一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物及其用途

摘要

本发明公开了一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物及其用途，所述中药组合物按质量百分数计，落地生根提取物含量为50～80%，冰片含量为1～10%，丹参总酚酸含量为5～20%，赤芍总苷含量为5～20%，余量为药学上可接受的载体和/或赋形剂，以上四种成分总含量为60～99%。本发明中药组合物作为抗皮肤癌药物有显著的治疗效果，且适用于各种类型的皮肤癌，质量可控度高，药效良好。

权利要求

1.一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物按质量百分数计，落地生根提取物含量为50～80%，冰片含量为1～10%，丹参总酚酸含量为5～20%，赤芍总苷含量为5～20%，以上四种成分总含量为60～99%，余量为药学上可接受的载体和/或赋形剂；其中，所述落地生根提取物的具体提取方法为，取落地生根植物全株或根、茎、叶任一部位的鲜品或冷冻干燥品，加入有机溶媒进行萃取或回流提取，收集提取液，干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括落地生根提取物70%，冰片4%，丹参总酚酸20%、赤芍总苷5%。

3.根据权利要求1所述的一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物包括落地生根提取物50%，冰片9%，丹参总酚酸20%，赤芍总苷20%。

4.根据权利要求1所述的一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，其特征在于，所述丹参总酚酸制备方法：取丹参药材，粉碎，加入0.1mol/l盐酸溶液，浸泡，将丹参药材浸泡液装柱，以14倍柱体积pH=2的盐酸溶液渗漉，合并渗漉液，按25mg丹参总酚酸/1ml树脂上样量，上AB-8型大孔树脂柱，以3ml/min洗脱，至吸附平衡，依次用水以5倍柱体积，20%乙醇6倍柱体积淋洗，最后用40%乙醇以4倍柱体积洗脱，合并洗脱液，70℃，减压脱醇浓缩，冻干，即得。

5.根据权利要求1所述的一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，其特征在于，所述赤芍总苷制备方法：取赤芍药材，以赤芍药材重量8倍量70%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并提取液，浓缩至无醇味，溶解，离心，取上清液，调节其浓度为 0.1g赤芍总苷/1ml，对D101型大孔吸附树脂柱装柱，上样量为48.67mg芍药苷/g树脂，以3ml/min洗脱，回收乙醇，浓缩，干燥，即得。

6.根据权利要求1所述的一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，其特征在于，所述中药组合物为搽剂、膏剂、凝胶剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸、微球、滴丸、控释制剂、缓释制剂、注射剂。

7.一种根据权利要求1所述的中药组合物在制备治疗皮肤癌药物的用途。

说明书

一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物及其用途

技术领域

[0001] 本发明涉及药物领域，具体是指一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物及其用途。

背景技术

[0002] 目前我国肿瘤引起的死亡约为所有病因引起死亡总数的17.9%，每年癌症的发病人数约为200万，死于癌症的人数超过140万，发病率逐年呈上升趋势。目前在我国皮肤癌的发病率不高，其中在白种人群中最为常见的，发病率至少达0.65%。

[0003] 目前对皮肤癌治疗主要采用手术治疗、放射治疗及化学治疗等方法，其中，临床治疗方案中，手术治疗为首选方式，治愈率较高，但为防止转移，需进行深度切除，进而影响美观；采用放射治疗及化学治疗的毒副作用较大。因此，寻求一种非手术方式且毒副作用小、确有疗效的治疗皮肤癌药物成为药物研究开发的必然发展趋势。

发明内容

[0004] 本发明的目的在于：提供一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物；另一目的在于：提供一种本发明中药组合物作为抗皮肤癌药物的用途。

[0005] 本发明通过下述技术方案实现：所述中药组合物按质量百分数计，落地生根提取物含量为50～80%，冰片含量为1～10%，丹参总酚酸含量为5～20%，赤芍总苷含量为5～20%，余量为药学上可接受的载体和/或赋形剂，以上四种成分总含量为60～99%。

