一株辣椒溶杆菌NF87-2及其应用

摘要

本发明涉及一种生防菌剂，其中有效活性成分由辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)NF87-2组成。其特征在于：该生防菌剂是水剂，其组成与重量百分含量为：5亿辣椒溶杆菌水剂：94.4％；NNO：0.5％；十二烷基苯磺酸钠：5％；苯甲酸钠：0.1％。应用时，将上述水剂叶面喷施或灌根，用于防治水稻细菌性条斑病或番茄枯萎病、油菜菌核病等多种植物真菌病害。其优点是：通过引进对人畜安全、对多种植物病害具有较好防治作用的辣椒溶杆菌NF87-2，达到利用生防菌剂防治植物病害；减少化学药剂用药量、降低用药成本；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产品中残留量的目的。

权利要求

1.一种生防菌剂及其应用，其特征在于：所述生防菌剂中有效活性成分由辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)NF87-2组成；所述辣椒溶杆菌NF87-2分泌的代谢产物中包括蛋白酶、纤维素酶和嗜铁素三种抗菌相关物质；所述生防菌剂为水剂；所述生防菌剂可用于防治水稻细菌性条斑病、番茄枯萎病、油菜菌核病多种植物病害。

2.一种用于防治多种植物病害的辣椒溶杆菌NF87-2水剂，其特征在于：各组成及重量百分含量如下：活性成分10％-99％；助剂0.5％-20％；表面活性剂0.5％-20％；防腐剂

0.1％-0.5％，各组成重量百分含量之和为100％，其中活性成分由辣椒溶杆菌NF87-2组成；

助剂选自NNO、氮酮、噻酮中的一种或多种；表面活性剂选自十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、木质素磺酸钠、茶枯粉、皂角粉中的一种或多种；防腐剂选自苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠、丙酸钙、双乙酸钠中的一种或多种。

3.根据权利要求2所述的辣椒溶杆菌NF87-2水剂，各组成及重量百分含量如下：5亿辣椒溶杆菌NF87-2：94.4％；NNO：0.5％；十二烷基苯磺酸钠：5％；苯甲酸钠：0.1％；pH 6.0-

7.0。

说明书

一株辣椒溶杆菌NF87-2及其应用

技术领域

[0001] 本发明涉及一种生防菌剂及其应用，尤其是一株辣椒溶杆菌NF87-2及其在防治植物病害中的应用。

背景技术

[0002] 随着种植业结构的调整和外来有害生物的入侵，近年来农作物重大病害频繁暴发。目前，生产上防治植物病害主要依靠化学农药，这不仅造成生态环境严重污染，而且直接增加农产品中有毒化学物质的残留，对人类健康带来严重危害。为了达到有效防治植物病害、减少化学农药使用量的目的，使用生物防治技术控制植物病害的方法越来越受到各国政府和人民的关注。生物防治技术主要是利用生物多样性，通过在自然界释放或引进有益微生物，可持续控制植物病害。1950年以来国内外均开展了利用生防菌剂防治植物病害的研究，已取得初步成效。如：利用枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)防治水稻纹枯病、大豆锈病、大白菜软腐病等；利用荧光假单胞杆菌(Fluorescentpseudomonads)防治棉花、亚麻、苜蓿、黄瓜等作物的枯萎病；利用酵母菌(Candida saitoana)、丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)和成团泛菌(Pantoea agglomerans)防治植物病害等。

[0003] 江苏省农业科学院从湖北省利川市采集的土样中，分离纯化获得一株新颖的生防菌株NF87-2。经中国科学院微生物研究所检测鉴定，根据细胞形态、生理生化特征、16S rRNA基因序列等实验数据综合分析，菌株NF87-2鉴定为辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)。同时，辣椒溶杆菌NF87-2已于2013年11月19日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心登记入册，保藏编号为CGMCC No.8483。地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。

