一种澳洲坚果杂交育种的方法

摘要

本发明提供一种澳洲坚果杂交育种的方法，属于果树杂交育种技术领域。它包括去雄、采集花粉和人工授粉三个步骤，其中去雄是在澳洲坚果盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留30-100朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位切断花被管，切断的花被管上部分向外翻时或切断花被管10-30分钟后，去除花被片并套袋封口，得到去雄花序。本发明的方法有效的提高了澳洲坚果去雄的效率，使人工操作去雄更加简单快捷，同时避免了伪杂种的产生，提高了杂交种的纯度。

权利要求

1.一种澳洲坚果杂交育种的方法，其特征在于包括如下步骤：

步骤（1），去雄：在澳洲坚果盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第

1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留

30-100朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位切断花被管，切断的花被管上部分向外翻时或切断花被管10-30分钟后，去除花被片并套袋封口，得到去雄花序；

步骤（2），采集花粉：对母本花序去雄的当天，在父本树上选择即将开放的花序套袋，授粉前选择袋内24小时之内开放的花序，将花序放入试管内，左右各螺旋式旋转试管3-5下，采集完花粉的试管用湿毛巾包裹，得到授粉试管；所述的试管规格为25×200mm，且为透明材质内壁光滑的试管；

步骤（3），人工授粉：步骤（1）得到的去雄花序在40-48h后，去掉步骤（2）得到的授粉试管外包裹的湿毛巾，然后将其放入授粉试管内，左右各螺旋式旋转试管2-3下，上下移动试管1-2下即完成授粉，套袋，10d后撤袋；其中，授粉的环境条件为温度18-21℃，相对湿度

60-70%，晴朗、无风或微风的天气。

2.根据权利要求1所述的澳洲坚果杂交育种的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的切断花被管采用锋利的U型小剪刀。

3.根据权利要求1所述的澳洲坚果杂交育种的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的去除花被片的方式为用手或镊子轻轻去除。

4.根据权利要求1所述的澳洲坚果杂交育种的方法，其特征在于每支步骤（2）得到的授粉试管能授粉3-5个步骤（1）得到的去雄花序。

5.根据权利要求1所述的澳洲坚果杂交育种的方法，其特征在于步骤（3）人工授粉后

24小时内降中到大雨，需重新人工授粉。

6.根据权利要求1所述的澳洲坚果杂交育种的方法，其特征在于步骤（3）所述的人工授粉时期为1月下旬至2月下旬或盛花期。

说明书

一种澳洲坚果杂交育种的方法

技术领域

[0001] 本发明属于果树杂交育种技术领域，具体涉一种澳洲坚果杂交育种的方法。

背景技术

[0002] 澳洲坚果(Macadamia spp.)，原产于澳大利亚昆士兰州东南部和新南威尔士州北部沿海的亚热带雨林，为多年生常绿乔木果树。我国于上世纪70年代开始澳洲坚果引种试种，现今已有50多年的栽培史，澳洲坚果的栽培面积已超过了主产国澳大利亚，但是商业性种植品种主要是国外育成品种，目前我国尚无自己选育的品种，为了满足生产和研究的需要，为了选育适合我国气候环境的、具有自主知识产权的新品种，我国于2009年开始启动澳洲坚果育种工作，而杂交育种仍然是澳洲坚果新品种选育的最主要方法，是澳洲坚果育种中最重要和最有效的途径，也是目前使用最广泛的方法。由于澳洲坚果的结实率一般较低，为了获得一定的杂交种子数，就必须做更多的杂交花数。在澳洲坚果杂交育种过程中，为了保证获得所配置组合的纯正杂交种子，去雄杂交是重要的步骤之一。1954年，澳大利亚学者URATA曾用针撕开花被片，后用镊子去掉雄蕊的方法来去雄，2009年林玉虹、陈显国等也用此方法对澳洲坚果进行杂交授粉试验。这种去雄方法费时费力，柱头受伤的概率较大，由于受伤柱头多，坐果率比较低。因此，如何克服现有技术中的不足是目前果树杂交育种技术领域亟需解决的问题。