[0006] 进一步地，优选所述中药组合物包括落地生根提取物70%，冰片4%，丹参总酚酸20%、赤芍总苷5%。

[0007] 进一步地，优选所述中药组合物包括落地生根提取物50%，冰片9%，丹参总酚酸20%，赤芍总苷20%。

[0008] 进一步地，所述落地生根提取物制备方法：取落地生根植物全株或根、茎、叶任一部位的鲜品、冷冻干燥品，加入有机溶媒进行萃取或回流提取，收集提取液，干燥，即得。通过有机溶媒预处理样品，确保有效成分在提取前的稳定性，提取溶媒包括但不限于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚或类似溶媒，提取方法包括但不限于浸渍法、回流法、渗漉法，干燥包括但不限于减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥。

[0009] 中药组合物中落地生根提取物为通过乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚等任意一种有机溶媒提取制备。

[0010] 1、落地生根乙醇提取物制备方法如下：

[0011] 1）取落地生根植物根、茎、叶任一部位鲜品1 kg，加入95%乙醇浸泡1～2天，粉碎，然后用95%乙醇提取浸渍3天，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根乙醇提取物。

[0012] 2）取落地生根全株植物鲜品1 kg，粉碎，加入95%乙醇回流提取3次，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根乙醇提取物。

[0013] 3）取落地生根全株植物鲜品1 kg，冷冻干燥后粉碎，加入95%乙醇回流提取3次，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根乙醇提取物。

[0014] 2、落地生根甲醇提取物制备方法：取落地生根植物根、茎、叶任一部位鲜品1 kg，粉碎，加入甲醇回流提取3次，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根甲醇提取物。

[0015] 3、落地生根石油醚提取物制备方法如下：

[0016] 1）取上述落地生根乙醇提取物制备方法获得的落地生根乙醇提取物浓缩溶液，用石油醚萃取，回收石油醚，干燥即得。

[0017] 2）取上述落地生根甲醇提取物制备方法获得的落地生根甲醇提取物干燥样品，加4~20倍水混悬，用石油醚萃取，回收石油醚，干燥即得。

[0018] 3）取上述落地生根乙醇提取物制备方法获得的落地生根乙醇提取物干燥样品，用石油醚回流提取，回收石油醚，干燥即得。

[0019] 4、落地生根乙酸乙酯提取物的制备方法如下：

[0020] 1）取上述落地生根乙醇提取物制备方法获得的落地生根乙醇提取物浓缩溶液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，干燥即得。

[0021] 2）取上述落地生根甲醇提取物制备方法获得的落地生根甲醇提物干燥样品，加4~20倍水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，干燥即得。

[0022] 3）取上述落地生根乙醇提取物制备方法获得的落地生根乙醇提取物干燥样品，用乙酸乙酯回流提取，回收乙酸乙酯，干燥即得。

[0023] 中药组合物中冰片通过粉碎至预定的颗粒细度得冰片极细粉。

[0024] 进一步地，所述丹参总酚酸的制备方法：取丹参药材，粉碎，加入0.1mol/l盐酸溶液，浸泡，将丹参药材浸泡液装柱，以14倍柱体积PH=2的盐酸溶液渗漉，合并渗漉液，上样量按25mg丹参总酚酸/1ml树脂的上AB-8型大孔树脂柱，以3ml/min洗脱，至吸附平衡，依次用水以5倍柱体积，20%乙醇6倍柱体积淋洗，最后用40%乙醇以4倍柱体积洗脱，合并洗脱液，70℃，减压脱醇浓缩，冻干，即得。

[0025] 其中，丹参总酚酸制备方法中，丹参药材可为丹参生药、丹参饮片或丹参炮制品中任意一种。

[0026] 进一步地，所述赤芍总苷制备方法：取赤芍药材，以药材重量8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并提取液，浓缩至无醇味，溶解，离心，取上清液，调节其浓度为 0.1g赤芍总苷/1ml，对D101型大孔吸附树脂柱装柱，上样量为48.67mg芍药苷/g树脂，以3ml/min洗脱，回收乙醇，浓缩，干燥，即得。

