作为鳞状癌及肝癌抑制剂的芪类化合物及其用途

摘要

本发明提供一系列芪类化合物及其衍生物，可作为头颈部鳞状细胞癌及肝癌的抑制剂。式I。

权利要求

1.一种化合物，其为式I所示的化合物或式I所示化合物的药学上可接受的盐，其中，R’、R为氢或C1-3烷基；R1，R2，R3独立地为氢、或C1-3烷基、或 而该R1，R2，及R3至少有一者为 R4，R5，R6为氢、或C1-3烷基、或(CH2)n-CH2OH、或(CHOH)n-CH2OH，n＝0至3；而，该R4，R5，R6中至少有一者为(CH2)n-CH2OH或(CHOH)n-CH2OH，n＝0至3。

2.如权利要求1所述的化合物，其中，R1，R2，R3为 且R4，R5，R6中至少有一者为(CH2)n-CH2OH，n＝0至3。

3.如权利要求1所述的化合物，其中，R1，R2，R3为 且R4，R5，R6中至少有一者为(CHOH)n-CH2OH，n＝0至3。

4.一种医药组成物，该医药组成物包含如权利要求1所述的化合物。

5.如权利要求4所述的医药组成物，进一步包含药学上可接受的载体。

6.如权利要求4所述的医药组成物，其特征在于，其作为头颈部鳞状细胞癌及肝癌的抑制剂。

7.一种如权利要求1所述化合物用于制备药物的用途，所述药物用于抑制头颈部鳞状细胞癌及肝癌。

8.一种化合物，其为式II所示的化合物或式II所示化合物的药学上可接受的盐，其中，R’、R为氢或C1-3烷基；X1、X2、及X3独立地为氢、C1-3烷基，或  其中R7及R8独立地为氢或C1-3烷基，而X1、X2、及X3非全部选自于氢和C1-3烷基。

9.一种制备式I化合物的方法，

该方法包含将式II化合物

进行去保护，生成式I化合物，

其中，R’、R为氢或C1-3烷基；R1，R2，R3独立地为氢、或C1-3烷基、或  而该R1，R2，及R3至少有一者为 R4，R5，R6中二者为CH2OH，另一为C1烷基；X1、X2、及X3独立地为氢、C1-3烷基或  R7及R8独立地为氢或C1-3烷基，且X1、X2、及X3非全部选自于氢和C1-3烷基。

说明书

作为鳞状癌及肝癌抑制剂的芪类化合物及其用途

技术领域

[0001] 本发明涉及一种作为头颈部鳞状细胞癌及肝癌抑制剂的芪类化合物及其用途。更具体的，本发明涉及可以抑制头颈部鳞状细胞癌及肝癌细胞存活率与增生率的化合物、该化合物的医药组成物和该化合物用于制备药物的用途。

背景技术

[0002] 头与颈部癌症为全球第六普及的癌症且约占总癌症案例的6%，头与颈部癌症亦是台湾第四常见的癌症。头与颈部癌症泛指出现在鼻窦(paranasal sinuses)、鼻腔(nasal cavity)、口腔(oral cavity)、咽(pharynx)、及喉(larynx)之上皮恶性肿瘤(epithelial malignancies)。约95%的组织学分型为头颈部鳞状细胞癌(Head and neck squamous cell carcinoma，HNSCC)，其他的则为唾液腺肿瘤(salivary gland tumors)、淋巴瘤(lymphomas)、及肉瘤(sarcomas)。现今，许多与头颈部鳞状细胞癌性病变有关的风险因子已被识别出来，其中头颈部鳞状细胞癌最重要的风险因子为吸烟及饮酒。其他风险因子还有曝露于工业吸入性物质、人类乳突状瘤病毒(human papilloma virus，HPV)感染、及爱泼斯坦-巴尔病毒(Epstein-Barr virus，EBV)感染等。尽管对于头颈部鳞状细胞癌的治疗有所进步，患者预后及标准治疗方法后的效果是非常差的。较高的复发率及转移率使得大部分的患者的存活率非常低。

[0003] 目前头颈部鳞状细胞癌有三种主要的治疗及管理方法，为放射疗法、手术疗法、及化学疗法。基本的治疗为放射及手术，或两者结合并辅以化学疗法。最佳的治疗方法组合是由癌症发生的部位及阶段而定。最常见与放射疗法搭配的药物(称之为化学暨放射疗法，chemoradiation)，是顺铂(cisplatin，商品名：Platinol、Platinol-AQ)、氟尿嘧啶(fluorouracil，商品名：Adrucil、Efudex、Fluoroplex)、及西妥昔单株抗体(cetuximab，商品名：Erbitux)。其他使用的化学疗法药物还包括卡波铂(carboplatin，商品名：Paraplatin)、多西他赛(docetaxel，商品名：Taxotere)与吉西他滨(gemcitabine)、太平洋紫杉醇(paclitaxel，Taxol)、甲氨蝶呤(methotrexate，商品名：Abitrexate、Folex、Folex PFS、Mexate、Mexate-AQ)、及轮丝链霉素(bleomycin，商品名：Blenoxane)。

[0004] 尽管上述药物具有抗肿瘤效果，然而化学疗法会带来许多的副作用造成头颈部鳞状细胞癌患者的不便，包括：高感染风险、瘀伤(bruising)、贫血(anemia)、恶心(nausea)、呕吐(vomiting)、口疮(sore mouth)、听觉损失(hearing loss)、疲劳(fatigue)、及掉发。临床的观察发现顺铂会导致肾衰竭(renal failure)及细胞毒性(cytotoxicity)。顺铂和紫杉烷(taxanes)均具有毒性，包括：血液毒性(haematological toxicity)、神经毒性(neurotoxicity)、肾毒性(nephrotoxicity)及耳毒性(ototoxicity)。氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、及紫杉烷可能具有黏膜细胞毒性(mucosal cytoxicity)而使得放射疗法的结果恶化。
到目前为止，以顺铂为基础的化学疗法是治疗头颈部鳞状细胞癌最常用的方法，因为其具有较佳的存活率优势。然而，顺铂的化学疗法有其限制：一则容易产生耐药性，再则高剂量会有严重的毒性。因此，寻找更佳的头颈部鳞状细胞癌化学疗法药剂至关重要。理想的头颈部鳞状细胞癌化学疗法药剂需具有效的抗肿瘤活性、可避免头颈部鳞状细胞癌的复发及转移、并且为低毒性、低副作用。

