使用了吲哚类似物的角蛋白纤维的染色

摘要

本发明的课题是提供既确保高的安全性又对角蛋白纤维有效染色的手段。本发明提供一种将由吲哚类似物构成的氧化染料与源自疣孢漆斑菌或枯草芽孢杆菌的胆红素氧化酶进行组合的染色方法和染色剂。

权利要求

1.一种角蛋白纤维染色用染色剂，其特征在于，含有源自枯草芽孢杆菌的胆红素氧化酶，即EC1.3.3.5，和由作为染料前体的吲哚衍生物或吲哚啉衍生物构成的氧化染料；

所述吲哚衍生物或吲哚啉衍生物是选自5,6-二羟基吲哚啉、N-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、N-乙基-5,6-二羟基吲哚啉、N-丁基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基-7-甲氧基吲哚啉、6,7-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚啉、4-甲氧基-6-羟基吲哚啉、N-己基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、3-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基吲哚啉、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚啉、2-甲基-5-羟基-6-β-羟基乙基吲哚啉、4-羟基丙基吲哚啉、2-羟基-3-甲氧基吲哚啉、6-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基吲哚啉、5-羟基吲哚啉、7-羟基吲哚啉、7-氨基吲哚啉、5-氨基吲哚啉、4-氨基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚啉-2-羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚、6,7-二羟基吲哚、N-甲基-5,6-二羟基吲哚、N-乙基-5,6-二羟基吲哚、N-己基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5,6-二羟基吲哚、3-甲基-5,6-二羟基吲哚、4-羟基吲哚、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚、2-甲基-5-羟基-6-β-羟基乙基吲哚、4-羟基丙基吲哚、2-羟基-3-甲氧基吲哚、

4-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基-7-甲氧基吲哚、6-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基吲哚、

5-羟基吲哚、7-羟基吲哚、7-氨基吲哚、6-氨基吲哚、5-氨基吲哚、4-氨基吲哚、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸以及1-甲基-5,6-二羟基吲哚中的氧化染料。

2.根据权利要求1所述的染色剂，其中，所述胆红素氧化酶由以下(7)～(9)中任一项所述的蛋白质构成：(7)由序列号6所述的氨基酸序列构成的蛋白质；

(8)由序列号6所述的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

(9)由序列号5所述的多核苷酸编码的蛋白质。

3.根据权利要求1或2所述的染色剂，其中，所述角蛋白纤维是人毛发。

4.根据权利要求1或2所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自5,6-二羟基吲哚、

5,6-二羟基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸、5,6-二羟基吲哚啉-2-羧酸、4-氨基吲哚和5-氨基吲哚中的氧化染料。

5.根据权利要求3所述的染色剂，其中，所述氧化染料是选自5,6-二羟基吲哚、

5,6-二羟基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸、5,6-二羟基吲哚啉-2-羧酸、4-氨基吲哚和5-氨基吲哚中的氧化染料。