[0027] 进一步地，所述中药组合物，可通过药剂学已知方法，与载体或赋形剂结合制备药物制剂，如外用制剂搽剂、膏剂、凝胶剂等，如体内给药制剂片剂、胶囊剂、颗粒剂、微丸、微球、滴丸、控释制剂、缓释制剂、注射剂等。

[0028] 中药组合物药物制剂的制备方法如下：

[0029] 片剂的制备：取落地生根乙醇提取物300 g，加入200目的冰片极细粉6g，丹参总酚酸90g，赤芍总苷30g，加入辅料，微晶纤维素20g，乳糖17.5g，交联羧甲基纤维素钠5 g，压片制成片剂；

[0030] 胶囊剂的制备：取落地生根乙酸乙酯提取物300g，加入200目的冰片极细粉6g，丹参总酚酸90g，赤芍总苷25g，加入辅料，乳糖10g、可压性淀粉5g、羧甲基淀粉5g、微晶纤维素10g制成胶囊剂；

[0031] 颗粒剂的制备：取落地生根甲醇提取物300g，加入200目的冰片极细粉6g，丹参总酚酸90g，赤芍总苷25g，加入辅料，乳糖10g、淀粉5g、甲基纤维素5g、羟甲基纤维素10g、羟丙基甲基纤维素12g、聚乙烯吡咯烷酮4g、微粉硅胶3g制成颗粒剂。

[0032] 软膏剂的制备：取落地生根乙醇提取物或乙酸乙酯提取物300g，加入200目的冰片极细粉6g，丹参总酚酸 30g，赤芍总苷30g，加入辅料，十八醇25g、单硬脂酸甘油脂10g、甘油15g、硬脂酸15g制成软膏剂。

[0033] 栓剂的制备：取落地生根乙醇提取物300g，加入200目的冰片极细粉10g，丹参总酚酸40g，赤芍总苷40g，加入辅料，混合脂肪酸甘油酯10g、聚乙二醇PEG4g、蜂蜡5g制成栓剂。

[0034] 进一步地，所述中药组合物作为制备治疗皮肤癌药物的用途。

[0035] 中药组合物中落地生根提取物为对落地生根植物处理所得，落地生根（Bryophyllum pinnatum (L.f.) Oken）为景天科落地生根属植物，具有清热解毒、凉血止血的功效，也可用于治疗皮肤创伤、蚊虫叮咬及疮疡等，其毒性甚微，安全性高，具有抗炎、免疫抑制、抗菌等药效。

[0036] 中药组合物中丹参总酚酸为对丹参药材处理所得，丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge）又名赤参，为双子叶植物唇形科鼠尾草属植物，性味苦，微寒。归心、肝经。有祛瘀止痛，活血通经，清心除烦的功效， 用于月经不调，经闭痛经，症瘕积聚，胸腹刺痛，热痹疼痛，疮疡肿痛，心烦不眠；肝脾肿大，心绞痛。

[0037] 中药组合物中赤芍总苷为对赤芍药材处理所得，赤芍（Paeonia veitchii）为毛茛科芍药属植物，味苦，性微寒，归肝经，主治清热止血、活血祛瘀。

[0038] 本发明与现有技术相比，具有以下优点及有益效果：

[0039] 本发明提供一种新的中药组合物及中药组合物在制备抗皮肤癌药物的医药用途，经药效学实验证明，该中药组合物表现出了优异的抗皮肤癌活性，适用于各种类型的皮肤癌，且具有安全性高，药效明确的特点。