[0005] 肝癌(Hepatocellular carcinoma，HCC)为全球第五普及的恶性肿瘤且为第二常见造成死亡的癌症。肝癌在亚洲及非洲盛行，而现在其发生率在西方国家亦有上升的趋势。肝癌是一种侵略性的肿瘤，频繁地发生于慢性肝病及肝硬化。肝癌最主要的风险因子包括：
B型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)或C型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)感染、酒精性肝病(alcoholic liver diseases)、及非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver diseases)。在西方国家，第二型糖尿病及肥胖为两大新兴的造成肝癌的原因。临床上，对肝癌的诊断通常较晚期、标准治疗方法后的预后极差、且存活率非常低。

[0006] 目前的肝癌治疗方法，包括：外科介入(surgical intervention)的肿瘤切除(tumor resection)与肝脏移植(liver transplantation)；经皮介入(percutaneous interventions)的乙醇或醋酸注射、高周波电热烧灼术(radiofrequency thermal ablation)、微波烧蚀(microwave ablation)、及冷冻剥蚀(cryoablation)；动脉性介入(transarterial interventions)的栓塞手术(embolization)、化学流灌治疗(chemoperfusion)、或化学栓塞手术(chemoembolization)；全身性化学疗法(systemic chemotherapy)及分子标靶治疗(molecularly target therapies)。全身性化学疗法(systematic chemotherapy)的药物可分为细胞毒药物(cytotoxic drugs)及分子标靶药物(molecular target drugs)，前者包括Xeloda(截瘤达，cape citabine)、Etoposide(依托泊贰)、Irinotecan(喜树碱衍生物)、5-Fu、Doxorubicin(爱霉素)、Mitoxantrone(能灭瘤)及thymitaq(商品名：nolatrexed，诺拉曲特)，这些细胞毒药物副作用很强，而且容易产生抗药性。分子标靶药物包括sorafenib(商品名：Nexavar，蕾莎瓦)、sunitinib(商品名：Sutent，舒癌特)及bevacizumab(商品名：Avastin，癌思停)等，这些药物都容易产生抗药性。该些副作用不仅造成肝癌患者的不便，更降低其存活率。

[0007] 开发对肝癌有效而且低毒性的新药是医药领域的重要课题。为了同时克服副作用并降低肝癌的发病率及致死率，发展新颖的全身性化疗药物，作为先进肝癌治疗方法最为重要。理想的化学治疗药剂必须具备抗肿瘤、高效、且对患者的正常细胞毒性极低等特性。

[0008] 白藜芦醇(3,5,4'-trihydroxy-trans-stilbene)是一种芪类化合物、一种天然酚类、及一种植物防御素(phytoalexin)。在1939年Michio Takaoka首先在一篇日文文献中提及自有毒但有药效的白花藜芦(Veratrum album)分离出白藜芦醇。白藜芦醇被发现存在于红葡萄及其他水果的皮中，亦存在于日本结草(Japanese knotweed)-虎杖(Polygonum cuspidatum)的根中。白藜芦醇在药物学上的功效包括：延长寿命、保护心血管、抗糖尿病、抗发炎等。此外，在动物模型中，白藜芦醇具有抗癌的效果。然而，该药物上的抗癌效果因为低的生物可用性而有所限制。

[0009] 在大鼠以每天0.3kg白藜芦醇处理的实验中，未观察到明显的毒性。曾经有一些研究探讨高剂量白藜芦醇的不良反应，受试人数为104位(包括服用安慰剂者)。一70kg的人一次性最高摄取白藜芦醇的剂量为5g，而若为反复性地给予白藜芦醇其剂量为每天0.9g。在这些研究中并没有观察到严重不良反应。那些不良反应是轻微的且仅会持续几天。

[0010] 紫檀芪是一种天然的酚芪类化合物并被确认是一种植物防御素，存在于葡萄、各种莓类及药用植物中。紫檀芪药物上的药效为抗菌、抗氧化、抗发炎、降血脂、抗糖尿病、及提升记忆力。紫檀芪的副作用及毒性非常低，28天的亚慢性(subchronic)毒性研究显示，在剂量为3.0g/kg/天未观察到不良的生化及毒性效果。

发明内容

[0011] 缘此，本发明提供一种化合物，其为式I所示的化合物或式I所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药，

[0012] 式I

[0013] 其中，R’、R为氢或C1-3烷基；R1，R2，R3独立的为氢、或C1-3烷基、或 或R4，R5，R6为氢、或C1-3烷基、或(CH2)n-CH2OH、或(CHOH)n-CH2OH，n=0至3；而该R1，R2，及R3至少有一者为 当R1，R2，R3为 时，R4，R5，R6中至少有一者为(CH2)n-CH2OH，n=0至3；又或者当R1，R2，R3为 时，R4，R5，R6中至少有一者为(CHOH)n-CH2OH，n=0至3。

[0014] 本发明之另一目的是提供一种医药组成物，该医药组成物包含式I所示之化合物，且进一步可包含药学上可接受的载体、赋形剂、稀释剂、辅剂、媒介物或其组合。该医药组成物是作为头颈部鳞状细胞癌及肝癌的抑制剂。

[0015] 本发明之另一目的是提供一种式I所述之化合物用于制备药物的用途，所述的药物用于抑制头颈部鳞状细胞癌及肝癌。

[0016] 本发明另提供一种化合物，其为式II所示的化合物或式II所示化合物的立体异构体、几何异构体、互变异构体、氮氧化物、水合物、溶剂化物、代谢产物、药学上可接受的盐或前药， 式II

[0017] 其中，R’、R为氢或C1-3烷基；X1、X2、及X3独立的为氢、C1-3烷基，或其中R7及R8独立地为氢或C1-3烷基，而X1、X2、及X3非全部选自于氢和C1-3烷基。

[0018] 本发明之另一方面，是提供一种制备式I化合物的方法，式I

[0019] 该方法包含将式II化合物

[0020] 式II

[0021] 进行去保护，生成式I化合物，

[0022] 其中，R’、R为氢或C1-3烷基；R1，R2，R3独立地为氢、或C1-3烷基、或 或R4，R5，R6为氢、或C1-3烷基、或(CH2)n-CH2OH、或(CHOH)n-CH2OH，n=0至3；而该R1，R2，及R3至少有一者为 R4，R5，R6中至少有一者为(CH2)n-CH2OH，n=0至3；
R4，R5，R6中至少有一者为(CHOH)n-CH2OH，n=0至3；X1、X2、及X3独立地为氢、C1-3烷基，或R7及R8独立地为氢或C1-3烷基，且X1、X2、及X3非全部选自于氢和C1-3烷基。
在本发明的某些实施例中，该式II化合物是由三酚化合物与2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,
3-二氧六环-5-碳酰或2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯反应生成，[0023] 式II

