视网膜疾病的预防、改善或治疗剂

摘要

包含下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮的视网膜疾病的预防、改善或治疗剂可以通过直接抑制视网膜细胞的细胞死亡而从根本上预防、改善或治疗视网膜疾病。所述香叶基香叶基丙酮，(a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；(b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；(c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

权利要求

1.一种应用，其为香叶基香叶基丙酮在制造视网膜疾病的炎症的预防、改善或治疗剂中的应用，该香叶基香叶基丙酮，

(a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

(b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；或者(c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

2.如权利要求1所述的应用，其为眼科用制剂。

3.如权利要求2所述的应用，其中，含有相对于制剂的总量为0.00001～10重量％的香叶基香叶基丙酮。

4.如权利要求1所述的应用，其为口服剂。

5.如权利要求4所述的应用，其中，含有相对于制剂的总量为0.001～80重量％的香叶基香叶基丙酮。

6.如权利要求1所述的应用，其中，视网膜疾病为选自由青光眼、视网膜色素变性、老年黄斑变性及糖尿病性视网膜病组成的组中的疾病。

7.如权利要求1所述的应用，其中，pH为6～8。

8.如权利要求1所述的应用，其中，还含有磷酸缓冲剂。

9.一种应用，其为香叶基香叶基丙酮在制造保护视网膜细胞免受炎症损伤的制剂中的应用，该香叶基香叶基丙酮，

(a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

(b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；或者(c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

10.如权利要求9所述的应用，其为眼科用制剂。

11.如权利要求10所述的应用，其中，含有相对于制剂的总量为0.00001～10重量％的香叶基香叶基丙酮。

12.如权利要求9所述的应用，其为口服剂。

13.如权利要求12所述的应用，其中，含有相对于制剂的总量为0.001～80重量％的香叶基香叶基丙酮。

14.如权利要求9所述的应用，其中，视网膜细胞为视网膜神经节细胞或视网膜色素上皮细胞。

15.如权利要求9所述的应用，其中，pH为6～8。

16.如权利要求9所述的应用，其中，还含有磷酸缓冲剂。

17.一种应用，其为香叶基香叶基丙酮在制造视网膜细胞的炎症所引起的变性、损伤或死亡的抑制剂中的应用，该香叶基香叶基丙酮，

(a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

(b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；或者(c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

18.如权利要求17所述的应用，其为眼科用制剂。

19.如权利要求18所述的应用，其中，含有相对于制剂的总量为0.00001～10重量％的香叶基香叶基丙酮。

20.如权利要求17所述的应用，其为口服剂。

21.如权利要求20所述的应用，其中，含有相对于制剂的总量为0.001～80重量％的香叶基香叶基丙酮。

22.如权利要求17所述的应用，其中，视网膜细胞为视网膜神经节细胞或视网膜色素上皮细胞。

23.如权利要求17所述的应用，其中，pH为6～8。

24.如权利要求17所述的应用，其中，还含有磷酸缓冲剂。

说明书

视网膜疾病的预防、改善或治疗剂

技术领域

[0001] 本发明涉及视网膜疾病的预防、改善或治疗剂。

背景技术

[0002] 替普瑞酮(卫材公司)是以3:2的重量比含有5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮和5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物。替普瑞酮作为经口给药用的消化性溃疡治疗剂被广泛使用。

[0003] 此外，还提出了将替普瑞酮在眼科领域使用的方案。例如专利文献1教导了使用替普瑞酮作为干眼症、眼疲劳或眼干涩的预防或治疗剂的有效成分。此外，专利文献2公开了包含替普瑞酮、磷脂质、合成表面活性剂及水的澄清滴眼剂。

[0004] 此外，还已知将未限定顺反异构体比的香叶基香叶基丙酮(卫材公司)作为视网膜疾病的治疗剂的有效成分是有用的。

[0005] 例如，专利文献3教导了如下方法：通过对糖尿病性视网膜病或青光眼等眼疾病患者给用香叶基香叶基丙酮而使眼组织中热休克蛋白的表达或活性提高，通过对该眼组织补充干细胞来改善眼疾病。

[0006] 此外，非专利文献1教导了：在对引入有视网膜脱离的动物腹腔内给用香叶基香叶基丙酮时，会诱导热休克蛋白70的表达，使视细胞的细胞凋亡显著减少。

[0007] 此外，非专利文献2教导了：在对青光眼模型大鼠腹腔内给用香叶基香叶基丙酮时，会诱导热休克蛋白72的表达，视网膜神经节细胞死亡减少，改善视神经损伤。

[0008] 此外，非专利文献3教导了：在对因光照射造成视细胞损伤的小鼠经口给用香叶基香叶基丙酮时，会诱导视网膜色素上皮中的硫氧还蛋白及热休克蛋白72。此外，还教导了从视网膜色素上皮释放硫氧还蛋白对于维持视细胞发挥重要作用，并公开了香叶基香叶基丙酮发挥保护视细胞免受光损伤的作用。

[0009] 此外，非专利文献4教导了：在对因缺血造成视网膜损伤的小鼠经口给用香叶基香叶基丙酮时，视网膜神经的存活数显著增加，并且香叶基香叶基丙酮对于治疗伴随缺血的视网膜损伤疾病是有用的。

[0010] 此外，非专利文献5教导了：在对多发性硬化症模型小鼠经口给用香叶基香叶基丙酮时，可改善视觉功能，使视神经的损伤神经轴突数减少，抑制神经节的细胞数的减少。

[0011] 由卫材公司出售的替普瑞酮以3:2的重量比含有5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮和5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮(WO2004/047822、日本特开平9-169639、日本专利第4621326、日本特开2006-89393、日本药典第16次修订版、施维舒添附文件)。因此，专利文献3及非专利文献1～5中记载的香叶基香叶基丙酮以3:2的重量比含有5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮和5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮。另外，由卫材公司以外的公司出售的替普瑞酮也以3:2的重量比含有5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮和5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮(例如，试剂MSDS(202-15733)；和光纯药)。

[0012] 但是，由以3:2的重量比含有5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮和5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的替普瑞酮产生的视网膜疾病的改善效果在实用上并不充分。

[0013] 现有技术文献

[0014] 专利文献

[0015] 专利文献1：日本特开平8-133967

[0016] 专利文献2：日本特开2000-319170

[0017] 专利文献3：日本特开2009-507770

[0018] 非专利文献

[0019] 非专利文献1：The American Journal of Pathology,Vol.178,No.3,March 2011,1080-1090

[0020] 非专利文献2：Investigative Ophthalmology&Visual Science,May 2003,Vol.44,No.5,1982-1992

[0021] 非专利文献3：The Journal of Neuroscience,March 2,2005,25(9),2396-2404[0022] 非专利文献4：Molecular vision,2007,13,1601-1607

[0023] 非专利文献5：Neuroscience Letters,462,2009,281-285

发明内容

[0024] 发明所要解决的问题

[0025] 本发明的课题在于提供在实用上充分有效的视网膜疾病的预防、改善或治疗剂。

[0026] 用于解决问题的方法

[0027] 本发明人为了解决上述问题而反复进行了研究，得到了以下的预想不到的见解。

[0028] (i)香叶基香叶基丙酮具有视网膜细胞的保护作用，并且对于视网膜疾病的预防、改善或治疗极为有效。该效果在为5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮(以下有时称为“全反式体”)及5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮(以下有时称为“5Z单顺式体”)时较高，而在为两者的混合物时较低。

[0029] (ii)与以3:2的重量比含有全反式体和5Z单顺式体的混合物即替普瑞酮相比，全反式体的视网膜细胞的保护效果特别优良。

[0030] (iii)在使全反式体与5Z单顺式体的混合物中全反式体的比率达到80重量％以上时，视网膜细胞的保护效果变得特别高。

[0031] (iv)在使全反式体与5Z单顺式体的混合物中5Z单顺式体的比率非常高的情况下，也显示出优良的视网膜细胞保护效果。

[0032] 本发明基于上述见解而完成，其提供下述的视网膜疾病的预防、改善或治疗剂。

[0033] 第1项.一种药剂，其为含有香叶基香叶基丙酮的视网膜疾病的预防、改善或治疗剂，

[0034] 该香叶基香叶基丙酮，

[0035] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0036] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；或者

[0037] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0038] 第2项.如第1项所述的药剂，其为眼科用制剂。

[0039] 第3项.如第2项所述的药剂，其中，含有相对于制剂的总量为0.00001～10重量％的香叶基香叶基丙酮。

[0040] 第4项.如第1项所述的药剂，其为口服剂。

[0041] 第5项.如第4项所述的药剂，其中，含有相对于制剂的总量为0.001～80重量％的香叶基香叶基丙酮。

[0042] 第6项.如第1～5项中任一项所述的药剂，其中，视网膜疾病为选自由青光眼、视网膜色素变性、老年黄斑变性及糖尿病性视网膜病组成的组中的疾病。

[0043] 第7项.如第1～6项中任一项所述的药剂，其pH为6～8。

[0044] 第8项.如第1～7项中任一项所述的药剂，其中，还含有磷酸缓冲剂。

[0045] 第9项.一种药剂，其为含有香叶基香叶基丙酮作为有效成分的视网膜细胞保护剂，

[0046] 该香叶基香叶基丙酮，

[0047] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0048] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；或者

[0049] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0050] 第10项.如第9项所述的药剂，其为眼科用制剂。

[0051] 第11项.如第10项所述的药剂，其中，含有相对于制剂的总量为0.00001～10重量％的香叶基香叶基丙酮。

[0052] 第12项.如第9项所述的药剂，其为口服剂。

[0053] 第13项.如第12项所述的药剂，其中，含有相对于制剂的总量为0.001～80重量％的香叶基香叶基丙酮。

[0054] 第14项.如第9～13项中任一项所述的药剂，其中，视网膜细胞为视网膜神经节细胞或视网膜色素上皮细胞。

[0055] 第15项.如第9～14项中任一项所述的药剂，其pH为6～8。

[0056] 第16项.如第9～13项中任一项所述的药剂，其中，还含有磷酸缓冲剂。

[0057] 第17项.一种药剂，其为含有香叶基香叶基丙酮作为有效成分的视网膜细胞的变性、损伤或死亡的抑制剂，

[0058] 该香叶基香叶基丙酮，

[0059] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0060] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；或者

[0061] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0062] 第18项.如第17项所述的药剂，其为眼科用制剂。

[0063] 第19项.如第18项所述的药剂，其中，含有相对于制剂的总量为0.00001～10重量％的香叶基香叶基丙酮。

[0064] 第20项.如第17项所述的药剂，其为口服剂。

[0065] 第21项.如第20项所述的药剂，其中，含有相对于制剂的总量为0.001～80重量％的香叶基香叶基丙酮。。

[0066] 第22项.如第17～21项中任一项所述的药剂，其中，视网膜细胞为视网膜神经节细胞或视网膜色素上皮细胞。

[0067] 第23项.如第17～22项中任一项所述的药剂，其pH为6～8。

[0068] 第24项.如第17～23项中任一项所述的药剂，其中，还含有磷酸缓冲剂。

[0069] 第25项.一种用于预防、改善或治疗视网膜疾病的组合物，其含有下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0070] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0071] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0072] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0073] 第26项.香叶基香叶基丙酮在制造视网膜疾病的预防、改善或治疗剂中的应用，所述香叶基香叶基丙酮为下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0074] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0075] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0076] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0077] 第27项.香叶基香叶基丙酮作为视网膜疾病的预防、改善或治疗剂的应用，所述香叶基香叶基丙酮为下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0078] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0079] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0080] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0081] 第28项.一种预防、改善或治疗视网膜疾病的方法，其包括对视网膜疾病患者给用有效量的下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮来预防、改善或治疗视网膜疾病的步骤，[0082] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0083] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0084] 第29项.一种用于保护视网膜细胞的组合物，其含有下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0085] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0086] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0087] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0088] 第31项.香叶基香叶基丙酮作为视网膜细胞保护剂的应用，所述香叶基香叶基丙酮为下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0089] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0090] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0091] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0092] 第30项.香叶基香叶基丙酮在制造视网膜细胞保护剂中的应用，所述香叶基香叶基丙酮为下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0093] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0094] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0095] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0096] 第32项.一种视网膜细胞的保护方法，其包括对视网膜疾病患者给用有效量的下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮来保护视网膜细胞的步骤，

[0097] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0098] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0099] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0100] 第33项.一种用于抑制视网膜细胞的变性、损伤或死亡的组合物，其含有下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0101] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0102] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0103] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0104] 第34项.香叶基香叶基丙酮在制造视网膜细胞的变性、损伤或死亡的抑制剂中的应用，所述香叶基香叶基丙酮为下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0105] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0106] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0107] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0108] 第35项.香叶基香叶基丙酮作为视网膜细胞的变性、损伤或死亡的抑制剂的应用，所述香叶基香叶基丙酮为下述(a)、(b)、或(c)的香叶基香叶基丙酮：