[0040] 以下通过实验说明本发明中的中药组合物在制备抗皮肤癌药物的医药用途。

[0041] 1、中药组合物体外抗肿瘤活性

[0042] 实验对象：处于对数生长期的四种肿瘤细胞：人黑素癌细胞株A375；人黑素癌细胞株A875；人基底细胞癌细胞株A431；人皮肤鳞状细胞癌SCL-1。

[0043] 中药组合物：包括70%落地生根提取物、4%冰片、20%丹参总酚酸和5%赤芍总苷。

[0044] 实验条件：分别取处于对数期的细胞，2000 rpm 离心5 min，取含有10%牛胎血清的培养液将沉淀细胞浓度调为1×105个/ml，将细胞悬液按200μl/孔接种于96孔培养板中，然后分别加入一定浓度无菌的中药组合物溶液，使每孔内的提取物浓度为0.02、0.1、0.2、0.4、0.5、0.8、1.0、2.0mg/ml，混匀，置37 ℃、5 % CO2孵箱，培养24 h，析出培养液，用PBS溶液洗涤两次，再向每孔加入5 mg/ml的MTT 磷酸缓冲液20μl以及150μlRPMI1640培养基，继续培养4h后停止培养，以2000rpm离心5min，然后弃去培养板孔内的培养液，每孔加入150μl DMSO，震动10 min，使形成的甲臜颗粒充分溶解，采用酶标仪检测吸光值。选择测定波长为570 nm。计算中药组合物对肿瘤细胞的IC50，详见表1。

[0045] 表1 组合物对不同肿瘤细胞的抑制作用

[0046]

[0047] 由结果可知，中药组合物具有良好的肿瘤抑制效果。

[0048] 2、中药组合物对荷S180小鼠的影响

[0049] 中药组合物：包括70%落地生根提取物、4%冰片、20%丹参总酚酸和5%赤芍总苷。

[0050] 实验对象：接种8d健康状况良好的S180瘤源小鼠，雄性昆明种小鼠96只（18~20g）。

[0051] 实验准备：选取接种8d健康状况良好的S180瘤源小鼠，腹部皮肤消毒后抽取腹水，腹水体积：无菌生理盐水体积=1:4混悬备用。

[0052] 将雄性昆明种小鼠96只，按体重随机分为8组，并采用相应溶液处理，分别为：模型对照组（采用0.5%西黄芪胶溶液）、阳性对照组（采用环磷酰胺溶液）、含落地生根乙醇提取物的中药组合物大剂量组、含落地生根甲醇提取物的中药组合物大剂量组、含落地生根乙醇提取物的中药组合物小剂量组、含落地生根甲醇提取物的中药组合物小剂量组、落地生根乙醇提取物大剂量组、落地生根甲醇提取物大剂量组。

[0053] 每组动物均在其右侧腋部皮下接种0.2ml按腹水体积：无菌生理盐水体积=1:4混悬制备的混悬液，2h后，模型对照组和药物组分别灌胃给予如表2所示受试物或混悬剂，每日一次，连续14日；阳性对照组腹腔注射环磷酰胺溶液，给药量按照每kg小鼠体重给与环磷酰胺溶液40mg，隔日一次，共7次。末次给药后24h颈椎脱臼处死小鼠，剥离瘤块称重，并计算抑瘤率：（（1—实验组平均瘤重/模型对照组平均瘤重）*100%）。

[0054] 表2 中药组合物对荷S180小鼠的影响（ ）

[0055]

[0056] 本实验剂量为单位重量受试物中所含落地生根生药量，与模型对照组比较， **P＜0.01；与单独使用等剂量落地生根提取物组比较，▲P＜0.05

[0057] 实验结果表明，含落地生根甲醇及乙醇提取物的中药组合物2g/kg灌胃给予，均可显著抑制S180在小鼠体内的生长，抑瘤率均接近或超过50%，因此含落地生根甲醇提取物的中药组合物大剂量组、含落地生根乙醇提取物的中药组合物大剂量组均具有较好的抗肿瘤活性。

