泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用

摘要

本发明提供了泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用。本发明中经药理试验发现，泽兰素能明显延长小鼠的断头张口喘气时间，能显著降低脑缺血后脑组织的含水量，能降低前脑缺血小鼠脑组织MDA的含量，升高SOD的含量，并能改善东莨菪碱所致小鼠记忆获得不良的作用。泽兰素的原料易得，能够通过常规方法制成各种常用剂型，如片剂、胶囊剂、注射剂等，制备方法简单。

权利要求

1.泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用，其特征在于，所述的药物能够降低缺血后脑组织的含水量，且能够改善心脑组织的缺血缺氧状态。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的药物为治疗缺血性脑血管疾病引起的记忆损害的药物。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述的药物是指泽兰素与可药用载体制成的片剂、胶囊剂及注射剂。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述片剂按重量份数计的配方包括：泽兰素200～400份、崩解剂10～150份、润滑剂10～20份。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述崩解剂为微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素或羧甲基淀粉钠；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

6.根据权利要求4或5所述的应用，其特征在于，所述片剂的配方还包括矫味剂150～

300份；所述矫味剂为乳糖。

7.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂按重量份数计的配方包括：泽兰素200～400份、润滑剂10～20份；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述胶囊剂的配方还包括矫味剂100～250份；所述矫味剂为乳糖。

9.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述注射剂按重量份数计的配方包括：泽兰素200～800份、氯化钠150～360份、助悬剂100～200份、乳化剂50～100份、注射用水500～1500份。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述的助悬剂为吐温-80或羧甲基纤维素；所述的乳化剂为卵磷脂、豆磷脂或普流罗尼F-68。

说明书

泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于生物医药技术领域，具体涉及泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用。

背景技术

[0002] 缺血性心脑血管病，是由于机体脂质代谢异常，以及血的平衡失调，血流速度变慢，血脂沉积于血管壁上以及代谢产物滞留在体内，引起心脏冠状动脉及脑部血液循环障碍所致。目前，缺血性心脑血管疾病在临床上发病率较高，严重危害中老人的身心健康。

[0003] 缺血性心脑血管病中以脑梗死和心肌梗死较为严重，病死率和并发症较高。临床上对此类疾病除手术治疗外，其基本治疗主要依赖于各种抗脑缺血药物，如抗凝血药、扩血管药和溶栓药等。目前已知，在急性发病期间溶栓疗法有肯定的疗效和积极的前景，但对于溶栓治疗伴随的再灌注损伤和错过溶栓时间窗的患者，满意的治疗药物还非常少见。

[0004] Euparin(泽兰素，兰草素)为一种单体化合物，可从橐吾属(Ligularia Cass)植物窄头橐吾和黄亮橐吾的根茎中分离提取，也可从泽兰属植物的根茎中获得，其结构如下：

[0005]

[0006] 泽兰素的植物来源、分离方法及其抗肿瘤和杀菌作用等有较多报道，但其对缺血性心脑血管疾病的研究及应用无人涉及。

发明内容

[0007] 本发明的目的在于提供泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用。

[0008] 本发明是通过以下技术方案来实现：

[0009] 本发明提供泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病药物中的应用，特别是泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病所致的记忆损害的药物中的应用。

[0010] 本发明所述的药物是以泽兰素为活性成分，与可药用载体制成的医疗上可接受的制剂，如片剂、胶囊剂及注射剂等。

[0011] 其中，所述片剂按重量份计的配方为：泽兰素200～400份、崩解剂10～150份、润滑剂10～20份；所述崩解剂为微晶纤维素(MCC)、低取代羟丙基纤维素或羧甲基淀粉钠；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。