[0004] 溶杆菌属(Lysobacter)是一类具有滑移性，高G+C含量，对人畜安全、对多种病原真菌、细菌和线虫有溶菌活性的革兰氏阴性杆菌。溶杆菌属现隶属于γ-变形菌亚门，黄单胞菌目，黄单胞菌科。它的分布十分广泛，存在于土壤(根际)、河流、下水道等环境中。早期根据菌株表型将溶杆菌属分为4个种，分别为产酶溶杆菌(Lysobacter enzymogenes)、抗生素溶杆菌(Lysobacter antibioticus)、变棕溶杆菌(Lysobacter brunescens)和胶状溶杆菌(Lysobacter gummosus)。已文献报道的溶杆菌主要是产酶溶杆菌，对油菜菌核病菌、甘薯软腐病菌、辣椒疫霉病菌和瓜果腐霉病菌等具有显著抑菌效果(Qian G L等，2010年，Biological Control)；可有效防治Bipolaris sorokiniana引起的高羊茅草叶斑病(Kilic-Ekici O等，2003年，Phytopathology)和Rhizoctonia solani引起的草坪草褐斑病(Yuan G Y，2001年，International Turfgrass Society Research Journal)。姬广海等报道抗生素溶杆菌13-1能抑制水稻白叶枯病菌等多种病原细菌(Ji G H等，2008年，Biological Contro1)。已有溶杆菌属相关专利主要是产酶溶杆菌(专利申请号：200710190998.6；201310207022.0)和抗生素溶杆菌(专利申请号：200510011078.4；
201310405482.4)。目前，辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)的生防应用国内外未见报道。

发明内容

[0005] 本发明的目的是提供一株具有较好应用前景的生防菌株-辣椒溶杆菌(Lysobacter capsici)NF87-2，该菌株已于2013年11月19日在中国微生物菌种保藏中心登记入册，保藏编号为CGMCCNo.8483。

[0006] 本发明提供了一种生防菌剂，其中有效活性成分由辣椒溶杆菌NF87-2组成。

[0007] 本发明所述的生防菌剂，其中辣椒溶杆菌NF87-2分泌的代谢产物中包括蛋白酶、纤维素酶和嗜铁素三种抗菌相关物质。

[0008] 本发明所述的生防菌剂，它是水剂。

[0009] 本发明所述的水剂，其特征在于：各组成及重量百分含量如下：活性成分10％-99％；助剂0.5％-20％；表面活性剂0.5％-20％；防腐剂0.1％-0.5％。其中活性成分由辣椒溶杆菌NF87-2组成；助剂选自NNO、氮酮、噻酮中的一种或多种；表面活性剂选自十二烷基磺酸钠、十二烷基苯磺酸钠、木质素磺酸钠、茶枯粉、皂角粉中的一种或多种；防腐剂选自苯甲酸钠、山梨酸钾、脱氢乙酸钠、丙酸钙、双乙酸钠中的一种或多种。

[0010] 本发明所述的水剂，各组成及重量百分含量如下：5亿辣椒溶杆菌NF87-2：94.4％；NNO：0.5％；十二烷基苯磺酸钠：5％；苯甲酸钠：0.1％。

[0011] 本发明所述的水剂喷施植物叶面或灌根，用于防治水稻细菌性条斑病或番茄枯萎病、油菜菌核病等多种植物真菌病害。

[0012] 本发明的优点在于：开发出一株对人畜安全、具有较好应用前景的生防菌株-辣椒溶杆菌NF87-2，丰富生防资源。该生防菌剂可以用来防治多种植物病害，减少生产中化学药剂的使用量，降低用药成本；同时改善生态环境、减少化学药剂在农产品中的残留量。