发明内容

[0003] 针对现有技术存在的上述不足，本发明的目的是提供一种工作效率更高的去雄方法，避免了伪杂种的产生，提高了杂交种的纯度。

[0004] 为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

[0005] 一种澳洲坚果杂交育种的方法，包括如下步骤：

[0006] 步骤(1)，去雄：在澳洲坚果盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留30-100朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位切断花被管，切断的花被管上部分向外翻时或切断花被管10-30分钟后，去除花被片并套袋封口，得到去雄花序，本方法称之为切管连被去雄法；

[0007] 步骤(2)，采集花粉：对母本花序去雄的当天，在父本树上选择即将开放的花序套袋，授粉前选择袋内24小时之内开放的花序，将花序放入试管内，左右各螺旋式旋转试管3-5下，让花粉尽可能多的粘到试管内壁上，待试管内壁上能够明显的看到一层花粉时即可，采集完花粉的试管用湿毛巾包裹，试管口包在湿毛巾内，湿毛巾以不滴水为宜，得到授粉试管；

[0008] 步骤(3)，人工授粉：步骤(1)得到的去雄花序在40-48h后，去掉步骤(2)得到的授粉试管外包裹的湿毛巾，然后将其放入授粉试管内，左右各螺旋式旋转试管2-3下，上下移动试管1-2下即完成授粉，套袋，10d后撤袋。

[0009] 步骤(1)中所述的切断花被管采用锋利的U型小剪刀。

[0010] 步骤(1)中所述的去除花被片的方式为用手或镊子轻轻去除。

[0011] 步骤(2)中所述的试管规格为25×200mm，且为透明材质内壁光滑的试管。

[0012] 每支步骤(2)得到的授粉试管能授粉3-5个步骤(1)得到的去雄花序。

[0013] 步骤(3)授粉的环境条件为温度18-21℃，相对湿度60-70％，晴朗、无风或微风的天气。

[0014] 步骤(3)人工授粉后24小时内降中到大雨，需重新人工授粉。

[0015] 所述的步骤(3)所述的人工授粉时期为1月下旬至2月下旬或盛花期，盛花期为父母本树上开花数量在25％-75％之间时。

[0016] 本发明与现有技术相比，其有益效果为：(1)本发明的切管连被去雄法是将花被片一次去除而成功去雄，速度快，受伤柱头较少，母本花的柱头外露，便于授粉；(2)本发明在研究了澳洲坚果花器特征、花药散粉时间、柱头可授性、花粉萌发率高峰时间、花粉的收集等授粉特性的基础上，确定澳洲坚果人工授粉中的去雄时间、花粉采集时间及方法、授粉时间及方法和撤袋时间，有效地提高了人工杂交授粉的效率，避免了伪杂种的产生，提高了杂交种的纯度；(3)经本发明方法杂交育种最终坐果率高达6％，远远高出于自然授粉的平均坐果率，其中，自然授粉的平均坐果率为0.22％。具体实施例

[0017] 下面结合实施例对本发明作进一步的详细描述。

[0018] 以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的保护范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。

[0019] 实施例1

[0020] 本实施例澳洲坚果杂交育种的方法采用的澳洲坚果品种D4为母本，品种HAES900为父本，各选择3株，具体包括以下步骤：

[0021] 步骤(1)，去雄：在澳洲坚果品种D4的盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留30朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位，用锋利的U型小剪刀切断花被管，切断花被管10分钟后，用镊子轻轻去除花被片并套袋封口，得到去雄花序；

