乌苏酸化学修饰物及其制备方法和应用转让专利
申请号 : CN201410128699.X
文献号 : CN104045678B
文献日 : 2016-03-02
发明人 : 赵肃清 , 吴盼盼 , 张焜 , 何萍 , 黄天明 , 罗健 , 程安明
申请人 : 广东工业大学
摘要 :
本发明公开了一种乌苏酸化学修饰物及其制备方法和应用，该乌苏酸化学修饰物结构式为下式：其中：R1为酰基；R2为胺基：制备方法，乌苏酸和酸酐在催化剂条件下反应得到3β‐酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸类化合物2～5；化合物2～5利用草酰氯在冰浴条件下酰化，得到3‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12烯‐28‐酰氯，再在缚酸剂条件下，与苯胺反应得N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐胺类化合物；该化合物具有抑制酶活性的作用，可应用在制备预防、控制或治疗血糖水平升高糖尿病或肥胖症的药品、饮品、食品和保健品中；属于药物合成技术领域。
权利要求 :
1.一种乌苏酸化学修饰物，其特征在于，结构式为式1：
其中：R1为甲酰基或者丙酰基或者丁酰基或者异丁酰基的其中之一；R2为苯胺基或邻溴苯胺基或邻氯苯胺基或者邻氟苯胺基或对溴苯胺基或对氯苯胺基或对氟苯胺基的其中之一。
2.制备权利要1所述的乌苏酸化学修饰物的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
1)先称取乌苏酸置于的烧瓶中，加入溶剂搅拌溶解后，再加入催化剂4-二甲氨基吡啶搅拌溶解，然后缓慢滴加酸酐，反应过夜后，用TLC法检测反应终点，反应完毕，减压蒸除溶剂，然后用蒸馏水分散反应体系、抽滤，收集固体层；
2)用水分散步骤1)收集的固体层，加酸调节pH至3-4，然后水洗至中性，过滤收集固体；烘干固体得粗产物，通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体，即3β-酰氧基-乌苏烷型-12-烯-28-羧酸类化合物；
3)称取步骤2)制备的3β-酰氧基-乌苏烷型-12-烯-28-羧酸类化合物，置于烧瓶中，然后加溶剂搅拌溶解后，将烧瓶置于冰浴中，将二酰氯缓慢加入体系中，在常温条件下避光反应30-40h，蒸除溶剂和未反应完全的二酰氯；
4)再向步骤3)的反应体系中加入溶剂，然后加入缚酸剂，最后量取苯胺类化合物缓慢滴加至反应体系，反应4-8h后蒸除溶剂得到粗产物化合物6-12的其中之一，通过硅胶柱层析和Sephadex LH-20纯化，得到N-(3β-乙酰氧基-乌苏烷型-12-烯-28-酰)-胺类化合物；
其中：乌苏酸:催化剂:酸酐:胺类化合物的摩尔比为：6:0.45-0.55:24:6。
3.根据权利要2所述的乌苏酸化学修饰物的制备方法，其特征在于，步骤1)所述的酸酐为乙酸酐或者丙酸酐或者丁酸酐或者异丁酸酐的其中之一。
4.根据权利要2所述的乌苏酸化学修饰物的制备方法，其特征在于，步骤4)所述的苯胺类化合物为苯胺或者邻溴苯胺或者邻氯苯胺或者邻氟苯胺或者对溴苯胺或者对氯苯胺或者对氟苯胺的其中之一。
5.权利要求1所述的乌苏酸化学修饰物在制备α-葡萄糖苷酶抑制剂中的应用。
6.权利要求1所述的乌苏酸化学修饰物在制备抑制血糖水平升高的药品、饮品、食品和保健品中的应用。
7.权利要求1所述的乌苏酸化学修饰物在制备预防、控制或治疗糖尿病或肥胖症及其并发症的药品、饮品、食品和保健品中的应用。
8.权利要求1所述的乌苏酸化学修饰物在制备预防、控制或治疗肥胖症，或减肥美体塑身用的药品、饮品、食品和保健品中的应用。
说明书 :
乌苏酸化学修饰物及其制备方法和应用
技术领域
[0001] 本发明公开了一种乌苏酸化学修饰物，本发明还公开了该乌苏酸化学修饰物及其制备方法以及应用；属于药物合成技术领域。
背景技术
[0002] 糖尿病是一种常见的内分泌代谢慢性病，当胰脏不能产生足够的胰岛素或者当身体不能有效利用产生的胰岛素时，就会出现糖尿病。胰岛素是一种调节血糖的荷尔蒙。高血糖症或血糖升高，是糖尿病不加控制的一种通常结果，随着时间的推移会对人体的许多系统带来严重损害，特别是神经和血管。在发达国家，糖尿病是继心脑血管疾病和癌症之后危害人类健康的第三大“杀手”。
[0003] 根据世界卫生组织2013年3月报道，全球范围内糖尿病患者约有3.47亿。据统计，2010年全球有340万人死于空腹高血糖带来的后果。80％以上的糖尿病死亡发生在低收入和中等收入国家。世界卫生组织预测，2030年糖尿病将成为人类死亡的第七位主要根源。而作为世界上人口大国的中国，糖尿病的患病比率逐年攀升，截至2012年，中国有超过0.92亿人口患有此病。
[0004] 乌苏酸(ursolic acid,UA,CAS号:77-52-1)(化合物1)是一种五环三萜类化合物，广泛存在于中药、食物及其它植物中。据报道，乌苏酸具有保肝护肝、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、抗炎、抗菌、抑制艾滋病毒、抗氧化、抗糖尿病以及降血糖等多种生物学效应。
[0005] 早期研究表明，乌苏酸能够增加一种蛋白质的活性，这种蛋白质可以刺激小鼠的肌肉生长及葡萄糖代谢。而在最新的跟进研究中，爱荷华州的研究人员对患有饮食引起的肥胖症的小鼠进行了乌苏酸测试。六周内，其中一组小鼠可以无限食用一种高脂肪食物，这种食物会引起肥胖症、葡萄糖不耐受和脂肪肝。近年来，乌苏酸及其衍生物的生物活性备受关注，并合成了大量的衍生物以提高其活性。而乌苏酸特别是其衍生物的α-葡萄糖苷酶抑制活性报道较少。
发明内容
[0006] 针对上述问题，本发明所要解决的技术问题在于，提供一种乌苏酸作为先导化合物，设计出一种具有多种生物活性的，特别是具有α‐葡萄糖苷酶抑制活性的乌苏酸化学修饰物；本发明还提供了该乌苏酸化学修饰物的制备方法及其应用。
[0007] 为解决上述技术问题，本发明提供的前一技术方案是这样的：一种乌苏酸化学修饰物，其特征在于，结构式为式1：
[0008]
[0009] 其中：R1为酰基；R2为胺基。
[0010] 进一步的，上述的乌苏酸化学修饰物，所述的酰基为甲酰基或者丙酰基或者丁酰基或者异丁酰基的其中之一。
[0011] 进一步的，上述的乌苏酸化学修饰物，所述的胺基为苯胺基或者邻溴苯胺基或者邻氯苯胺基或者邻氟苯胺基或者对溴苯胺基或者对氯苯胺基或者对氟苯胺基的其中之一。
[0012] 本发明还该提供的乌苏酸化学修饰物的制备方法，该方法依次包括下述步骤：
[0013] 1)先称取乌苏酸置于的烧瓶中，加入溶剂搅拌溶解后，再加入催化剂4‐二甲氨基吡啶搅拌溶解，然后缓慢滴加酸酐，反应过夜后，用TLC法检测反应终点，反应完毕，减压蒸除溶剂，然后用蒸馏水分散反应体系、抽滤，收集固体层；
[0014] 2)用水分散步骤1)收集的固体层，加酸调节pH至3‐4，然后水洗至中性，过滤收集固体；烘干固体得粗产物，通过硅胶柱层析纯化，得到白色固体，即3β‐酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸类化合物；
[0015] 3)称取步骤2)制备的3β‐酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸类化合物，置于烧瓶中，然后加溶剂搅拌溶解后，将烧瓶置于冰浴中，将二酰氯缓慢加入体系中，在常温条件下避光反应30‐40h，蒸除溶剂和未反应完全的二酰氯；
[0016] 4)再向步骤3)的反应体系中加入溶剂，然后加入缚酸剂，最后量取苯胺类化合物缓慢滴加至反应体系，反应4‐8h后蒸除溶剂得到粗产物化合物6‐12的其中之一，通过硅胶柱层析和Sephadex LH‐20纯化，得到N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐胺类化合物；
[0017] 其中：乌苏酸:催化剂:酸酐:胺类化合物的摩尔比为：6:0.45‐0.55:24:6。
[0018] 进一步的，上述的乌苏酸化学修饰物的制备方法，步骤1)所述的酸酐为乙酸酐或者丙酸酐或者丁酸酐或者异丁酸酐的其中之一；步骤4)所述的苯胺类化合物为苯胺或邻溴苯胺或者邻氯苯胺或邻氟苯胺或对溴苯胺或对氯苯胺或对氟苯胺的其中之一。
[0019] 本发明还提供了该乌苏酸化学修饰物在制备α‐葡萄糖苷酶抑制剂中的应用；在制备抑制血糖水平升高的药品、饮品、食品和保健品中的应用；在制备预防、控制或治疗糖尿病或肥胖症及其并发症的药品、饮品、食品和保健品中的应用；在制备预防、控制或治疗肥胖症，或减肥美体塑身用的药品、饮品、食品和保健品中的应用。