附图说明

[0013] 下面结合附图和实施例对本发明进一步说明。

[0014] 图1是辣椒溶杆菌NF87-2对病原细菌的抑制作用

[0015] 图2是辣椒溶杆菌NF87-2对病原真菌的抑制作用。

[0016] 图3是辣椒溶杆菌NF87-2产生蛋白酶。

[0017] 图4是辣椒溶杆菌NF87-2产生纤维素酶。

[0018] 图5是辣椒溶杆菌NF87-2产生嗜铁素。

[0019] 图中A：辣椒溶杆菌NF87-2；B：巨大芽孢杆菌；C：水稻细菌性条斑病菌；D：番茄枯萎病菌；E：水稻纹枯病菌；F：番茄灰霉病菌；G：油菜菌核病菌；H：甘蓝黑斑病菌。具体实施方式：

[0020] 实施例1、

[0021] 辣椒溶杆菌NF87-2对两种病原细菌的抑制作用

[0022] A、供试病原细菌

[0023] 病原细菌包括巨大芽孢杆菌和水稻细菌性条斑病菌，由江苏省农业科学院植物保护研究所提供。用LB培养液(蛋白胨10.0g，酵母粉5.0g，NaCl10g，蒸馏水1000mL)28℃、150rpm振荡培养2d，用无菌水稀释至106cfu/mL，备用。

[0024] B、试验方法：

[0025] 将江苏省农业科学院筛选获得的辣椒溶杆菌NF87-2在LB培养基上进行活化，然后移入50mL LB培养液中，于28℃、150rpm振荡培养2d，用无菌水稀释至5×108cfu/mL，备用。

[0026] 吸取辣椒溶杆菌NF87-2菌液5μL，点接在LB平板中央，28℃培养48h后用病原细菌稀释液喷雾，28℃培养过夜，调查抑菌圈直径。每处理重复3次，取平均值。设清水对照。

[0027] C、试验结果：

[0028] 试验结果见图1。辣椒溶杆菌NF87-2菌液对对供试的2种病原细菌均有一定的抑制作用，对巨大芽孢杆菌的抑菌圈直径为17mm；对水稻细菌性条斑病菌的抑菌圈直径为18mm。

[0029] 如图1所示。

[0030] 实施例2

[0031] 辣椒溶杆菌NF87-2对五种植物病原真菌的抑制作用

[0032] A、供试病原真菌；

[0033] 病原真菌包括番茄枯萎病菌、水稻纹枯病菌、番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌和甘蓝黑斑病菌，均由江苏省农业科学院植物保护研究所提供。用PDA培养基(200g马铃薯、20g葡萄糖、20g琼脂和1000mL蒸馏水，pH5.6-6.6)28℃培养5d，备用。

[0034] B、试验方法：

[0035] 辣椒溶杆菌NF87-2菌液制备同实施例1。

[0036] 将病原真菌菌饼(直径为6mm)置于空白PDA平板一侧，距平板边缘30mm。平板另一侧，距平板边缘30mm，点接辣椒溶杆菌NF87-2菌液5μL。28℃恒温培养，设清水对照，待对照平板病原菌菌落长满时调查各处理病原菌生长直径，计算抑制率。每处理重复3次，取平均值。

[0037] 病原真菌抑制率＝[(对照病原菌生长直径-处理病原菌生长直径)/对照病原菌生长直径]×100％。

[0038] C、试验结果：

[0039] 试验结果见表1和图2。结果表明：辣椒溶杆菌NF87-2菌液对供试的5种病原真菌有明显的抑制作用，抑制率均大于30％。

[0040] 表1 辣椒溶杆菌NF87-2对供试病原真菌的抑制作用

[0041]

[0042] 如图2所示。

[0043] 实施例3

[0044] 辣椒溶杆菌NF87-2代谢分泌物-抗菌相关物质的产生

[0045] 供试材料：蛋白酶检测培养基：脱脂奶粉100g，琼脂20g，定容至1000mL。纤维素酶检测培养基：蛋白胨10g，酵母粉10g，羧甲基纤维素钠10g，NaCl5g，KH2PO41g，琼脂20g，定容至1000mL，pH7.0。嗜铁素检测培养基：CAS60.5mg，10mL三价铁溶液(1mmol·L-1 FeCl3·6H2O)，HDTMA72.9mg，琼脂20g，定容至1000mL，pH7.0。