[0024] 其中R’、R为氢或C1-3烷基；R1，R2，R3独立地为氢、或C1-3烷基、或 或R4，R5，R6为氢、或C1-3烷基、或(CH2)n-CH2OH、或(CHOH)n-CH2OH，n=0至3；而该R1，R2，及R3至少有一者为 R4，R5，R6中至少有一者为(CH2)n-CH2OH，n=0至3；
R4，R5，R6中至少有一者为(CHOH)n-CH2OH，n=0至3；X1、X2、及X3独立地为氢、C1-3烷基，或R7及R8独立地为氢或C1-3烷基，且X1、X2、及X3非全部选自于氢和C1-3烷基。

[0025] 本发明之化合物，相较于部分传统使用的药物/化合物，表现出更有效的抗癌能力且毒性非常低；此外，本发明的化合物在水中的溶解度高而进一步使得其在体内的吸收率高，因此，适合用于癌症的治疗且安全无虞。

[0026] 以下将配合图式进一步说明本发明的实施方式，以下所列举的实施例是用以阐明本发明，并非用以限定本发明的范围，任何熟习此技艺者，在不脱离本发明的精神和范围内，当可做些许更动与润饰，因此本发明的保护范围当以后附的权利要求书所界定的范围为准。

附图说明

[0027] 图1为化合物2-4抑制具顺铂抗性的头颈部鳞状癌细胞(CAR)活性的效果。

[0028] 图2为化合物2-4抑制Hep3B细胞活性的效果。

[0029] 图3为化合物2-4抑制异体移植具顺铂抗性的头颈部鳞状癌细胞裸鼠模型的效果。

[0030] 图4为化合物2-4抑制异体移植具顺铂抗性的头颈部鳞状癌细胞裸鼠模型中肿瘤大小的效果。

[0031] 图5为化合物2-4抑制异体移植具顺铂抗性的头颈部鳞状癌细胞裸鼠模型中肿瘤重量的效果。

[0032] 图6为化合物2-4对异体移植具顺铂抗性的头颈部鳞状癌细胞裸鼠模型中平均体重与时间分布的影响。

[0033] 图7为化合物2-4对正常口腔细胞的影响。

具体实施方式

[0034] 定义

[0035] 除非其他方面表明，本发明所描述的结构式包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构，和几何异构(或构象异构))：例如含有不对称中心的R、S构型，双键的(Z)、(E)异构体，和(Z)、(E)的构象异构体。因此，本发明的化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体，非对映异构体，或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。

[0036] 本发明所使用的术语“前药”，代表一个化合物在体内转化为式(I)所示的化合物。这样的转化受前体药物在血液中水解或在血液或组织中经酶转化为母体结构的影响。本发明前体药物类化合物可以是酯，在现有的发明中酯可以作为前体药物的有苯酯类、脂肪族(C1-24)酯类、酰氧基甲基酯类、碳酸酯、氨基甲酸酯类和氨基酸酯类。例如本发明里的一个化合物包含羟基，即可以将其酰化得到前体药物形式的化合物。其他的前体药物形式包括磷酸酯，如这些磷酸酯类化合物是经母体上的羟基磷酸化得到的。关于前体药物完整的讨论可以参考以下文献：T.Higuchi and V.Stella,Pro-drugs as Novel Delivery Systems,Vol.14of the A.C.S.Symposium Series,Edward B.Roche,ed.,Bioreversible Carriers in Drug Design,American Pharmaceutical Association and Pergamon Press,1987,J.Rautio et al,Prodrugs：Design and Clinical Applications,Nature Review Drug Discovery,2008,7,255-270,and S.J.Hecker et al,Prodrugs of Phosphates and Phosphonates,Journal of Medicinal Chemistry,2008,51，2328-2345。

[0037] 除非其他方面表明，本发明的化合物的所有互变异构形式都包含在本发明的范围之内。另外，除非其他方面表明，本发明所描述的化合物的结构式包括一个或多个不同的原子的富集同位素。

[0038] 本发明的“溶剂化物”是指一个或多个溶剂分子与本发明的化合物所形成的缔合物。形成溶剂化物的溶剂包括，但并不限于，水、异丙醇、乙醇、甲醇、二甲亚砜、乙酸乙酯、乙酸、氨基乙醇。术语“水合物”是指溶剂分子与水所形成的缔合物。

[0039] “代谢产物”是指具体的化合物或其盐在体内通过代谢作用所得到的产物。一个化合物的代谢产物可以通过所属领域公知的技术来进行鉴定，其活性可以通过如本发明所描述的那样采用试验的方法进行表征。这样的产物可以是通过给药化合物经过氧化、还原、水解、酰氨化、脱酰氨作用、酯化、脱脂作用、酶裂解等等方法得到。相应地，本发明包括化合物的代谢产物，包括将本发明的化合物与哺乳动物充分接触一段时间所产生的代谢产物。

[0040] 本发明所使用的“药学上可接受的盐”是指本发明的化合物的有机盐和无机盐。药学上可接受的盐在所属领域是为我们所熟知的，如文献：S.M.Berge  et  al.,J.Pharmaceutical Sciences,66,1-19,1977所记载的。药学上可接受的无毒的酸形成的盐包括，但并不限于，与氨基基团反应形成的无机酸盐、有机酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、高氯酸盐，和有机酸盐如乙酸盐、草酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、琥珀酸盐、丙二酸盐，或通过书籍文献上所记载的其他方法如离子交换法来得到这些盐。其他药学上可接受的盐包括己二酸盐、藻酸盐、抗坏血酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、苯甲酸盐、重硫酸盐、硼酸盐、丁酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊基丙酸盐、二葡萄糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、甲酸盐、反丁烯二酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、葡萄糖酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢碘酸盐、2-羟基-乙磺酸盐、乳糖醛酸盐、乳酸盐、月桂酸盐、月桂基硫酸盐、苹果酸盐、丙二酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、硝酸盐、油酸盐、棕榈酸盐、扑酸盐、果胶酸盐、过硫酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、特戊酸盐、丙酸盐、硬脂酸盐、硫氰酸盐、对甲苯磺酸盐、+十一酸盐、戊酸盐等等。通过适当的碱得到的盐包括碱金属、碱土金属、铵和N (C1-4烷基)4的盐。本发明也拟构思了任何所包含N的基团的化合物所形成的季铵盐。水溶性或油溶性或分散产物可以通过季铵化作用得到。碱金属或碱土金属盐包括钠、锂、钾、钙、镁等等。药学上可接受的盐进一步包括适当的、无毒的铵、季铵盐和抗平衡离子形成的胺阳离子，如卤化物、氢氧化物、羧化物、硫酸化物、磷酸化物、硝酸化物、C1-8磺酸化物和芳香磺酸化物。