[0020] 与现有技术相比，本发明提供的技术方案具有如下优点：对天然产物乌苏酸进行化学修饰，得到一系列乌苏酸修饰物，具有制备方法简单，合成产率高，所得的乌苏酸化学修饰生物活性高，使用范围广，具体如下。
附图说明
[0021] 图1是本发明实施例5制备的化合物6的1H NMR谱图；
[0022] 图2是本发明实施例5制备的化合物613C NMR谱图；
[0023] 图3是本发明实施例5制备的化合物6的高分辨率质谱图；
[0024] 图4是本发明实施例6制备的化合物7的1H NMR谱图；
[0025] 图5是本发明实施例6制备的化合物7的13C NMR谱图；
[0026] 图6是本发明实施例6制备的化合物7的高分辨率质谱图；
[0027] 图7是本发明实施例7制备的化合物8的1H NMR谱图；
[0028] 图8是本发明实施例7制备的化合物8的13C NMR谱图；
[0029] 图9是本发明实施例7制备的化合物8的高分辨率质谱图；
[0030] 图10是本发明实施例8制备的化合物9的1H NMR谱图；
[0031] 图11是本发明实施例8制备的化合物9的13C NMR谱图；
[0032] 图12本发明实施例8制备的化合物9的高分辨率质谱图；
[0033] 图13是本发明实施例9制备的化合物10的1H NMR谱图；
[0034] 图14是本发明实施例9制备的化合物10的13C NMR谱图；
[0035] 图15是本发明实施例9制备的化合物10的高分辨率质谱图；
[0036] 图16是本发明实施例10制备的化合物11的1H NMR谱图；
[0037] 图17是本发明实施例10制备的化合物11的13C NMR谱图；
[0038] 图18本发明实施例10制备的化合物11的高分辨率质谱图；
[0039] 图19是本发明实施例11制备的化合物12的1H NMR谱图；
[0040] 图20是本发明实施例11制备的化合物12的13C NMR谱图；
[0041] 图21是本发明实施例11制备的化合物12的高分辨率质谱图；
[0042] 图22是化合物8酶动力学研究双倒数曲线图；
[0043] 图23是化合物12酶动力学研究双倒数曲线图；
[0044] 图24是化合物15酶动力学研究双倒数曲线图；
[0045] 图25是化合物21酶动力学研究双倒数曲线图；
[0046] 图26是乌苏酸及化合物8、21和阿卡波糖对正常小鼠灌胃麦芽糖后血糖控制影响曲线图。
具体实施方式
[0047] 下面结合具体实施例的方式对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但并不构成对本发明的任何限制，任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求范围之内。
[0048] 实施例1 3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸(化合物2)的制备：
[0049] 首先称取6mmol的乌苏酸(UA)于125mL含磁子的圆底烧瓶中，然后量取75mL干燥的吡啶于烧瓶中，在室温下，搅拌约10min待溶解完全后，加入60mg 4‐二甲氨基吡啶搅拌溶解，然后缓慢的滴加24mmol(四倍量)的乙酸酐，在室温下，反应12小时，以TLC检测反应终点，(展开剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝5:1，显色剂：甲醇:乙酸:浓硫酸:茴香醛(体积比)＝85:10:5:0.5)。反应完毕，在55℃下，减压蒸除吡啶，然后用100mL蒸馏水分散反应体系、抽滤，重复三次，收集固体层。再次用100mL水分散固体，用2mol/L的HCl溶液调节pH至3‐4，然后水洗至中性，再次过滤，收集固体得到粗产物。在50℃下，烘干粗产物，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝10:1)，得1 13 1
到化合物2，白色固体，产率：81％。并进行 H NMR和 C NMR分析，H NMR(300MHz,DMSO)δ11.89(s,1H,‐COOH),5.12(s,1H),4.40(dd,J ＝ 11.2,4.5Hz,1H),2.11(d,J ＝
11.3Hz,1H),2.00(s,3H,‐OCOCH3),1.97–1.71(m,4H),1.68–1.38(m,10H),1.30(t,J ＝
13
14.2Hz,4H),1.10–0.96(m,5H),0.91(s,7H),0.84(d,J ＝ 13.2Hz,10H),0.76(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.3,170.1(‐OCOCH3),138.2,124.4,79.9,54.5,52.3,46.8,46.8,
41.6,38.5,38.4,37.7,37.2,36.4,36.3,32.5,30.2, 27.8,27.5,23.8,23.2,23.2,22.8,22‐
.5(‐OCOCH3),21.1,21.0,17.8,17.0,16.9,16.7,15.1；ESI‐MS m/z 497.77(M‐H) 。
到化合物2，白色固体，产率：81％。并进行 H NMR和 C NMR分析，H NMR(300MHz,DMSO)δ11.89(s,1H,‐COOH),5.12(s,1H),4.40(dd,J ＝ 11.2,4.5Hz,1H),2.11(d,J ＝
11.3Hz,1H),2.00(s,3H,‐OCOCH3),1.97–1.71(m,4H),1.68–1.38(m,10H),1.30(t,J ＝
13
14.2Hz,4H),1.10–0.96(m,5H),0.91(s,7H),0.84(d,J ＝ 13.2Hz,10H),0.76(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.3,170.1(‐OCOCH3),138.2,124.4,79.9,54.5,52.3,46.8,46.8,
41.6,38.5,38.4,37.7,37.2,36.4,36.3,32.5,30.2, 27.8,27.5,23.8,23.2,23.2,22.8,22‐
.5(‐OCOCH3),21.1,21.0,17.8,17.0,16.9,16.7,15.1；ESI‐MS m/z 497.77(M‐H) 。
[0050] 实施例2 3β‐丙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸(化合物3)的制备：
[0051] 首先称取6mmol的乌苏酸(UA)于125mL含磁子的圆底烧瓶中，然后量取75mL干燥的吡啶于烧瓶中，在室温下搅拌约10min待溶解完全后，加入60mg 4‐二甲氨基吡啶搅拌溶解，然后缓慢的滴加24mmol(四倍量)的丙酸酐，在室温下，反应12小时，以TLC检测反应终点(展开剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝5:1，显色剂：甲醇:乙酸:浓硫酸:茴香醛(体积比)＝85:10:5:0.5)，反应完毕，在55℃下，减压蒸除吡啶，然后用100mL蒸馏水分散反应体系、抽滤，重复三次，收集固体层。再次用100mL水分散固体，用2mol/L的HCl溶液调节pH至3‐4，然后水洗至中性，再次过滤，收集固体得到粗产物。在50℃下，烘干粗产物，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝10:1)，得1 13 1
到化合物3，白色固体，产率：73％。并进行 H NMR和 C NMR分析，H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H,‐COOH),5.13(s,1H),4.42(dd,J ＝ 11.3,4.5Hz,1H),2.39–
2.21(m,2H,‐OCOCH2CH3),2.11(d,J ＝ 11.2Hz,1H),2.00–1.74(m,4H),1.66–
1.43(m,10H),1.30(dd,J ＝ 22.7,11.5Hz,4H),1.04(dd,J ＝ 13.2,5.6Hz,7H,‐
13