[0046] 辣椒溶杆菌NF87-2菌液制备同实施例1。在各检测培养基平板中央点接辣椒溶杆菌NF87-2菌液5μL，每处理重复3次。28℃恒温培养3-7d，观察。

[0047] 蛋白酶检测：观察有无透明圈产生。若产生透明圈，说明该拮抗菌可分泌蛋白酶。

[0048] 纤维素酶检测：观察菌落周围有无透明圈产生。若产生透明圈，说明该拮抗菌可分泌纤维素酶。

[0049] 嗜铁素检测：28℃恒温培养7-10d后观察有无黄色晕圈产生。若产生黄色晕圈，说明该拮抗菌可分泌嗜铁素。

[0050] 试验结果表明：辣椒溶杆菌NF87-2能分泌蛋白酶，利用检测平板中的蛋白质，在菌落周围形成透明圈(图3)；辣椒溶杆菌NF87-2能分泌纤维素酶，在测试平板上能将纤维素分3+
解为可溶性物质，形成透明圈(图4)；辣椒溶杆菌NF87-2能分泌嗜铁素，与检测平板中的Fe结合，在菌落周围形成桔黄色晕圈(图5)。

[0051] 如图3、图4和图5所示。

[0052] 实施例4

[0053] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂的获得

[0054] A、菌种准备及活化。

[0055] LB培养基(同实施例1)按常规方法加琼脂后灭菌，做成斜面。接种辣椒溶杆菌NF87-2，28℃培养2d。

[0056] B、液体发酵。

[0057] 一级发酵：将上述培养好的试管斜面，用接种环移一环菌苔入500mL LB培养液(同实施例1)，共移2瓶。在28℃、150rpm振荡培养2d，备用。

[0058] 二级发酵：培养基配方：玉米淀粉3.0％，大豆粉0.5％，玉米浆0.4％，鱼粉1.0％，NaCl0.1％，CaCO30.3％。灭菌前pH7.0。2吨发酵罐中投料1吨。121℃灭菌30分钟。冷却至30℃左右时接种上述一级发酵菌种液1000mL。液体发酵温度30℃，搅拌转速250rpm。通气量1∶1.5。发酵周期为16小时。

[0059] 三级发酵：培养基配方同二级发酵。15吨发酵罐中投料10吨。121℃灭菌30分钟。冷却至30℃左右时接种上述二级发酵菌种液1吨。液体发酵温度30℃，搅拌转速300rpm。通气量1∶1.5。发酵周期为25小时左右，放罐。

[0060] C、水剂配置。

[0061] 发酵液放入储罐中，加入NNO0.5％、十二烷基苯磺酸钠5％、苯甲酸钠0.1％，搅拌均匀。测得发酵液pH值为6.5，活菌数为5×108cfu/mL。灌装，即成5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂。

[0062] 实施例5

[0063] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对水稻细菌性条斑病盆栽防效测定

[0064] 试验地点：在江苏省农业科学院植物保护研究所温室内进行。

[0065] 试验品种：金刚30(感病品种，由江苏省农业科学院植物保护研究所提供)。

[0066] 试验药剂：5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂由实施例4提供。对照药剂为20％叶枯唑可湿性粉剂，购自惠州市中迅化工有限公司，是生产上防治水稻细菌性条斑病的常用化学药剂，按商品田间推荐剂量使用。

[0067] 试验方法：采用针刺法接种。用培养48h的水稻细菌性条斑病菌菌液(同实施例1)接种成株期的水稻植株，每处理接种6穴水稻，24片叶。接种后立即用辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液(含菌量为5×108cfu/mL)及100倍稀释液进行喷雾，每处理喷雾100mL菌液。常规管理。对照药剂为叶枯唑，设清水对照。14d后测量水稻叶片条斑病病斑直径，计算防治效果。