[0109] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0110] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0111] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0112] 第36项.一种抑制视网膜细胞的变性、损伤或死亡的方法，其包括对视网膜疾病患者给用有效量的下述(a)、(b)或(c)的香叶基香叶基丙酮来抑制视网膜细胞的变性、损伤或死亡的步骤，

[0113] (a)是5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮与5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮的混合物，且该混合物含有80重量％以上的5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮；

[0114] (b)仅由5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成；

[0115] (c)仅由5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮构成。

[0116] 发明效果

[0117] 包含全反式体的比率为80重量％以上的香叶基香叶基丙酮(以下有时简称为“GGA”)的本发明的药剂保护各种视网膜细胞免受变性、损伤或死亡，显著促进其存活。因此，在各种视网膜疾病的预防、改善或治疗方面显示出显著效果。

[0118] 全反式体的比率为80重量％以上的GGA以少量显示出对视网膜细胞的保护作用，因此，本发明的药剂可以不含有高浓度的GGA。一般而言，眼科用制剂的成分向眼球的迁移性低，因此以较高浓度使用。因此，本发明的药剂可以降低GGA浓度是作为眼科用制剂的优良优点。

[0119] 此外，以往的视网膜疾病治疗剂例如通过使眼压降低来抑制由眼压上升所致的视网膜神经细胞死亡等，从而间接性地保护视网膜细胞，与此相对，本发明的药剂直接抑制视网膜细胞的细胞死亡，因此，能够从根本上预防、改善或治疗视网膜疾病，作为视网膜疾病的治疗剂极为有用。

[0120] 此外，GGA是被广泛使用且已经确立安全性的药物，因此，本发明的药剂是安全的。

[0121] 此外，本发明的药剂可以制成像滴眼剂或口服剂那样患者容易在家中使用的制剂，因此，作为重度视网膜疾病的预防、改善、治疗剂是有用的。

[0122] 此外，包含以3:2的重量比含有全反式体和5Z单顺式体的混合物即替普瑞酮的液剂在低温保存时容易产生白浊。因此，尤其是在寒冷地区流通及保存时，制剂产生白浊，商品价值低。

[0123] 就这一点而言，包含全反式体的比率为80重量％以上的GGA的本发明的药剂即使在低温下保存也不易产生白浊。因此，在任意地区均可流通，商品价值高。

[0124] 此外，包含全反式体的比率为80重量％以上的GGA的本发明的眼科用组合物可以抑制对眼睛的刺激。

[0125] 单顺式体、以及全反式体与单顺式体的混合物且单顺式体的比率非常高的GGA也具有视网膜细胞的保护作用，对于视网膜疾病的预防、改善或治疗极为有效。其效果与以3:2的重量比含有全反式体和5Z单顺式体的混合物即替普瑞酮相比特别优良。

附图说明

[0126] 图1是表示GGA保护细胞免受低氧、低葡萄糖诱导性缺血样细胞死亡的作用的图。

[0127] 图2是表示大鼠RGC中的由GGA所致的神经突起伸长诱导作用的图。

[0128] 图3是表示大鼠RGC中的由GGA所致的神经突起伸长诱导作用的照片。

[0129] 图4是表示GGA保护细胞免受氧化应激的作用的图。

[0130] 图5是表示GGA的抑制因TNF-α引起的IL-8产生的作用的图。

[0131] 图6是表示全反式体及5Z单顺式体对NMDA诱发青光眼模型大鼠的眼睛的神经保护作用的图。

[0132] 图7是表示全反式体对NMDA诱发青光眼模型大鼠的眼睛的神经保护作用的图。

[0133] 图8是表示全反式体使NMDA诱发青光眼模型大鼠的视网膜的内网状层的厚度增大的图。

[0134] 图9是表示全反式体对NMDA诱发青光眼模型大鼠的眼睛的神经保护作用的图。

[0135] 图10是表示含有GGA的眼科用组合物的、抑制低温保存时的白浊的效果的图。

具体实施方式

[0136] 以下对本发明详细地进行说明。

[0137] 本发明的视网膜疾病的预防、改善或治疗剂含有GGA作为有效成分。

[0138] 该GGA为全反式体、单顺式体、含有80重量％以上的全反式体的全反式体与单顺式体的混合物、或者单顺式体的比率非常高的全反式体与单顺式体的混合物。

[0139] 香叶基香叶基丙酮

[0140] (1)几何异构体的种类

[0141] GGA存在8种几何异构体。具体为如下8种：

[0142] (5E,9E,13E)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5E,9E,13EGGA)(全反式体)、

[0143] (5Z,9E,13E)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5Z,9E,13EGGA)(5Z单顺式体)、

[0144] (5Z,9Z,13E)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5Z,9Z,13EGGA)(13E单反式体)、

[0145] (5Z,9Z,13Z)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5Z,9Z,13ZGGA)(全顺式体)、

[0146] (5E,9Z,13E)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5E,9Z,13EGGA)(9Z单顺式体)、

[0147] (5E,9Z,13Z)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5E,9Z,13ZGGA)(5E单反式体)、

[0148] (5E,9E,13Z)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5E,9E,13ZGGA)(13Z单顺式体)、以及

[0149] (5Z,9E,13Z)-6,10,14,18-四甲基-5,9,13,17-十九碳四烯-2-酮(5Z,9E,13ZGGA)(9E单反式体)。

[0150] 本发明中，GGA仅由全反式体构成、仅由单顺式体构成、或者为全反式体与单顺式体的混合物。单顺式体可以是5Z单顺式体、9Z单顺式体及13Z单顺式体中的任意一种。此外，也可以是这些单顺式体中的2种以上的组合。

[0151] 单顺式体优选为5Z单顺式体。

[0152] 在GGA为全反式体与单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的混合物时，全反式体的比率为80重量％以上，优选为82重量％以上，更优选为84重量％以上，进一步优选为86重量％以上，更进一步优选为88重量％以上，更进一步优选为90重量％以上，更进一步优选为92重量％以上，更进一步优选为94重量％以上，更进一步优选为96重量％以上，更进一步优选为98重量％以上。特别优选仅由全反式体构成。若为上述范围，则在视网膜疾病的预防、改善或治疗方面显示出显著效果，并且在低温保存时不易产生白浊。

[0153] 此外，在GGA为全反式体与单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的混合物时，单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的比率非常高的GGA也在视网膜疾病的预防、改善或治疗方面显示出显著效果，故优选。

[0154] (2)全反式体和5Z单顺式体

[0155] 5E,9E,13E香叶基香叶基丙酮(全反式体)为以下的结构式所示的化合物。

[0156]

[0157] 全反式体例如可以购自Rionlon公司。

[0158] 此外，全反式体也可以通过将市售替普瑞酮(卫材公司、和光纯药、阳进堂)利用例如使用正己烷:乙酸乙酯＝9:1的流动相的硅胶柱色谱法与5Z单顺式体分离而得到。市售替普瑞酮的5Z单顺式体与全反式体的分离也可委托例如神户天然物化学公司来进行。

[0159] 通过市售替普瑞酮的分离，也可得到5Z,9E,13E香叶基香叶基丙酮(5Z单顺式体)。5Z单顺式体为以下的结构式所示的化合物。

[0160]

[0161] 此外，全反式体可以利用例如Bull.Korean Chem.Soc.,2009,Vol.30,No.9,215-217中记载的方法来合成。在该文献中记载了例如下述合成路线所示的方法。

[0162]

[0163] 具体而言，在上述反应式中，将香叶基芳樟醇1、化合物2和异丙醇铝混合，将该混合物缓缓升温至130℃，使其发生反应。反应结束后，将残余的化合物2除去，并将反应混合物用5％碳酸钠进行稀释，使残余的丙醇铝淬灭。由此得到全反式体。进而，可以利用使用二氯甲烷作为洗脱液的硅胶柱色谱法等对全反式体进行纯化。

[0164] (3)全反式体与5Z单顺式体的混合物

[0165] 全反式体与5Z单顺式体的混合物可以通过在市售替普瑞酮中添加全反式体或5Z单顺式体而得到。

[0166] 制剂

[0167] 本发明的药剂的剂型并无特别限定，例如可以无限制地采用眼科用药剂、口服剂、注射剂(静脈注射剂、皮下注射剂、肌内注射剂等)、经皮吸收剂、栓剂、吸入剂等医药上公知的剂型。其中，从视网膜疾病的预防、改善或治疗效果优良且为患者容易使用的剂型的观点考虑，优选眼科用药剂、口服剂或经皮吸收剂，更优选眼科用药剂。

[0168] 在采用任意一种剂型的情况下，均可以使制剂在GGA的基础上含有药学上容许的基剂或载体、药学上容许的添加剂和/或除GGA以外的生理活性成分或药理活性成分。

[0169] (1)眼科用药剂

[0170] 眼科用药剂的性状并无特别限定，例如可以为液体状、流动状、凝胶状、半固体状或固体状等任意一种性状。

[0171] 眼科用药剂的种类并无特别限定。例如可列举滴眼剂、洗眼剂、角膜接触镜配戴液、角膜接触镜用液(洗涤液、保存液、消毒液、多功能护理液、包装护理液)、移植用角膜等摘除的眼组织的保存剂、手术时的灌注液、眼软膏(水溶性眼软膏、油溶性眼软膏)及眼内注射剂(例如玻璃体内注射剂)等。

[0172] 此外，除固体状以外的液体状、流动状、凝胶状、半固体状或固体状等的眼科用药剂可以为水性组合物，也可以为软膏剂等等油性组合物。

[0173] 眼科用制剂的制备方法已熟知。可以通过将GGA与药学上容许的基剂或载体、根据需要添加的药学上容许的眼科用制剂用添加剂及其他有效成分(除GGA以外的生理活性成分或药理活性成分)混合来制备。

[0174] ＜基剂或载体＞

[0175] 作为基剂或载体，例如可列举：水；极性溶剂之类的水性溶剂；多元醇；植物油；油性基剂等。作为眼内注射剂的基剂或载体，可列举注射用蒸馏水或生理盐水。

[0176] 基剂或载体可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0177] ＜添加剂＞

[0178] 作为添加剂，例如可列举表面活性剂、香料或清凉剂、防腐剂、杀菌剂或抗菌剂、pH调节剂、等渗剂、螯合剂、缓冲剂、稳定剂、抗氧化剂及增稠剂等。在眼内注射剂中可以含有助溶剂、助悬剂、等渗剂、缓冲剂、无痛化剂、稳定剂及防腐剂等。

[0179] 添加剂可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0180] 以下例示出添加剂的具体例。

[0181] 表面活性剂：例如，聚氧乙烯(以下有时也称为“POE”)-聚氧丙烯(以下有时也称为“POP”)嵌段共聚物(例如Poloxamer 407、Poloxamer 235、Poloxamer 188)、乙二胺的POE-POP嵌段共聚物加成物(例如Poloxamine)、POE山梨糖醇酐脂肪酸酯(例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80(TO-10等))、POE硬化蓖麻油(例如POE(60)硬化蓖麻油(HCO-60等))、POE蓖麻油、POE烷基醚(例如聚氧乙烯(9)月桂基醚、聚氧乙烯(20)聚氧丙烯(4)鲸蜡基醚)及聚乙二醇硬脂酸酯之类的非离子性表面活性剂；

[0182] 甘氨酸型两性表面活性剂(例如烷基二氨基乙基甘氨酸、烷基多氨基乙基甘氨酸)及甜菜碱型两性表面活性剂(例如月桂基二甲基氨基乙酸甜菜碱、咪唑啉 甜菜碱)之类的两性表面活性剂；以及

[0183] 烷基季铵盐(例如苯扎氯铵、苄索氯铵)之类的阳离子表面活性剂等。

[0184] 另外，括号内的数字表示加成摩尔数。

[0185] 香料或清凉剂：例如，樟脑、冰片、萜烯类(它们可以为d体、l体或dl体中的任意一种)、薄荷水、桉叶油、香柠檬油、茴香脑、丁香酚、香叶醇、薄荷醇、柠檬烯、薄荷油、椒样薄荷油及玫瑰油之类的精油等。

[0186] 防腐剂、杀菌剂或抗菌剂：例如，泊利氯铵、盐酸烷基二氨基乙基甘氨酸、苯甲酸钠、乙醇、苯扎氯铵、苄索氯铵、葡萄糖酸氯己定、氯丁醇、山梨酸、山梨酸钾、脱氢乙酸钠、对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯、硫酸羟基喹啉、苯乙醇、苯甲醇、双胍化合物(具体为聚六亚甲基双胍或其盐酸盐等)及Glokill(Rhodia公司制)等。