[0058] 3、中药组合物对小鼠实验性皮肤癌的影响

[0059] 中药组合物：包括70%落地生根提取物、4%冰片、20%丹参总酚酸和5%赤芍总苷。

[0060] 雄性昆明种小鼠108只，18~20g，按体重随机分为9组，分别为正常对照组、模型对照组、阳性对照组（5氟尿嘧啶，5-Fu）、含落地生根乙醇提取物的中药组合物大剂量组、含落地生根乙醇提取物的中药组合物小剂量组、含落地生根甲醇提取物的中药组合物大剂量组、含落地生根甲醇提取物的中药组合物小剂量组、落地生根乙醇提取物大剂量组、落地生根甲醇提取物大剂量组。除正常对照组外，各组动物均在其皮肤固定位置涂抹60%二甲基苯蒽（DMBA），每日1次，连续15日。第16日开始在同位置皮肤涂抹相应中药组合物，给药剂量按照单位小鼠体重给予中药组合物量，大剂量组为每g小鼠体重给予相当于含落地生根生药量6g的中药组合物量，小剂量组为每g小鼠体重给予相当于含落地生根生药量2g的中药组合物量，正常对照组及模型对照组给予赋型剂，连续15日。第31日处死动物，取相应位置皮肤，称重，并计算抑瘤率（（1—实验组平均瘤重/模型对照组平均瘤重）*100%），其中瘤重为（平均皮肤重-空白对照组平均皮肤重）。

[0061] 表3 组合物对小鼠实验性皮肤癌的影响（ ）

[0062]

[0063] 本实验剂量为单位重量小鼠体重中所含生药量；与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与单独使用等剂量落地生根提取物组比较，▲▲P＜0.01。

[0064] 实验结果表明，含落地生根甲醇和乙醇提取物的中药组合物在实验剂量下外涂，可有效抑制DMBA所致小鼠皮肤癌的生长，且对动物外观及行为无明显影响，因而，含落地生根提取物（包括含落地生根甲醇提取物、落地生根乙醇提取物）的中药组合物大剂量组、中药组合物小剂量组具有良好的抗皮肤癌活性，且安全性高。

[0065] 4、中药组合物对小鼠的急性毒性实验

[0066] 中药组合物：包括70%落地生根提取物、4%冰片、20%丹参总酚酸和5%赤芍总苷。

[0067] 昆明种小鼠60只，18~20g，雌雄各半，按体重随机分成3组，分别为正常对照组、含落地生根乙醇提取物的中药组合物组、含落地生根甲醇提取物的中药组合物组。除正常对照组外，各组动物均灌胃给予最大给药量受试物，同一天每间隔4小时给予1次，每次60g/kg（按每kg小鼠体重给予相当于含60g落地生根生药量的中药组合物剂量）给予，共两次，连续观察14日，第15日处死动物，进行大体解剖，观察脏器有无明显异常，如表4：

[0068] 表4 含落地生根乙醇、甲醇提取物的中药组合物对小鼠的急性毒性研究[0069]

[0070] 实验结果表明，中药组合物按120g/kg最大给药量给予均无明显毒性。

具体实施方式

[0071] 下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但本发明的实施方式不限于此。

[0072] 实施例1：

[0073] 一种具有抗皮肤癌活性的中药组合物，所述中药组合物按质量百分数计，落地生根提取物含量为50～80%，冰片含量为1～10%，丹参总酚酸含量为5～20%，赤芍总苷含量为5～20%，余量为药学上可接受的载体和/或赋形剂，以上四种成分总含量为60～99%。

[0074] 优选地，所述中药组合物包括落地生根提取物70%，冰片4%，丹参总酚酸20%、赤芍总苷5%。

[0075] 所述落地生根提取物制备方法：取落地生根植物全株或根、茎、叶任一部位的鲜品、冷冻干燥品，加入有机溶媒进行萃取或回流提取，收集提取液，干燥，即得。通过有机溶媒预处理样品，确保有效成分在提取前的稳定，提取溶媒包括但不限于甲醇、乙醇、乙酸乙酯、石油醚或类似溶媒，提取方法包括但不限于浸渍法、回流法、渗漉法，干燥包括但不限于减压干燥、冷冻干燥、喷雾干燥、微波干燥。