[0041] 本发明所使用的术语“药学上可接受的”是指这样的化合物、原料、组合物和/或剂型，它们在合理医学判断的范围内，适用于与患者组织接触而无过度毒性、刺激性、变态反应或与合理的利益/风险比相对称的其他问题和并发症，并有效用于既定用途。

[0042] 本发明化合物的合成

[0043] 关于本发明化合物，总体来说，是由合成方法1合成。如合成方法1所示，将三酚化合物(triphenolic compound)(化合物1-1)与不同当量的化合物1-2反应，在4-二甲基氨基吡啶(N,N-dimethylaminopyridine，DMAP)中反应，并由二环已基碳二亚胺(N,N-dicyclohexylcarbodiimide，DCC)催化，进行耦合(coupling)，纯化后可得到多种的酯(化合物1-3至化合物1-7)。所合成的酯再于甲醇且在刘易斯酸(Lewis acid)存在的条件下进行去保护(deprotection)，以获得相应的化合物(化合物1-8至化合物1-9)。

[0044] 合成方法1

[0045]

[0046] 合成方法2

[0047]

[0048] 关于化合物2-3及化合物2-4的合成方法，请参考合成方法2。

[0049] 实施例1

[0050] 4-(3,5-二甲氧基苯乙烯基)苯基2,2,5-三甲基-1,3-二氧六环-5-羧酸酯(4-(3,5-dimethoxystyryl)phenyl2,2,5-trimethyl-1,3-dioxane-5-carboxylate)

[0051] (化合物2-3)的制备

[0052] 请参考合成方法2。在室温下，搅拌一含有化合物2-2(0.740g，4.25mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液，并依序加入二环已基碳二亚胺(1.140g，5.53mmol)、化合物2-1(1.090g，4.25mmol)、及4-二甲基氨基吡啶(0.052g，0.43mmol)。将混合液于相同的温度下搅拌18小时后加入水(15mL)抑制反应。分离该溶液的水性层并以二氯甲烷(2x20mL)萃取。将所得的有机萃取物以卤水(brine)冲洗并以硫酸镁干燥，过滤、浓缩后得到初产物。该初产物进一步以硅胶快速色层分析(flash chromatography on silical gel)与乙酸乙酯(EtOAc)/n-己烷(n-hexane)(比例为1:2)纯化，获得白色固体的化合物2-3(1.070g，61%)。

[0053] 1H NMR(CDCl3,200MHz):δ7.49(d,J=8.6Hz,2H),7.09-6.99(m,4H),6.65-6.63(m,2H),6.38(s,1H),4.21(d,J=11.8Hz,2H),3.80(s,6H),3.75(d,J=11.8Hz,2H),1.46(s,3H),
1,43(s,3H),1,33(s,3H);13C NMR(CDCl3,50MHz):δ172.7,160.7,150.1,139.1,134.5,
129.0,128.0,127.4,121.7,104.5,100.1,97.0,66.0,55.3,43.0,24.8,22.1,18.0。

[0054] 实施例2

[0055] 4-(3,5-二甲氧基苯乙烯基)苯基-3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸(4-(3,5-dimethoxystyryl)phenyl-3-hydroxy-2-(hydroxymethyl)-2-methylpropanoate)(化合物2-4)的制备

[0056] 请参考合成方法2。在室温下，搅拌一含有化合物2-3(0.900g，2.18mmol)的二氯甲烷(25mL)溶液，并加入12N HCl/甲醇(MeOH)(比例为1:30，2ml)。将混合液于相同的温度下搅拌30分钟后浓缩得到初产物。该初产物进一步进行结晶反应，获得白色固体的化合物2-4(0.66g，81%)。

[0057] 1H NMR(CDCl3,200MHz):δ7.50(d,J=8.6Hz,2H),7.19-6.99(m,4H),6.64-6.63(m,2H),6.38(s,1H),4.05(d,J=10.0Hz,2H),3.85-3.80(m,8H),2.89(br s,2H),1,21(s,3H);
13C NMR(CDCl3,50MHz):δ174.7,160.9,149.9,139.1,135.2,129.0,128.0,127.5,121.8,
104.5,100.1,68.7,55.3,49.5,17.0。化合物2-4熔点：108.0-109.5℃。

[0058] 关于化合物3-3、3-4、3-5、3-6的详细制备方法，请参考合成方法3。

[0059] 合成方法3

[0060]

[0061] 实施例3

[0062] 4’-(2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-羧基)-白藜芦醇(4’-(2,2,5-trimethyl-1,3-dioxane-5-carboxy)-resveratrol)(化合物3-3)及3,4’-(2,2,5-二甲氧基苯乙烯基 1,3-二氧六环-5-羧基)-白藜芦醇(3,4’-(2,2,5-trimethyl 1,3-dioxane-5-carboxy)-resveratrol)(化合物3-4)的制备

[0063] 在室温下，搅拌一含有化合物3-2(1.373g，7.88mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)(25mL)溶液，并依序加入盐酸1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺((1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide，EDCI)(1.224g，7.88mmol)、羟基苯并三唑(Hydroxybenzotriazole)(1.224g，7.88mmol)、化合物3-1(0.600g，2.62mmol)、及三乙胺(Et3N)(0.797g，7.88mmol)。将混合液于相同的温度下搅拌32小时后加入水(15mL)。将所得的有机萃取物以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，过滤、浓缩后得到初产物。该初产物进一步以硅胶快速色层分析与乙酸乙酯/二氯甲烷/n-己烷(比例为1:1:1)纯化，获得白色固体的化合物3-3(0.537g，53%)及白色固体的化合物3-4(0.125，9%)。需注意的是，本实施例的化合物3-3即为合成方法1中的化合物1-3；化合物3-4即为合成方法1中的化合物1-4。

[0064] 化合物3-3：1H NMR(CDCl3,500MHz):δ7.44(d,J=6.5Hz,2H),7.07(d,J=6.5Hz,2H),6.94-6.77(m,2H),6.55(s,2H),6.33(s,1H),4.37(d,J=12.0Hz,2H),3.80(d,J=12.0Hz,
2H),1.51(s,3H),1,48(s,3H),1,35(s,3H);13C NMR(CDCl3,125MHz):δ173.1,157.5,149.9,
139.5,135.2,128.7,127.9,127.4,121.6,121.7,105.8,102.6,98.4,66.0,42.4,25.3,
22.0,18.4。