[0068] 防治效果(％)＝[(对照叶片病斑直径-处理叶片病斑直径)/对照叶片病斑直径]×100％

[0069] 试验结果见表2。辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液对水稻细菌性条斑病盆栽防效为73.87％，明显高于化学药剂20％叶枯唑的防效，而辣椒溶杆菌NF87-2水剂100倍稀释液的盆栽防效为60.92％，与20％叶枯唑的防效相当。试验结果表明：生防菌剂NF87-2水剂可有效防治水稻细菌性条斑病。

[0070] 表2 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对水稻细菌性条斑病菌盆栽防效测定

[0071]

[0072] 实施例6

[0073] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对番茄枯萎病盆栽防效测定

[0074] 试验地点：江苏省农业科学院植物保护研究所温室内进行。

[0075] 试验品种：江蔬一号(由江苏省农业科学院蔬菜所提供)。

[0076] 试验药剂：

[0077] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂由实施例4提供。对照药剂为50％多菌灵，购自江苏辉丰农化股份有限公司，是生产上防治番茄枯萎病的常用化学药剂，按商品田间推荐剂量使用。

[0078] 番茄枯萎病菌孢子液的制备如下：将番茄枯萎病菌接种于PDA培养基平板，28℃培养5d，用无菌水洗下平板中的孢子，过滤菌丝，摇匀。显微镜下用血球计数板计数，用无菌水调至孢子浓度为106个/mL。

[0079] 试验方法：将江蔬1号番茄种播于灭菌土壤中，当番茄苗长出5片真叶时，移至装有100g无菌土的盆钵中，每钵1株番茄苗，每株番茄苗灌根20mL枯萎病菌孢子液(浓度为106孢子/mL)，24h后灌根20mL辣椒溶杆菌NF87-2水剂(菌含量为5×108cfu/mL)。每处理20盆，常规管理。对照药剂为50％多菌灵，设清水对照。番茄苗移栽后生长30d后调查病情，计算防效。

[0080] 番茄枯萎病病情分级标准如下：

[0081] 0级为茎内维管束正常，外部无症状；

[0082] 1级为茎内维管束1/4以下变色；

[0083] 3级为茎内维管束1/4～1/2变色；

[0084] 5级为茎内维管束1/2～3/4变色；

[0085] 7级为茎内维管束3/4以上变色，部分叶片萎蔫；

[0086] 9级为整株枯死。

[0087] 病情指数＝[∑(各级发病数×各级代表值)/(调查总株数×最高级代表值)]×100

[0088] 防治效果(％)＝[(对照的病情指数-处理的病情指数)/对照的病情指数]×100％[0089] 试验结果见表3。人工接种番茄枯萎病菌孢子液后，番茄枯萎病的盆栽病情指数为52.64，辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液和100倍稀释液对番茄枯萎病盆栽防效分别为70.44％和61.11％，而化学药剂多菌灵的防效为51.31％。试验结果表明：生防菌剂NF87-2对番茄枯萎病的防效明显高于常规化学药剂多菌灵。

[0090] 表3 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对番茄枯萎病盆栽防效测定

[0091]

[0092] 实施例7

[0093] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对水稻纹枯病的盆栽防效测定

[0094] 试验地点：江苏省农业科学院植物保护研究所温室内进行。

[0095] 试验品种：金刚30(由江苏省农业科学院植物保护研究所提供)。

[0096] 试验药剂：

[0097] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂由实施例4提供。对照药剂为50％多菌灵，购自江苏辉丰农化股份有限公司，是生产上防治水稻纹枯病的常用化学药剂，按商品田间推荐剂量使用。

[0098] 试验方法：水稻纹枯病接种采用火柴梗嵌入法。播种金刚30，育苗。30d后，在直径30cm的塑料桶中装入泥土并插秧金刚30，每桶栽种3穴，每穴2棵。将火柴棒浸入装有PDA液体培养基的三角瓶中灭菌后，接入已培养的水稻纹枯病菌菌块，28℃培养5d，火柴梗上长满菌丝。在水稻分蘖末期将火柴梗插入水稻中下部的叶鞘内，接种后立即喷施辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液及100倍稀释液，间隔7-10d后再喷施一次。每处理20个重复，常规管理。对照药剂为50％多菌灵，设清水对照。在孕穗末期调查发病结果，测量病斑长度与水稻株高，并计算防治效果。