[0187] pH调节剂：例如，盐酸、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁、三乙醇胺、单乙醇胺、二异丙醇胺、硫酸及磷酸等。

[0188] 等渗剂：例如，亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、氯化钾、氯化钙、氯化钠、氯化镁、乙酸钾、乙酸钠、碳酸氢钠、碳酸钠、硫代硫酸钠、硫酸镁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、甘油及丙二醇等。

[0189] 螯合剂：例如，抗坏血酸、乙二胺四乙酸四钠、乙二胺四乙酸钠及柠檬酸等。

[0190] 缓冲剂：例如，磷酸缓冲剂；柠檬酸、柠檬酸钠之类的柠檬酸缓冲剂；乙酸、乙酸钾、乙酸钠之类的乙酸缓冲剂；碳酸氢钠、碳酸钠之类的碳酸缓冲剂；硼酸、硼砂之类的硼酸缓冲剂；牛磺酸、天冬氨酸及其盐类(钾盐等)、ε-氨基己酸之类的氨基酸缓冲剂等。

[0191] 其中，优选使用磷酸缓冲剂来调节pH，由此，抑制GGA向容器壁吸附，进而抑制眼科用药剂中的GGA的含有率降低。此外，还可以得到如下效果：抑制低温保存时的白浊，抑制GGA向角膜接触镜吸附，使对热及光的稳定性良好。

[0192] 磷酸缓冲剂可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0193] 磷酸缓冲剂并无特别限定，例如可列举：磷酸；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸三钠、磷酸氢二钾、磷酸二氢钾及磷酸三钾之类的磷酸碱金属盐；磷酸钙、磷酸氢钙、磷酸二氢钙、磷酸一镁、磷酸二镁(磷酸氢镁)、磷酸三镁之类的磷酸碱土金属盐；磷酸氢二铵、磷酸二氢铵之类的磷酸铵盐等。磷酸缓冲剂可以是无水物或水合物中的任意一种。

[0194] 其中，优选使用选自由磷酸及磷酸碱金属盐组成的组中的至少一种，更优选使用选自由磷酸及磷酸钠盐组成的组中的至少一种。

[0195] 作为磷酸缓冲剂的优选组合，可列举：磷酸、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和磷酸三钠的组合；磷酸、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的组合；磷酸、磷酸氢二钠和磷酸三钠的组合；磷酸、磷酸二氢钠和磷酸三钠的组合；磷酸氢二钠、磷酸二氢钠和磷酸三钠的组合；磷酸和磷酸氢二钠的组合；磷酸和磷酸二氢钠的组合；磷酸和磷酸三钠的组合；磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的组合；磷酸氢二钠和磷酸三钠的组合；磷酸二氢钠和磷酸三钠的组合。

[0196] 其中，优选：磷酸、磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的组合；磷酸和磷酸氢二钠的组合；磷酸和磷酸二氢钠的组合；磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的组合，更优选磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的组合。

[0197] 以换算为无水物计，磷酸缓冲剂的含量相对于眼科用药剂的总量优选为0.001重量％以上，更优选为0.005重量％以上，进一步优选为0.01重量％以上，更进一步优选为0.05重量％以上。若为上述范围，则可以充分得到由添加磷酸缓冲剂而带来的、GGA的稳定化效果、抑制低温白浊的效果、抑制GGA向容器壁及角膜接触镜吸附的效果。

[0198] 此外，以换算为无水物计，眼科用药剂中的磷酸缓冲剂的含量相对于眼科用药剂的总量优选为10重量％以下，更优选为7重量％以下，进一步优选为5重量％以下，更进一步优选为3重量％以下。若为上述范围，则对眼睛的刺激小。

[0199] 作为磷酸缓冲剂的含量，以换算为无水物计，相对于眼科用药剂的总量，可列举约0.001重量％～约10重量％、约0.001重量％～约7重量％、约0.001重量％～约5重量％、约
0.001重量％～约3重量％、约0.005重量％～约10重量％、约0.005重量％～约7重量％、约
0.005重量％～约5重量％、约0.005重量％～约3重量％、约0.01重量％～约10重量％、约
0.01重量％～约7重量％、约0.01重量％～约5重量％、约0.01重量％～约3重量％、约0.05重量％～约10重量％、约0.05重量％～约7重量％、约0.05重量％～约5重量％、约0.05重量％～约3重量％。

[0200] 此外，以换算为无水物计，磷酸缓冲剂的含量相对于1重量份GGA优选为0.0005重量份以上，更优选为0.001重量份以上，进一步优选为0.005重量份以上，更进一步优选为0.01重量份以上。若为上述范围，则可以充分得到由添加磷酸缓冲剂而带来的、GGA的稳定化效果、抑制低温白浊的效果、抑制GGA向容器壁及角膜接触镜吸附的效果。

[0201] 此外，以换算为无水物计，磷酸缓冲剂的含量相对于1重量份GGA优选为5000重量份以下，更优选为1000重量份以下，进一步优选为500重量份以下，更进一步优选为200重量份以下。若为上述范围，则对眼睛的刺激小。

[0202] 作为磷酸缓冲剂的含量，以换算为无水物计，相对于1重量份GGA，可列举约0.0005重量份～约5000重量份、约0.0005重量份～约1000重量份、约0.0005重量份～约500重量份、约0.0005重量份～约200重量份、约0.001重量份～约5000重量份、约0.001重量份～约1000重量份、约0.001重量份～约500重量份、约0.001重量份～约200重量份、约0.005重量份～约5000重量份、约0.005重量份～约1000重量份、约0.005重量份～约500重量份、约
0.005重量份～约200重量份、约0.01重量份～约5000重量份、约0.01重量份～约1000重量份、约0.01重量份～约500重量份、约0.01重量份～约200重量份。

[0203] 稳定剂：缓血酸胺、甲醛次硫酸钠(吊白块)、生育酚、焦亚硫酸钠、单乙醇胺、单硬脂酸铝及单硬脂酸甘油酯等。

[0204] 抗氧化剂：抗坏血酸、抗坏血酸衍生物(抗坏血酸-2-硫酸二钠、抗坏血酸钠、抗坏血酸-2-磷酸镁、抗坏血酸-2-磷酸钠等)、亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、硫代硫酸钠等水溶性抗氧化剂。

[0205] 在眼科用药剂中可以含有脂溶性抗氧化剂，由此可以抑制眼科用药剂向容器壁吸附，进而可以抑制组合物中的GGA的含有率降低。此外，可以抑制GGA向角膜接触镜吸附，使GGA对热及光的稳定性也提高。

[0206] 作为脂溶性抗氧化剂，例如可列举：丁基羟基甲苯(BHT)、丁基羟基茴香醚(BHA)之类的含丁基酚；去甲二氢愈创木酸(NDGA)；抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、氨基丙醇抗坏血酸磷酸酯、抗坏血酸生育酚磷酸酯、抗坏血酸三磷酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯磷酸酯之类的抗坏血酸酯；α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚、δ-生育酚之类的生育酚；乙酸生育酚、烟酸生育酚、琥珀酸生育酚之类的生育酚衍生物；没食子酸乙酯、没食子酸丙酯、没食子酸辛酯、没食子酸十二烷酯之类的没食子酸酯；没食子酸丙酯；3-丁基-4-羟基喹啉-2-酮；大豆油、菜籽油、橄榄油、芝麻油之类的植物油；叶黄素、虾青素之类的类胡萝卜素类；花青素类、儿茶素、单宁酸、姜黄素等多酚类；视黄醇、视黄醇酯(视黄醇乙酸酯、视黄醇丙酸酯、视黄醇丁酸酯、视黄醇辛酸酯、视黄醇月桂酸酯、视黄醇硬脂酸酯、视黄醇肉豆蔻酸酯、视黄醇油酸酯、视黄醇亚麻酸酯、视黄醇亚油酸酯、视黄醇棕榈酸酯等)、视黄醛、视黄醛酯(视黄醛乙酸酯、视黄醛丙酸酯、视黄醛棕榈酸酯等)、视黄酸、视黄酸酯(视黄酸甲酯、视黄酸乙酯、视黄醇视黄酸酯、生育酚视黄酸酯等)、脱氢视黄醇、脱氢视黄醛、脱氢视黄酸、前维生素A(α-胡萝卜素、β-胡萝卜素、γ-胡萝卜素、δ-胡萝卜素、番茄红素、玉米黄质、β-隐黄质、海胆酮等)、维生素A等维生素A类；CoQ10等。这些化合物已市售。

[0207] 其中，优选含丁基酚、NDGA、抗坏血酸酯、生育酚、生育酚衍生物、没食子酸酯、没食子酸丙酯及3-丁基-4-羟基喹啉-2-酮、植物油、维生素A类。其中，优选含丁基酚、生育酚、生育酚衍生物、植物油、维生素A类，更优选含丁基酚、植物油、视黄醇或视黄醇酯，进一步优选BHT、BHA、芝麻油、视黄醇棕榈酸酯。

[0208] 脂溶性抗氧化剂可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0209] 眼科用药剂中的脂溶性抗氧化剂的含量相对于眼科用药剂的总量优选为0.00001重量％以上，更优选为0.00005重量％以上，进一步优选为0.0001重量％以上，更进一步优选为0.0005重量％以上。若为上述范围，则可以充分得到由添加脂溶性抗氧化剂而带来的、抑制GGA向容器壁吸附的效果(抑制GGA的含有率降低的效果)、抑制GGA向角膜接触镜吸附的效果、以及提高GGA对热及光的稳定性的效果。

[0210] 此外，眼科用药剂中的脂溶性抗氧化剂的含量相对于组合物的总量优选为10重量％以下，更优选为5重量％以下，进一步优选为2重量％以下，更进一步优选为1重量％以下。若为上述范围，则对眼睛的刺激也小。

[0211] 作为眼科用药剂中的脂溶性抗氧化剂的含量，相对于眼科用药剂的总量，可列举约0.00001重量％～约10重量％、约0.00001重量％～约5重量％、约0.00001重量％～约2重量％、约0.00001重量％～约1重量％、约0.00005重量％～约10重量％、约0.00005重量％～约5重量％、约0.00005重量％～约2重量％、约0.00005重量％～约1重量％、约0.0001重量％～约10重量％、约0.0001重量％～约5重量％、约0.0001重量％～约2重量％、约0.0001重量％～约1重量％、约0.0005重量％～约10重量％、约0.0005重量％～约5重量％、约0.0005重量％～约2重量％、约0.0005重量％～约1重量％。

[0212] 此外，眼科用药剂中的脂溶性抗氧化剂的含量相对于1重量份GGA优选为0.0001重量份以上，更优选为0.001重量份以上，进一步优选为0.005重量份以上，更进一步优选为0.01重量份以上。若为上述范围，则可以充分得到由添加脂溶性抗氧化剂而带来的、抑制GGA向容器壁吸附的效果(抑制GGA的含有率降低的效果)、抑制GGA向角膜接触镜吸附的效果、以及提高GGA对热及光的稳定性的效果。

[0213] 此外，眼科用药剂中的脂溶性抗氧化剂的含量相对于1重量份GGA优选为100重量份以下，更优选为50重量份以下，进一步优选为10重量份以下，更进一步优选为5重量份以下。若为上述范围，则对眼睛的刺激也小。

[0214] 作为眼科用药剂中的脂溶性抗氧化剂的含量，相对于1重量份GGA，可列举约0.0001重量份～约100重量份、约0.0001重量份～约50重量份、约0.0001重量份～约10重量份、约0.0001重量份～约5重量份、约0.001重量份～约100重量份、约0.001重量份～约50重量份、约0.001重量份～约10重量份、约0.001重量份～约5重量份、约0.005重量份～约100重量份、约0.005重量份～约50重量份、约0.005重量份～约10重量份、约0.005重量份～约5重量份、约0.01重量份～约100重量份、约0.01重量份～约50重量份、约0.01重量份～约10重量份、约0.01重量份～约5重量份。