[0065] 化合物3-4：1H NMR(CDCl3,500MHz):δ7.49(d,J=6.5Hz,2H),7.11(d,J=6.5Hz,2H),7.09-6.91(m,2H),6.84(s,2H),6.53(s,1H),4.36(d,J=11.0Hz,4H),3.80(d,J=11.5Hz,
4H),1.51(s,6H),1.48(s,6H),1,38(s,6H);13C NMR(CDCl3,125MHz):δ173.2,157.3,151.9,
150.5,139.6,134.8,129.0,127.7,127.6,121.7,111.7,111.1,108.3,98.3,66.0,42.3,
25.1,22.2,18.5。

[0066] 实施例4

[0067] 4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物3-5)的制备

[0068] 在室温下，搅拌一含有化合物3-3(0.232g，0.60mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，并加入12N HCl/甲醇(MeOH)(比例为1:30，1ml)。将混合液于相同的温度下搅拌30分钟后浓缩得到初产物。该初产物进一步进行结晶反应，获得白色固体的化合物3-5(0.188g，90%)。需注意的是，本实施例的化合物3-5即为合成方法1中的化合物1-8。

[0069] 1H NMR(MeOD,200MHz):δ7.65(d,J=8.6Hz,2H),7.23-7.07(m,4H),6.64-6.63(m,2H),6.35(s,1H),3.98(d,J=10.0Hz,2H),3.87(d,J=10.0Hz,2H),1,43(s,3H);13C NMR(MeOD,50MHz):δ172.5,156.8,148.8,137.7,133.6,127.3,125.5,125.4,120.2,103.2,
100.3,63.0,49.2,14.4。化合物3-5熔点：138.0-139.5℃。

[0070] 实施例5

[0071] 3,4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3,4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物3-6)的制备

[0072] 在室温下，搅拌一含有化合物3-4(0.098g，0.18mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，并加入12N HCl/甲醇(MeOH)(比例为1:30，0.2ml)。将混合液于相同的温度下搅拌30分钟后浓缩得到初产物。该初产物进一步进行结晶反应，获得白色固体的化合物3-6(0.075g，90%)。需注意的是，本实施例的化合物3-6即为合成方法1中的化合物1-9。

[0073] 1H NMR(MeOD,500MHz):δ7.58(d,J=8.0Hz,2H),7.20-7.05(m,4H),6.87-6.84(m,2H),6.49(s,1H),3.87(d,J=11.0Hz,4H),3.77(d,J=11.0Hz,4H),1,32(s,6H);13C NMR(MeOD,125MHz):δ172.5,158.2,152.2,150.6,139.4,134.9,128.2,127.1,121.7,110.5,
108.0,64.5,50.8,50.7,50.6,16.0,15.9。化合物3-6熔点:146.0-148.0℃。

[0074] 实施例6

[0075] 3,5,4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3,5,4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物4-3)的制备

[0076] 关于化合物4-3的制备，请参考合成方法4。

[0077] 合成方法4

[0078]

[0079] 在室温下，缓慢地加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(2,2,5-trimethyl-1,3-dioxane-5-carbonyl chloride)(636mg，3.3mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.55mL，3.96mmol)至一含有化合物4-1(228mg，1.0mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物4-2。

[0080] 在室温下，缓慢地加入2N HCl(3.0mL)至一含有化合物4-2(348mg，0.5mmol)的四氢呋喃(THF)(3.0mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物4-3(230mg，0.4mmol)，产率为80%。需注意的是，本实施例的化合物4-2即为合成方法1中的化合物1-5，化合物4-3即为合成方法1中的化合物1-10。

[0081] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.21(s,9H),3.52-3.55(m,6H),3.65-3.70(m,6H),4.90-4.96(m,6H),6.78(s,1H),7.09(d,2H),7.22(d,2H),7.27(d,2H),7.66(d,2H).MS:577(M+1)。化合物4-3熔点:228.0-229.5℃。

[0082] 实施例7

[0083] 5-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(5-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物5-3)的制备

[0084] 关于化合物5-3的制备，请参考合成方法5。

[0085] 合成方法5

[0086]

[0087] 在室温下，缓慢的加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(212mg，1.1mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.17mL，1.2mmol)至一含有化合物5-1(256mg,1.0mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物5-2。

[0088] 在室温下，缓慢地加入氯双(二甲基酰胺基)硼烷(BCl3.SMe2)(2.0M于二氯甲烷，2.5mL，5.0mmol)至一含有化合物5-2(412mg,1.0mmol)的1,2-二氯乙烷(1,2-
dichloroethane)(10mL)溶液，接着加热回流16小时。将该混合溶液降温至室温，水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得之有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物5-3(207mg，0.6mmol)，产率为60%。需注意的是，本实施例的化合物5-3即为合成方法1中的化合物1-11。

[0089] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.19(s,3H),3.52(d,4H),3.65(d,3H),4.90(s,2H),6.35(t,1H),6.70(s,1H),6.74-6.78(m,3H),6.90(d,1H),7.02(d,1H),7.41(d,2H),9.64(s(br.),2H).MS:345(M+1)。化合物5-3熔点:135.6-136.9℃。实施例8

[0090] 3,5-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3,5-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物6-3)的制备

[0091] 关于化合物6-3的制备，请参考合成方法6。

[0092] 合成方法6

[0093]

[0094] 在室温下，缓慢地加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(424mg，2.2mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.37mL，2.64mmol)至一含有化合物6-1(242mg，1.0mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物6-2。

[0095] 在室温下，缓慢地加入氯双(二甲基酰胺基)硼烷(2.0M于二氯甲烷，2.5mL，5.0mmol)至一含有化合物6-2(554mg，1.0mmol)的1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane)(10mL)溶液，接着加热回流16小时。将该混合溶液降温至室温，水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物6-3(300mg，0.65mmol)，产率为65%。需注意的是，本实施例的化合物6-3即为合成方法1中的化合物1-12。

[0096] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.20(s,6H),3.53(m,4H),3.68(m,4H),4.95(m,3H),6.71(m,1H),6.77(d,2H),7.00-7.03(m,1H),7.15(m,3H),7.45(d,2H).MS:461(M+1)。化合物6-3熔点:195.0-197.0℃。

[0097] 实施例9

[0098] 3,4’-甲基-5-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3,4’methyl-5-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物7-3)的制备

[0099] 关于化合物7-3的制备，请参考合成方法7。

[0100] 合成方法7

[0101]

[0102] 在室温下，缓慢地加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(212mg，1.1mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.17mL，1.2mmol)至一含有化合物7-1(256mg，1.0mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物7-2。

[0103] 在室温下，缓慢地加入2N HCl(3.0mL)至一含有化合物7-2(206mg，0.5mmol)的四氢呋喃(3.0mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物7-3(158mg，0.42mmol)，产率为84%。