[0099] 防治效果(％)＝[1-(处理组病斑长度/水稻株高)/(对照病斑长度/水稻株高)]×100％。

[0100] 试验结果见表4。辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液对水稻纹枯病盆栽防效为84.15％，100倍稀释液对水稻纹枯病盆栽防效为72.26％，均明显高于对照化学药剂多菌灵的防效(50.30％)。

[0101] 表4 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对水稻纹枯病盆栽防效测定

[0102]

[0103] 实施例8

[0104] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对番茄灰霉病的盆栽防效测定

[0105] 试验地点：江苏省农业科学院植物保护研究所温室内进行。

[0106] 试验品种：江蔬一号(由江苏省农业科学院蔬菜所提供)。

[0107] 试验药剂：

[0108] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂由实施例4提供。对照药剂为75％百菌清可湿性粉剂，购自江苏苏州佳辉化工有限公司，是生产上防治番茄灰霉病的常用化学药剂，按商品田间推荐剂量使用。

[0109] 试验方法：番茄灰霉病菌孢子液的制备同实施例6“番茄枯萎病菌孢子液的制备”。将江蔬1号番茄种播于灭菌土壤中，当番茄苗长出5片真叶时，移至装有100g无菌土的盆钵中，每钵1棵。将番茄灰霉病菌孢子液(106cfu/mL)喷雾接种于番茄苗叶面，常温保湿培养
24h后，喷施辣椒溶杆菌NF87-2水剂及100倍稀释液。每处理20个重复，常规管理。对照药剂为75％百菌清，设清水对照。待清水对照发病后调查试验结果。

[0110] 番茄灰霉病病情分级标准如下：

[0111] 0级：无病斑；

[0112] 1级：病斑面积占整个叶面积5％以下；

[0113] 3级：病斑面积占整个叶面积6％～10％；

[0114] 5级：病斑面积占整个叶面积11％～20％；

[0115] 7级：病斑面积占整个叶面积21％～40％；

[0116] 9级：病斑面积占整个叶面积40％以上。

[0117] 病情指数＝[∑(各级病叶数×各级代表值)/(调查总株数×最高级代表值)]×100

[0118] 防治效果(％)＝[(对照的病情指数-处理的病情指数)/对照的病情指数]×100％[0119] 试验结果见表5。人工接种番茄灰霉病菌孢子液后，番茄灰霉病的病情指数为72.53，辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液和100倍稀释液对番茄灰霉病盆栽防效分别为77.47和
56.56％，而化学药剂百菌清的防效为44.46％，生防菌剂NF87-2水剂原液和100倍稀释液的防效均明显高于常规化学药剂。因此，生防菌剂NF87-2水剂可以有效防治番茄灰霉病。

[0120] 表5 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对番茄灰霉病盆栽防效测定

[0121]

[0122] 实施例9

[0123] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对油菜菌核病的盆栽防效测定

[0124] 试验地点：江苏省农业科学院植物保护研究所温室内进行。

[0125] 试验品种：宁杂15号(由江苏省农业科学院经作所提供)。

[0126] 试验药剂：

[0127] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂由实施例4提供。对照药剂为50％腐霉利可湿性粉剂，购自上海升联化工有限公司，是生产上防治油菜菌核病的常用化学药剂，按商品田间推荐剂量使用。