[0215] 增稠剂：瓜尔胶、羟丙基瓜尔胶、甲基纤维素、乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素钠之类的纤维素类高分子化合物、阿拉伯胶、刺梧桐树胶、黄原胶、琼脂、海藻酸、α-环糊精、糊精、葡聚糖、肝素、类肝素、硫酸肝素、硫酸乙酰肝素、透明质酸、透明质酸盐(钠盐等)、硫酸软骨素钠、淀粉、壳多糖及其衍生物、壳聚糖及其衍生物、角叉菜胶、山梨糖醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚甲基丙烯酸乙烯酯之类的聚乙烯类高分子化合物、聚丙烯酸的碱金属盐(钠盐及钾盐等)、聚丙烯酸的胺盐(单乙醇胺盐、二乙醇胺盐、三乙醇胺盐等)、聚丙烯酸的铵盐之类的羧基乙烯基聚合物、酪蛋白、明胶、胶原、果胶、弹性蛋白、神经酰胺、液体石蜡、甘油、聚乙二醇、聚乙二醇(macrogol)、聚乙烯亚胺海藻酸盐(钠盐等)、海藻酸酯(丙二醇酯等)、黄蓍胶粉末以及三异丙醇胺等。

[0216] ＜其他的视网膜疾病的预防、改善或治疗成分＞

[0217] 眼科用药剂优选在GGA的基础上含有以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分。即，眼科用药剂优选含有GGA与其他成分的组合作为预防、改善或治疗视网膜疾病的有效成分。以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0218] 作为这样的组合，对其并无限定，例如可列举：GGA与前列素类药剂的组合(GGA与拉坦前列素、GGA与曲伏前列素、GGA与他氟前列素等)、GGA与前列腺酰胺类药剂的组合(GGA与比马前列素等)、GGA与前列酮类药剂的组合(GGA与异丙基乌诺前列酮)之类的GGA与前列腺素F2α衍生物的组合；GGA与β阻断药的组合(GGA与马来酸噻吗洛尔、GGA与凝胶化噻吗洛尔、GGA与盐酸卡替洛尔、GGA与凝胶化卡替洛尔等)、GGA与β1阻断药的组合(GGA与盐酸倍他洛尔等)、GGA与αβ阻断药的组合(GGA与盐酸左布诺洛尔、GGA与尼普地洛、GGA与盐酸布那唑嗪等)、GGA与α2阻断药的组合(GGA与溴莫尼定酒石酸盐)之类的GGA与交感神经阻断药的组合；GGA与盐酸匹鲁卡品、GGA与溴地斯的明之类的GGA与副交感神经激动药的组合；GGA与肾上腺素、GGA与肾上腺素酒石酸氢盐(epinephrine hydrogen tartrate)、GGA与盐酸地匹福林之类的GGA与交感神经激动药的组合；GGA与多佐胺盐酸盐、GGA与布林佐胺之类的GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合；GGA与SNJ-1656、GGA与K-115之类的GGA与ROCK(Rho-associated coiled coil forming protein kinase，Rho-相关螺旋卷曲形成蛋白激酶)的特异性抑制剂的组合；GGA与洛美利嗪盐酸盐之类的GGA与钙拮抗剂的组合；GGA与DE-117之类的GGA与EP2促效剂的组合；GGA与OPA-6566之类的GGA与腺苷A2a受体激动药的组合；GGA与VEGF适体的组合(GGA与哌加他尼钠)、GGA与VEGF抑制剂的组合(GGA与兰尼单抗、GGA与贝伐单抗)之类的GGA与老年黄斑变性症治疗剂的组合等。

[0219] 其中，从使视网膜疾病的预防、改善、治疗效果非常高的方面考虑，优选GGA与前列腺素F2α衍生物的组合、以及GGA与交感神经阻断药的组合(尤其是GGA与β阻断药的组合)。

[0220] ＜其他的药理活性成分或生理活性成分＞

[0221] 此外，在眼科用药剂中可以配合除视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。这样的药理活性成分或生理活性成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0222] 作为这样的药理活性成分或生理活性成分，除此以外还可列举例如神经营养因子、解充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分、糖类、高分子化合物、纤维素或其衍生物、以及局部麻醉药成分等。以下例示出这些药剂的具体例。

[0223] 神经营养因子：神经营养因子(NGF：Nerve growth factor)、脑源性神经营养因子(BDNF：brain-derived nerve growth factor)及胶质细胞源性神经营养因子(GDNF：glial cell line-derived neurotrophic factor)等。

[0224] 此外，由于血清包含以神经营养因子为代表的营养因子，因此也可添加从患者采集的血清而制成用于该患者的制剂。

[0225] 解充血成分：例如，α-类肾上腺素激动药，具体为肾上腺素、盐酸肾上腺素、盐酸麻黄碱、盐酸羟甲唑啉、盐酸四氢唑啉、盐酸萘唑啉、盐酸苯肾上腺素、盐酸甲基麻黄碱、肾上腺素酒石酸氢盐及硝酸萘唑啉等。它们可以为d体、l体或dl体中的任意一种。

[0226] 眼肌调节药成分：例如，具有与乙酰胆碱类似的活性中心的胆碱酯酶抑制剂，具体为甲基硫酸新斯的明、托吡卡胺、土木香素及硫酸阿托品等。

[0227] 抗炎药成分或收敛药成分：例如，硫酸锌、乳酸锌、尿囊素、ε-氨基己酸、吲哚美辛、氯化溶菌酶、硝酸银、普拉洛芬、 磺酸钠、甘草酸二钾、甘草酸二铵、双氯芬酸钠、溴芬酸钠、氯化小檗碱及硫酸小檗碱等。

[0228] 抗组胺药成分或抗过敏药成分：例如，阿扎司特、苯海拉明或其盐酸盐等盐、马来酸氯苯那敏、富马酸酮替芬、左卡巴斯汀或其盐酸盐等、氨来呫诺、异丁司特、他扎司特、曲尼司特、奥沙米特、甲磺司特或其对甲苯磺酸盐等盐、色甘酸钠及吡嘧司特钾等。

[0229] 维生素类：例如，视黄醇乙酸酯、视黄醇棕榈酸酯、盐酸吡哆醇、黄素腺嘌呤二核苷酸钠、磷酸吡哆醛、氰钴胺素、泛醇、泛酸钙、泛酸钠、抗坏血酸、乙酸生育酚、烟酸生育酚、琥珀酸生育酚、琥珀酸生育酚钙及泛醌衍生物等。

[0230] 氨基酸类：例如，氨基乙基磺酸(牛磺酸)、谷氨酸、肌酸酐、天冬氨酸钠、天冬氨酸钾、天冬氨酸镁、天冬氨酸镁钾混合物、谷氨酸、谷氨酸钠、谷氨酸镁、ε-氨基己酸、甘氨酸、丙氨酸、精氨酸、赖氨酸、γ-氨基丁酸、γ-氨基戊酸及硫酸软骨素钠等。它们可以为d体、l体或dl体中的任意一种。

[0231] 抗菌药成分或杀菌药成分：例如，烷基多氨基乙基甘氨酸、氯霉素、磺胺甲 唑、磺胺异 唑、磺胺甲 唑钠、磺胺异 唑二乙醇胺、磺胺异 唑单乙醇胺、磺胺甲基异 唑钠、磺胺二甲异嘧啶钠、氧氟沙星、诺氟沙星、左氧氟沙星、盐酸洛美沙星及阿昔洛韦等。

[0232] 糖类：例如，单糖类、二糖类，具体为葡萄糖、麦芽糖、海藻糖、蔗糖、环糊精、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇等。

[0233] 高分子化合物：例如，海藻酸、海藻酸钠、糊精、葡聚糖、果胶、透明质酸、软骨素硫酸、聚乙烯醇(完全皂化物或部分皂化物)、聚乙烯吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、聚乙二醇(macrogol)及其药学上容许的盐类等。

[0234] 纤维素或其衍生物：例如，乙基纤维素、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、羧乙基纤维素、硝基纤维素等。

[0235] 局部麻醉药成分：例如，氯丁醇、盐酸普鲁卡因、盐酸利多卡因等。

[0236] ＜GGA的含量＞

[0237] 在眼科用制剂为除固体制剂以外的例如液体状、流动状、凝胶状或半固体状等的制剂时，眼科用组合物中的GGA的含量相对于组合物的总量优选为0.00001重量％以上，更优选为0.0001重量％以上，进一步优选为0.001重量％以上。此外，可以为0.01重量％以上，也可以为0.1重量％以上，还可以为1重量％以上。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0238] 此外，在眼科用制剂为除固体制剂以外的例如液体状、流动状、凝胶状或半固体状等的制剂时，眼科用组合物中的GGA的含量相对于组合物的总量优选为10重量％以下，更优选为5重量％以下，进一步优选为3重量％以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果，并且可以形成更澄清且不易产生雾视的制剂。

[0239] 在眼科用制剂为除固体制剂以外的例如液体状、流动状、凝胶状或半固体状等的制剂时，作为眼科用组合物中的GGA的含量，相对于组合物的总量，可列举约0.00001重量％～约10重量％、约0.00001重量％～约5重量％、约0.00001重量％～约3重量％、约0.0001重量％～约10重量％、约0.0001重量％～约5重量％、约0.0001重量％～约3重量％、约0.001重量％～约10重量％、约0.001重量％～约5重量％、约0.001重量％～约3重量％、约0.01重量％～约10重量％、约0.01重量％～约5重量％、约0.01重量％～约3重量％、约0.1重量％～约10重量％、约0.1重量％～约5重量％、约0.1重量％～约3重量％、约1重量％～约10重量％、约1重量％～约5重量％、约1重量％～约3重量％。

[0240] 对于缓释性眼内植入制剂或在角膜接触镜中含有GGA的缓释性角膜接触镜制剂等固体制剂中的GGA的含量，将在后文进行叙述。

[0241] pH

[0242] 在眼科用药剂为含有水分的组合物时，该眼科用药剂的pH优选为4以上，更优选为5.5以上，进一步优选为6以上，更进一步优选为6.5以上。若为上述范围，则成为GGA对热及光的稳定性良好的制剂。

[0243] 此外，眼科用药剂的pH优选为9以下，更优选为8.5以下，进一步优选为8以下，更进一步优选为7.5以下。若为上述范围，则可以抑制对眼睛的刺激。

[0244] 缓释性眼内植入剂

[0245] 此外，作为眼科用药剂，还可列举缓释性眼内植入剂。已知有各种缓释性眼内植入剂的制备方法。例如可列举：将GGA与含有高分子物质的载体混合并成型而得到的基质制剂；以高分子膜包覆含有GGA的核而得到的制剂；将GGA封入包含高分子物质的微小胶囊中而得到的胶囊制剂等。

[0246] 作为高分子，可以无限制地使用在缓释性眼内植入剂中所使用的高分子，例如可列举羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、普鲁兰多糖、明胶、胶原、缺端胶原、透明质酸、酪蛋白、琼脂、阿拉伯胶、糊精、乙基纤维素、甲基纤维素、壳多糖、壳聚糖、甘露聚糖、羧甲基乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、聚乙二醇、海藻酸钠、聚乙烯醇、纤维素乙酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅氧烷、聚乙烯醇缩乙醛二乙基氨基乙酸酯、白蛋白及乳酸-乙醇酸共聚物等。

[0247] 高分子可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0248] 缓释性眼内植入剂优选含有GGA和其他的视网膜疾病的预防、改善或治疗成分。作为该组合，可列举例如上述例示的组合。缓释性眼内植入剂可以进一步含有其他的药理活性成分或生理活性成分。该成分可以使用例如上述例示的物质。

[0249] 缓释性眼内植入剂中的GGA的含量相对于制剂的总量优选为0.001mg以上，更优选为0.01mg以上，进一步优选为0.1mg以上。此外，优选为1000mg以下，更优选为100mg以下，进一步优选为10mg以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0250] 作为缓释性眼内植入剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001mg～约1000mg、约0.001mg～约100mg、约0.001mg～约10mg、约0.01mg～约1000mg、约0.01mg～约100mg、约0.01mg～约10mg、约0.1mg～约1000mg、约0.1mg～约100mg、约0.1mg～约10mg。

[0251] 缓释性角膜接触镜制剂

[0252] 此外，作为眼科用药剂，还可列举使角膜接触镜本身含有GGA的缓释性角膜接触镜制剂。这样的缓释性制剂例如可以通过将角膜接触镜浸渍在含有GGA的角膜接触镜用液例如洗涤液、保存液、消毒液、多功能护理液、包装护理液等中来制备。或者，可以通过使GGA含浸于角膜接触镜制造原料例如角膜接触镜聚合物的构成单体(甲基丙烯酸羟基乙酯、甲基丙烯酸甲酯、乙烯基吡咯烷酮、二乙烯基苯、甲基丙烯酸、乙二醇二甲基丙烯酸酯、苯偶姻甲基醚等)、着色剂或紫外线吸收剂后使用其制造角膜接触镜来制备。