[0022] 步骤(2)，采集花粉：对母本花序去雄的当天，在父本HAES900的树上选择即将开放的花序套袋，授粉前选择袋内24小时之内开放的花序，用规格为25×200mm、透明材质内壁光滑的试管取花粉，把花序放入干净的试管内，左右各螺旋式旋转试管3下，让花粉尽可能多的粘到试管内壁上，待试管内壁上能够明显的看到一层花粉时即可；采集完花粉的试管标上标签，用湿毛巾包裹，试管口包在湿毛巾内，湿毛巾以不滴水为宜，得到授粉试管；

[0023] 步骤(3)，人工授粉：步骤(1)得到的去雄花序在40h后，去掉步骤(2)得到的授粉试管外包裹的湿毛巾，然后将其放入授粉试管内，左右各螺旋式旋转试管2下，上下移动试管1下即完成授粉，套袋后挂上标签，注明父母本，每支步骤(2)得到的授粉试管可授粉3个步骤(1)得到的去雄花序；授粉结束后10d撤袋。

[0024] 授粉时期为1月下旬，；授粉环境条件优选为温度18-21℃、相对湿度60-70％、晴朗、微风；

[0025] 授粉后5个月调查最终坐果数，去雄授粉的坐果率为5％(坐果率＝坐果数/授粉花朵数*100％)。

[0026] 实施例2

[0027] 本实施例澳洲坚果杂交育种的方法采用的澳洲坚果品种D4为母本，品种HAES900为父本，各选择4株，具体包括以下步骤：

[0028] 步骤(1)，去雄：在澳洲坚果品种D4的盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留100朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位，用锋利的U型小剪刀切断花被管，切断花被管30分钟后，用手轻轻去除花被片并套袋封口，得到去雄花序；

[0029] 步骤(2)，采集花粉：对母本花序去雄的当天，在父本HAES900的树上选择即将开放的花序套袋，授粉前选择袋内24小时之内开放的花序，用规格为25×200mm、透明材质内壁光滑的试管取花粉，把花序放入干净的试管内，左右各螺旋式旋转试管5下，让花粉尽可能多的粘到试管内壁上，待试管内壁上能够明显的看到一层花粉时即可；采集完花粉的试管标上标签，用湿毛巾包裹，试管口包在湿毛巾内，湿毛巾以不滴水为宜，得到授粉试管；

[0030] 步骤(3)，人工授粉：步骤(1)得到的去雄花序在48h后，去掉步骤(2)得到的授粉试管外包裹的湿毛巾，然后将其放入授粉试管内，左右各螺旋式旋转试管3下，上下移动试管2下即完成授粉，套袋后挂上标签，注明父母本，每支步骤(2)得到的授粉试管可授粉5个步骤(1)得到花序；授粉结束后10d撤袋。

[0031] 授粉时期为2月下旬，授粉环境条件优选为温度18-21℃、相对湿度60-70％、晴朗、无风；

[0032] 授粉后5个月调查最终坐果数，去雄授粉的坐果率为5.6％。

[0033] 实施例3

[0034] 本实施例澳洲坚果杂交育种的方法采用的澳洲坚果品种D4为母本，品种HAES900为父本，各选择5株，具体包括以下步骤：

[0035] 步骤(1)，去雄：在澳洲坚果品种D4的盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留60朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位，用锋利的U型小剪刀切断花被管，切断的花被管上部分向外翻时，用手轻轻去除花被片并套袋封口，得到去雄花序；

[0036] 步骤(2)，采集花粉：对母本花序去雄的当天，在父本HAES900的树上选择即将开放的花序套袋，授粉前选择袋内24小时之内开放的花序，用规格为25×200mm、透明材质内壁光滑的试管取花粉，把花序放入干净的试管内，左右各螺旋式旋转试管4下，让花粉尽可能多的粘到试管内壁上，待试管内壁上能够明显的看到一层花粉时即可；采集完花粉的试管标上标签，用湿毛巾包裹，试管口包在湿毛巾内，湿毛巾以不滴水为宜，已收集好花粉的试管称为授粉试管；