6.根据权利要求1或2所述的染色剂，是含有所述氧化染料和所述胆红素氧化酶的单剂型。

7.根据权利要求3所述的染色剂，是含有所述氧化染料和所述胆红素氧化酶的单剂型。

8.根据权利要求4所述的染色剂，是含有所述氧化染料和所述胆红素氧化酶的单剂型。

9.根据权利要求5所述的染色剂，是含有所述氧化染料和所述胆红素氧化酶的单剂型。

10.根据权利要求1或2所述的染色剂，是由含有所述氧化染料的第1要素和含有所述胆红素氧化酶的第2要素构成的双剂型。

11.根据权利要求3所述的染色剂，是由含有所述氧化染料的第1要素和含有所述胆红素氧化酶的第2要素构成的双剂型。

12.根据权利要求4所述的染色剂，是由含有所述氧化染料的第1要素和含有所述胆红素氧化酶的第2要素构成的双剂型。

13.根据权利要求5所述的染色剂，是由含有所述氧化染料的第1要素和含有所述胆红素氧化酶的第2要素构成的双剂型。

14.一种染色方法，其特征在于，包含使用权利要求1～13中任一项所述的染色剂处理角蛋白纤维的步骤。

15.根据权利要求14所述的染色方法，其中，在pH为7.0～8.0的条件下进行所述处理。

说明书

使用了吲哚类似物的角蛋白纤维的染色

技术领域

[0001] 本发明涉及角蛋白纤维的染色。具体而言，本发明涉及利用吲哚类似物作为氧化染料的染色剂和染色方法。

背景技术

[0002] 利用苯二胺类、氨基酚类等氧化染料的染色方法，具有能够进行各种色调的染色，持续时间长，并且染色时间短等优点，尤其是频繁用于人毛发等角蛋白纤维的染色。另一方面，吲哚类似物也被作为角蛋白染色用氧化染料来利用。例如，作为吲哚衍生物的5,6-二羟基吲哚是黑色素前体，在氧存在下发生聚合，形成黑色素。利用这一反应能够将毛发等染色。例如，专利文献1、2公开了利用了5,6-二羟基吲哚等吲哚衍生物的空气氧化型染色剂。

[0003] 现有技术文献

[0004] 专利文献

[0005] 专利文献1:日本特开2007-326809号公报

[0006] 专利文献2:日本特开2009-137877号公报

[0007] 专利文献3:日本特表2004-510798号公报

[0008] 专利文献4:日本专利第4743954号公报

发明内容

[0009] 5,6-二羟基吲哚等吲哚类似物与苯二胺类、氨基酚类等氧化染料相比安全性高。但是，其染色效果差，特别地成为问题。因此，本发明的课题在于提供通过利用吲哚类似物作为氧化染料能够确保高的安全性且能够发挥高的染色效果的染色方法以及用于该方法的染色剂。

[0010] 本发明人等着眼于氧化酶的一种、即胆红素氧化酶(以下简称为“BO”)，研究了利用吲哚类似物作为氧化染料并应用于染发的可能性。结果表明，BO能够带来高的染色效果。此外，通过使用各种BO的比较实验，成功确定有效性极高的(即，具有特别高的染色效果)BO。以下示出的发明主要是基于这些成果。应予说明，在公开了角蛋白纤维的染色方法的上述专利文献3中，尽管公开了作为氧化酶的BO，作为氧化染料的吲哚类似物，但是，没有将这些物质并用时的具体的记载(例如实施数据)，这些物质的并用对于角蛋白纤维的染色实际上是否有效完全未知。而且，也没有提及与本发明人等发现的特定BO相关的内容。

[0011] [1]一种角蛋白纤维染色用染色剂，其含有源自疣孢漆斑菌或枯草芽孢杆菌的胆红素氧化酶(EC1.3.3.5)。

[0012] [2]根据[1]记载的染色剂，其中，上述胆红素氧化酶由以下(1)～(9)中任一项记载的蛋白质构成：

[0013] (1)由序列号2记载的氨基酸序列构成的蛋白质；

[0014] (2)由序列号2记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

[0015] (3)由序列号1记载的多核苷酸编码的蛋白质；

[0016] (4)由序列号4记载的氨基酸序列构成的蛋白质；

[0017] (5)由序列号4记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

[0018] (6)由序列号3记载的多核苷酸编码的蛋白质；

[0019] (7)由序列号6记载的氨基酸序列构成的蛋白质；

[0020] (8)由序列号6记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

[0021] (9)由序列号5记载的多核苷酸编码的蛋白质。

[0022] [3]根据[1]或[2]记载的染色剂，其中，上述角蛋白纤维是人毛发。

[0023] [4]根据[1]～[3]中任一项记载的染色剂，其特征在于，是将由吲哚衍生物或吲哚啉衍生物构成的氧化染料进行组合而形成的。

[0024] [5]根据[4]记载的染色剂，其中，上述氧化染料是选自5,6-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸、5,6-二羟基吲哚啉-2-羧酸、4-氨基吲哚和5-氨基吲哚中的氧化染料。