[0128] 试验方法：油菜菌核病接种采用火柴棍茎干法。播种油菜种子，分苗时将油菜移至20cm直径的花盆中，每盆2棵，常规管理至油菜盛花期。将牙签置于盛有PDA液体培养基的三角瓶中浸泡灭菌，然后接种油菜菌核病菌菌饼，28℃培养5d后备用。油菜盛花期时，用直径为3mm的消毒铁钉在离地30cm的油菜茎干处钻孔，将带菌牙签插入孔内贯通整个茎干。接种后喷施辣椒溶杆菌NF87-2水剂及100倍稀释液，间隔7-10d后再喷施药剂一次。每处理20个重复，常规管理。对照药剂为50％腐霉利，设清水对照。14d后量取茎秆上油菜菌核病病斑长度，计算防效。

[0129] 防治效果(％)＝[(对照病斑长度-处理病斑长度)/对照病斑长度]×100％[0130] 试验结果见表6。辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液和100倍稀释液对油菜菌核病盆栽防效分别为70.44和40.84％，而化学药剂腐霉利的防效为53.18％。生防菌剂NF87-2水剂原液的盆栽防效明显高于常规化学药剂腐霉利。

[0131] 表6 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对油菜菌核病盆栽防效测定

[0132]

[0133] 实施例10

[0134] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对番茄枯萎病田间防效测定

[0135] 试验地点：江苏省宿迁市沭阳县华冲镇设施番茄大棚内进行。

[0136] 试验品种：当地主栽品种，京番一号。

[0137] 试验药剂：同实施例6。

[0138] 试验方法：选取番茄枯萎病自然发病较重的温室大棚为试验大棚。试验用苗按常规操作，经育苗、分苗和定植三个阶段。播种时将药剂均匀浇灌苗床，用药量为300mL/m2苗床。分苗时将药剂均匀灌根于番茄苗根部，用药量为300mL/m2。定植时灌根，用药量为10mL菌液/棵。定植后每间隔15-20d灌根，用药量为5mL菌液/棵，共防治3-4次。试验药剂分4个处理：辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液、辣椒溶杆菌NF87-2水剂100倍稀释液、50％多菌灵、清水对照。每个处理小区约400棵苗，重复2次，处理小区随机分布。对照小区番茄苗发病时调查发病情况，计算防效。番茄枯萎病病情调查方法同实施例6。

[0139] 试验结果见表7。对照病田中番茄枯萎病的病情指数为87.53，辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液和100倍稀释液对番茄枯萎病田间防效分别为76.52％和65.18％，而化学药剂多菌灵的防效为50.63％，生防菌剂NF87-2的防效明显高于常规化学药剂，这与实施例6盆栽防效测定结果一致。试验结果表明：生防菌剂NF87-2水剂能有效防治番茄枯萎病。

[0140] 表7 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对番茄枯萎病田间防效测定

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[0142] 实施例11

[0143] 5亿辣椒溶杆菌NF87-2水剂对水稻纹枯病田间防效测定

[0144] 试验地点：江苏省农业科学院溧水基地实验田中进行。

[0145] 试验品种：当地主栽品种，南粳46。

[0146] 试验药剂：同实施例7。

[0147] 试验方法：选取水稻纹枯病自然发病较重的田块进行。播种前，用药剂浸泡水稻种子1小时，育秧30d。秧苗移栽于小区中，小区面积为1亩。在分蘖盛期喷雾各处理药剂1次，间隔15-20d后再喷施1次药剂。每次喷雾约500mL。试验药剂分4个处理：辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液、辣椒溶杆菌NF87-2水剂100倍稀释液、50％多菌灵、清水对照。每个处理重复2次，处理小区随机分布，常规肥水管理。在孕穗末期调查发病情况，并计算防效。从小区各边行向内数第三行查起，采用五点取样法，每点查20穴，用病斑高率(平均病斑长/株高)表示发病严重度。

[0148] 试验结果见表8。辣椒溶杆菌NF87-2水剂原液和100倍稀释液对水稻纹枯病田间防效分别为85.90％和76.13％，明显高于对照化学药剂多菌灵的防效(48.12％)。试验结果表明：辣椒溶杆菌NF87-2水剂能有效防治水稻纹枯病。

[0149] 表8 辣椒溶杆菌NF87-2水剂对水稻纹枯病田间防效测定

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