一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法转让专利
申请号 : CN201410319444.1
文献号 : CN104041457B
文献日 : 2016-04-06
发明人 : 邵俭 , 危起伟 , 吴金明 , 孙庆亮
申请人 : 中国水产科学研究院长江水产研究所
摘要 :
本发明公开了一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，步骤是：A、筛选成熟、活力强的秦岭细鳞鲑作为亲本；B、亲本强化培育；C、人工催产：选择3月底至4月中旬，采用两针注射进行催产；D、人工采精卵：注射催产药物后的亲本分养在催产池，在催产池一端架设进水管，选秦岭细鳞鲑亲鱼采用腹部节律挤压进行活体采精卵；E、人工授精：采到卵后，用鱼用生理盐水漂洗，将雄鱼的精液挤于卵上，后用羽毛搅拌，进行人工授精；F、人工孵化：将受精卵用纯净水清洗，倒入底部有多孔篦子的孵化槽中孵化，待鱼苗冲游出现后，移出孵化设备，转至鱼盆培育。方法易行，操作简便，其受精率和孵化率高，所得子代鱼体健壮、匀称，成活率和饵料利用率高，生长速度快。
权利要求 :
1.一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其步骤是：
A、筛选成熟、活力强的秦岭细鳞鲑作为亲本，筛选体重0.25～0.4kg，3～4龄的秦岭细鳞鲑作为亲本；
B、亲本培育：
3
a)按雌雄比例为1：2～3，放养量为5～8尾/m，投喂黄粉虫或夜间悬挂黑光灯，自23
月底开始，加大水流量0.05～0.1m/s；
b)自3月初开始，每日监测水温，水温达到6～7℃，开始减食，后每隔3～5天进行聚维酮碘水体消毒：不停水，在进水口进行泼洒，使用浓度为3～5mg/L，催产前5～7天停食，并停止水体消毒，水温接近繁殖温度时，雌雄亲鱼进行分池培育；
C、人工催产：选择3月底至4月中旬，采用两针注射进行催产，第一针对亲本注射催产药物DOM与LHRH-A2的混合物，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼剂量为：DOM 2～4mg+LHRH-A2 7～
10μg，秦岭细鳞鲑雄鱼注射剂量减半，24～48h注射第二针，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼注射剂量为DOM 1～2mg+LHRH-A2 3～5μg+维生素B12 4μg，秦岭细鳞鲑雄鱼注射剂量减半或不注射；
D、人工采精卵：注射催产药物后的亲本分养在催产池，在催产池一端架设进水管，离水3
面高度0.5～1.0m，水流量控制在0.1～0.15m/s，周围用1.5m进行圈围，选秦岭细鳞鲑亲鱼采用腹部节律挤压进行活体采精卵，雌雄亲本比例为1：1～3；
E、人工授精：采到卵后，用鱼用生理盐水漂洗2～3次，将雄鱼的精液挤于卵上，后用羽毛搅拌2～3分钟，进行人工授精；
F、人工孵化：将受精卵用纯净水进行2～3次清洗，每次为30秒，倒入孵化槽中孵化，3
所述的孵化密度为8万/m，采用下端进水，水流以鱼卵不粘黏为度，每日早晚在进水口倒入粗盐2～3kg，待鱼苗冲游出现后，移出孵化设备，转至鱼盆或网箱进行苗种培育；
所述的步骤B中a步骤培育所用的培育池设计为河渠状水泥池，形成落差，池底铺设砾石，进水口端设置喷水管或扬水设施，进水口下方水深加大，形成人工深潭，每个渠道体3
积为16～20m，水深为0.5～0.8m,排水方便，池水水质透明度为0.5～0.7m,溶氧高于
8mg/L；所述的步骤C中催产时水温达到8～12℃时，进行人工催产。
2.根据权利要求1所述的一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其特征在于：所述的步骤C采用两针注射，DOM与LHRH-A2的混合剂，每尾亲本注射量小于或等于2ml混合剂 量，第一针对亲本注射催产药物DOM与LHRH-A2的混合剂，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼剂量为：DOM
