本发明公开了一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤：（1）选材；（2）茎段消毒及芽启动萌发培养；（3）无菌试管苗增殖培养；（4）生根培养；（5）炼苗移栽。本发明所述的猕猴桃的增殖继代培养方法通过改良基本培养基及成分，同时辅助合理的培养方法，使得猕猴桃的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的猕猴桃的果实质量及营养价值高，口感好，有利于猕猴桃的大力发展和推广应用。
1.一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，包括以下步骤 ：
（1）选材 ：选取生长健壮的基生枝用清水冲洗 2-3h，然后用 5% 的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用 ；
（2）茎段消毒及芽启动萌发培养 ：将步骤（1）处理过的茎段置于超净工作台上，用 75%的酒精消毒 10-15s，然后用无菌水清洗 3-5 次，然后用 0.1% 的升汞灭菌浸泡 5-8min，最后用无菌水冲洗 3-5 次后，用滤纸吸干水分，剪取 1-2cm 带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种 3-5 外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为 20-22℃，光照强度 1500—2000 lx，光照时间 14 h/d 的条件下，进行 15-20d 的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，40-50d 后形成无菌试管苗 ；
（3）无菌试管苗增殖培养 ：将步骤（2）所述的无菌试管苗切成 带1-2 个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔 2-3 周继代一次，获得大量无菌试管苗 ；
（4）生根培养 ：将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25-30d，至根长至 2.0cm 以上时，进行炼苗移栽 ；
（5）炼苗移栽 ：将步骤（4）得到的试管苗首先在培养室适应 1d, 然后在温室条件下，清水洗涤 3-5 次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在 80% 以上，然后驯化炼苗 10-15d 后移栽进行常规管理；
所述的试管苗增殖继代培养基包括改良 MS +1.0 ～ 2.0mg·L BA+1.0 ～ 1.5mg·L-1 -1 -1 -1 KT + 0.1 ～ 0.3mg·L NAA +3.0 ～ 3.5g·L 植物凝胶+ 2-3 mg·L GA 3 + 20g·L-1 蔗糖 , 且 pH 值为 5.8；
所述的改良MS 包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂；
所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为 ：硝酸钾 1900mg/L ；硫酸铵 1650 mg/L ；七水硫酸镁 350 mg/L ；二水氯化钙 400mg/L ；无水磷酸二氢钾 150mg/L ；乙二胺四乙酸二钠 35.6 mg/L ；七水硫酸亚铁 25.8 mg/L；
所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为 ：四水硫酸锰 20.5mg/L ；硫酸锌
9.0mg/L ；硼酸 6.5 mg/L ；碘化钾 0.5mg/L ；钼酸钠 0.3mg/L ；氯化钴 0.05 mg/L，硫酸铜 0.02 mg/L；
所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为 ：盐酸硫胺素 10.0 mg/L ；烟酸 1.5 mg/L ；盐酸吡哆醇 1.5mg/L ；肌醇 80.0 mg/L。
一种猕猴桃的增殖继代培养方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种猕猴桃的增殖继代培养方法，属于植物学技术领域。
背景技术
[0002] 猕猴桃的茎枝上容易产生不定根，跟上容易产生不定芽，适于猕猴桃繁殖的方式有很多种，如，扦插繁殖、压条繁殖、嫁接繁殖和种子繁殖等。上述繁殖方法具有繁殖周期长、易感染真菌性病害、良种化程度降低，而劣质种苗的使用又导致猕猴桃的果实质量及营养价值降低，同时口感下降，这在一定程度上约束了猕猴桃的大力发展和推广应用。
发明内容
[0003] 为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种培育周期短、可有效降低猕猴桃的染病几率，提高其果实质量和营养价值的猕猴桃的增殖继代培养方法。
[0004] 为了实现上述发明目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
[0005] 一种猕猴桃的增殖继代培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
[0006] （1）选材：选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2-3h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
[0007] （2）茎段消毒及芽启动萌发培养：将步骤（1）处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒10-15s，然后用无菌水清洗3-5次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡5-8min，最后用无菌水冲洗3-5次后，用滤纸吸干水分，剪取1-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种3-5外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为
20-22℃，光照强度1500—2000 lx，光照时间14 h／d的条件下，进行15-20d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，40-50d后形成无菌试管苗；
[0008] （3）无菌试管苗增殖培养：将步骤（2）所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2-3周继代一次，获得大量无菌试管苗；
[0009] （4）生根培养：将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25-30d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
[0010] （5）炼苗移栽：将步骤（4）得到的试管苗首先在培养室适应1d,然后在温室条件下，清水洗涤3-5次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗10-15d后移栽进行常规管理。
[0011] 进一步，所述的试管苗增殖继代培养基包括改良MS +1.0～2.0mgL-1BA+1.0～-1 -1 -1 -1 -11.5mgL KT + 0.1～0.3mgL NAA +3.0～3.5gL phytagel + 2-3 mgL GA3+ 20gL 蔗糖, 且pH值为5.8。
[0012] 更进一步，所述的改良MS包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂。
[0013] 其中，所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为：硝酸钾1900mg/L；硫酸铵1650 mg/L；七水硫酸镁350 mg/L；二水氯化钙400mg/L；无水磷酸二氢钾150mg/L；乙二胺四乙酸二钠35.6 mg/L；七水硫酸亚铁25.8 mg/L。