OCOCH2CH3),0.91(s,7H),0.88–0.79(m,11H),0.75(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.3,173.2(‐OCOCH2CH3),138.2,124.4,79.7,54.5,52.3,46.8,46.8, 41.6,38.5,38.4,37.7,37.3,36.4,36.3,32.5,30.2, 27.8,27.5,27.2(‐OCOCH2CH3),23.8,23.2,23.2,22.8,21.1,21.1,17.8,17.0,16.9,16.7,15.1,9.2(‐OCOCH2CH3)；
‐
ESI‐MS m/z 511.80(M‐H) 。
到化合物3，白色固体，产率：73％。并进行 H NMR和 C NMR分析，H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H,‐COOH),5.13(s,1H),4.42(dd,J ＝ 11.3,4.5Hz,1H),2.39–
2.21(m,2H,‐OCOCH2CH3),2.11(d,J ＝ 11.2Hz,1H),2.00–1.74(m,4H),1.66–
1.43(m,10H),1.30(dd,J ＝ 22.7,11.5Hz,4H),1.04(dd,J ＝ 13.2,5.6Hz,7H,‐
13
OCOCH2CH3),0.91(s,7H),0.88–0.79(m,11H),0.75(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.3,173.2(‐OCOCH2CH3),138.2,124.4,79.7,54.5,52.3,46.8,46.8, 41.6,38.5,38.4,37.7,37.3,36.4,36.3,32.5,30.2, 27.8,27.5,27.2(‐OCOCH2CH3),23.8,23.2,23.2,22.8,21.1,21.1,17.8,17.0,16.9,16.7,15.1,9.2(‐OCOCH2CH3)；
‐
ESI‐MS m/z 511.80(M‐H) 。
[0052] 实施例3 3β‐丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸(化合物4)的制备：
[0053] 首先称取6mmol的乌苏酸(UA)于125mL含磁子的圆底烧瓶中，然后量取75mL干燥的吡啶于烧瓶中，在室温下搅拌约10min待溶解完全后，加入60mg 4‐二甲氨基吡啶搅拌溶解，然后缓慢的滴加24mmol(四倍量)的丁酸酐，在室温下，反应12小时，以TLC检测反应终点(展开剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝5:1，显色剂：甲醇:乙酸:浓硫酸:茴香醛(体积比)＝85:10:5:0.5)，反应完毕，在55℃下，减压蒸除吡啶，然后用100mL蒸馏水分散反应体系、抽滤，重复三次，收集固体层。再次用100mL水分散固体，用2mol/L的HCl溶液调节pH至3‐4，然后水洗至中性，再次过滤，收集固体得到粗产物。在50℃下，烘干粗产物，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝10:1)，得1 13 1
到化合物4，白色固体，产率：63％。并进行 H NMR和 C NMR分析，H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H,‐COOH),5.13(s,1H),4.42(dd,J ＝ 11.3,4.6Hz,1H),2.34–
2.19(m,2H,‐OCOCH2CH2CH3),2.11(d,J ＝ 11.2Hz,1H),2.00–1.74(m,4H),1.62–
1.47(m,10H),1.30(dd,J＝22.8,11.4Hz,4H),1.08–0.97(m,5H),0.97–0.85(m,12H,‐OC
13
OCH2CH2CH3),0.82(s,10H),0.75(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.2,172.4(‐OCOCH2CH
2CH3),138.2,124.4,79.7,54.5,52.3,46.8,46.9, 41.6,38.5,38.4,37.7,37.3,36.4,36.3,
35.8(‐OCOCH2CH2CH3),32.5,30.2,27.8,27.5,23.8,23.2,23.2,22.8,21.0,21.0,18.1(‐OCOCH2CH2CH3),17.8,17.0,16.8,16.7,15.1,13.4(‐OCOCH2CH2CH3)；ESI‐MS m/z 525.83(M‐‐
H) 。
到化合物4，白色固体，产率：63％。并进行 H NMR和 C NMR分析，H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H,‐COOH),5.13(s,1H),4.42(dd,J ＝ 11.3,4.6Hz,1H),2.34–
2.19(m,2H,‐OCOCH2CH2CH3),2.11(d,J ＝ 11.2Hz,1H),2.00–1.74(m,4H),1.62–
1.47(m,10H),1.30(dd,J＝22.8,11.4Hz,4H),1.08–0.97(m,5H),0.97–0.85(m,12H,‐OC
13
OCH2CH2CH3),0.82(s,10H),0.75(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.2,172.4(‐OCOCH2CH
2CH3),138.2,124.4,79.7,54.5,52.3,46.8,46.9, 41.6,38.5,38.4,37.7,37.3,36.4,36.3,
35.8(‐OCOCH2CH2CH3),32.5,30.2,27.8,27.5,23.8,23.2,23.2,22.8,21.0,21.0,18.1(‐OCOCH2CH2CH3),17.8,17.0,16.8,16.7,15.1,13.4(‐OCOCH2CH2CH3)；ESI‐MS m/z 525.83(M‐‐
H) 。
[0054] 实施例4 3β‐异丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐羧酸(化合物5)的制备：
[0055] 首先称取6mmol的乌苏酸(UA)于125mL含磁子的圆底烧瓶中，然后量取75mL干燥的吡啶于烧瓶中，在室温下搅拌约10min待溶解完全后，加入60mg 4‐二甲氨基吡啶搅拌溶解，然后缓慢的滴加24mmol(四倍量)的异丁酸酐，在室温下，反应12小时，以TLC检测反应终点(展开剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝5:1，显色剂：甲醇:乙酸:浓硫酸:茴香醛(体积比)＝85:10:5:0.5)，反应完毕，在55℃下，减压蒸除吡啶，然后用100mL蒸馏水分散反应体系、抽滤，重复三次，收集固体层。再次用100mL水分散固体，用2mol/L的HCl溶液调节pH至3‐4，然后水洗至中性，再次过滤，收集固体得到粗产物。在50℃下，烘干粗产物，通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝10:1)，得到化合物5，白色固体，产率：61％。并
1 13 1
进行 H NMR和 C NMR分析，参阅图1和图2，H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H,‐COOH),5.13(s,1H),4.40(dd,J ＝ 11.4,4.6Hz,1H),2.11(d,J ＝ 11.2Hz,1H),2.00–
1.74(m,4H),1.63–1.44(m,10H),1.30(dd,J ＝ 23.0,11.6Hz,4H),1.09(dd,J＝ 10.9,7.0Hz,7H,‐OCOCH(CH3)2),1.06–0.97(m,5H),0.91(s,7H),0.82(d,J
13
＝ 8.0Hz,10H),0.76(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.2,175.6,(‐OCOCH(CH3)2),138.2,124.4,79.5,54.5,52.3,46.8, 46.8,41.6,38.5,38.4,37.6,37.4,36.4,36.