3mg+LHRH-A2 8～9μg，24～48h注射第二针，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼注射剂量为DOM
1.5mg+LHRH-A2 4μg+维生素B12 4μg。
3.根据权利要求1所述的一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其特征在于：所述的步骤D中催产池平均水深0.5m，架设进水管管口高度离水面0.5m，周围用细网进行圈围。
4.根据权利要求1所述的一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其特征在于：所述的步骤F水温为8～9℃时，孵化出膜时间为450～480h。
5.根据权利要求1所述的一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其特征在于：所述的步骤F水温为10～12℃时，孵化出膜时间为408～445h。
说明书 :
一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法
技术领域
[0001] 本发明属于濒危野生动物种质资源保护技术领域，具体为一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法。其方法适用于秦岭细鳞鲑自然种群恢复及人工保种方面。
背景技术
[0002] 秦岭细鳞鲑(Brachymystax lenok tsinlingensis)俗称花鱼、五色鱼、梅花鱼，隶属鲑形目(Saloniformes)、鲑科(Salmonidae)为我国特有种、局部分布的陆封型冷水性鱼类。秦岭细鳞鲑分布范围极为狭窄，栖息水域条件严格，天然种群稀少，仅分布于秦岭太白山峯东麓的黑河，北麓的石头河、南麓的湑水河和太白河，陇县的千河支流及甘肃渭河上游及支流(陕西省动物所等，1987)。由于自然和人为因素的双重影响，秦岭细鳞鲑栖息与生存环境日趋恶化，种质资源受到严重破坏，已被列入国家二级野生保护动物(乐珮琦和陈宜瑜，1998)，对秦岭细鳞鲑的保护已经刻不容缓。随着人工繁殖、苗种培育及各种养殖方式的日趋成熟，加之我国加大对濒危物种保护重视，采用人工繁殖技术保护秦岭细鳞鲑资源成为最行之有效的手段。但由于秦岭细鳞鲑个体小型化严重，性成熟资源量锐减，生境条件苛刻，加之秦岭细鳞鲑性急躁、喜跳善游，体表黏液少，体被细鳞，体内鱼骨相对细小，应激性强等特点，其亲本容易擦伤起病致死(施德亮等，2012)。另外，秦岭细鳞鲑为肉食性冷水鱼类，雌鱼绝对怀卵量小；在自然环境中受精率、孵化率和成活率低，且生长速度慢、生长周期长、人工驯养较难；性成熟一般需要3～4年，500g鱼生长周期一般在4～5年，这增加秦岭细鳞鲑种质资源恢复的难度。近年来，通过多年实践探索，研究出一种成熟、高效的秦岭细鳞鲑亲鱼培育和人工催产技术，提高了受精率、孵化率和苗种成活率。
发明内容
[0003] 鉴于上述问题，本发明的目的是在于提供了一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，方法易行，操作简便，亲鱼具有稳定的产卵量和排精量，其受精率和孵化率高，所得子代鱼体健壮、匀称，成活率和饵料利用率高，具有较强的环境耐受性和抗病力，生长速度快。
[0004] 为了实现上述的目的，本发明采用以下技术措施：
[0005] 一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其步骤是：
[0006] 1)筛选成熟、活力强的秦岭细鳞鲑作为亲本，
[0007] 2)亲本强化培育：
[0008] a)按雌雄比例为1：2～3，放养量为5～8尾/m3，投喂黄粉虫或夜间悬挂黑光灯，3
自2月底开始，加大水流量(0.05～0.1m/s)，促进秦岭细鳞鲑亲鱼的性腺发育。
自2月底开始，加大水流量(0.05～0.1m/s)，促进秦岭细鳞鲑亲鱼的性腺发育。