[0014] 所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为：四水硫酸锰20.5mg/L；硫酸锌9.0mg/L；硼酸6.5 mg/L；碘化钾0.5mg/L；钼酸钠0.3mg/L；氯化钴0.05 mg/L，硫酸铜0.02 mg/L，
[0015] 而所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为：盐酸硫胺素10.0 mg/L；烟酸1.5 mg/L；盐酸吡哆醇1.5mg/L；肌醇80.0 mg/L。
[0016] 本发明的有益效果是：本发明所述的猕猴桃的增殖继代培养方法通过改良基本培养基及成分，同时辅助合理的培养方法，使得猕猴桃的外植体繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良种化程度高，以使得最终培育得到的猕猴桃的果实质量及营养价值高，口感好，有利于猕猴桃的大力发展和推广应用。
具体实施方式
[0017] 下面将结合具体实施例，详细说明本发明的具体实施方式：
[0018] 在本实施方式中，所有实施例中采用的改良MS均包括常量营养元素、微量营养元素和有机试剂，
[0019] 且所述的常量营养元素的组分和其对应的浓度为：硝酸钾1900mg/L；硫酸铵1650 mg/L；七水硫酸镁350 mg/L；二水氯化钙400mg/L；无水磷酸二氢钾150mg/L；乙二胺四乙酸二钠35.6 mg/L；七水硫酸亚铁25.8 mg/L。
[0020] 所述的微量营养元素的组分和其对应的浓度为：四水硫酸锰20.5mg/L；硫酸锌9.0mg/L；硼酸6.5 mg/L；碘化钾0.5mg/L；钼酸钠0.3mg/L；氯化钴0.05 mg/L，硫酸铜0.02 mg/L，
[0021] 而所述的有机试剂的组分和其对应的浓度为：盐酸硫胺素10.0 mg/L；烟酸1.5 mg/L；盐酸吡哆醇1.5mg/L；肌醇80.0 mg/L。
[0022] 实施例1:
[0023] 一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤：
[0024] （1）选材：选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
[0025] （2）茎段消毒及芽启动萌发培养：将步骤（1）处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒10s，然后用无菌水清洗3次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡5min，最后用无菌水冲洗3次后，用滤纸吸干水分，剪取1-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种3个外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22℃，光照强度1500—2000 lx，光照时间14 h／d的条件下，进行15d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，40d后形成无菌试管苗；
[0026] （3）无菌试管苗增殖培养：将步骤（2）所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2周继代一次，获得大量无菌试管苗，所述的试管苗增-1 -1 -1 -1殖继代培养基包括改良MS +1.0mgL BA+1.0mgL KT + 0.1mgL NAA +3.0gL phytagel + 2 -1 -1
mgL GA3+ 20gL 蔗糖, 且pH值为5.8；
[0027] （4）生根培养：将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养25d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
[0028] （5）炼苗移栽：将步骤（4）得到的试管苗首先在培养室适应1d,然后在温室条件下，清水洗涤3次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗10d后移栽进行常规管理。
[0029] 利用实施例1所述的猕猴桃的增殖继代培养方法对猕猴桃的外植体进行增殖培养，增殖继代培养频率为2周继代一次，其新生苗按1:15-18的比例增长，且成活率为94.2%。
[0030] 实施例2：
[0031] 一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤：
[0032] （1）选材：选取生长健壮的基生枝用清水冲洗3h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
[0033] （2）茎段消毒及芽启动萌发培养：将步骤（1）处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒15s，然后用无菌水清洗5次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡8min，最后用无菌水冲洗5次后，用滤纸吸干水分，剪取1-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种5外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22℃，光照强度
1500—2000 lx，光照时间14 h／d的条件下，进行20d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，50d后形成无菌试管苗；
[0034] （3）无菌试管苗增殖培养：将步骤（2）所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔3周继代一次，获得大量无菌试管苗，所述的试管苗增-1 -1 -1 -1殖继代培养基包括改良MS +2.0mgL BA+1.5mgL KT + 0.3mgL NAA +3.5gL phytagel + 3 -1 -1
mgL GA3+ 20gL 蔗糖, 且pH值为5.8；
[0035] （4）生根培养：将外植体大量增殖后的无菌试管苗转移到生根培养基中诱导生根，培养30d，至根长至2.0cm以上时，进行炼苗移栽；
[0036] （5）炼苗移栽：将步骤（4）得到的试管苗首先在培养室适应1d,然后在温室条件下，清水洗涤5次后移栽到装有混合育苗基质的穴盘中，保持空气相对湿度在80%以上，然后驯化炼苗15d后移栽进行常规管理。
[0037] 利用实施例2所述的猕猴桃的增殖继代培养方法对猕猴桃的外植体进行增殖培养，增殖继代培养频率为2.5周继代一次，其新生苗按1:16-18的比例增长，且成活率为92.6%。
[0038] 实施例3：
[0039] 一种猕猴桃的增殖继代培养方法，包括以下步骤：
[0040] （1）选材：选取生长健壮的基生枝用清水冲洗2h，然后用5%的多菌灵喷洒选取的枝条，用滤纸吸干茎段表面水分后备用；
[0041] （2）茎段消毒及芽启动萌发培养：将步骤（1）处理过的茎段置于超净工作台上，用75%的酒精消毒12s，然后用无菌水清洗4次，然后用0.1%的升汞灭菌浸泡6min，最后用无菌水冲洗4次后，用滤纸吸干水分，剪取1-2cm带一个饱满芽的茎段，然后，将茎段的基部插入芽启动培养基上，每瓶接种4外植体，诱导顶芽和腋芽萌发，在温度为20-22℃，光照强度
1500—2000 lx，光照时间14 h／d的条件下，进行18d的培养，茎段腋芽开始萌动，茎尖伸长，45d后形成无菌试管苗；
[0042] （3）无菌试管苗增殖培养：将步骤（2）所述的无菌试管苗切成1-2个腋芽的茎段接种在试管苗增殖继代培养基上，每隔2周继代一次，获得大量无菌试管苗，所述的试管苗