3,33.6(‐OCOCH(CH3)2),32.5,30.2,27.8,27.5,23.8,23.2,23.2,22.8,21.0,21.0,19.0(‐OCOCH(CH3)2),18.7(‐OCOCH(CH3)2),17.7,17.0,16.9,16.7,15.1；ESI‐MS m/z525.82(M‐‐
H) 。
1 13 1
进行 H NMR和 C NMR分析，参阅图1和图2，H NMR(400MHz,DMSO)δ11.96(s,1H,‐COOH),5.13(s,1H),4.40(dd,J ＝ 11.4,4.6Hz,1H),2.11(d,J ＝ 11.2Hz,1H),2.00–
1.74(m,4H),1.63–1.44(m,10H),1.30(dd,J ＝ 23.0,11.6Hz,4H),1.09(dd,J＝ 10.9,7.0Hz,7H,‐OCOCH(CH3)2),1.06–0.97(m,5H),0.91(s,7H),0.82(d,J
13
＝ 8.0Hz,10H),0.76(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ178.2,175.6,(‐OCOCH(CH3)2),138.2,124.4,79.5,54.5,52.3,46.8, 46.8,41.6,38.5,38.4,37.6,37.4,36.4,36.
3,33.6(‐OCOCH(CH3)2),32.5,30.2,27.8,27.5,23.8,23.2,23.2,22.8,21.0,21.0,19.0(‐OCOCH(CH3)2),18.7(‐OCOCH(CH3)2),17.7,17.0,16.9,16.7,15.1；ESI‐MS m/z525.82(M‐‐
H) 。
[0056] 实施例5 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐苯胺(化合物6)的制备：
[0057] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在45℃下蒸除溶剂得到化合物6粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯
1 13
仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物6，白色固体，产率：76％。并进行 H NMR、C
1
NMR和高分辨质谱分析，参阅图1至图3，H NMR(400MHz,DMSO)δ8.86(s,1H),7.53(d,J＝ 7.7Hz,2H),7.25(t,J ＝ 7.8Hz,2H),7.00(t,J ＝ 7.2Hz,1H),5.28(s,1H),4.39(d,J＝ 7.0Hz,1H),2.37(d,J ＝ 10.9Hz,1H),2.00(s,3H,‐OCOCH3),1.76(dd,J ＝
39.0,11.3Hz,5H),1.65–1.37(m,9H),1.37–1.16(m,4H),1.12–0.91(m,9H),0.91–
13
0.69(m,13H),0.64(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ175.1(‐CO‐NH‐),170.1(‐OCOCH3),139.3,138.5,128.3,128.3,124.5,123.0, 120.4,120.4,79.9,54.5,51.6,47.5,46.8,41.6, 38.8,38.3,37.7,37.2,36.4,36.3,32.4,30.3,27.8,27.4,23.4,23.4,23.2,22.9,2+
1.1,21.0,17.7,17.1,16.6,16.6,16.6,15.1；ESI‐MS m/z 612.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H55+
NO3(574.4253)[M+H]＝574.4255。
1 13
仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物6，白色固体，产率：76％。并进行 H NMR、C
1
NMR和高分辨质谱分析，参阅图1至图3，H NMR(400MHz,DMSO)δ8.86(s,1H),7.53(d,J＝ 7.7Hz,2H),7.25(t,J ＝ 7.8Hz,2H),7.00(t,J ＝ 7.2Hz,1H),5.28(s,1H),4.39(d,J＝ 7.0Hz,1H),2.37(d,J ＝ 10.9Hz,1H),2.00(s,3H,‐OCOCH3),1.76(dd,J ＝
39.0,11.3Hz,5H),1.65–1.37(m,9H),1.37–1.16(m,4H),1.12–0.91(m,9H),0.91–
13
0.69(m,13H),0.64(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ175.1(‐CO‐NH‐),170.1(‐OCOCH3),139.3,138.5,128.3,128.3,124.5,123.0, 120.4,120.4,79.9,54.5,51.6,47.5,46.8,41.6, 38.8,38.3,37.7,37.2,36.4,36.3,32.4,30.3,27.8,27.4,23.4,23.4,23.2,22.9,2+
1.1,21.0,17.7,17.1,16.6,16.6,16.6,15.1；ESI‐MS m/z 612.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H55+
NO3(574.4253)[M+H]＝574.4255。
[0058] 实施例6 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐对氟苯胺(化合物7)的制备：
[0059] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol对氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物7粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化
1 13 1
合物7，白色固体，产率：51％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图4至图6，H NMR(300MHz,DMSO)δ8.90(s,1H),7.57–7.47(m,2H),7.08(t,J＝ 8.7Hz,2H),5.74(s,1H),5.27(s,1H),4.38(dd,J＝10.7,4.6Hz,1H),2.36(d,J＝10.9Hz,1H),1.99(s,3H),1.90–
1.65(m,5H),1.63–1.38(m,9H),1.27(dd,J ＝ 31.3,11.4Hz,3H),1.08(s,3H),0.98(d,J
13
＝18.6Hz,6H),0.84(dd,J＝21.7,5.1Hz,13H),0.64(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO+CDCl3)δ176.3(‐CO‐NH‐),172.9(‐OCOCH3),139.6,138.3,127.7,127.7,127.1,127.1, 126.2,124.5,79.6,54.6,52.0,46.8,46.6,42.2, 41.5,38.8,38.3,37.6,37.1,36.9,36.3,32.4,
30.4,27.7,27.2,27.2,23.5,23.1,23.1,22.7,20.9,17.6,16.9,16.5,16.4,15.0；ESI‐MS + +
m/z 630.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54FNO3(592.4158)[M+H]＝592.4160。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol对氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物7粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化
1 13 1
合物7，白色固体，产率：51％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图4至图6，H NMR(300MHz,DMSO)δ8.90(s,1H),7.57–7.47(m,2H),7.08(t,J＝ 8.7Hz,2H),5.74(s,1H),5.27(s,1H),4.38(dd,J＝10.7,4.6Hz,1H),2.36(d,J＝10.9Hz,1H),1.99(s,3H),1.90–
1.65(m,5H),1.63–1.38(m,9H),1.27(dd,J ＝ 31.3,11.4Hz,3H),1.08(s,3H),0.98(d,J
13
＝18.6Hz,6H),0.84(dd,J＝21.7,5.1Hz,13H),0.64(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO+CDCl3)δ176.3(‐CO‐NH‐),172.9(‐OCOCH3),139.6,138.3,127.7,127.7,127.1,127.1, 126.2,124.5,79.6,54.6,52.0,46.8,46.6,42.2, 41.5,38.8,38.3,37.6,37.1,36.9,36.3,32.4,
30.4,27.7,27.2,27.2,23.5,23.1,23.1,22.7,20.9,17.6,16.9,16.5,16.4,15.0；ESI‐MS + +
m/z 630.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54FNO3(592.4158)[M+H]＝592.4160。