[0012] 此外，所述片剂的配方中还可以包括150～300份矫味剂，所述矫味剂为乳糖。

[0013] 制备方法：将除润滑剂之外的原料混合均匀，用水润湿，过筛(16～20目)，干燥，然后再过筛(18～22目)，加入润滑剂，混合均匀后压片。

[0014] 所述胶囊剂按重量份计的配方为：泽兰素200～400份、润滑剂10～20份；所述润滑剂为硬脂酸镁、微粉硅胶或聚乙二醇。此外，还可以包括矫味剂100～250份，所述矫味剂为乳糖。

[0015] 制备方法：将除润滑剂之外的各种原料混合均匀，用水润湿，过筛(18～22目)，干燥，然后再次过筛(20～24目)，加入润滑剂，混合均匀后装入胶囊。

[0016] 所述注射剂按重量份计的配方为：泽兰素200～800份、氯化钠150～360份、助悬剂100～200份、乳化剂50～100份、注射用水500～1500份。

[0017] 所述助悬剂为吐温-80或羧甲基纤维素；所述乳化剂为卵磷脂、豆磷脂、普流罗尼F－68、氧乙烯丙烯聚合物等。

[0018] 制备方法：将泽兰素和氯化钠溶于注射用水中，加助悬剂和乳化剂搅拌溶解，在无菌条件下装入安瓶中。

[0019] 本发明通过药效学试验，进一步说明了本发明的泽兰素在制备治疗缺血性心脑血管疾病的应用，特别是在制备脑缺血和缺血性记忆下降中的应用。

[0020] 与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：

[0021] 1、本发明提供泽兰素单体新的医药用途，开拓了新的应用领域；泽兰素单体对缺血性心脑血管疾病具有较好的治疗效果，能够有效应用于缺血性心脑血管疾病药物的制备。

[0022] 2、泽兰素的药理作用明显，主要表现为：能明显延长小鼠的断头张口喘气时间，能显著降低脑缺血后脑组织的含水量，能降低前脑缺血小鼠脑组织MDA的含量，升高SOD的含量，并能改善东莨菪碱所致小鼠记忆获得不良的作用。

[0023] 3、泽兰素原料易得，且能够通过常规方法制成各种常用剂型，如片剂、胶囊剂、注射剂等，制备方法简单。

具体实施方式

[0024] 下面结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，所述是对本发明的解释而不是限定。

[0025] 实施例1

[0026] 泽兰素片剂的制备(1000片)

[0027] 配方：泽兰素(Euparin)，(新乡医学院药学院药物化学实验室提供，纯度＞96％，以下实施例均相同)200份、MCC(微晶纤维素)150份、硬脂酸镁10份。

[0028] 制备方法：将泽兰素、MCC混合均匀，用水润湿，然后过18目筛，干燥，再次过22目筛，然后加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。

[0029] 实施例2

[0030] 泽兰素片剂的制备(1000片)

[0031] 配方：泽兰素300份、乳糖150份、羧甲基纤维素钠100份、硬脂酸镁20份。

[0032] 制备方法：将泽兰素、乳糖及羧甲基纤维素钠混合均匀，用水润湿，然后过18目筛，干燥，再次过24目筛，然后加入硬脂酸镁，混合均匀，压片。

[0033] 实施例3

[0034] 泽兰素片剂的制备(1000片)

[0035] 配方：泽兰素300份、乳糖200份、羧甲基淀粉钠10份、微粉硅胶15份。

[0036] 制备方法：将泽兰素、乳糖及羧甲基淀粉钠混合均匀，用水润湿，然后过18目筛，干燥，再次过24目筛，然后加入微粉硅胶，混合均匀，压片。

[0037] 实施例4

[0038] 泽兰素片剂的制备(1000片)

[0039] 配方：泽兰素400份、乳糖300份、羧甲基淀粉钠80份、聚乙二醇10份。

[0040] 制备方法：将泽兰素、乳糖及羧甲基淀粉钠混合均匀，用水润湿，然后过18目筛，干燥，再次过24目筛，然后加入聚乙二醇，混合均匀，压片。

[0041] 实施例5

[0042] 泽兰素胶囊剂的制备(1000粒)