[0104] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.20(s,3H),3.54(m,2H),3.68(m,2H),3.78(s,6H),4.89(s,2H),6.53(s,1H),6.87(s,1H),6.94(d,2H),7.04(t,2H),7.19(d,1H),7.54(d,2H).MS:372.9(M+1)。化合物7-3熔点:101.0-102.5℃。

[0105] 实施例10

[0106] 3-甲基-5,4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3-methyl-5,4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物8-3)的制备

[0107] 关于化合物8-3的制备，请参考合成方法8。

[0108] 合成方法8

[0109]

[0110] 在室温下，缓慢地加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(424mg，2.2mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.42mL，3.0mmol)至一含有化合物8-1(242mg，1.0mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物8-2。

[0111] 在室温下，缓慢地加入2N HCl(3.0mL)至一含有化合物8-2(277mg，0.5mmol)的四氢呋喃(3.0mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物8-3(190mg，0.4mmol)，产率为80%。

[0112] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.20(s,6H),3.53(m,4H),3.67(m,4H),3.79(s,3H),4.93(t,4H),6.57(t,1H),6.92(s,1H),7.06-7.09(m,3H),7.18-7.29(m,2H),7.63(d,2H).MS:475.4(M+1)。化合物8-3熔点:168.0-169.5℃。

[0113] 实施例11

[0114] 3,5-乙酰基-4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3,5-acetyl-4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物9-4)的制备

[0115] 关于化合物9-4的制备，请参考合成方法9。

[0116] 合成方法9

[0117]

[0118] 在室温下，缓慢地加入氯双(二甲基酰胺基)硼烷(2.0M于二氯甲烷，5.0mL，10mmol)至一含有化合物9-1(824mg，2.0mmol)的1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane)(20mL)溶液，接着加热回流16小时。将该混合溶液降温至室温，以水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物9-2。

[0119] 在室温下搅拌化合物9-2(230mg，0.67mmol)和具催化效果量的对-甲苯磺酸(PTSA)于2,2-二甲氧基丙烷(2,2-dimethoxypropane)(5.0mL)溶液中持续1.0小时。接着加入碳酸氢钠再搅拌15分钟。该混合液在减压的状态下浓缩以去除2,2-二甲氧基丙烷，接着以水抑制反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩。将萃取物溶于吡啶(pyridine)(2.0mL)，加入乙酸酐(acetic anhydride)(2.0mL)并于室温下搅拌2.0小时。将该混合溶液以水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物9-3。

[0120] 在室温下，缓慢地加入2N HCl(3.0mL)至一含有化合物9-3的四氢呋喃(3.0mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物9-4(172mg，0.4mmol)，产率为60%。

[0121] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.20(s,3H),2.29(s,3H),3.53(m,2H),3.68(m,2H),4.93(t,2H),6.90(t,1H),7.10(d,2H),7.21(d,1H),7.30(m,3H),7.63(d,2H).MS:429.1(M+
1)。化合物9-4熔点:121.0-122.5℃。

[0122] 实施例12

[0123] 3-乙酰基-5,4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3-acetyl-5,4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物10-4)到的制备

[0124] 关于化合物19的制备，请参考合成方法10。

[0125] 合成方法10

[0126]

[0127] 在室温下，缓慢地加入氯双(二甲基酰胺基)硼烷(2.0M于二氯甲烷，2.5mL，5.0mmol)至一含有化合物10-1(456mg，0.96mmol)的1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane)(10mL)溶液，接着加热回流16小时。将该混合溶液降温至室温，以水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物10-2。

[0128] 在室温下搅拌化合物10-2(230mg，0.67mmol)和具催化效果量的对-甲苯磺酸于2,2-二甲氧基丙烷(5.0mL)溶液中持续1.0小时。接着加入碳酸氢钠再搅拌15分钟。该混合液在减压的状态下浓缩以去除2,2-二甲氧基丙烷，接着以水抑制反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩。将萃取物溶于吡啶(2.0mL)，加入乙酸酐(2.0mL)并于室温下搅拌2.0小时。将该混合溶液以水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物10-3。

[0129] 在室温下，缓慢地加入2N HCl(3.0mL)至一含有化合物10-3(291mg，0.5mmol)的四氢呋喃(3.0mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物10-4(216mg，0.43mmol)，产率为85%。需要注意的是，本实施例的化合物10-1即为实施例10中的化合物8-3。

[0130] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.19(s,3H),1.21(s,6H),2.27(s,3H),3.51(m,4H),3.66(m,4H),4.93(m,4H),6.82(t,1H),7.07(d,2H),7.21-7.32(m,4H),7.63(d,2H).MS:
503.5(M+1)。化合物10-4熔点:161.0-163.0℃。

[0131] 实施例13

[0132] 3-甲基-4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(3-methyl-4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物11-3)的制备关于化合物11-3的制备，请参考合成方法11。

[0133] 合成方法11

[0134]

[0135] 在室温下，缓慢地加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(913mg，4.7mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.9mL，6.5mmol)至一含有化合物11-1(1.1g，4.3mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物11-2。

[0136] 在室温下，缓慢地加入氯双(二甲基酰胺基)硼烷(2.0M于二氯甲烷，5.0mL，10mmol)至一含有化合物9(824mg，2.0mmol)的1,2-二氯乙烷(1,2-dichloroethane)(10mL)溶液，接着加热回流5.0小时。将该混合溶液降温至室温，以水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。
将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物11-3(287mg，0.8mmol)，产率为40%。

[0137] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.20(s,6H),3.52(m,2H),3.67(m,2H),3.73(s,3H),4.92(t,2H),6.26(s,1H),6.57-6.63(d,2H),7.06-7.17(m,4H),7.61(d,2H),9.47(s,1H).MS:359.2(M+1)。化合物11-3熔点:129.0-131.0℃。

[0138] 实施例14

[0139] 5-乙酰基-3-甲基-4’-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-白藜芦醇(5-acetyl-3-methyl-4’-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-resveratrol)(化合物12-3)的制备[0140] 关于化合物12-3的制备，请参考合成方法12。

[0141] 合成方法12

[0142]

[0143] 在室温下搅拌化合物12-1(716mg，2mmol)和具催化效果量的对-甲苯磺酸于2,2-二甲氧基丙烷(10mL)溶液中持续1.0小时。接着加入碳酸氢钠再搅拌15分钟。该混合液在减压的状态下浓缩以去除2,2-二甲氧基丙烷，接着以水抑制反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩。将萃取物溶于吡啶(4.0mL)，加入乙酸酐(4.0mL)并于室温下搅拌2.0小时。将该混合溶液以水抑制反应并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物12-2。需要注意的是，本实施例的化合物12-1即为实施例11中的化合物11-3。