[0037] 步骤(3)，人工授粉：步骤(1)得到去雄花序在去除花被片44h后，去掉步骤(2)得到的授粉试管外包裹的湿毛巾，然后将其放入授粉试管内，左右各螺旋式旋转试管2下，上下移动试管2下即完成授粉，套袋后挂上标签，注明父母本，每支步骤(2)得到的授粉试管可授粉4个步骤(1)得到花序；授粉结束后10d撤袋。

[0038] 授粉时期为2月上旬；授粉环境条件优选为温度18-21℃、相对湿度60-70％、晴朗、无风；

[0039] 授粉后5个月调查最终坐果数，去雄授粉的坐果率为6％。

[0040] 实施例4

[0041] 本实施例澳洲坚果杂交育种的方法采用的澳洲坚果品种788为母本，品种HAES900为父本，各选择3株，具体包括以下步骤：

[0042] 步骤(1)，去雄：在澳洲坚果品种788的盛花期，选择大部分花蕾发白、花被管裂开且花柱突出第1d的花序，去掉花被管没有裂开的小花，并对花柱突出第1d的小花进行疏除至每个花序留50朵小花，在小花花柱突出弯曲的部位，用锋利的U型小剪刀切断花被管，切断花被管20分钟后，用镊子轻轻去除花被片并套袋封口，得到去雄花序；

[0043] 步骤(2)，采集花粉：对母本花序去雄的当天，在父本HAES900的树上选择即将开放的花序套袋，授粉前选择袋内24小时之内开放的花序，用规格为25×200mm、透明材质内壁光滑的试管取花粉，把花序放入干净的试管内，左右各螺旋式旋转试管4下，让花粉尽可能多的粘到试管内壁上，待试管内壁上能够明显的看到一层花粉时即可；采集完花粉的试管标上标签，用湿毛巾包裹，试管口包在湿毛巾内，湿毛巾以不滴水为宜，已收集好花粉的试管称为授粉试管；

[0044] 步骤(3)，人工授粉：步骤(1)得到去雄花序在去除花被片45h后，去掉步骤(2)得到的授粉试管外包裹的湿毛巾，然后将其放入授粉试管内，左右各螺旋式旋转试管3下，上下移动试管2下即完成授粉，套袋后挂上标签，注明父母本，每支步骤(2)得到的授粉试管可授粉4个步骤(1)得到花序；授粉结束后10d撤袋。

[0045] 授粉时期为盛花期；授粉环境条件优选为温度18-21℃、相对湿度60-70％、晴朗、无风；

[0046] 授粉后5个月调查最终坐果数，去雄授粉的坐果率为4.5％。

[0047] 对比试验：用本发明的切管连被去雄法与URATA和林玉虹的针撕去雄方法作比较，以澳洲坚果品种D4为母本，品种HAES900为父本，各选择3株。切管连被去雄法的具体步骤同实例3，URATA的针撕去雄方法为:用针轻轻撕开花被片后用镊子去掉雄蕊，再用手指将花被片推回原来的位置，使小花恢复原状。试验按完全随机设计，根据去雄时的小花所处状态，针撕去雄法设3个处理为花被管裂开前1d、花被管裂开花柱突出第1d、花被管裂开花柱突出第2d，去雄后套袋，开花后授粉。每处理去雄50朵小花，重复3次。调查去雄所需时间、柱头受伤率及授粉后20d的坐果率。结果如表1。由表1可以看出本发明的切管连被去雄方法是将花被片一次去除而成功去雄，速度快，受伤柱头较少，母本花的柱头外露，便于授粉；去雄后，母本花朵无花瓣和花药，不诱传媒昆虫，为防万一有传媒昆虫停留柱头，而需套袋，传媒昆虫少的地方，可以不套袋，而且由于受伤柱头少，坐果率比较高；URATA和林玉虹的针撕去雄法是用针轻轻撕开花被片后用镊子逐一去掉雄蕊来达到去雄的目的，这种去雄方法费时费力，柱头受伤的概率较大，由于受伤柱头多，坐果率比较低。

[0048] 表1

[0049]