[0253] 缓释性角膜接触镜制剂中的GGA的含量相对于制剂的总量优选为0.001mg以上，更优选为0.01mg以上，进一步优选为0.1mg以上。此外，优选为1000mg以下，更优选为100mg以下，进一步优选为10mg以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0254] 作为缓释性角膜接触镜制剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001mg～约1000mg、约0.001mg～约100mg、约0.001mg～约10mg、约0.01mg～约1000mg、约
0.01mg～约100mg、约0.01mg～约10mg、约0.1mg～约1000mg、约0.1mg～约100mg、约0.1mg～约10mg。

[0255] 缓释性角膜接触镜制剂优选含有GGA和其他的视网膜疾病的预防、改善或治疗成分。作为该组合，可列举例如上述例示的组合。缓释性角膜接触镜制剂可以进一步含有除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分。该成分可以使用例如上述例示的物质。

[0256] 从向患部的迁移性良好的方面考虑，眼科用药剂的剂型优选为滴眼剂、眼内注射剂、眼软膏及洗眼剂，更优选为滴眼剂。

[0257] (2)口服剂

[0258] GGA可以制成口服剂或经口给用剂。作为口服剂，对其并无限定，例如可列举：片剂(包括舌下片、口腔内崩解片)、胶囊剂(包括软胶囊、微胶囊)、颗粒剂、散剂、药片、咀嚼剂、含片剂之类的固体制剂；糖浆剂、乳剂、悬浮剂之类的液体制剂等。

[0259] 固体制剂可以通过在GGA中配合药学上容许的载体、以及根据需要的药学上容许的口服剂用添加剂及除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分并利用例如日本药典记载的公知方法来制备。

[0260] 作为药学上容许的载体，对其并无限定，例如可列举：乳糖、白糖、D-甘露糖醇、D-山梨糖醇、淀粉、α化淀粉、糊精、结晶纤维素、低取代度羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钠、阿拉伯胶、普鲁兰多糖、轻质硅酸酐、合成硅酸铝、偏硅酸铝酸镁之类的赋形剂；α化淀粉、蔗糖、明胶、阿拉伯胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、结晶纤维素、白糖、D-甘露糖醇、海藻糖、糊精、普鲁兰多糖、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮之类的粘合剂；乳糖、白糖、淀粉、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、轻质硅酸酐、低取代度羟丙基纤维素之类的崩解剂；柠檬酸酐、月桂酸钠、甘油之类的稳定剂等。

[0261] 此外，液体制剂也可以利用例如日本药典记载的公知方法来制备。例如通过使GGA溶解或分散于水、乙醇、甘油、单糖浆或它们的混合液等中来制备。

[0262] 在口服剂中可以添加例如甜味剂、防腐剂、润滑剂、稀释剂、缓冲剂、香味剂、着色剂及抗氧化剂之类的口服剂用添加剂。

[0263] 口服剂优选组合含有GGA和以与本发明的药剂不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分。作为这样的组合，对其并无限定，例如可列举：GGA与乙酰唑胺、GGA与甲醋唑胺、GGA与双氯非那胺之类的GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合；GGA与浓甘油、GGA与异山梨醇之类的GGA与高渗透压药的组合等。

[0264] 其中，优选GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合，更优选GGA与乙酰唑胺的组合以及GGA与甲醋唑胺的组合，进一步优选GGA与甲醋唑胺的组合。

[0265] 以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0266] 口服剂可以含有除视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。

[0267] 尤其是作为公知的药理活性成分或生理活性成分，除此以外还可列举例如神经营养因子、解充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分等。

[0268] 在固体制剂的情况下，口服剂中的GGA的含量相对于组合物的总量优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。此外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。

[0269] 在固体制剂的情况下，作为口服剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001重量％～约80重量％、约0.001重量％～约60重量％、约0.001重量％～约50重量％、约0.01重量％～约80重量％、约0.01重量％～约60重量％、约0.01重量％～约50重量％、约
0.1重量％～约80重量％、约0.1重量％～约60重量％、约0.1重量％～约50重量％。

[0270] 此外，在液体制剂的情况下，相对于组合物的总量，优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。此外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。

[0271] 在液体制剂的情况下，作为口服剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001重量％～约80重量％、约0.001重量％～约60重量％、约0.001重量％～约50重量％、约0.01重量％～约80重量％、约0.01重量％～约60重量％、约0.01重量％～约50重量％、约
0.1重量％～约80重量％、约0.1重量％～约60重量％、约0.1重量％～约50重量％。

[0272] 若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0273] 在口服剂中，载体、添加剂及除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0274] (3)注射剂

[0275] 注射剂可以通过使GGA溶解或分散于注射用蒸馏水或生理盐水等并利用例如日本药典记载的公知方法来制备。此外，在注射剂中可以含有助溶剂、助悬剂、等渗剂、缓冲剂、无痛化剂、稳定剂及防腐剂等药学上容许的载体、或进一步含有药学上容许的注射剂用添加剂。

[0276] 注射剂优选在GGA的基础上含有以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分。即，注射剂优选含有GGA与其他成分的组合作为预防、改善或治疗视网膜疾病的有效成分。以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0277] 作为这样的组合，对其并无限定，例如可列举：GGA与前列素类药剂的组合(GGA与拉坦前列素、GGA与曲伏前列素、GGA与他氟前列素等)、GGA与前列腺酰胺类药剂的组合(GGA与比马前列素等)、GGA与前列酮类药剂的组合(GGA与异丙基乌诺前列酮)之类的GGA与前列腺素F2α衍生物的组合；GGA与β阻断药的组合(GGA与马来酸噻吗洛尔、GGA与凝胶化噻吗洛尔、GGA与盐酸卡替洛尔、GGA与凝胶化卡替洛尔等)、GGA与β1阻断药的组合(GGA与盐酸倍他洛尔等)、GGA与αβ阻断药的组合(GGA与盐酸左布诺洛尔、GGA与尼普地洛、GGA与盐酸布那唑嗪等)、GGA与α2阻断药的组合(GGA与溴莫尼定酒石酸盐)之类的GGA与交感神经阻断药的组合；GGA与盐酸匹鲁卡品、GGA与溴地斯的明之类的GGA与副交感神经激动药的组合；GGA与肾上腺素、GGA与肾上腺素酒石酸氢盐、GGA与盐酸地匹福林之类的GGA与交感神经激动药的组合；GGA与多佐胺盐酸盐、GGA与布林佐胺之类的GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合；GGA与SNJ-1656、GGA与K-115之类的GGA与ROCK(Rho-associated coiled coil forming protein kinase，Rho-相关螺旋卷曲形成蛋白激酶)的特异性抑制剂的组合；GGA与洛美利嗪盐酸盐之类的GGA与钙拮抗剂的组合；GGA与DE-117之类的GGA与EP2促效剂的组合；GGA与OPA-6566之类的GGA与腺苷A2a受体激动药的组合；GGA与VEGF适体的组合(GGA与哌加他尼钠)、GGA与VEGF抑制剂的组合(GGA与兰尼单抗、GGA与贝伐单抗)之类的GGA与老年黄斑变性症治疗剂的组合等。

[0278] 其中，从使视网膜疾病的预防、改善、治疗效果非常高的方面考虑，优选GGA与前列腺素F2α衍生物的组合、以及GGA与交感神经阻断药的组合(尤其是GGA与β阻断药的组合)。

[0279] 在注射剂中可以配合除视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。作为这样的药理活性成分或生理活性成分，例如可列举神经营养因子、解充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分等。

[0280] 注射剂中的GGA的含量相对于制剂的总量优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。此外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0281] 作为注射剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001重量％～约80重量％、约0.001重量％～约60重量％、约0.001重量％～约50重量％、约0.01重量％～约80重量％、约0.01重量％～约60重量％、约0.01重量％～约50重量％、约0.1重量％～约80重量％、约0.1重量％～约60重量％、约0.1重量％～约50重量％。

[0282] 在注射剂中，添加剂及除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0283] (4)经皮吸收剂

[0284] 作为经皮吸收剂，可列举将GGA与医药外用剂中通常使用的基剂(药学上容许的基剂)及除GGA以外的成分混合而得到的涂布剂。

[0285] 作为基剂，可列举：海藻酸钠、明胶、玉米淀粉、黄蓍胶、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羧甲基纤维素、黄原胶、角叉菜胶、甘露聚糖、琼脂糖、糊精、羧甲基淀粉、聚乙烯醇、聚丙烯酸钠、甲氧基乙烯-马来酸酐共聚物、聚乙烯醚、聚乙烯吡咯烷酮、羧基乙烯基聚合物、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、普鲁兰多糖等聚合物类；白色凡士林、黄色凡士林、石蜡、地蜡、微晶蜡等烃类；凝胶化烃(例如，商品名Plastibase、Bristol Myers Squibb公司制)；硬脂酸等高级脂肪酸；鲸蜡醇、辛基十二烷醇、硬脂醇等高级醇；聚乙二醇(例如聚乙二醇(macrogol)4000等)；丙二醇、甘油、二丙二醇、1,3-丁二醇、浓甘油等多元醇；单油酸酯、硬脂酸甘油酯等脂肪酸酯类等。进而，也可以添加助溶剂、无机填充剂、保湿剂、防腐剂、增稠剂、抗氧化剂及清凉剂等药学上容许的经皮吸收剂用添加剂。

[0286] 此外，经皮吸收剂也可为将含有GGA的涂布剂层与支撑该涂布剂层的支撑体一体化而得到的贴剂(巴布剂)。巴布剂的制备方法已经为人所熟知，例如可以利用日本药典中记载的公知方法来制备。

[0287] 作为巴布剂，也可列举通过将涂布剂层以使GGA浓度逐层增大的方式进行多层层压来确保GGA的缓释性的巴布剂。

[0288] 此外，作为经皮吸收剂，还可列举含有内包有GGA的乳化粒子的涂布剂。此种涂布剂可以通过将GGA与表面活性剂(磷脂质、非离子性表面活性剂等)、水及油性基剂一起搅拌混合而得到。作为油性基剂，可列举上述例示的烃类、高级脂肪酸、高级醇、多元醇及脂肪酸酯类等。

[0289] 此外，作为经皮吸收剂，还可列举使GGA悬浮液以微小粒子的形式分散于疏水性聚合物中而得到的制剂。作为疏水性聚合物，对其并无限定，例如可列举聚乳酸。

[0290] 经皮吸收剂优选在GGA的基础上含有以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分。即，经皮吸收剂优选含有GGA与其他成分的组合作为预防、改善或治疗视网膜疾病的有效成分。以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0291] 作为这样的组合，对其并无限定，例如可列举：GGA与前列素类药剂的组合(GGA与拉坦前列素、GGA与曲伏前列素、GGA与他氟前列素等)、GGA与前列腺酰胺类药剂的组合(GGA与比马前列素等)、GGA与前列酮类药剂的组合(GGA与异丙基乌诺前列酮)之类的GGA与前列腺素F2α衍生物的组合；GGA与β阻断药的组合(GGA与马来酸噻吗洛尔、GGA与凝胶化噻吗洛尔、GGA与盐酸卡替洛尔、GGA与凝胶化卡替洛尔等)、GGA与β1阻断药的组合(GGA与盐酸倍他洛尔等)、GGA与αβ阻断药的组合(GGA与盐酸左布诺洛尔、GGA与尼普地洛、GGA与盐酸布那唑嗪等)、GGA与α2阻断药的组合(GGA与溴莫尼定酒石酸盐)之类的GGA与交感神经阻断药的组合；GGA与盐酸匹鲁卡品、GGA与溴地斯的明之类的GGA与副交感神经激动药的组合；GGA与肾上腺素、GGA与肾上腺素酒石酸氢盐、GGA与盐酸地匹福林之类的GGA与交感神经激动药的组合；GGA与多佐胺盐酸盐、GGA与布林佐胺之类的GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合；GGA与SNJ-1656、GGA与K-115之类的GGA与ROCK(Rho-associated coiled coil forming protein kinase，Rho-相关螺旋卷曲形成蛋白激酶)的特异性抑制剂的组合；GGA与洛美利嗪盐酸盐之类的GGA与钙拮抗剂的组合；GGA与DE-117之类的GGA与EP2促效剂的组合；GGA与OPA-6566之类的GGA与腺苷A2a受体激动药的组合；GGA与VEGF适体的组合(GGA与哌加他尼钠)、GGA与VEGF抑制剂的组合(GGA与兰尼单抗、GGA与贝伐单抗)之类的GGA与老年黄斑变性症治疗剂的组合等。

[0292] 其中，从使视网膜疾病的预防、改善、治疗效果非常高的方面考虑，优选GGA与前列腺素F2α衍生物的组合、以及GGA与交感神经阻断药的组合(尤其是GGA与β阻断药的组合)。