[0076] 中药组合物中落地生根药材通过乙醇、甲醇、乙酸乙酯、石油醚等有机溶媒提取制备落地生根提取物方法如下：

[0077] 1、落地生根乙醇提取物制备方法。

[0078] 1）取落地生根植物根、茎、叶任一部位鲜品1 kg，加入95%乙醇浸泡1～2天后，粉碎，再用95%乙醇提取浸渍3天，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根乙醇提取物。

[0079] 2）取落地生根全株植物鲜品1 kg，粉碎，加入95%乙醇回流提取3次，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根乙醇提取物。

[0080] 3）取落地生根全株植物鲜品1 kg，冷冻干燥后粉碎，加入95%乙醇回流提取3次，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根乙醇提取物。

[0081] 2、落地生根甲醇提取物制备方法：取落地生根植物根、茎、叶任一部位鲜品1 kg，粉碎，加入甲醇回流提取3次，收集提取液，减压回收乙醇，浓缩液冷冻干燥即得落地生根甲醇提取物。

[0082] 3、落地生根石油醚提取物制备方法。

[0083] 1）取落地生根乙醇提取物制备方法中获得的落地生根乙醇提取物浓缩溶液，用石油醚萃取，回收石油醚，干燥即得。

[0084] 2）取落地生根甲醇提取物制备方法中获得的落地生根甲醇提取物干燥样品，加4~20倍水混悬，用石油醚萃取，回收石油醚后，干燥即得。

[0085] 3）取落地生根乙醇提取物制备方法中落地生根乙醇提取物干燥样品，用石油醚回流提取，回收石油醚，干燥即得。

[0086] 4、落地生根乙酸乙酯提取物的制备方法。

[0087] 1）取落地生根乙醇提取物制备方法中获得的落地生根乙醇提取物的浓缩溶液，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，干燥即得。

[0088] 2）取落地生根甲醇提取物制备方法获得的落地生根甲醇提取物干燥样品，加4~20倍水混悬，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯，干燥即得。

[0089] 3）取落地生根乙醇提取物制备方法中获得的落地生根乙醇提取物干燥样品，用乙酸乙酯回流提取，回收乙酸乙酯，干燥即得。

[0090] 中药组合物中冰片通过粉碎至预定的颗粒细度，获得冰片极细粉。

[0091] 所述丹参总酚酸的制备方法：取丹参药材，粉碎，加入0.1mol/l盐酸溶液，浸泡，将丹参药材与浸泡液装柱，以14倍柱体积PH=2的盐酸溶液渗漉，合并渗漉液，上样量按25mg丹参酚酸B/1ml树脂的上AB-8型大孔树脂柱，以3ml/min洗脱，至吸附平衡，依次用水以5倍柱体积，20%乙醇6倍柱体积淋洗，最后用40%乙醇以4倍柱体积洗脱，合并洗脱液，
70℃，减压脱醇浓缩，冻干，即得。

[0092] 其中，丹参总酚酸制备方法中，丹参药材可为丹参生药、丹参饮片或丹参炮制品中任意一种。

[0093] 所述赤芍总苷制备方法：取赤芍药材，以药材重量8倍量的70%乙醇回流提取3次，每次1.5小时，滤过，合并提取液，浓缩至无醇味，溶解，离心，取上清液，调节其浓度为0.1g赤芍总苷/1ml，对D101型大孔吸附树脂柱装柱，上样量为48.67mg芍药苷/g树脂，以
3ml/min洗脱，回收乙醇，浓缩，干燥，即得。

[0094] 其中，赤芍总苷的制备方法中，赤芍药材可为赤芍总苷生药、赤芍总苷饮片、赤芍