[0060] 实施例7 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐对氯苯胺(化合物8)的制备：
[0061] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol对氯苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物8粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物8，白色固体，产率：46％
1 13 1
。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图7至图9，H NMR(400MHz,DMSO)δ9.01(s,1H),7.59(d,J ＝ 8.9Hz,2H),7.31(d,J ＝ 8.9Hz,2H),5.27(s,1H),4.39(dd,J＝ 11.3,4.7Hz,1H),2.36(d,J ＝ 10.9Hz,1H),1.99(s,3H),1.94–1.66(m,5H),1.64–
1.36(m,10H),1.36–1.16(m,3H),1.07(s,3H),1.05–0.92(m,6H),0.89–
13
0.76(m,13H),0.61(s,3H). C NMR(100MHz,DMSO)δ175.3(‐CO‐NH‐),170.0(‐OCOCH3),138.4,138.3,128.2,128.2,126.6,124.5, 121.7,121.7,79.8,54.5,51.6,47.6,46.7,41.5, 38.7,38.3,37.7,37.2,36.3,36.2,32.3,30.2,27.7,27.4,23.4,23.3,23.2,22.9,2+
1.0,20.9,17.7,17.1,16.6,16.6,16.5,15.1；ESI‐MS m/z 646.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54+
ClNO3(608.3861)[M+H]＝608.3865。
1 13 1
。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图7至图9，H NMR(400MHz,DMSO)δ9.01(s,1H),7.59(d,J ＝ 8.9Hz,2H),7.31(d,J ＝ 8.9Hz,2H),5.27(s,1H),4.39(dd,J＝ 11.3,4.7Hz,1H),2.36(d,J ＝ 10.9Hz,1H),1.99(s,3H),1.94–1.66(m,5H),1.64–
1.36(m,10H),1.36–1.16(m,3H),1.07(s,3H),1.05–0.92(m,6H),0.89–
13
0.76(m,13H),0.61(s,3H). C NMR(100MHz,DMSO)δ175.3(‐CO‐NH‐),170.0(‐OCOCH3),138.4,138.3,128.2,128.2,126.6,124.5, 121.7,121.7,79.8,54.5,51.6,47.6,46.7,41.5, 38.7,38.3,37.7,37.2,36.3,36.2,32.3,30.2,27.7,27.4,23.4,23.3,23.2,22.9,2+
1.0,20.9,17.7,17.1,16.6,16.6,16.5,15.1；ESI‐MS m/z 646.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54+
ClNO3(608.3861)[M+H]＝608.3865。
[0062] 实施例8 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐对溴苯胺(化合物9)的制备：
[0063] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol对溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物9粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步
1 13
纯化，得到化合物9，白色固体，产率：76％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参
1
阅图10至图12，H NMR(300MHz,DMSO)δ8.99(s,1H),7.52(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(d,J＝ 8.4Hz,2H),5.26(s,1H),4.38(dd,J ＝ 10.6,4.6Hz,1H),2.36(d,J ＝
11.3Hz,1H),1.99(s,3H),1.76(dd,J＝ 35.4,12.2Hz,5H),1.64–1.33(m,10H),1.24(dd,J＝ 20.6,11.8Hz,3H),1.12–0.91(m,9H),0.86(d,J ＝ 9.9Hz,6H),0.79(d,J ＝
13
3.2Hz,7H),0.61(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ175.4(‐CO‐NH‐),170.1(‐OCOCH3),138.2,126.3,126.1,125.9,125.8,125.7, 125.0,124.1,115.5,115.3,79.9,54.5,51.9,47.7, 46.8,41.7,38.8,38.3,37.7,37.2,36.7,36.4,32.5,30.3,27.8,27.4,23.6,23.2+
,22.9,21.0,21.0,17.7,17.1,16.6,16.6,15.1；ESI‐MS m/z 692.5(M+K)；HRMS(ESI):C38+
H54BrNO3(652.3356)[M+H]＝652.3360。
1 13
纯化，得到化合物9，白色固体，产率：76％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参
1
阅图10至图12，H NMR(300MHz,DMSO)δ8.99(s,1H),7.52(d,J＝8.6Hz,2H),7.42(d,J＝ 8.4Hz,2H),5.26(s,1H),4.38(dd,J ＝ 10.6,4.6Hz,1H),2.36(d,J ＝
11.3Hz,1H),1.99(s,3H),1.76(dd,J＝ 35.4,12.2Hz,5H),1.64–1.33(m,10H),1.24(dd,J＝ 20.6,11.8Hz,3H),1.12–0.91(m,9H),0.86(d,J ＝ 9.9Hz,6H),0.79(d,J ＝
13
3.2Hz,7H),0.61(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ175.4(‐CO‐NH‐),170.1(‐OCOCH3),138.2,126.3,126.1,125.9,125.8,125.7, 125.0,124.1,115.5,115.3,79.9,54.5,51.9,47.7, 46.8,41.7,38.8,38.3,37.7,37.2,36.7,36.4,32.5,30.3,27.8,27.4,23.6,23.2+
,22.9,21.0,21.0,17.7,17.1,16.6,16.6,15.1；ESI‐MS m/z 692.5(M+K)；HRMS(ESI):C38+
H54BrNO3(652.3356)[M+H]＝652.3360。
[0064] 实施例9 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐邻氟苯胺(化合物10)的制备：
[0065] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物10粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物10，白色固体，产率：90％。并
1 13 1
进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图13至图15，H NMR(400MHz,DMSO)δ8.51(s,1H),7.84(d,J ＝ 7.2Hz,1H),7.42(d,J ＝ 8.0Hz,1H),7.26(t,J ＝
7.4Hz,1H),7.11(t,J＝7.0Hz,1H),5.33(s,1H),4.38(dd,J＝10.9,5.0Hz,1H),2.21(d,J＝ 10.7Hz,1H),1.98(s,3H),1.92–1.72(m,5H),1.66–1.40(m,9H),1.40–
1.19(m,4H),1.09(s,3H),1.03(d,J ＝ 13.4Hz,3H),0.94(d,J ＝ 6.0Hz,3H),0.87(d,J ＝
13
8.5Hz,6H),0.80(t,J ＝ 8.0Hz,7H),0.66(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO+CDCl3)δ175.3(‐CO‐NH‐),169.8(‐OCOCH3),137.8,135.0,129.0,127.2,125.6,125.3, 125.2,124.6,12
4.3,124.1,79.8,54.5,52.3,48.1, 46.7,41.6,38.2,37.6,37.1,36.7,36.3,32.2,30.3,
27.7,27.2,23.9,23.2,23.1,22.7,20.9,20.8,17.6,16.9,16.5,16.5,15.0；ESI‐MS；m/+ +
z630.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54FNO3(592.4160)[M+H]＝592.4160。
1 13 1