[0144] 在室温下，缓慢地加入2N HCl(10mL)至一含有化合物12-2的四氢呋喃(10mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物12-3(560mg，1.4mmol)，产率为70%。

[0145] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.20(s,3H),2.27(s,3H),3.53(m,2H),3.67(m,2H),3.79(s,3H),4.93(t,2H),6.64(s,1H),6.98(s,1H),7.08(t,3H),7.18(d,1H),7.30(d,1H),
7.63(d,2H).MS:401.1(M+1)。化合物12-3熔点:109.0-111.0℃。

[0146] 实施例15

[0147] 3,5-[2,2-双(羟甲基)丙烷基]-4’-甲基-白藜芦醇(3,5-[2,2-Bis(hydroxymethyl)propanoxy]-4’-methyl-resveratrol)(化合物13-3)的制备[0148] 关于化合物13-3的制备，请参考合成方法13。

[0149] 合成方法13

[0150]

[0151] 在室温下，缓慢地加入2,2,5-二甲氧基苯乙烯基-1,3-二氧六环-5-碳酰氯(424mg，2.2mmol)和三乙胺(triethylamin)(0.37mL，2.64mmol)至一含有化合物13-1(242mg，1.0mmol)的二氯甲烷(5.0mL)溶液并搅伴1.0小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物13-2。

[0152] 在室温下，缓慢的加入2N HCl(3.0mL)至一含有化合物4(277mg，0.5mmol)的四氢呋喃(3.0mL)溶液并搅伴1.0小时。将溶液以水稀释并以乙酸乙酯萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物13-3(197mg，0.42mmol)，产率为84%。

[0153] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.21(s,6H),3.53(m,4H),3.68(m,4H),3.77(m,4H),4.93(m,4H),6.73(t,1H),6.95(d,2H),7.17(m,4H),7.55(d,2H).MS:475(M+1)。化合物13-3熔点:141.0-142.5℃。

[0154] 实施例16

[0155] 紫檀芪D-核餹酸二丙酮(Pterostilbene D-ribonic acid diacetonide)(化合物14-5)到的制备

[0156] 关于化合物14-5的制备，请参考合成方法14。

[0157] 合成方法14

[0158]

[0159] 在室温下搅拌化合物14-1(1.484g，10mmol)和具催化效果量的对-甲苯磺酸(114mg，0.6mmol)于2,2-二甲氧基丙烷(20mL)溶液中持续48小时。接着加入碳酸氢钠再搅拌15分钟。该混合液在减压的状态下浓缩以去除2,2-二甲氧基丙烷，接着以水抑制反应并以二氯甲烷萃取。将萃取得到的有机层以卤水冲洗并以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，获得化合物14-2。

[0160] 将一含有化合物14-2的溶液加入水(20mL)中，降温至0℃并搅拌20分钟。接着，将该溶液加温至室温并进一步搅拌70分钟。在该溶液中加入水并以二氯甲烷萃取。萃取后水性层在0℃下以加入柠檬酸(15.42g，73.4mmol)的方式酸化，并以二氯甲烷萃取4次。接着，于该水性层再加入氯化钠(5.0g)并且以二氯甲烷进一步萃取3次。与有机层结合，以硫酸镁干燥，并在减压的状态下将其浓缩，获得化合物14-3。

[0161] 在室温下，逐步地加入化合物14-3(3.19g，13.0mmol)、二环己碳二亚胺(dicyclohexylcarbodiimide)(2.96g，14.3mmol)、及4-二甲基氨基吡啶(4-dimethylaminopyridine)(71.4mg，0.6mmol)至一含有化合物14-4的DMF溶液中并搅拌18小时。以水抑制该混合溶液反应并以二氯甲烷萃取。萃取的有机层以硫酸镁干燥，在减压的状态下将其浓缩，并以硅胶快速色层分析纯化，获得化合物14-5(3.0g，6.2mmol)，产率为72%。

[0162] 1H NMR(500MHz,DMSO-d6):δ:1.29(s,3H),1.35(s,3H),1.36(s,3H),1.47(s,3H),3.78(s,6H),3.86(m,1H),4.12(m,2H),4.39(m,1H),5.04(d,1H),6.42(t,1H),6.78(d,2H),
7.19(m,3H),7.27(d,1H),7.66(d,2H).MS:485.0(M+1)。化合物14-5熔点:107.0-109.0℃。

[0163] 化合物14-5中的丙酮保护基(acitonide protection group)可以使用本领域中已知的去丙酮保护基的方法将其去除，以获得紫檀芪D-核餹酸(Pterostilbene D-ribonic acid)(化合物14-6)。

[0164]

[0165] 细胞株及细胞培养

[0166] 人类头颈部癌细胞株CAL27是从美国组织培养保存中心(American Tissue Culture Collection，ATCC)取得。具顺铂抗性的CAL27细胞株–CAR细胞株，是以10-80μM顺铂(购自Sigma-Aldrich Corp.，St.Louis，MO，USA)处理CAL27细胞株并接续一回复时间，共进行10次循环作为品系选择(clonal selection)。CAR细胞株培育在含有10%胎牛血清(FBS)、100μg/mL链霉素(streptomycin)、100U/mL青霉素G(penicillin G)、2mM L-麸酰氨酸(L-glutamine，购自Gibco by Life technologies，Carlsbad，CA，USA)、及80μM顺铂的DMEM培养基(Dulbecco's modified Eagle's medium)。

[0167] 细胞存活率分析(MTT assay)

[0168] 化合物2-4的抗细胞增生效果是由一改良过的细胞存活率分析得知。CAR细胞逐个的以细胞密度为2×104细胞/孔接种于96-孔盘中，并单独的以二甲基亚砜(DMSO)处理(0.5%(v/v)于培养液中作为空白控制组(vehicle control))，或以不同浓度(0、25、50、75、及100μM)的化合物2-4处理24小时及48小时。细胞经上述方式处理后，先将上清液去除，再于各孔中加入100μL MTT(500μg/mL)，在37℃下培养4小时。培养后，加入200μL二甲基亚砜以溶化(solubilize)该MTT所产生之紫色福吗简(formazan)结晶。细胞的存活率(%控制组)系由微量培养盘读取仪(microplate reader)侦测细胞内溶解之福吗简在570nm的吸光值后计算而得。

[0169] 动物给药

[0170] 所有的动物实验皆依照国际规范(Affidavit of Approval of Animal Use Protocol)进行，并经由中国医药大学(台湾，台中)的动物饲养管理及使用委员会(Institutional Animal Care and Use Committee，IACUC)检验合格。所有不含病原体的四周大雄性BALB/c裸鼠皆购自国家实验动物中心(National Laboratory Animal Center)(台湾，台北)。这些动物饲养在一恒温(室温)、光照与黑暗各为12小时的动物房内，并且水分与标准啮齿目动物的饲料被充分的供给。