[0043] 配方：泽兰素400份、乳糖100份、硬脂酸镁10份。

[0044] 制备方法：将泽兰素、乳糖混合均匀，用水润湿，然后过20目筛，干燥，再次过22目筛，然后加入硬脂酸镁，混合均匀，装入胶囊。

[0045] 实施例6

[0046] 泽兰素胶囊剂的制备(1000粒)

[0047] 配方：泽兰素200份、乳糖100份、微粉硅胶20份。

[0048] 制备方法：将泽兰素、乳糖混合均匀，用水润湿，然后过20目筛，干燥，再次过22目筛，然后加入微粉硅胶，混合均匀，装入胶囊。

[0049] 实施例7

[0050] 泽兰素胶囊剂的制备(1000粒)

[0051] 配方：泽兰素300份、乳糖250份、聚乙二醇15份。

[0052] 制备方法：将泽兰素、乳糖混合均匀，用水润湿，然后过20目筛，干燥，再次过22目筛，然后加入聚乙二醇，混合均匀，装入胶囊。

[0053] 实施例8

[0054] 泽兰素注射剂的制备(100瓶)

[0055] 配方：泽兰素200份、氯化钠300份、羧甲基纤维素100份、豆磷脂100份、注射用水500份。

[0056] 制备方法：将泽兰素、氯化钠溶于注射用水中，再加羧甲基纤维素和豆磷脂搅拌混匀后进行灭菌处理，并在无菌条件下装入安瓶中。

[0057] 实施例9

[0058] 泽兰素注射剂的制备(100瓶)

[0059] 配方：泽兰素500份、氯化钠150份、吐温-80150份、卵磷脂50份、注射用水800份。

[0060] 制备方法：将泽兰素、氯化钠溶于注射用水中，再加吐温-80和卵磷脂搅拌混匀后进行灭菌处理，并在无菌条件下装入安瓶中。

[0061] 实施例10

[0062] 泽兰素注射剂的制备(100瓶)

[0063] 配方：泽兰素800份、氯化钠360份、羧甲基纤维素200份、普流罗尼F-68100份、注射用水1500份。

[0064] 制备方法：将泽兰素、氯化钠溶于注射用水中，再加羧甲基纤维素和普流罗尼F-68搅拌混匀后进行灭菌处理，并在无菌条件下装入安瓶中。

[0065] 以下通过相关药理实验，进一步说明本发明。

[0066] 一、泽兰素对小鼠断头喘气时间的影响

[0067] 1.实验方法

[0068] ICR雄性小鼠48只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为4个组，即：溶媒对照组、实施例1所述化合物8mg/kg组、16mg/kg组、32mg/kg组，每组12只。溶媒对照组给予生理盐水+0.625％的二甲基亚砜+0.125％吐温80，其它各组给予相应剂量的所述化合物，均按0.2mL/
10g腹腔注射，注射30分钟后断头，用秒表记数小鼠喘气时间。

[0069] 2.实验结果

[0070] 泽兰素各剂量组与溶媒对照组比较，均能明显延长小鼠断头张口喘气时间，其药效学作用存在剂量依赖性，提示该药物具有良好的抗小鼠脑缺血缺氧作用(见表1)。

[0071] 表1 泽兰素对小鼠断头喘气时间的影响(n＝12, )

[0072]

[0073] 与溶媒对照组比较*P<0.05,**P<0.01.