进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图13至图15，H NMR(400MHz,DMSO)δ8.51(s,1H),7.84(d,J ＝ 7.2Hz,1H),7.42(d,J ＝ 8.0Hz,1H),7.26(t,J ＝
7.4Hz,1H),7.11(t,J＝7.0Hz,1H),5.33(s,1H),4.38(dd,J＝10.9,5.0Hz,1H),2.21(d,J＝ 10.7Hz,1H),1.98(s,3H),1.92–1.72(m,5H),1.66–1.40(m,9H),1.40–
1.19(m,4H),1.09(s,3H),1.03(d,J ＝ 13.4Hz,3H),0.94(d,J ＝ 6.0Hz,3H),0.87(d,J ＝
13
8.5Hz,6H),0.80(t,J ＝ 8.0Hz,7H),0.66(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO+CDCl3)δ175.3(‐CO‐NH‐),169.8(‐OCOCH3),137.8,135.0,129.0,127.2,125.6,125.3, 125.2,124.6,12
4.3,124.1,79.8,54.5,52.3,48.1, 46.7,41.6,38.2,37.6,37.1,36.7,36.3,32.2,30.3,
27.7,27.2,23.9,23.2,23.1,22.7,20.9,20.8,17.6,16.9,16.5,16.5,15.0；ESI‐MS；m/+ +
z630.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54FNO3(592.4160)[M+H]＝592.4160。
[0066] 实施例10 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐邻氯苯胺(化合物11)的制备：
[0067] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氯苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物11粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步
1 13
纯化，得到化合物11，白色固体，产率：87％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，
1
参阅图16至图18，H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,1H),7.53(d,J＝ 8.0Hz,1H),7.25(t,J ＝ 7.7Hz,1H),6.98(t,J ＝ 7.7Hz,1H),5.35(s,1H),4.36(dd,J＝ 9.6,6.2Hz,1H),2.15(d,J ＝ 10.6Hz,1H),1.96(s,3H),1.82(dd,J ＝
40.4,9.3Hz,4H),1.66–1.38(m,10H),1.38–1.18(m,4H),1.11–0.96(m,6H),0.93(d,J＝
13
6.0Hz,3H),0.89–0.82(m,6H),0.78(d,J＝8.2Hz,7H),0.64(s,3H). C NMR(100MHz,DMSO)δ175.2(‐CO‐NH‐),169.7(‐OCOCH3),137.6,136.0,132.0,127.6,125.9,125.2, 123.6,115.1,79.8,54.5,52.6,48.2,46.7,41.6, 39.0,38.3,37.6,37.1,36.7,36.2,32.1,30.3,
27.6,27.2,24.0,23.2,23.0,22.7,20.8,20.8,17.6,16.8,16.5,16.5,16.3,15.0；ESI‐MS + +
m/z 646.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54ClNO3(608.3865)[M+H]＝608.3865。
1 13
纯化，得到化合物11，白色固体，产率：87％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，
1
参阅图16至图18，H NMR(400MHz,DMSO)δ8.29(s,1H),7.96(d,J＝8.1Hz,1H),7.53(d,J＝ 8.0Hz,1H),7.25(t,J ＝ 7.7Hz,1H),6.98(t,J ＝ 7.7Hz,1H),5.35(s,1H),4.36(dd,J＝ 9.6,6.2Hz,1H),2.15(d,J ＝ 10.6Hz,1H),1.96(s,3H),1.82(dd,J ＝
40.4,9.3Hz,4H),1.66–1.38(m,10H),1.38–1.18(m,4H),1.11–0.96(m,6H),0.93(d,J＝
13
6.0Hz,3H),0.89–0.82(m,6H),0.78(d,J＝8.2Hz,7H),0.64(s,3H). C NMR(100MHz,DMSO)δ175.2(‐CO‐NH‐),169.7(‐OCOCH3),137.6,136.0,132.0,127.6,125.9,125.2, 123.6,115.1,79.8,54.5,52.6,48.2,46.7,41.6, 39.0,38.3,37.6,37.1,36.7,36.2,32.1,30.3,
27.6,27.2,24.0,23.2,23.0,22.7,20.8,20.8,17.6,16.8,16.5,16.5,16.3,15.0；ESI‐MS + +
m/z 646.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54ClNO3(608.3865)[M+H]＝608.3865。
[0068] 实施例11 N‐(3β‐乙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐邻溴苯胺(化合物12)的制备：
[0069] 首先称取纯化后的化合物2(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物12粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化
1 13
合物12，白色固体，产率：80％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图19至图21
1
，H NMR(400MHz,DMSO)δ9.00(s,1H),7.55(d,J ＝ 2.0Hz,1H),7.54–7.50(m,1H),7.47–
7.43(m,1H),7.42(d,J＝2.0Hz,1H),5.27(s,1H),4.38(dd,J＝11.4,4.7Hz,1H),2.36(d,J＝ 10.8Hz,1H),1.99(s,3H),1.94–1.66(m,5H),1.66–1.35(m,10H),1.35–
1.17(m,3H),1.07(s,3H),1.04–0.92(m,6H),0.89–0.82(m,6H),0.79(d,J ＝
13
5.4Hz,7H),0.61(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ175.3(‐CO‐NH‐),170.1(‐OCOCH3),138.7,138.4,131.1,131.1,124.5,122.1, 122.1,114.6,79.9,54.5,51.6,47.6,46.7,41.5, 38.7,38.3,37.7,37.2,36.3,36.2,32.3,30.2,27.7,27.3,23.4,23.3,23.2,22.9,2+
1.0,20.9,17.6,17.1,16.6,16.6,16.5,15.1；ESI‐MS m/z 692.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54+
BrNO3(652.3359)[M+H]＝652.3360。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物12粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化
1 13
合物12，白色固体，产率：80％。并进行 H NMR、C NMR和高分辨质谱分析，参阅图19至图21
1
，H NMR(400MHz,DMSO)δ9.00(s,1H),7.55(d,J ＝ 2.0Hz,1H),7.54–7.50(m,1H),7.47–
7.43(m,1H),7.42(d,J＝2.0Hz,1H),5.27(s,1H),4.38(dd,J＝11.4,4.7Hz,1H),2.36(d,J＝ 10.8Hz,1H),1.99(s,3H),1.94–1.66(m,5H),1.66–1.35(m,10H),1.35–
1.17(m,3H),1.07(s,3H),1.04–0.92(m,6H),0.89–0.82(m,6H),0.79(d,J ＝
13
5.4Hz,7H),0.61(s,3H)；C NMR(100MHz,DMSO)δ175.3(‐CO‐NH‐),170.1(‐OCOCH3),138.7,138.4,131.1,131.1,124.5,122.1, 122.1,114.6,79.9,54.5,51.6,47.6,46.7,41.5, 38.7,38.3,37.7,37.2,36.3,36.2,32.3,30.2,27.7,27.3,23.4,23.3,23.2,22.9,2+
1.0,20.9,17.6,17.1,16.6,16.6,16.5,15.1；ESI‐MS m/z 692.5(M+K)；HRMS(ESI):C38H54+
BrNO3(652.3359)[M+H]＝652.3360。