[0171] 异体移植抗肿瘤研究

[0172] 将CAR细胞株(1×107细胞/鼠)于0.2mL培养液(比例为1:1)及基胶质(Matrigel)(购自BD Bioscience)以皮下注射的方式注入裸鼠的侧面。当异体移植的肿瘤生长至约3
50mm (接种后22天)，将32只实验鼠随机地分成四组，每组八只。以口服的方式给予化合物
2-4，剂量分别为25、50、及100mg/kg体重，每天30次(给药方案：QD×30，p.o.)；控制组小鼠则为以口服的方式给予30μL二甲基亚砜。各小鼠肿瘤的大小(mm3)由卡尺测量并以0.5×长度×(宽度)2计算。所有实验的动物在处理后皆以二氧化碳麻醉并在第31天安乐死。取出各小鼠的肿瘤组织后各别地以前述的方式测量及秤重。

[0173] 生化分析–酵素分布及血液计数

[0174] 各组的小鼠安乐死后观察其相关的毒性，取自心脏的全血液样本进行生化分析以评估化合物2-4的安全性。简单来说，从各小鼠收集血液并让其凝固，之后在室温下以1000×g离心10分钟，接着进行进一步的生化测试包括：总蛋白质、白蛋白(albumin)、肌酸肝(creatinine)、血液尿素氮(blood urea nitrogen，BUN)、尿酸(uric acid)、及葡萄糖。

[0175] 实施例17

[0176] 本发明各化合物对Hep3B及CAR细胞的抗增生效果

[0177] 关于本发明各化合物对Hep3B细胞及CAR细胞的抗增生效果请参考表1。以不同浓度的本发明的化合物处理Hep3B及CAR细胞48及72小时，并以细胞存活率分析(MTT assay)评估其抗增生效果。结果以IC50(μM)表示，即达到50%抗增生效果所需的浓度。

[0178] 表1

[0179]

[0180]

[0181]

[0182]

[0183] 如表1所示，所有测试的化合物皆表现显著的抗Hep3B及CAR细胞的效果。其中，化合物2-4、3-6、7-3、11-3、12-3、及13-3较白藜芦醇及紫檀芪具有更佳的抗癌活性。

[0184] 实施例18

[0185] 化合物2-4对具顺铂抗性的头颈部鳞状癌细胞(CAR)的抗增生效果

[0186] 利用细胞存活率分析，CAR细胞以不同浓度的化合物2-4处理24、48、及72小时。其结果如图1所示，化合物2-4的于CAR细胞有抗增生的效果，且该效果为浓度-时间依赖性。经72小时处理后的IC50为50μM。

[0187] 实施例19

[0188] 化合物2-4对Hep3B细胞的抗增生效果

[0189] 以细胞存活率分析评估化合物2-4对肝癌细胞的抗增生能力。Hep3B细胞用不同浓度的化合物2-4处理48及72小时。化合物2-4显示对于Hep3B的存活率具有抑制的效果且为浓度依赖性(如图2所示)。

[0190] 实施例20

[0191] 化合物2-4的细胞内抗肿瘤效果

[0192] 评估化合物2-4在裸鼠异体移植CAR细胞，并经由口服途径(p.o.)投予剂量为25、50及100mg/kg/天(时程为QD×30)。其结果如图3、图4、及图5所示，化合物2-4对CAR的肿瘤大小(图3、图4)及肿瘤重量(图5)具有剂量依赖性的抑制效果。另，在剂量为25mg/kg/天的情况下，观察到显著的肿瘤生长抑制效果。在100mg/kg/天的情况下，CAR肿瘤的重量相较于空白控制组下降至22%(如图5所示)。

[0193] 在评估化合物2-4的抗肿瘤效果时，无论在以化合物2-4处理的小鼠或在控制组小鼠，皆未侦测到显著的体重变化(如图6所示)。此外，经过30天的处理后，将小鼠安乐死并收集其血液样本进行总蛋白质、白蛋白、肌酸肝、血液尿素氮、尿酸、及葡萄糖的生化定量。血液的分析结果如表2所示，在以化合物2-4处理的小鼠及控制组小鼠中，并没有观察到显著的不同。化合物2-4显示显著的抗肿瘤作用同时在动物模型中口服毒性非常低。

[0194] 表2

[0195]

[0196] 实施例21

[0197] 化合物2-4对正常口腔细胞的影响

[0198] 人类正常牙龈纤维母细胞(Human normal gingival fibroblasts cells，HGF)及人类正常口腔角质细胞(human normal oral keratinocyte cells，OK)是由中国医药大学口腔卫生学系(台湾)取得，并于DMEM中培养。

[0199] HGF及OK细胞均以1×104细胞置入96-孔盘中并以浓度为0、25、50及100μM的化合物2-4培养24、48及72小时。为了与自体吞噬抑制剂(autophagy inhibitor)共同培养，细胞先以3-甲基苯丙胺(3-methylamphetamine，3-MA，10mM)处理1小时，接着以化合物2-4(50and75μM)处理48小时，或不以化合物2-4处理。细胞经过冲洗后，加入含MTT(0.5mg/mL)的DMEM来测量细胞存活率。细胞存活率以控制组的百分比表示。

[0200] 关于化合物2-4对正常口腔细胞(HGF及OK)的影响，请参考图7。图7中(A)代表HGF细胞(B)代表OK细胞以不同浓度的化合物2-4处理72小时。细胞存活率是用MTT分析，结果以至少3个样本选自各组的平均±S.E.M.表示之。如图7所示，当以化合物2-4处理时，HGF细胞及OK细胞均未表现存活率的影响，说明化合物2-4在正常口腔细胞中的毒性极低，故，化合物2-4使用于正常细胞是完全安全的。

[0201] 实施例22

[0202] 化合物于水中的溶解度测定

[0203] 以本领域中公知的方法测定本发明各化合物在水中的溶解度，其结果如表3所示。

[0204] 表3

[0205]

[0206]

[0207] 由表2可知化合物3-6、4-3、5-3、6-3、8-3、9-4、及10-4在水中的溶解度较白藜芦醇增加1至12倍。此结果亦表示，当加入3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸至紫檀芪可提升在水中的溶解度1至28倍。

[0208] 本发明所提供的化合物、医药组成物及其用途确实具有产业上之利用价值，惟以上叙述仅为本发明中较佳实施例的说明，本领域技术人员当可依据上述的说明而作其它种种改良，这些改变仍属于本发明之精神及本发明要保护的范围中。