[0009] b)自3月初(2～8日)开始，每日监测水温，水温达到6～7℃，开始减食，后每隔3～5天进行聚维酮碘水体消毒(不停水，在进水口进行泼洒，使用浓度为3～5mg/L)，催产前5～7天停食，并停止水体消毒。水温接近繁殖温度(8～9℃)时，雌雄亲鱼进行分池培育。
[0010] 3)人工催产：
[0011] 选择3月底(28－31日)至4月中旬(13－17日)，采用两针注射进行催产，第一针对亲本注射催产药物DOM与LHRH-A2的混合物，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼剂量为：DOM2～4mg+LHRH-A27～10μg，秦岭细鳞鲑雄鱼注射剂量减半。24～48h注射第二针，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼注射剂量为DOM 1～2mg+LHRH-A23～5μg+维生素B124μg，秦岭细鳞鲑雄鱼注射剂量减半或者不注射。
[0012] 4)人工采精卵：
[0013] 注射催产药物后的亲本分养在催产池，在催产池一端架设进水管，离水面高度3
0.5～1.0m，水流量控制在0.1～0.15m/s，周围用1.5m进行圈围，防止亲鱼跳出催产池，待效应期后，选秦岭细鳞鲑亲鱼采用腹部节律挤压进行活体采精卵，雌雄亲本比例为1：1～
3。
0.5～1.0m，水流量控制在0.1～0.15m/s，周围用1.5m进行圈围，防止亲鱼跳出催产池，待效应期后，选秦岭细鳞鲑亲鱼采用腹部节律挤压进行活体采精卵，雌雄亲本比例为1：1～
3。
[0014] 5)人工授精：
[0015] 采到卵后，用鱼用生理盐水漂洗2～3次，迅速将雄鱼的精液挤于卵上，后用羽毛轻轻搅拌2～3分钟，进行人工授精。
[0016] 6)人工孵化：
[0017] 将受精卵用纯净水进行多次(2～3次)清洗，每次为30秒，缓慢倒入底部有多孔3
篦子的孵化槽中孵化。所述的孵化密度为8万/m，采用下端进水，水流以鱼卵不粘黏为度，每日早晚在进水口倒入粗盐(Nacl含量：≥90％)2～3kg，待鱼苗冲游出现后，移出孵化设备，转至鱼盆或网箱进行苗种培育。
篦子的孵化槽中孵化。所述的孵化密度为8万/m，采用下端进水，水流以鱼卵不粘黏为度，每日早晚在进水口倒入粗盐(Nacl含量：≥90％)2～3kg，待鱼苗冲游出现后，移出孵化设备，转至鱼盆或网箱进行苗种培育。
[0018] 所述的步骤1中筛选体重0.25～0.4kg，3～4龄以上性成熟的秦岭细鳞鲑作为亲本。
[0019] 所述的步骤2中a步骤中培育池设计为河渠状水泥池，形成落差，池底铺设砾石和石块，进水口端设置喷水管或扬水设施(单相潜水电泵QD6-32/3-1.1，口径40mm)， 进水3
口下方水深加大，形成人工深潭(1.2～1.5m)，每个渠道体积约为16～20m，平均水深为
0.5～0.8m,排水方便，池水水质透明度为0.5～0.7m,溶氧高于8mg/L。
口下方水深加大，形成人工深潭(1.2～1.5m)，每个渠道体积约为16～20m，平均水深为
0.5～0.8m,排水方便，池水水质透明度为0.5～0.7m,溶氧高于8mg/L。
[0020] 所述的步骤3中催产时水温达到8～12℃时，进行人工催产。
[0021] 所述的步骤3采用两针注射，DOM与LHRH-A2的混合剂，每尾亲本注射量小于或等于2ml混合剂量，第一针对亲本注射催产药物DOM与LHRH-A2的混合剂，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼剂量为：DOM 3mg+LHRH-A28～9μg，24～48h注射第二针，每1000g秦岭细鳞鲑雌鱼注射剂量为DOM 1.5mg+LHRH-A24μg+维生素B124μg。
[0022] 所述的步骤4中催产池平均水深0.5m，架设进水管管口高度离水面0.5m，周围用细网进行圈围，防止鱼体跳出和擦伤。
[0023] 所述的步骤5人工采卵后先用鱼用生理盐水漂洗，后迅速将精液挤在卵上用羽毛搅拌。
[0024] 所述的步骤6人工授精后，迅速用纯净水淘洗2～3次，每次为30秒，缓慢倒入底3