[0070] 实施例12 N‐(3β‐丙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐对溴苯胺(化合物13)的制备：
[0071] 首先称取纯化后的化合物3(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol对溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物13粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物13，白色固体，产率：81％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol对溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物13粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物13，白色固体，产率：81％。
[0072] 实施例13 N‐(3β‐丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐对氟苯胺(化合物14)的制备：
[0073] 首先称取纯化后的化合物4(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物14粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物14，白色固体，产率：83％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物14粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物14，白色固体，产率：83％。
[0074] 实施例14 N‐(3β‐异丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐对氯苯胺(化合物15)的制备：
[0075] 首先称取纯化后的化合物5(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氯苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物15粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物15，白色固体，产率：85％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氯苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物15粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物15，白色固体，产率：85％。
[0076] 实施例15 N‐(3β‐丙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐邻溴苯胺(化合物16)的制备：
[0077] 首先称取纯化后的化合物3(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物16粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物16，白色固体，产率：82％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻溴苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物16粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物16，白色固体，产率：82％。
[0078] 实施例16 N‐(3β‐丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐邻氟苯胺(化合物17)的制备：
[0079] 首先称取纯化后的化合物4(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物17粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物17，白色固体，产率：88％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氟苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物17粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物17，白色固体，产率：88％。
[0080] 实施例17 N‐(3β‐异丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐邻氯苯胺(化合物18)的制备：
[0081] 首先称取纯化后的化合物5(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氯苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物18粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物18，白色固体，产率：79％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol邻氯苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后蒸除溶剂得到化合物18粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物18，白色固体，产率：79％。
[0082] 实施例18 N‐(3β‐丙酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐苯胺(化合物19)的制备：
[0083] 首先称取纯化后的化合物3(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在
45℃下蒸除溶剂得到化合物19粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物19，白色固体，产率：90％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在
45℃下蒸除溶剂得到化合物19粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物19，白色固体，产率：90％。
[0084] 实施例19 N‐(3β‐丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐苯胺(化合物20)的制备：
[0085] 首先称取纯化后的化合物4(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在
45℃下蒸除溶剂得到化合物20粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物20，白色固体，产率：87％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在
45℃下蒸除溶剂得到化合物20粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物20，白色固体，产率：87％。
[0086] 实施例20 N‐(3β‐异丁酰氧基‐乌苏烷型‐12‐烯‐28‐酰)‐苯胺(化合物21)的制备
[0087] 首先称取纯化后的化合物5(0.5g，1mmol)于100mL有磁子的圆底烧瓶中，然后量取50mL无水CH2Cl2于烧瓶中，在室温下，搅拌3min待完全溶解后，将反应置于冰浴条件下，用移液枪吸取0.6mL草酰氯，缓慢加入体系中，然后在常温条件下避光反应36h后，在45℃下减压蒸除CH2Cl2溶剂和没反应完全的草酰氯，再加入50mL无水的CH2Cl2，然后加入
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在
45℃下蒸除溶剂得到化合物21粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物21，白色固体，产率：85％。
0.14mL的三乙胺，最后量取1mmol苯胺缓慢的滴加入反应体系，在室温下，反应6h后，在
45℃下蒸除溶剂得到化合物21粗产物。通过硅胶柱层析纯化(洗脱剂：石油醚:乙酸乙酯(体积比)＝20:1)和Sephadex LH‐20(洗脱剂(体积比)：氯仿:甲醇＝1:1)进一步纯化，得到化合物21，白色固体，产率：85％。
[0088] 实施例1‐20中，化合物2‐21对应结构式如式2。
[0089]
[0090]
[0091] 为了说明本发明提供的乌苏酸化学修饰物具有较高的药物活性，下面给出本发明部分药物活性效果实验例：
[0092] 实验例1
[0093] 乌苏酸化学修饰物体外对α‐葡萄糖苷酶活性抑制实验
[0094] 1、测试原理：
[0095] 根据α‐葡萄糖苷酶对α‐对硝基苯酚葡萄糖苷降解前后吸光度变化，通过多功能酶标仪(Infinite 200)检测样品对α‐葡萄糖苷酶活性的抑制作用。
[0096] 2、测试条件：
[0097] 仪器：多功能酶标仪(Infinite 200)(比利时)，PHS‐3B雷磁pH计(上海精密科学仪器有限公司)；主要试剂：α‐葡萄糖苷酶(美国Sigma公司)、α‐对硝基苯酚葡萄糖苷(美国Sigma公司)、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾(天津市大茂化学试剂厂)。
[0098] 3、测试步骤：