[0293] 在经皮吸收剂中可以配合除视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。作为这样的药理活性成分或生理活性成分，例如可列举解充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分等。

[0294] 经皮吸收剂中的GGA的含量相对于制剂的总量优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。此外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0295] 作为经皮吸收剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001重量％～约80重量％、约0.001重量％～约60重量％、约0.001重量％～约50重量％、约0.01重量％～约
80重量％、约0.01重量％～约60重量％、约0.01重量％～约50重量％、约0.1重量％～约80重量％、约0.1重量％～约60重量％、约0.1重量％～约50重量％。

[0296] 在经皮吸收剂中，添加剂及除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0297] (5)栓剂

[0298] 栓剂可以通过将GGA与如下的药学上容许的基剂配合并利用例如日本药典记载的方法的公知方法来制备，所述药学上容许的基剂为：聚羧乙烯及聚卡波非之类的丙烯酸类高分子；羟丙基纤维素及羟丙基甲基纤维素之类的纤维素类高分子；海藻酸钠及壳聚糖之类的天然高分子；及脂肪酸蜡等。

[0299] 在栓剂中可以配合如下的药学上容许的栓剂用添加剂：苯甲酸钠、山梨酸钾及对羟基苯甲酸酯之类的防腐剂；盐酸、柠檬酸及氢氧化钠之类的pH调节剂；甲硫氨酸之类的稳定剂等。

[0300] 栓剂优选在GGA的基础上含有以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分。即，栓剂优选含有GGA与其他成分的组合作为预防、改善或治疗视网膜疾病的有效成分。以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0301] 作为这样的组合，对其并无限定，例如可列举：GGA与前列素类药剂的组合(GGA与拉坦前列素、GGA与曲伏前列素、GGA与他氟前列素等)、GGA与前列腺酰胺类药剂的组合(GGA与比马前列素等)、GGA与前列酮类药剂的组合(GGA与异丙基乌诺前列酮)之类的GGA与前列腺素F2α衍生物的组合；GGA与β阻断药的组合(GGA与马来酸噻吗洛尔、GGA与凝胶化噻吗洛尔、GGA与盐酸卡替洛尔、GGA与凝胶化卡替洛尔等)、GGA与β1阻断药的组合(GGA与盐酸倍他洛尔等)、GGA与αβ阻断药的组合(GGA与盐酸左布诺洛尔、GGA与尼普地洛、GGA与盐酸布那唑嗪等)、GGA与α2阻断药的组合(GGA与溴莫尼定酒石酸盐)之类的GGA与交感神经阻断药的组合；GGA与盐酸匹鲁卡品、GGA与溴地斯的明之类的GGA与副交感神经激动药的组合；GGA与肾上腺素、GGA与肾上腺素酒石酸氢盐、GGA与盐酸地匹福林之类的GGA与交感神经激动药的组合；GGA与多佐胺盐酸盐、GGA与布林佐胺之类的GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合；GGA与SNJ-1656、GGA与K-115之类的GGA与ROCK(Rho-associated coiled coil forming protein kinase，Rho-相关螺旋卷曲形成蛋白激酶)的特异性抑制剂的组合；GGA与洛美利嗪盐酸盐之类的GGA与钙拮抗剂的组合；GGA与DE-117之类的GGA与EP2促效剂的组合；GGA与OPA-6566之类的GGA与腺苷A2a受体激动药的组合；GGA与VEGF适体的组合(GGA与哌加他尼钠)、GGA与VEGF抑制剂的组合(GGA与兰尼单抗、GGA与贝伐单抗)之类的GGA与老年黄斑变性症治疗剂的组合等。

[0302] 其中，从使视网膜疾病的预防、改善、治疗效果非常高的方面考虑，优选GGA与前列腺素F2α衍生物的组合、以及GGA与交感神经阻断药的组合(尤其是GGA与β阻断药的组合)。

[0303] 在栓剂中可以配合除视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。作为这样的药理活性成分或生理活性成分，例如可列举解充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分等。

[0304] 栓剂中的GGA的含量相对于制剂的总量优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。此外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0305] 作为栓剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001重量％～约80重量％、约0.001重量％～约60重量％、约0.001重量％～约50重量％、约0.01重量％～约80重量％、约0.01重量％～约60重量％、约0.01重量％～约50重量％、约0.1重量％～约80重量％、约0.1重量％～约60重量％、约0.1重量％～约50重量％。

[0306] 在栓剂中，添加剂及除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0307] (6)吸入剂

[0308] 作为吸入剂，可列举粉末吸入剂、液体吸入剂及气溶胶剂等。它们的制备方法已经为人所熟知。

[0309] 粉末吸入剂例如可以通过利用常规方法将GGA微粉碎并根据需要混合乳糖等赋形剂来制备。粉末吸入剂可以使用Spinhaler(注册商标名)等吸入用器具进行给用。

[0310] 液体吸入剂例如可以通过在纯化水或注射用蒸馏水等药学上容许的载体中添加GGA及根据需要的药学上容许的液体吸入剂用添加剂并搅拌溶解来制备。作为药学上容许的液体吸入剂用添加剂，可列举：氯化钠之类的等渗剂；硼酸缓冲剂及磷酸缓冲剂之类的缓冲剂；苯扎氯铵之类的防腐剂；羧基乙烯基聚合物之类的增稠剂等。液体吸入剂可以使用Nebulizer(注册商标名)等吸入器具进行给用。

[0311] 气溶胶剂例如可以通过利用常规方法将GGA微粉碎并根据需要加入分散剂并在冷却下将其与喷射剂一起填充于喷雾容器中来制备。作为喷射剂，例如可列举：液化氢氟烷烃(HFA134a(1,1,1,2-四氟乙烷；CH2FCF3)、HFA227(1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷：CF3-CHF-CF3)等)等。作为分散剂，例如可列举Miglyol 812(商标：Dynamit Nobel公司制)等中链脂肪酸三甘油酯及大豆卵磷脂等。

[0312] 吸入剂优选在GGA的基础上含有以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分。即，吸入剂优选含有GGA与其他成分的组合作为预防、改善或治疗视网膜疾病的有效成分。以与GGA不同的作用机制预防或治疗视网膜疾病的成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0313] 作为这样的组合，对其并无限定，例如可列举：GGA与前列素类药剂的组合(GGA与拉坦前列素、GGA与曲伏前列素、GGA与他氟前列素等)、GGA与前列腺酰胺类药剂的组合(GGA与比马前列素等)、GGA与前列酮类药剂的组合(GGA与异丙基乌诺前列酮)之类的GGA与前列腺素F2α衍生物的组合；GGA与β阻断药的组合(GGA与马来酸噻吗洛尔、GGA与凝胶化噻吗洛尔、GGA与盐酸卡替洛尔、GGA与凝胶化卡替洛尔等)、GGA与β1阻断药的组合(GGA与盐酸倍他洛尔等)、GGA与αβ阻断药的组合(GGA与盐酸左布诺洛尔、GGA与尼普地洛、GGA与盐酸布那唑嗪等)、GGA与α2阻断药的组合(GGA与溴莫尼定酒石酸盐)之类的GGA与交感神经阻断药的组合；GGA与盐酸匹鲁卡品、GGA与溴地斯的明之类的GGA与副交感神经激动药的组合；GGA与肾上腺素、GGA与肾上腺素酒石酸氢盐、GGA与盐酸地匹福林之类的GGA与交感神经激动药的组合；GGA与多佐胺盐酸盐、GGA与布林佐胺之类的GGA与碳酸脱氢酶抑制剂的组合；GGA与SNJ-1656、GGA与K-115之类的GGA与ROCK(Rho-associated coiled coil forming protein kinase，Rho-相关螺旋卷曲形成蛋白激酶)的特异性抑制剂的组合；GGA与洛美利嗪盐酸盐之类的GGA与钙拮抗剂的组合；GGA与DE-117之类的GGA与EP2促效剂的组合；GGA与OPA-6566之类的GGA与腺苷A2a受体激动药的组合；GGA与VEGF适体的组合(GGA与哌加他尼钠)、GGA与VEGF抑制剂的组合(GGA与兰尼单抗、GGA与贝伐单抗)之类的GGA与老年黄斑变性症治疗剂的组合等。

[0314] 其中，从使视网膜疾病的预防、改善或治疗效果非常高的方面考虑，优选GGA与前列腺素F2α衍生物的组合、以及GGA与交感神经阻断药的组合(尤其是GGA与β阻断药的组合)。

[0315] 在吸入剂中可以配合除视网膜疾病的预防、改善或治疗成分以外的药理活性成分或生理活性成分。作为这样的药理活性成分或生理活性成分，例如可列举解充血成分、眼肌调节药成分、抗炎药成分或收敛药成分、抗组胺药成分或抗过敏药成分、维生素类、氨基酸类、抗菌药成分或杀菌药成分等。

[0316] 吸入剂中的GGA的含量相对于制剂的总量优选为0.001重量％以上，更优选为0.01重量％以上，进一步优选为0.1重量％以上。此外，优选为80重量％以下，更优选为60重量％以下，进一步优选为50重量％以下。若为上述范围，则可以充分得到视网膜疾病的预防、改善或治疗效果。

[0317] 作为吸入剂中的GGA的含量，相对于制剂的总量，可列举约0.001重量％～约80重量％、约0.001重量％～约60重量％、约0.001重量％～约50重量％、约0.01重量％～约80重量％、约0.01重量％～约60重量％、约0.01重量％～约50重量％、约0.1重量％～约80重量％、约0.1重量％～约60重量％、约0.1重量％～约50重量％。

[0318] 在吸入剂中，添加剂、及除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分可以单独使用1种或组合使用2种以上。

[0319] 试剂盒

[0320] 本发明的药剂可以是由包含全部成分的单剂型的组合物构成的药剂，也可以是分开具有包含GGA的组合物和包含除GGA以外的药理活性成分或生理活性成分的组合物的试剂盒。此外，还可以是分开具有包含特定添加剂的组合物和包含GGA的组合物的试剂盒。在为试剂盒时，各组合物可以填充于不同的容器，或者也可以是填充于能够在使用时进行混合的容器中的使用时制备型组合物。在为试剂盒时，可以采用双剂型或三剂型等任意类型。

[0321] 在本发明的药剂为包含GGA的组合物与包含其他成分的组合物的试剂盒时，在各组合物填充于不同容器的试剂盒的情况以及使用时制备型的试剂盒的情况下，上述说明的各制剂的GGA含量均为相对于将各组合物混合后的总量的比率。

[0322] 对象疾病

[0323] 本发明作为对象的视网膜疾病只要是产生构成视网膜的细胞的变性、损伤或细胞死亡的疾病、或者由构成视网膜的细胞的变性、损伤或细胞死亡引起的疾病即可，例如可列举青光眼、视网膜色素变性、老年黄斑变性、糖尿病性视网膜病、视网膜脱离、糖尿病性黄斑病变、高血压性视网膜病、视网膜血管阻塞(视网膜动脉阻塞；视网膜中心静脈阻塞、视网膜中心静脈分支阻塞等视网膜静脈阻塞等)、视网膜动脉硬化症、视网膜裂孔、视网膜圆形裂孔、黄斑圆形裂孔、眼底出血、玻璃体后脱离、色素性静脈旁视网膜脉络膜萎缩、回旋状视网膜脉络膜萎缩、无脉络膜症、晶状视网膜病、白点状视网膜病、角膜营养不良、锥体营养不良、中心性晕轮状脉络膜营养不良、多英氏蜂窝状视网膜营养不良、卵黄状黄斑营养不良、黄斑囊样水肿、隐性黄斑营养不良、斯特格病、视网膜分离症、中心性浆液性视网膜脉络膜病变(中心性视网膜病)、脊髄小脑变性症第七型、家族性渗出性玻璃体视网膜病、增强蓝锥细胞综合征、视网膜血管样条纹症、常染色体显性视神经萎缩、常染色体显性玻璃膜疣、家族性玻璃膜疣、急性带状隐匿性外层视网膜病、癌症相关的视网膜病、光损伤、缺血性视网膜病、炎症诱导性视黄醛变性疾病等。

[0324] 其中，青光眼、视网膜色素变性、老年黄斑变性、糖尿病性视网膜病为优选的对象疾病，青光眼为更优选的对象疾病。

[0325] 此外，本发明可以以构成视网膜的任意细胞受到损伤的疾病、或由构成视网膜的任意细胞的损伤引起的疾病作为对象。作为视网膜构成细胞，可列举视网膜神经节细胞、无长突细胞、水平细胞、米勒神经胶质细胞、双极细胞、视网膜视细胞(锥体、杆体)及视网膜色素上皮细胞等。特别适用于观察到视网膜神经节细胞或视网膜色素上皮细胞的损伤的疾病或者由这些细胞的损伤引起的疾病。