部有多孔篦子的孵化槽中孵化，孵化密度为8万/m，采用下端进水，水流以鱼卵不粘黏为度。
部有多孔篦子的孵化槽中孵化，孵化密度为8万/m，采用下端进水，水流以鱼卵不粘黏为度。
[0025] 所述的步骤6每日早晚在进水口倒入粗盐2～3kg进行水体过滤消毒。
[0026] 所述的步骤6水温为8～9℃时，孵化出膜时间为450～480h。
[0027] 所述的步骤6水温为10～12℃时，孵化出膜时间为408～445h。
[0028] 本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
[0029] 述一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，通过人工调控环境因子，使雌雄鱼性腺发育基本同步，保证人工催产顺利进行，方法简单，可操作性强，实践应用性好，其受精率高于90.00％，孵化率高于83.00％，成活率高于90.00％，和其余鲑鳟冷水鱼类繁殖一样，完全适用于苗种的规模化生产，从而用于秦岭细鳞鲑物种资源保护及其自然种群恢复。
具体实施方式
[0030] 以下结合具体的实施方式，对本发明进一步说明。
[0031] 实施例1：
[0032] 一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，其步骤是：
[0033] 1.亲本选择：
[0034] 筛选体重在0.25～0.4kg成熟、活力强的秦岭细鳞鲑作为亲本。
[0035] 2.亲本强化培育：
[0036] 自然条件下，秦岭细鳞鲑生活习性特殊，栖息地条件苛刻，且其雄鱼性腺发育早于雌鱼。因此，为了促使亲本对人工设施适应，并保证雌雄鱼性腺发育同步，顺利进行人工繁殖，需要对亲本进行仿生态模拟强化培育，并人工调控雌雄亲本的性腺发育。
[0037] a)秦岭细鳞鲑亲鱼的强化培育：建设仿生态模拟配培育池，培育池设计为河渠状水泥池，形成落差，池底铺设砾石和石块，进水口端设置喷水管或扬水设施，进水口下方水3
深加大，形成人工深潭(1.2～1.5m)，每个渠道体积约为16或17或18或19或20m，平均水深为0.5或0.6或0.7或0.8m，排水方便，池水水质透明度为0.5或0.6或0.7m，溶氧高
3
于8mg/L，放养量为20或25或35或40尾/m，雌雄比例为1：2，黄粉虫为亲鱼饵料投喂，同时伴乳酸恩诺沙星1g/kg饵料，一周内连续投喂3天，每隔一周使用。自2月底，加大水流量进行流水刺激，促进秦岭细鳞鲑亲鱼的性腺发育；
深加大，形成人工深潭(1.2～1.5m)，每个渠道体积约为16或17或18或19或20m，平均水深为0.5或0.6或0.7或0.8m，排水方便，池水水质透明度为0.5或0.6或0.7m，溶氧高
3
于8mg/L，放养量为20或25或35或40尾/m，雌雄比例为1：2，黄粉虫为亲鱼饵料投喂，同时伴乳酸恩诺沙星1g/kg饵料，一周内连续投喂3天，每隔一周使用。自2月底，加大水流量进行流水刺激，促进秦岭细鳞鲑亲鱼的性腺发育；
[0038] b)从3月中旬抽用井水进行人工调控，减少极温差值(8～12℃)，维持日均温稳定(10～11℃)，促进秦岭细鳞鲑雌雄亲鱼性腺发育同步；每隔3或4或5天进行聚维酮碘水体消毒，催产前5或6或7天停止投喂，并停止水体消毒。水温接近繁殖温度(8～9℃)时雌雄亲鱼分池培育，以避免亲鱼个别自产。
[0039] 3.人工催产：
[0040] (1)雌雄鉴别与配比：
[0041] 秦岭细鳞鲑雌鱼在生殖季节胸鳍、腹鳍手摸硬度增加，体色为青褐色，体侧伴有橙红色带状条纹，生殖孔突起呈棕红色；而雄鱼在生殖季节胸鳍、腹鳍手摸较为柔软，体色为黑褐色，体侧伴有绛红色条纹，生殖孔锥形明显呈红褐色。
[0042] (2)成熟亲鱼的选择：
[0043] 秦岭细鳞鲑雌鱼：腹部均为膨大，柔软、弹性强，触摸腹壁有丰满和松软感，即为性腺发育良好。秦岭细鳞鲑雄鱼：轻压腹部两侧有乳白色黏稠状的精液流出且遇水立即散开。
[0044] (3)注射催产剂与剂量：