[0025] [6]根据[4]或[5]记载的染色剂，是含有上述氧化染料和上述胆红素氧化酶的单剂型染色剂。

[0026] [7]根据[4]或[5]记载的染色剂，是由含有上述氧化染料的第1要素和含有上述胆红素氧化酶的第2要素构成的双剂型染色剂。

[0027] [8]一种染色方法，包含使用[1]～[7]中任一项记载的染色剂处理角蛋白纤维的步骤。

[0028] [9]根据[8]记载的染色方法，在pH为7.0～8.0的条件下进行上述处理。

附图说明

[0029] 图1：染色试验的结果。从左侧示出未处理毛束(试验例27(仅染料))、试验例28(过氧化氢)、试验例34(BO-3)、试验例31(BODII)的染发结果。下面的数值表示毛发染色程度(ΔE﹡ab)。

具体实施方式

[0030] 1.染色剂

[0031] 本发明的第1方面涉及用于角蛋白纤维(人的毛发、牛、马、羊、山羊、羊驼、安哥拉兔等的毛等)染色的染色剂。本发明的染色剂含有作为氧化酶的胆红素氧化酶(BO)(EC1.3.3.5)。本发明的染色剂对氧化染料产生作用，发挥期望的染色效果。因此，典型而言，将本发明的染色剂与氧化染料组合使用。本说明书中术语“组合使用”或“组合而形成的”是指将氧化染料与BO并用。作为一实施方式，本发明的染色剂以混合有氧化染料和BO的组合物的形态提供。将该实施方式的染色剂称为单剂型染色剂。另一方面，也可以以由含有氧化染料的第1要素和含有BO的第2要素构成的试剂盒的形态提供本发明的染色剂。该实施方式的染色剂称为双剂型染色剂。双剂型染色剂的情况下，各要素以收纳于各自的容器或区间的形态提供，使用时将两个要素混合。应予说明，单剂型染色剂不仅是简单的构成，而且能够实现更简便的使用方法，在这一方面好于双剂型染色剂。

[0032] (1)染料

[0033] 本说明书中术语“氧化染料”是指显色或染色需要氧化反应的染料。氧化染料中包含其自身发生氧化聚合而显色的“染料前体”和通过与染料前体聚合而呈现特有色调的“染料助剂(耦合剂)”。本发明中作为氧化染料使用吲哚类似物。可以使用各种吲哚类似物。优选从属于吲哚衍生物或吲哚啉衍生物、或其盐(例如，盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、或醋酸盐等酸加成盐))的化合物中采用适当的氧化染料。吲哚衍生物和吲哚啉衍生物的具体例是5,6-二羟基吲哚啉、N-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、N-乙基-5,6-二羟基吲哚啉、N-丁基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基-7-甲氧基吲哚啉、6,7-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚啉、4-甲氧基-6-羟基吲哚啉、N-己基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、3-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4-羟基吲哚啉、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚啉、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚啉、2-甲基-5-羟基-6-β-羟基乙基吲哚啉、4-羟基丙基吲哚啉、2-羟基-3-甲氧基吲哚啉、6-羟基-5-甲氧基吲哚啉、6-羟基吲哚啉、5-羟基吲哚啉、7-羟基吲哚啉、7-氨基吲哚啉、5-氨基吲哚啉、
4-氨基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚啉-2-羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚啉、4,5-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚、6,7-二羟基吲哚、N-甲基-5,6-二羟基吲哚、N-乙基-5,6-二羟基吲哚、N-己基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5,6-二羟基吲哚、3-甲基-5,6-二羟基吲哚、
4-羟基吲哚、2,3-二甲基-5,6-二羟基吲哚、2-甲基-5-乙基-6-羟基吲哚、2-甲基-5-羟基-6-β-羟基乙基吲哚、4-羟基丙基吲哚、2-羟基-3-甲氧基吲哚、4-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基-7-甲氧基吲哚、6-羟基-5-甲氧基吲哚、6-羟基吲哚、5-羟基吲哚、7-羟基吲哚、7-氨基吲哚、6-氨基吲哚、5-氨基吲哚、4-氨基吲哚、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸、1-甲基-5,6-二羟基吲哚。优选的一个实施方式中，使用选自5,6-二羟基吲哚、5,6-二羟基吲哚啉、5,6-二羟基吲哚-2-羧酸、5,6-二羟基吲哚啉-2-羧酸、4-氨基吲哚和5-氨基吲哚中的1种或2种以上的氧化染料。