[0074] 二、泽兰素对小鼠前脑缺血再灌注的影响

[0075] 1实验材料和方法

[0076] 1.1动物分组和给药

[0077] ICR雄性小鼠40只，随机分为4组，即溶媒对照组、实施例2所述化合物8mg/kg组、16mg/kg组、32mg/kg组，每组10只。溶媒对照组给予生理盐水+0.625％的二甲基亚砜+
0.125％吐温80，其它各组给予相应剂量的所述化合物，均按0.2ml/10g腹腔注射。

[0078] 1.2主要实验药品、试剂、试剂盒

[0079] 所述化合物为泽兰素(Euparin)由新乡医学院药物化学研究室提供(纯度＞96％，为黄色结晶粉末)，5ml玻璃匀浆器、MDA、SOD和考马斯亮兰试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。

[0080] 1.3主要仪器

[0081] FA2004型电子天平(上海良平仪器仪表有限公司生产)、101-3型电热鼓风恒温干燥箱(江苏金坛市佳美仪器厂生产)、T6型分光光度计(北京谱析通用仪器有限责任公司生产)、TG16-W微量高速离心机(长沙湘仪离心机仪器有限公司生产)、SK-1型快速旋涡混匀器(江苏金坛医疗仪器厂生产)、电热恒温水浴锅(上海医疗器械厂生产)。

[0082] 1.4前脑缺血模型制作和组织处理方法

[0083] 小鼠用10％的水合氯醛麻醉(400mg/kg)，颈部正中切口，分离出双侧颈总动脉，用无创动脉夹夹闭双侧颈总动脉2小时进行再灌注，再灌注期间小鼠腹腔注射给药，2次/天(均腹腔注射)。给药48h后处死动物取出脑组织，左脑称干湿重，右脑制成10％的脑组织匀浆并离心取上清液-20℃保存。

[0084] 1.5脑组织含水量的测定方法

[0085] 将取出的左侧脑组织用分析天平称重后，放入110℃烤箱烘烤15h并再次称重，然后根据公式计算出脑组织的含水量。公式如下：

[0086] 组织含水量(％)＝(湿重-干重)/湿重×100％

[0087] 1.6脑组织MDA和SOD的测定

[0088] 1.6.1MDA(丙二醛)测定方法：考马斯亮兰蛋白定量后，采取最佳取样量，按顺序配制实验所需各个试管，旋涡器混匀，95℃水浴40分钟，取出后流水冷却，离心10分钟(3500-4000转/分)，取上清液适量，532nm处，1cm光径，蒸馏水调零，测定各管吸光度值。根据以下计算公式算出各组各动物的MDA值。

[0089]

[0090] 其中，nmoL/mgprot为钠摩尔/毫克蛋白。

[0091] 1.6.2脑组织中SOD(总超氧化物歧化酶)测定方法：

[0092] 考马斯亮兰蛋白定量后，采用最佳取样量严格按试剂盒说明书配制实验所需各个试管，旋涡器充分混匀，置37℃恒温水浴40分钟，然后在各管加显色剂再室温放置10分钟，于波长550nm处，1cm光径比色杯，蒸馏水调零，比色测定各组数值。然后根据公式计算出各组每个动物的SOD值。

[0093]

[0094] 1.7统计学方法

[0095] 采用SPSS17.0进行统计学处理，计量资料均用±s表示，采用方差分析，两两比较，方差齐者采用LSD法，方差不齐者采用Dunnett's T3法，P﹤0.05者有显著性差异。

[0096] 2实验结果

[0097] 2.1泽兰素对前脑缺血小鼠脑组织含水量的影响

[0098] 实施例2所述化合物各剂量组与模型组比较均能显著降低脑缺血后脑组织的含水量，存在较好的剂量依赖性。(见表2)

[0099] 表2 泽兰素对前脑缺血脑组织含水量影响的比较(n＝10， )

[0100]

[0101] 与模型组比较*P<0.05,**P<0.01.

[0102] 2.2泽兰素对前脑缺血小鼠脑组织MDA和SOD的影响

[0103] 泽兰素各剂量组与模型组比较均能降低脑缺血后脑组织MDA的含量，升高SOD的含量，随着剂量的升高，所述化合物的作用越强，具有较好的剂量依赖性。

[0104] 表3 泽兰素对前脑缺血MDA、SOD和NO值影响的比较(n＝10, )

[0105]

[0106] 与模型组比较*P<0.05,**P<0.01.