[0045] 注射方法一般采用胸腔注射，部分为胸鳍基部或腹鳍基部，采用两次注射，药物为马来酸地欧酮(DOM)和促黄体素释放激素A2(LHRH-A2)的混合物，第二针剂量减半，添加维生素B12混合；雄鱼剂量均减半使用。
[0046] (4)人工催产的药物使用：
[0047] 选择3月下旬至4月中旬，分别对两种亲本注射催产药物DOM(马来酸地欧酮，宁 波，三生药业有限公司)与LHRH-A2(促黄体素释放激素A2,宁波，三生药业有限公司)的混合物，每1000g秦岭细鳞鲑亲鱼的剂量：DOM 3mg+LHRH-A28～9μg混合剂；24或28或32或36或40或44或48h注射第二针，每1000g秦岭细鳞鲑亲鱼注射剂量为DOM
1.5mg+LHRH-A24μg+维生素B124μg混合剂，以上雄鱼剂量减半。效应时间与水温相关，水温8或9℃，秦岭细鳞鲑雌鱼效应时间为48或55或62或70或82或88h，雄鱼效应时间为
36或39或44或46或48h；水温10或11或12℃，秦岭细鳞鲑雌鱼效应时间为24或27或
29或32或34或36h，雄鱼效应为12或15或18或21或24h，因此雌鱼要早于12h注射催产药物，不同温度下秦岭细鳞鲑雌鱼的催产效应时间表，见表1。
1.5mg+LHRH-A24μg+维生素B124μg混合剂，以上雄鱼剂量减半。效应时间与水温相关，水温8或9℃，秦岭细鳞鲑雌鱼效应时间为48或55或62或70或82或88h，雄鱼效应时间为
36或39或44或46或48h；水温10或11或12℃，秦岭细鳞鲑雌鱼效应时间为24或27或
29或32或34或36h，雄鱼效应为12或15或18或21或24h，因此雌鱼要早于12h注射催产药物，不同温度下秦岭细鳞鲑雌鱼的催产效应时间表，见表1。
[0048] 表1 不同温度下秦岭细鳞鲑雌雄亲鱼的催产效应时间
[0049]
[0050] 4.人工采精卵授精：
[0051] 注射催产药物后的亲本分养在催产池中，强流水刺激，亲鱼发情时，极喜跳跃、乱窜，雌雄有时跳跃水面达1m，逆水冲游很明显。此时，筛选秦岭细鳞鲑亲本，按雌雄比例为1：1～2采卵授精。
[0052] 5.人工孵化：
[0053] 秦岭细鳞鲑的受精卵为半黏性卵，先用鱼用生理盐水2或3次进行脱洗去黏后，采用干法授精，将精液挤于卵，搅动2或3分钟，充分授精，授精在昏暗光线下进行，再放入3
微流水的孵化槽中孵化，孵化密度为8万/m水体。受精卵呈橙黄色，若按受精卵发育到神经胚期为受精成功标准，其受精卵为98％；若按受精卵发育到器官形成后期，其受精率为
90％。水温8或9℃，若按90％受精卵孵化出膜为标准，约经450或460或470或480h孵化出膜；水温10或11或12℃，若按90％受精卵孵化出膜为标准，约经408或415或422或
431或438或441或445h孵化出膜。鱼苗孵化9天后，开始出现口裂，当体色加深50％鱼苗出现冲游后，进行鸡蛋黄和丰年虫开口；90％鱼苗出现冲游行为后，移出孵化设备，移至仔鱼培育网箱进行仔稚鱼培育。
微流水的孵化槽中孵化，孵化密度为8万/m水体。受精卵呈橙黄色，若按受精卵发育到神经胚期为受精成功标准，其受精卵为98％；若按受精卵发育到器官形成后期，其受精率为
90％。水温8或9℃，若按90％受精卵孵化出膜为标准，约经450或460或470或480h孵化出膜；水温10或11或12℃，若按90％受精卵孵化出膜为标准，约经408或415或422或
431或438或441或445h孵化出膜。鱼苗孵化9天后，开始出现口裂，当体色加深50％鱼苗出现冲游后，进行鸡蛋黄和丰年虫开口；90％鱼苗出现冲游行为后，移出孵化设备，移至仔鱼培育网箱进行仔稚鱼培育。
[0054] 上述一种秦岭细鳞鲑人工繁殖方法，还具有以下优点：
[0055] 1.具有稳定的产卵量：一般情况下秦岭细鳞鲑性腺发育雄鱼较雌鱼早，个体间差异显著，性腺发育不同步，雌鱼绝对怀卵量低，且受精率、孵化率和成活率都较低，规模化育种困难。本发明根据秦岭细鳞鲑的生物学特性，结合各种人工调控手段，进行人工催产繁殖，其受精率达90％，孵化率达83.33％,鱼种孵化出膜后成活达92.9％，与其它鲑鳟冷水鱼类繁殖一样，完全适用于苗种的规模化生产，从而用于秦岭细鳞鲑物种资源保护及其自然种群恢复。