[0034] 本发明的染色剂中可使用1种或2种以上的氧化染料。2种以上的氧化染料并用，例如对染色效果的提高、色彩(色调)的调整等是有效的。特别是，可以将被分类为染料前体的氧化染料与被分类为染料助剂的氧化染料并用。

[0035] 氧化染料的配合量没有特别限制，可以考虑使用的氧化染料的特性、用途等来确定配合量。单剂型染色剂的情况下，可以以相对于染色剂总量例如为0.01～20重量％、优选0.05～10重量％、更优选0.01～1重量％的方式配合氧化染料。双剂型染色剂的情况下，可以以相对于含有氧化染料的第1要素总量例如为0.01～20重量％、优选0.05～10重量％、更优选0.01～1重量％的方式配合氧化染料。

[0036] 作为有助于染色的成分，除氧化染料之外也可以配合直接染料。通过配合直接染料，能够提高染色效果，调整染色的色调。例举直接染料的例子时，可以是2-氨基-4-硝基苯酚、2-氨基-5-硝基苯酚、1-氨基-4-甲基氨基蒽醌、硝基-对苯二胺·盐酸盐、1,4-二氨基蒽醌、硝基-对苯二胺、苦氨酸、苦氨酸钠、2-氨基-5-硝基苯酚·硫酸盐、间苯二酚、硝基-对苯二胺·硫酸盐、对硝基-邻苯二胺·硫酸盐、对硝基-间苯二胺·硫酸盐、天然橙6(2-羟基-1,4-萘醌)、酸性橙8、酸性紫17、雷玛唑亮蓝、伊文思蓝、酸性蓝80。

[0037] 直接染料的配合量也没有特别限制。单剂型染色剂的情况下，可以以相对于染色剂总量例如为0.01～20重量％的方式配合直接染料。双剂型染色剂的情况下，在含有氧化染料而成的第1要素和/或含有BO而成的第2要素中配合直接染料。这种情况下的配合量是相对于第1要素总量例如为0.01～20重量％，相对于第2要素总量例如为0.01～20重量％。应予说明，与氧化染料同样地直接染料也可以将2种以上并用。

[0038] (2)酶

[0039] 本发明中使用氧化酶BO。具体而言，使用源自疣孢漆斑菌的BO或源自枯草芽孢杆菌的BO。换言之，本发明中使用的BO的来源生产菌是疣孢漆斑菌或枯草芽孢杆菌。生产菌可以是野生株(来自天然的分离株，未实施基因操作等突变·改变处理的菌株)也可以是突变株。将疣孢漆斑菌的BO基因导入宿主微生物而得到的转化体所产生的BO也属于源自疣孢漆斑菌的BO。关于源自枯草芽孢杆菌的BO也是同样的。因此，可以使用通过基因重组技术生产的BO(重组BO)。

[0040] 如果示出本发明中使用的BO的生产菌的具体例，可以是疣孢漆斑菌MT-1(FERM-BP653(参见Agricultural and Biological Chemistry，第45卷，2383-2384页(1981年)))、疣孢漆斑菌IFO6113、疣孢漆斑菌IFO6133、疣孢漆斑菌IFO6351、疣孢漆斑菌IFO9056、枯草芽孢杆菌ATCC23857株。这些菌株可按照常规方法液体培养或固体培养，通过从其培养液提取、盐析、透析、离子交换、凝胶过滤等，能够得到胆红素氧化酶的精制标准品。

[0041] 源自疣孢漆斑菌MT-1株的BO的氨基酸序列示于序列号2(其是全长的，包含信号序列)和序列号4(其是成熟体，不包含信号序列)示出。本发明的一实施方式中，使用由以下(1)～(6)中任一项记载的蛋白质构成的BO。应予说明，序列号1的序列是编码序列号2的氨基酸序列的基因序列，序列号3的序列是编码序列号4的氨基酸序列的基因序列。