[0326] 此外，本发明还以构成视网膜的层、即内界膜、神经纤维层、神经节细胞层、内网状膜、内颗粒层、外网状层、外颗粒层、外界膜、视细胞层及视网膜色素上皮层中的任意层受到损伤的疾病、或由这些层中的任意层的损伤引起的疾病作为对象。尤其是以神经节细胞层、内颗粒层或外颗粒层的损伤疾病作为优选的对象。

[0327] 成为本发明的对象的患者为上述视网膜疾病的患者。

[0328] 如上所述，本发明的药剂通过使GGA保护视网膜细胞、即促进视网膜细胞的存活、或者抑制视网膜细胞的变性、损伤或死亡来预防、改善或治疗视网膜疾病。

[0329] 因此，本发明包含含有GGA作为有效成分的视网膜细胞保护剂、视网膜细胞存活促进剂、或者视网膜细胞的变性、损伤或死亡的抑制剂，该GGA，

[0330] (a)是全反式体与单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的混合物，且该混合物含有80重量％以上的全反式体；

[0331] (b)仅由全反式体构成；

[0332] (c)仅由5Z单顺式体构成；或者

[0333] (d)是全反式体与单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的混合物，且该混合物中单顺式体的比率非常高。

[0334] 在这些药剂中，适合的视网膜细胞的种类如上所述。此外，制剂中的成分、其使用量、制剂的性状、剂型等如针对本发明的视网膜疾病的预防、改善或治疗剂所说明的那样。

[0335] 在本发明中，“预防”包括发病的避免、延迟或发病率的降低，“改善”及“治疗”包括症状的减轻、症状发展的抑制及治愈或痊愈。

[0336] 使用方法

[0337] ＜眼科用制剂＞

[0338] 在本发明的药剂为滴眼剂时，只要将以上述浓度含有GGA的滴眼剂以例如每次约1滴～约2滴、每天约1次～约5次、优选每天约1次～约3次的方式进行滴眼即可。

[0339] 此外，在本发明的药剂为洗眼剂时，只要将以上述浓度含有GGA的洗眼剂以例如每次使用约1mL～约20mL、每天约1次～约10次、优选每天约1次～约5次的方式进行洗眼即可。

[0340] 此外，在本发明的药剂为眼软膏时，只要将以上述浓度含有GGA的眼软膏以例如每次约0.001g～约5g、每天约1次～约5次、优选每天约1次～约3次的方式涂布于眼即可。

[0341] 此外，在本发明的药剂为眼内注射剂时，只要将以上述浓度含有GGA的注射剂以每次约0.005mL～约1mL、1～14天约1次～约3次、优选1次的方式进行注入即可。

[0342] 此外，在本发明的药剂为角膜接触镜用液(洗涤液、保存液、消毒液、多功能护理液、包装护理液)、移植用角膜等摘除的眼组织的保存剂或手术时的灌注液时，只要将以上述浓度含有GGA的组合物按照这些制剂的通常的用法用量进行使用即可。

[0343] 此外，在本发明的药剂为缓释性角膜接触镜制剂时，只要将含有上述量的GGA的角膜接触镜以例如1～14天约1次～约3次、优选1次的方式进行换新即可。

[0344] 此外，在本发明的药剂为缓释性眼内植入剂时，只要在植入含有上述量的GGA的植入剂后约1天～约14天后，根据需要植入新的植入剂即可。

[0345] 在本发明的药剂为眼科用组合物时，GGA的每天给药量优选为50ng以上，更优选为500ng以上，进一步优选为5μg以上。此外，GGA的每天给药量优选为50mg以下，更优选为20mg以下，进一步优选为10mg以下。

[0346] 在本发明的药剂为眼科用组合物时，作为GGA的每天给药量，可列举约50ng～约50mg、约50ng～约20mg、约50ng～约10mg、约500ng～约50mg、约500ng～约20mg、约500ng～约10mg、约5μg～约50mg、约5μg～约20mg、约5μg～约10mg。

[0347] ＜其他制剂＞

[0348] 在本发明的药剂为除眼科用制剂以外的剂型时，GGA的每天给药量优选为约0.1mg以上，更优选为约1mg以上，进一步优选为约5mg以上。此外，优选为约5000mg以下，更优选为约1000mg以下，进一步优选为约500mg以下。

[0349] 在本发明的药剂为除眼科用制剂以外的剂型时，作为GGA的每天给药量，可优选列举约0.1mg～约5000mg，更优选列举约1mg～约1000mg，进一步优选列举约5mg～约500mg。只要将上述每天给药量以例如每天分为约1～5次、优选每天分为约1～3次进行给用即可。

[0350] 给药时间根据疾病的种类、阶段、年龄、体重、性別、给药途径等而异，例如可以在约1天～30年的范围内进行适当选择。例如在青光眼、视网膜色素变性、老年黄斑变性及糖尿病性视网膜病等视网膜疾病时，存在能够在约1～20年、尤其是约1～10年这样短的给药期间内预防、改善或治疗视网膜疾病的情况。在本发明的眼科用组合物利用视网膜保护作用来抑制视网膜疾病的发展时，也有连续给药的情况。

[0351] 本发明包括：

[0352] (i)一种预防、改善或治疗视网膜疾病的方法，其包括对视网膜疾病患者给用有效量的下述(a)、(b)、(c)或(d)的GGA来预防、改善或治疗视网膜疾病的步骤；

[0353] (ii)一种抑制视网膜细胞的变性、损伤或死亡的方法，其包括对视网膜疾病患者给用有效量的下述(a)、(b)、(c)或(d)的GGA来抑制视网膜细胞的变性、损伤或死亡的步骤；以及

[0354] (iii)一种视网膜细胞的保护方法，其包括对视网膜疾病患者给用有效量的下述(a)、(b)、(c)或(d)的GGA来保护视网膜细胞的步骤，

[0355] (a)是全反式体与单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的混合物且该混合物含有80重量％以上的全反式体的GGA；

[0356] (b)仅由全反式体构成的GGA；

[0357] (c)仅由5Z单顺式体构成的GGA；

[0358] (d)是全反式体与单顺式体(尤其是5Z单顺式体)的混合物且该混合物中的单顺式体的比率非常高的GGA。

[0359] GGA只要以上述说明的本发明的各制剂的形态进行给用即可。给用方法根据剂型而异，可列举：滴眼、洗眼、向眼睛的涂布、向眼睛的喷雾、向眼睛的植入、角膜接触镜的配戴、注射(向玻璃体内等眼内的注射、静脈注射、皮下注射、肌内注射)、口服、经皮、向直肠的插入、吸入等。在眼科用药剂的情况下，只要对眼睛给用即可。

[0360] 对象疾病、对象患者、视网膜细胞的种类如在说明本发明的药剂的项目中所叙述的那样。

[0361] 实施例

[0362] 以下，列举实施例对本发明更详细地进行说明，但本发明并不受这些实施例的限定。

[0363] (1)香叶基香叶基丙酮的制备

[0364] 购入市售的替普瑞酮(全反式体:5Z单顺式体＝重量比3:2)(和光纯药公司)，利用硅胶柱色谱法纯化全反式体。

[0365] 作为具体的条件，将硅胶(PSQ60B，富士硅化学制)填充到玻璃制管中，利用流动相(正己烷:乙酸乙酯＝9:1)进行分级纯化。分级后，将各级分进行浓缩及减压干燥，再分别利用GC及1H-NMR(溶剂：氘代氯仿、内标：四甲基硅烷)确认全反式体的纯化度及结构(收率为约20％)。

[0366] ＜GC测定条件＞

[0367] 色谱柱：DB-1(J&Wscientific、0.53mm×30m、膜厚1.5μm)

[0368] 柱温：200℃→5℃/分钟→300℃(10分钟)

[0369] 气化室温度：280℃

[0370] 检测器温度：280℃

[0371] 载气：氦气

[0372] 氢气压力：60kPa

[0373] 空气压力：50kPa

[0374] 补充气体压力：75kPa(氮气)

[0375] 总流量：41mL/分钟

[0376] 色谱柱流量：6.52mL/分钟

[0377] 线速度：58.3cm/秒

[0378] 分流比：5:1

[0379] 注入量：注入0.1g/100mL(乙醇溶液)的试样1μL

[0380] 将市售的替普瑞酮和按照上述方式纯化后的全反式体以任意比率进行混合，由此制备各重量比(全反式体:5Z单顺式体＝重量比7:3、8:2、9:1等)的GGA。由于无法确认基于混合的稳定性，因此在使用时进行制备。

[0381] (2)保护视网膜神经细胞免受低氧、低葡萄糖诱导性的缺血样细胞死亡的效果的评价

[0382] 青光眼的视野损伤的发展与因视神经附近的缺血所致的视神经节细胞(RGC)死亡有关(日药理志(Folia Pharmacol.Jpn.)128，255～258(2006))。使用作为从大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤建立的代表性的神经细胞株并作为RGC的功能评价模型细胞使用的(J Neurosci Res.2000 May 15；60(4):495-503.)PC12，对GGA保护细胞免受低氧、低葡萄糖诱导性的缺血样细胞死亡的效果进行了试验。

[0383] (评价方法)

[0384] 按照以下方式制备受试物质。即，受试物质为以重量比10:0、8:2、6:4及0:10含有全反式体和5Z单顺式体的4种GGA。称量各GGA 100mg、作为抗氧化物质的乙酸DL-α-生育酚(和光纯药工业)0.25mg，溶解于100％的乙醇789mg中，将除GGA以外的成分按照同样方式制备，将所得物作为基剂。将溶解于100％的乙醇789mg中的10:0、8:2及6:4的GGA以以使添加了10％(v/v)马血清(DS Pharma Biomedical)、5％(v/v)胎牛血清(第一化学药品)的高葡萄糖浓度(4.5g/L)的杜尔贝克改良的Eagle培养基(DMEM)中实质上含有30μM全反式体的方式进行校正后的浓度进行稀释，将仅含有5Z单顺式体的0:10的GGA稀释成30μM。对于基剂，以与制备全反式体与5Z单顺式体的重量比为6:4的GGA时同样的稀释倍率进行稀释。

[0385] 将PC12(从DS Pharma Biomedical购得)以每孔2.0×104个细胞的方式在涂布有胶原IV的96孔微孔板(IWAKI)上接种各为100μL的细胞，利用上述DMEM在37℃、5％CO2的条件下培养48小时。

[0386] 在培养48小时后，除去细胞培养上清，更换为预先制备好的含有GGA的DMEM，在37℃、5％CO2的条件下培养2小时。在培养2小时后，更换为添加了2％马血清、1％胎牛血清的低葡萄糖浓度(1.0g/L)的DMEM，作为37℃、5％CO2、低氧条件，使用Anaeropack 5％(三菱瓦斯化学)，并变更为0％O2，培养8小时。将利用添加了2％(v/v)马血清、1％(v/v)胎牛血清的高葡萄糖浓度(4.5g/L)的DMEM在37℃、5％CO2、通常的氧浓度下培养8小时后的细胞作为未处理组。

[0387] (试验结果)

[0388] 在培养8小时后，对各孔各添加100μL的等量混合有活细胞检测试剂Cell Titer-Glo(Promega)和PBS的混合液，用光度计(GloMax；Promega制)测定活细胞内与ATP反应而生成的发光量。关于GGA保护细胞免受由过氧化氢所致的氧化应激的效果，通过基于实际测定的发光量并按照下式计算细胞存活率来进行评价。

[0389] 细胞存活率(％)＝100×[(基剂或GGA处理组的发光量)/(未处理组的发光量)][0390] 结果如图1所示。由图1可知，GGA处理组在任意一种重量比下均显示出比基剂处理组显著高的细胞存活率。进而，全反式体与5Z单顺式体的重量比为10:0、8:2及0:10的GGA均具有比6:4的GGA显著高的细胞保护效果(基于n＝10、＊P＜0.05、＊＊P＜0.01、Tukey-kramer检验。另外，在8:2、10:0及0:10之间未观察到显著差异)。

[0391] (3)使用来源于大鼠的视网膜神经节细胞(RGC)的培养体系的神经突起伸长诱导效果的评价

[0392] 青光眼中的视野损伤的发展与因视神经附近的缺血所致的视神经节细胞(RGC)死亡有关(日药理志(Folia Pharmacol.Jpn.)128，255～258(2006))。因此，使用被广泛用作研究青光眼等视神经疾病的工具之一的来源于大鼠的视网膜神经培养体系(Current protocols in Neuroscience 3.22.1-3.22.10,October 2010)，对GGA的神经突起伸长诱导效果进行了试验。