[0099] 首先，用0.1mol/L，pH＝6.8的磷酸盐缓冲溶液配制0.1U/mL的α‐葡萄糖苷酶溶液和0.1mmol/L的α‐对硝基苯酚葡萄糖苷溶液；
[0100] 然后，采用96孔板，每孔先加入82μL的pH＝6.8的磷酸盐缓冲溶液，再加入10μL不同浓度的样品溶液(溶于DMSO)，空白对照组加等量的DMSO，混匀后加入8μL0.1U/mL的α‐葡萄糖苷酶溶液，每孔重复4次，然后将板快速转移至多功能酶标仪中
37℃育孵10min，其中环形摇震1min。
37℃育孵10min，其中环形摇震1min。
[0101] 第三，将育孵完成的96孔板取出，用移液枪(排枪)每孔加入100μL的α‐对硝基苯酚葡萄糖苷溶液引发反应，然后将板快速转移至多功能酶标仪中37℃育孵反应30min，其中环形摇震3min。
[0102] 最后，将96孔板取出，每孔加入100μL的1mol/L的Na2CO3溶液终止反应，然后将板快速转移至多功能酶标仪中环形摇震30s，在405nm波长下，测定每孔的OD值。再通过公式：
[0103]
[0104] 计算抑制效果，通过抑制剂浓度和抑制效果的关系进行曲线拟合，从曲线计算得到样品的半抑制浓度IC50值。
[0105] 其中，A0为空白组，A1为样品组。
[0106] 结果：如表1所示：
[0107] 表1化合物1‐12对α‐葡萄糖苷酶的抑制活性
[0108]化合物 ％抑制率a ％抑制率b IC50(μM)c
1(UA) 48.65±6.85 87.55±10.43 5.04±0.80
2 48.85±5.66 75.62±11.53 5.27±0.35
3 68.89±3.58 86.51±6.89 2.66±0.40
4 99.84±5.09 99.79±5.00 1.01±0.14
5 69.31±3.91 90.83±3.20 3.26±0.52
6 45.38±2.48 67.38±7.82 5.64±1.12
7 45.28±5.09 66.71±10.57 6.53±1.33
1(UA) 48.65±6.85 87.55±10.43 5.04±0.80
2 48.85±5.66 75.62±11.53 5.27±0.35
3 68.89±3.58 86.51±6.89 2.66±0.40
4 99.84±5.09 99.79±5.00 1.01±0.14
5 69.31±3.91 90.83±3.20 3.26±0.52
6 45.38±2.48 67.38±7.82 5.64±1.12
7 45.28±5.09 66.71±10.57 6.53±1.33
[0109]8 64.52±2.38 82.03±11.94 3.24±0.21
9 28.31±11.36 52.97±8.50 9.33±4.36
10 16.85±7.55 37.89±9.04 14.18±3.66
11 6.83±3.51 13.66±2.44 >33
12 43.24±2.53 47.29±7.79 11.12±2.82
13 46.75±5.26 63.25±12.07 5.43±0.45
14 57.89±3.58 76.23±5.76 3.74±0.25
15 85.25±5.31 75.79±5.00 1.17±0.14
16 49.31±3.91 87.63±3.20 5.32±0.52
17 57.38±2.48 67.45±6.76 5.23±1.23
18 48.23±4.32 65.32±8.56 6.37±1.21
19 61.02±2.47 46.93±6.78 4.21±0.21
20 45.23±1036 42.97±9.42 8.56±1.36
21 66.73±6.25 45.23±8.54 14.18±1.25
13d <2 <5 579.15±20.58
a
9 28.31±11.36 52.97±8.50 9.33±4.36
10 16.85±7.55 37.89±9.04 14.18±3.66
11 6.83±3.51 13.66±2.44 >33
12 43.24±2.53 47.29±7.79 11.12±2.82
13 46.75±5.26 63.25±12.07 5.43±0.45
14 57.89±3.58 76.23±5.76 3.74±0.25
15 85.25±5.31 75.79±5.00 1.17±0.14
16 49.31±3.91 87.63±3.20 5.32±0.52
17 57.38±2.48 67.45±6.76 5.23±1.23
18 48.23±4.32 65.32±8.56 6.37±1.21
19 61.02±2.47 46.93±6.78 4.21±0.21
20 45.23±1036 42.97±9.42 8.56±1.36
21 66.73±6.25 45.23±8.54 14.18±1.25
13d <2 <5 579.15±20.58
a
[0110] 化合物浓度为5μmol/L对α‐葡萄糖苷酶的抑制活性；b
[0111] 化合物浓度为10μmol/L对α‐葡萄糖苷酶的抑制活性；c
[0112] IC50为半数有效抑制浓度；d
[0113] 阿卡波糖，阳性对照。
[0114] 从表1可以看出乌苏酸及其化学修饰物对α‐葡萄糖苷酶活性有明显的抑制作用，除了化合物11，所有化合物活性均高于阳性药物阿卡波糖。
[0115] 实验例2
[0116] 化合物8、12、15和21抑制α‐葡萄糖苷酶活性的动力学研究
[0117] 由实施例2测得的IC50可知，化合物8、12、15和21活性优于乌苏酸和阳性对照。因此为进一步了解它们对α‐葡萄糖苷酶的抑制机制，进行了酶动力学研究。
[0118] 1、化合物8酶动力学研究
[0119] 化合物浓度为：0μM■；3.90μM●；5.85μM▲；9.75μM◆；所有测试结果重复四次取平均值±标准偏差。
[0120] 从图22可以看出化合物8对α‐葡萄糖苷酶的抑制类型为非竞争性抑制。
[0121] 2、化合物12酶动力学研究
[0122] 化合物浓度为：0μM■；2.85μM●；4.0μM▲；6.64μM▼。所有测试结果重复四次取平均值±标准偏差。
[0123] 从图23可以看出化合物12对α‐葡萄糖苷酶的抑制类型为混合性抑制作用，由双倒数曲线可以得出抑制类型为非竞争性抑制和竞争性抑制类型混合抑制作用。
[0124] 3、化合物15动力学研究
[0125] 化合物浓度为：0μM■；1.6μM●；2.8μM▲；4.5μM▼。所有测试结果重复四次取平均值±标准偏差。
[0126] 从图24可以看出化合物15对α‐葡萄糖苷酶的抑制类型为混合性抑制作用，由双倒数曲线可以得出抑制类型为非竞争性抑制和反竞争性抑制类型混合抑制作用。
[0127] 4、化合物21动力学研究
[0128] 化合物浓度为：0μM■；2.5μM●；5.0μM▲；8.0μM▼。所有测试结果重复四次取平均值±标准偏差。
[0129] 从图25可以看出化合物21对α‐葡萄糖苷酶的抑制类型为混合性抑制作用，由双倒数曲线可以得出抑制类型为非竞争性抑制和反竞争性抑制类型混合抑制作用。
[0130] 根据化合物8、12、15和21动力学研究的双倒数曲线，计算得到α‐葡萄糖苷酶抑制常数(Ki和Ki')，如表2所示：
[0131] 表2化合物8、12.15和21对α‐葡萄糖苷酶抑制常数(Ki和Ki')
[0132]化合物 Ki Ki' 抑制类型
8 2.67±0.19 3.07±0.27 混合抑制
12 2.82±0.11 2.07±0.27 混合抑制
15 3.15±0.16 4.62±0.17 混合抑制
21 3.50±0.44 3.37±0.04 混合抑制
8 2.67±0.19 3.07±0.27 混合抑制
12 2.82±0.11 2.07±0.27 混合抑制
15 3.15±0.16 4.62±0.17 混合抑制
21 3.50±0.44 3.37±0.04 混合抑制
[0133] 所有计算结果均为平均值±标准偏差。
[0134] 实验例3
[0135] 化合物8和21对正常小鼠血糖水平的影响
[0136] 从体外的酶活性得知，化合物8和21有比较好的酶抑制活性，为进一步了解它们在体内的对血糖水平的调节作用，采用正常小鼠进行了研究。
[0137] 首先，根据动物药物口服相关规定，化合物8、21和阿卡波糖用0.9％NaCl(含1％二甲基亚砜)溶液配制成浓度为5mg/mL的药物溶液，昆明小鼠4‐6周、体重18‐20g，不分雌雄分为4组、每组6只，灌胃之前禁食不禁水16h，首先根据小鼠体重按照50mg/kg先灌胃药物溶液，然后根据体重按照3g/kg灌胃浓度为1g/mL的麦芽糖溶液，对照组先灌胃等量的0.9％NaCl(含1％二甲基亚砜)溶液，再灌胃等量的麦芽糖溶液。最后分别在0、30、60、90和120min尾端取血，用稳豪倍易血糖仪(强生医疗器材有限公司)测定血糖值。
[0138] 图26乌苏酸及化合物8、21和阿卡波糖对正常小鼠灌胃麦芽糖后血糖控制的影响，图中数据均为平均值±标准偏差。
[0139] 从图26可以看出化合物8、21和阳性药物抑制血糖效果在30min最明显。在整个过程中，化合物8和21的效果相似，和对照组相比，它们具有明显的抑制血糖水平能力。
[0140] 上述实验例说明乌苏酸化学修饰物特别是酯类衍生物具有较好的抑制消化相关酶活性剂，特别是抑制α‐葡萄糖苷酶活性的作用，小鼠体内试验提示化合物能够抑制正常小鼠餐后血糖水平，通过乌苏酸化学修饰物对正常小鼠血糖水平的抑制，表明该类化合物可以应用在制备预防、控制或治疗糖尿病的药品、饮品、食品和保健品中；也可以应用在制备抑制血糖水平升高的药品、饮品、食品和保健品中的应用；还可以应用在制备预防、控制或治疗糖尿病及其并发症的药品、饮品、食品和保健品中的应用；还可以应用在制备预防、控制或治疗肥胖症，或减肥美体塑身用的药品、饮品、食品和保健品中。
[0141] 这里所述的药品可以为粉剂、片剂、胶囊剂、悬浮剂、液体剂、乳剂、口服剂、冲剂等；所述的饮品或者食品可为含有该化合物的饮品和食品，其形式可以是粉剂、片剂、胶囊剂、颗粒、冲剂、酒类、果冻、乳制品等；所述的保健品可为粉剂、片剂、胶囊剂、液体剂、悬浮剂、乳剂、口服液、果冻或冲剂。