[0042] (1)由序列号2记载的氨基酸序列构成的蛋白质；

[0043] (2)由序列号2记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

[0044] (3)由序列号1记载的多核苷酸编码的蛋白质；

[0045] (4)由序列号4记载的氨基酸序列构成的蛋白质；

[0046] (5)由序列号4记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

[0047] (6)由序列号3记载的多核苷酸编码的蛋白质。

[0048] 源自枯草芽孢杆菌ATCC23857株的BO是孢壁构成成分蛋白质，典型而言具有序列号6的氨基酸序列。因此，本发明的一实施方式中，使用由以下(7)～(9)中任一项记载的蛋白质构成的BO。应予说明，序列号5的序列是编码序列号6的氨基酸序列的基因序列。

[0049] (7)由序列号6记载的氨基酸序列构成的蛋白质；

[0050] (8)由序列号6记载的氨基酸序列中1个或多个氨基酸突变、缺失或添加的氨基酸序列构成的蛋白质，是具有胆红素氧化酶活性的蛋白质；

[0051] (9)由序列号5记载的多核苷酸编码的蛋白质。

[0052] 关于源自枯草芽孢杆菌的BO的具体内容，可参见专利文献4(日本专利第4743854号公报)。

[0053] 源自疣孢漆斑菌的BO以产品名BO"Amano"3、简称BO-3的形式由天野酶株式会社市售，源自枯草芽孢杆菌的BO以产品名Bilirubin Oxidase、简称BODII的形式由旭化成制药株式会社市售，也可以将这些市售的BO用于本发明。

[0054] (3)其它成分

[0055] 本发明的染色剂中，除上述各成分之外，可以含有追加成分(任意成分)。作为任意成分，可以例示碱性化合物、硫代乳酸、亚硫酸钠、N-乙酰基-L-半胱氨酸等还原剂、表面活性剂、油性成分、有机硅类、增稠剂、溶剂、水、螯合剂、氨基酸、各种盐类、保湿剂、防腐剂、紫外线抑制剂、醇、多元醇、香料等。

[0056] 本发明的染色剂中可以含有碱性化合物。根据含有碱性化合物的染色剂，将其应用时，会促进角蛋白纤维的溶胀，提高染色效果。碱性化合物的配合量以使用时达到期望的pH(例如pH7.0～10.0)的方式进行设定。单剂型染色剂的情况下的配合量的例子是相对于染色剂总量为0.01～20重量％。另一方面，双剂型染色剂的情况下，原则上，使含有氧化染料而成的第1要素含有碱性化合物，作为配合量例如相对于第1要素总量为0.01～20重量％(其中，可以不是第1要素而是使第2要素含有碱性化合物，或者也可以使第1要素和第2要素二者含有碱性化合物)。应予说明，作为碱性化合物的具体例，可举出单乙醇胺、单异丙醇胺、三乙醇胺、二乙醇胺等胺化合物、氨、氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸铵、碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸钾、碳酸氢钾等无机化合物等。

[0057] 可将本发明染色剂制备为糊(膏)状、气雾状、凝胶(果冻)状、液体状、泡沫状等形态。由第1要素(含有氧化染料)和第2要素(含有BO)构成的双剂型的情况下，第1要素和第2要素的形态也可以不同。

[0058] 2.染色方法

[0059] 本发明的第2方面涉及使用本发明的染色剂的染色方法。本发明的染色方法，在氧存在的条件下(即，氧环境中)，使用本发明的染色剂处理角蛋白纤维。单剂型染色剂的情况下，例如，根据需要将染色剂稀释后(稀释不是必需的)，涂布于角蛋白纤维(例如人毛发)。或者，在溶解有染色剂的溶液中浸渍角蛋白纤维。

[0060] 双剂型染色剂的情况下，例如，将第1要素和第2要素混合之后(可以根据需要进行稀释，或溶解于溶剂)，涂布于角蛋白纤维。也可以将一方(第1要素或第2要素)涂布于角蛋白纤维之后，将另一方涂布于角蛋白纤维，在角蛋白纤维的表面等将两要素混合。此外，也可以在溶解第1要素和第2要素的溶液中浸渍角蛋白纤维。