[0107] 三、泽兰素对大鼠心肌缺血实验的影响

[0108] 1实验材料和方法

[0109] 1.1实验动物分组和给药方法

[0110] SD雄性大鼠40只，体重180-220g，分为5个组，每组8只。即：模型组(异丙肾上腺素30mg/kg)、空白对照组(等体积注射用水)、泽兰素8mg/kg组、16mg/kg组、32mg/kg组，均按
20ml/kg的容积给药，B.i.d，腹腔注射1天。

[0111] 1.2心肌缺血损伤模型的制作和组织处理

[0112] 动物用10％水合氯醛(300mg/kg)麻醉，气管切开插管，分离颈外静脉以备取血，连接心电图机记录肢体Ⅱ导联，异丙肾上腺素(isoproterenol，ISO)(30mg/kg)，缓慢皮下注射，观察心电图改变，注射ISO 10min即可见心率和ST-T波明显改变。对照组注射生理盐水，各用药组在注射ISO 15分钟后均腹腔注射，2小时后处死动物取出心脏，用生理盐水冲净血迹，取20-30mg心肌组织，在1-4℃条件下制成10％的生理盐水心肌组织匀浆，然后离心(3000r/min，10min)，取适量上清液检测心肌细胞MDA和SOD水平。

[0113] 1.3统计学方法

[0114] 采用SPSS17.0进行统计学处理，计量资料均用 表示，采用方差分析，两两比较，方差齐者采用LSD法，方差不齐者采用Duttet法，P﹤0.05者有显著性差异。

[0115] 2结果

[0116] 2.1泽兰素对急性心肌缺血MDA、SOD的影响

[0117] 泽兰素各剂量组与模型组比较均能降低心肌缺血损伤后脑组织MDA的含量，升高SOD的含量，具有较好的剂量依赖性(见表4)。

[0118] 表4 泽兰素对急性心肌缺血MDA、SOD值影响的比较(n＝8， )

[0119]

[0120] 与模型组比较*P<0.05,**P<0.01

[0121] 四、泽兰素对对小鼠记忆障碍的改善作用

[0122] 1实验材料和方法

[0123] 1.1实验动物分组和给药方法

[0124] ICR种小鼠60只，雌雄各半，体重18-22g，随机分为5个组，即空白对照组(给予等量溶媒)、病理模型组(东莨菪碱5mg/kg)、阳性药物对照组(1％阿尼西坦)、泽兰素8mg/kg组、16mg/kg组、32mg/kg组，每组12只。均按10ml/kg给药，q.d.，连续10天腹腔注射。

[0125] 1.2主要试剂、药物和仪器

[0126] 泽兰素(由新乡医学院药物化学研究室提供，纯度＞96％，为黄色结晶粉末)、氢溴酸东莨菪碱注射液(购于新乡医学院第三附属医院，规格：0.3mg/ml,批号：5A18002,上海禾丰制药有限公司生产)，STT-Z小鼠跳台仪(中国医学科学院药物研究所生产)[0127] 1.3实验方法

[0128] 动物经一次性训练后选取合格动物，用小鼠跳台仪进行测试并记录错误次数和SDL(小鼠台上停留时间)的成绩，实验结果以 表示，统计学方法同前。

[0129] 2.结果

[0130] 2.1泽兰素对东莨菪碱所致小鼠记忆获得不良影响的比较分析

[0131] 泽兰素各剂量组与模型组比较小鼠的记忆错误次数明显减少，SDL时间明显增加(P<0.05或P<0.01)；与阳性对照药比较泽兰素的中、高剂量组明显优于阳性对照药阿尼西坦，提示该药物具有改善东莨菪碱所致小鼠记忆获得不良的作用，见表5。

[0132] 表5 泽兰素对东莨菪碱所致小鼠记忆获得不良的影响(n＝12, )

[0133]