[0061] 通过以上操作形成染色剂和角蛋白纤维接触的状态。接下来，维持该接触状态为期望的染色所需要的时间。此时，为了提高染色效果或迅速或者高效的染色，可以进行保温或者加温。角蛋白纤维是人毛发的情况下，即，以用本发明的染色方法对人毛发染色的情况为例，例如维持接触状态约10分钟～2小时，优选约20分钟～1小时。

[0062] 处理时的pH条件依赖于使用的染色剂。但是，也可以另外使用pH调节剂调节pH。处理时的pH例如是pH7.0～9.0。如后文的实施例所示，使用BO的情况下，即使在比较低的pH条件下，也显示高的染色效果。基于这一发现，本发明的一实施方式中，在pH7.0～pH8.0的条件下处理。通过采用该条件，能够减少伴随染色的被染色材料的损伤。该条件在对人毛发染色时特别有效，也能够减少人毛发的损伤和对皮肤(头皮)的刺激。

[0063] 上述处理后，通常将角蛋白纤维清洗，最后将其干燥。清洗时可以使用例如水、洗剂等。此外，作为干燥的手段，可以例示风干(自然干燥)、热风干燥、旋转干燥、抽吸干燥、桶式干燥(barrel drying)等。

[0064] 本发明的染色方法中，通过BO的作用产生氧化染料的氧化、聚合，角蛋白纤维被染色。本发明中，由于氧化反应中利用了酶，因此，伴随染色处理的被染色材料的损伤(Damage)少。此外，应用于毛发的情况中对头皮产生不良影响(过敏反应)等的可能变少。本发明的染色剂能减少对角蛋白纤维等的影响，并能够有效进行染色。

[0065] 实施例

[0066] 研究将吲哚类似物作为染料时的各酶的染色效果。

[0067] 1.方法

[0068] (1)使用酶

[0069] 源自疣孢漆斑菌的BO(天野酶株式会社，产品名：BO"Amano"3，简称：BO-3)[0070] 源自枯草芽孢杆菌的BO(旭化成制药株式会社，产品名：Bilirubin Oxidase，简称：BODII，产品编码：T-188)

[0071] 源自粗皮灵芝(Trachyderma tsunodae)的BO((Takara Bio公司，产品名：Bilirubin oxidase“TAKARA”)

[0072] 源自白腐菌(Trametes sp.)的漆酶(大和化成株式会社)

[0073] 源自漆树(Rhus vernificerea)的漆酶(Sigma-Aldrich公司)

[0074] (2)染发基剂的制备

[0075] 将EMALEX HC-20(日本Emulsion公司)2％、乳酸1％、氧化染料剂(5,6-二羟基吲哚、4-氨基吲哚、5-氨基吲哚)分别以规定的量溶解于蒸馏水，使用单乙醇胺调节为规定的pH。接下来，添加羟乙基纤维素1.5％混合，添加蒸馏水达到最终重量80％。继而，添加酶或过氧化氢，最终制成100％。

[0076] (3)染发试验

[0077] 对每1束人白头发毛束(10cm,1g,Beaulax制)涂布染发基剂2g(以n＝3实施)。30℃反应30分(在中途15分钟里外翻转)。用水清洗后，进一步用1％SDS清洗，进行水洗直至颜色消失。最后，放置一夜，风干。

[0078] (4)色调评价

[0079] 使用分光色度计CM-700d(Konica Minolta制)，通过10°视野、D65Day Light、SCE模式测定。使用CIEL﹡a﹡b表色系评价与未处理的白发的色差(ΔE﹡ab)。应予说明，L﹡表示亮度。具有0～100的数值，数值越高表示越亮。此外，a﹡表示色彩。具有-60～+60的数值，越-表示越绿，越+表示越红。b﹡表示色彩。具有-60～+60的数2 2 2 1/2
值，越-表示越蓝，越+表示越黄。ΔE﹡ab是由[(ΔL)+(Δa)+(Δb)] 算出的数值，是头发颜色的评价中通常使用的单位。由与基准值(染发前白发的测定值)的L﹡值、a﹡值、b﹡值的差值算出ΔE﹡ab。表1示出色差程度与ΔE﹡ab的关系。

[0080] [表1]

[0081]色差程度的评语 ΔE*ab
极其微小地不同 0-0.5
微小地不同 0.5-1.5
可感知程度地不同 1.5-3.0
显著不同 3.0-6.0
极其显著不同 6.0-12.0
成为其它色系 12.0以上

[0082] 2.结果

[0083] (1)染发试验1(使用5，6-二羟基吲哚(0.3重量％)。在pH7.0的条件下染色)[0084] 染发试验1的结果由表2示出。

[0085] [表2]

[0086]

[0087] 如表2所示，对各酶进行比较之后发现，与试验例1、2相比，使用了BODII(旭化成制药株式会社)的试验例3～5、使用了BO-3(天野酶株式会社)的试验例6～8显示高的染发性。即，源自疣孢漆斑菌的BO和源自枯草芽孢杆菌的BO具有比过氧化氢高的染色效果。另一方面，使用其它酶的试验例9～17与使用过氧化氢的情况相比染发效果低。

[0088] (2)染色试验2(使用5,6-二羟基吲哚(0.3重量％)。在pH9.0的条件下染色)[0089] 比较碱性条件下(pH9.0)染色时的染色效果。结果由表3示出。

[0090] [表3]

[0091]

[0092] 通过表2和表3的比较，可知使用BODII、BO-3的情况下，与pH9相比pH7的条件下染发会获得高的染发效果。此外，pH7的条件中，用过氧化氢的染发性和用BO的染发性的差异更为显著。根据这些结果，使用BO时，能够在对头发更优异的条件下进行染发。

[0093] (3)染发试验3(使用5,6-二羟基吲哚(1.0重量％)。pH9.0的条件下染色)[0094] 比较提高氧化染料剂(5,6-二羟基吲哚)的浓度时(以相对于染色基剂整体为1.0重量％配合)的染色效果。结果由表4和图1示出。

[0095] [表4]

[0096]

[0097] 根据表1的试验例3～5和表4的试验例28～30的比较、以及表1的试验例6～8与表4的试验例31～33的比较，可知通过增加5,6-二羟基吲哚的添加量，染发效果提高。

[0098] (4)染色试验4(使用其它吲哚衍生物。pH7.0的条件下染色)

[0099] 研究作为氧化染料剂使用4-氨基吲哚和5-氨基吲哚时的染色效果。结果由表5示出。

[0100] [表5]

[0101]

[0102] 使用4-氨基吲哚和5-氨基吲哚时也是BODII和BO-3(试验例36～41)显示出与过氧化氢(试验例35)同等的染色性。另一方面，关于其它酶(试验例42～47)没有发现染发效果。

[0103] 3.结论

[0104] 现在，多数的染发剂中使用对于皮肤过敏性高的染料(对苯二胺等)。此外，染料的氧化(显色)通常会使用过氧化氢，而且，由于通常染发剂是在碱性条件下(典型的是pH9～10)使用，所以伴随染发易发生头发、头皮等的损伤。本次的研究结果表明，BO对于使用过敏性低的吲哚衍生物的染色是有效的，虽然没有使用过氧化氢，但也会获得优异的染色效果。此外，发现源自疣孢漆斑菌的BO和源自枯草芽孢杆菌的BO具有特别优异的染色效果。另一方面，发现源自疣孢漆斑菌的BO和或源自枯草芽孢杆菌的BO能够在温和的条件下(pH7)对吲哚衍生物良好地作用。这一事实意味着，使用这些BO，能够在对头发、头皮等的影响更少的条件下染发，换言之，BO的使用在实际应用上极其有利。

[0105] 工业上的可利用性

[0106] 本发明的染色剂可用于角蛋白纤维的染色。特别是，本发明对毛发的染色是有效的。

[0107] 本发明不局限于上述发明的实施方式和实施例的说明。不脱离要求保护范围的记载，本领域技术人员容易想到的范围内各种变形方式也包含在本发明。本说明书中举出的论文、公开专利公报、以及专利公报等内容通过援引而引用其全部内容。