[0393] (评价方法)

[0394] 以颈椎脱臼的方式使4日龄Wistar大鼠(日本SLC株式会社)安乐死，并摘除眼球。将所摘除的眼球在70％乙醇中浸渍10秒后，移至含有100U/mL的青霉素和100μg/mL的链霉素的汉克平衡盐溶液中，在实体显微镜下用手术用剪刀和镊子除去角膜、虹膜、水晶体及玻璃体，摘除视网膜组织。将所摘除的视网膜组织移至装有5mL神经细胞培养用基础培养基(Neurobasal、Invitrogen制)的离心管中，该神经细胞培养用基础培养基含有100U/mL的青TM
霉素、100μg/mL的链霉素、神经细胞培养用添加物(B27 -Supplement、Invitrogen制)、1μM L-半胱氨酸(协和发酵生物科技)及15U/mL的木瓜蛋白酶(Sigma Aldrich)，在37℃下孵育
30分钟。在30分钟后，除去上清，用含有100U/mL的青霉素、100μg/mL的链霉素、B27TM-Supplement的Neurobasal洗涤2次。洗涤后，加入2mL的Neurobasal，用经过干热灭菌的巴斯德吸管(Hilgenberg)进行移液操作，由此使组织成为小细胞块，并将其移至预先准备好的
50mL的Neurobasal中。以900×g离心5分钟，除去上清后，用6mL的Neurobasal再次使细胞悬浮，制备细胞悬浮液。将细胞悬浮液通过40μm尼龙网的细胞滤网(日本BD)，将凝聚的细胞块除去后，将细胞接种至涂布有聚-D-赖氨酸/层粘连蛋白的6孔板(日本BD)上，在37℃、5％CO2的条件下进行培养。

[0395] 受试物质为全反式体及以6:4的重量比含有全反式体与5Z单顺式体的2种GGA。称量各GGA 100mg、作为抗氧化物质的乙酸DL-α-生育酚(和光纯药工业)0.25mg，溶解于100％的乙醇789mg中，将除GGA以外的成分按照同样方式制备，将所得物作为基剂。将溶解于100％的乙醇789mg中的10:0及6:4的GGA以以使实质上含有3μM全反式体的方式进行校正后的浓度进行稀释，对于基剂，以与制备6:4的GGA时同样的稀释倍率进行稀释，在自细胞接种
2小时后添加于细胞培养上清中，在37℃、5％CO2的条件下培养48小时。

[0396] (结果)

[0397] 在培养48小时后除去细胞培养上清，使用4％多聚甲醛-磷酸缓冲液(和光纯药工业)及100％甲醇(和光纯药工业)，将细胞在室温下固定30分钟。用磷酸缓冲液(PBS、Kohjin Bio制)洗涤细胞后，在含有2％(w/v)牛血清白蛋白(Sigma Aldrich)、0.05％(v/v)Tween20(Sigma Aldrich)的PBS中于室温下封闭30分钟。30分钟后，利用PBS制备βIII tubulin抗体(Promega)的1000倍稀释液，对各孔各添加1mL，之后在室温下孵育2小时。2小时后除去抗体稀释液，用PBS洗涤3次后，利用PBS制备Alexa Fluor 488 Goat Anti-mouse抗体(Invitrogen)的1000倍稀释液，对各孔各添加1mL后，在室温下孵育1小时。1小时后除去抗体稀释液，用PBS洗涤3次后，对各孔各添加PBS 3mL，利用成像细胞仪(In Cell Analyzer 
1000、GE Healthcare Bioscience制)，对各孔的任意4点进行观察(激发波长475nm、荧光波长535nm)，计算出经过荧光染色的RGC的神经突起的长度(μm)的平均值。

[0398] 结果如图2所示。由图2可知，全反式体与5Z单顺式体的重量比为10:0的GGA处理组显示出比全反式体与5Z单顺式体的重量比为6:4的GGA处理组以及基剂处理组更显著的神经突起诱导效果(基于n＝4、＊P＜0.05、＊＊P＜0.01、Tukey-kramer检验)。

[0399] 此外，图3中示出经过荧光染色的大鼠RGC的代表性的观察图像。可知，10:0的GGA处理组具有比6:4的GGA的处理组更显著的神经突起诱导效果。

[0400] (4)保护视网膜色素上皮细胞免受由过氧化氢所致的氧化应激的效果的评价[0401] 氧化应激与眼科疾病的关系已经被广泛报道，除青光眼、白内障以外，还指出了在视网膜中氧化应激与由糖尿病、高血压、高脂血症等引起的视网膜疾病、老年黄斑变性、早产儿视网膜病、视网膜血管阻塞症、视网膜光损伤等的关系(日眼会志112，22-29(2008))。在视网膜中，视网膜色素上皮处于容易产生活性氧的环境(Invest Opthalmol Vis Sci.2006 July 47(7):3164-3177.)。使用来源于人的视网膜色素上皮细胞株ARPE-19，对GGA保护细胞免受由过氧化氢所致的氧化应激的效果进行了试验。

[0402] (评价方法)

[0403] 按照以下方式制备以10:0、8:2及6:4的重量比含有全反式体和5Z单顺式体的3种GGA作为受试物质。即，称量各GGA 100mg、作为抗氧化物质的乙酸DL-α-生育酚(和光纯药工业)0.25mg，溶解于100％的乙醇789mg中，将除GGA以外的成分按照同样方式制备，将所得物作为基剂。将溶解于100％的乙醇中的10:0、8:2及6:4的GGA以以使添加了10％(v/v)胎牛血清(第一化学药品)的杜尔贝克改良的Eagle培养基/Ham’s F12等比混合液体培养基(DMEM/F-12、Invitrogen制)中实质上含有280μM全反式体的方式进行校正后的浓度进行稀释。对于基剂，以与制备6:4的GGA时同样的稀释倍率进行稀释。将以上的稀释液作为受试液。

[0404] 将ARPE-19(购自ATCC)以每孔1.5×104个细胞的方式在96孔微孔板(CORNING)上接种各为100μL的细胞，利用上述DMEM/F-12在37℃、5％CO2的条件下培养48小时。

[0405] 在培养48小时后，除去细胞培养上清，更换为预先制备好的受试液，在37℃、5％CO2的条件下培养14小时。在培养即将要结束之前，将精密分析用过氧化氢(和光纯药工业)添加到DMEM/F-12中，制备添加有750μM过氧化氢的DMEM/F-12。培养14小时后，除去细胞培养上清，添加各200μL磷酸缓冲液(PBS、Kohjin Bio制)。立即除去PBS，更换为预先制备好的添加有过氧化氢的DMEM/F-12，在37℃、5％CO2的条件下培养2小时。将更换为不含有过氧化氢的DMEM/F-12的组作为未处理组。

[0406] (结果)

[0407] 在培养2小时后除去细胞培养上清，各添加PBS 200μL，立即除去PBS。对各孔各添加100μL的等量混合有活细胞检测试剂Cell Titer-Glo(Promega)和PBS的混合液，利用光度计(GloMax；Promega制)测定活细胞内与ATP反应而生成的发光量。关于GGA保护细胞免受由过氧化氢所致的氧化应激的效果，通过基于实际测定的发光量并按照下式计算细胞存活率来进行评价。

[0408] 细胞存活率(％)＝100×[(基剂或GGA处理组的发光量)/(未处理组的发光量)][0409] 结果如图4所示。由图4可知，GGA处理组在任意一种重量比下均显示出比基剂处理组更高的细胞存活率。进而，10:0及8:2的GGA均具有比基剂处理组显著高的细胞存活率(基于n＝3、＊P＜0.05、＊＊＊P＜0.001、Tukey-kramer检验)。

[0410] (5)抑制自视网膜色素上皮细胞产生IL-8的效果的评价

[0411] 已知在老年黄斑变性中玻璃膜疣会蓄积在视网膜色素上皮下，玻璃膜疣会吸引巨噬细胞。巨噬细胞分泌TNF-α，TNF-α作用于视网膜色素上皮或周边组织时，细胞进一步产生各种细胞因子而引起炎症(Mol Vis.200814:2292-303.)。白介素-8(IL-8)与中性粒细胞的迁移有关，其是使炎症扩大的代表性的细胞因子。使用来源于人的视网膜色素上皮细胞株ARPE-19，对GGA抑制因TNF-α产生IL-8的效果进行了试验。

[0412] (评价方法)

[0413] 按照以下方式制备全反式体、以6:4的重量比含有全反式体与5Z单顺式体的2种GGA作为受试物质。即，称量各GGA 100mg、作为抗氧化物质的乙酸DL-α-生育酚0.25mg，溶解于100％的乙醇789mg中，将除GGA以外的成分按照同样方式制备，将所得物作为基剂。将溶解于100％的乙醇789mg中的全反式体及全反式体与5Z单顺式体的重量比为6:4的GGA以以使DMEM/F-12中实质上含有50μM全反式体的方式进行校正后的浓度进行稀释。对于基剂，以与制备全反式体与5Z单顺式体的重量比为6:4的GGA时同样的稀释倍率进行稀释。将以上的稀释液作为受试液。

[0414] 将ARPE-19以每孔2.5×104个细胞的方式在96孔微孔板(CORNING)上接种各为100μL的细胞，利用添加了10％(v/v)胎牛血清的DMEM/F-12在37℃、5％CO2的条件下培养24小时。

[0415] 在培养24小时后除去细胞培养上清，对各孔各添加200μL的预先制备好的受试液，在37℃、5％CO2的条件下培养16小时。对于未处理组，同样地添加DMEM/F-12，并进行培养。在培养即将要结束之前，利用DMEM/F-12将重组人TNF-α(R&D Systems)制备为10ng/ml。培养16小时后，将预先制备好的包含TNF-α的DMEM/F-12各添加2μL至各孔的受试液中，在37℃、5％CO2的条件下培养4小时。对于未处理组，不添加TNF-α，并同样地进行培养。

[0416] (结果)

[0417] 在培养4小时后回收各150μL的细胞培养上清，在-80℃下保存。除去剩余的细胞培养上清，各添加200μL的PBS，立即除去PBS。对各孔各添加100μL的等量混合有活细胞检测试剂Cell Titer-Glo和PBS的混合液，利用光度计测定活细胞内与ATP反应而生成的发光量。基于实际测定的发光量，按照下式计算细胞存活率。

[0418] 细胞存活率(％)＝100×[(GGA处理组的发光量)/(基剂处理组的发光量)]

[0419] 使细胞培养上清恢复至室温，使用人CXCL8/IL-8 Quantikine ELISA试剂盒(R&D Systems)，对IL-8浓度进行定量。操作按照试剂盒附带的说明书来进行，用测定的吸光值除以细胞存活率来进行校正。吸光度的测定使用将测定波长设定为450nm且将校正波长设定为540nm的酶标仪(分子仪器公司制，VersaMax)(装置内温度20～25℃)。计算与校正后的测定值对应的IL-8浓度，减去作为背景值的未处理组的IL-8浓度，将所得的值作为各处理组的IL-8浓度。

[0420] 结果如图5所示。由图5可知，全反式体与5Z单顺式体的重量比为10:0的GGA(全反式体)处理组显示出比全反式体与5Z单顺式体的重量比为6:4的GGA处理组更显著的抑制IL-8产生的效果(基于n＝3、＊P＜0.05、Tukey-kramer检验)。

[0421] (6)保护视网膜神经节细胞免受由NMDA所致的神经损伤诱发作用的效果的评价[0422] 近年来，大量报道了作为谷氨酸的类似物的NMDA(N-甲基-D-天冬氨酸)是以阿尔茨海默病为代表的神经变性疾病的原因物质之一。在眼科领域中，认为NMDA与青光眼中观察到的视神经损伤有关(Brain Research Bulletin,81(2010)349-358)。因此，此次使用NMDA诱发青光眼模型大鼠对GGA的神经保护效果进行了评价。

[0423] 试验方法

[0424] 通过经口给药(试验例1)、玻璃体内给药(试验例2)、滴眼给药(试验例3)，对Sprague-Dawley(SD)大鼠预先给用全反式体、5Z单顺式体或替普瑞酮，之后，将5μL的NMDA给用至玻璃体内，由此诱发神经损伤。此外，在试验例2中，将作为阳性对照的市售的青光眼治疗用滴眼剂AIPHAGAN(商品名)以1天1次、5天的方式给用至玻璃体内。此外，各试验例中，将不含GGA或AIPHAGAN的基剂作为对照同样地进行了给药。

[0425] 试验例1～3的用法及用量如表1所示，并将各试验中使用的基剂的组成记载在表2中。

[0426] [表1]

[0427]

[0428] [表2]

[0429]g/100mL 试验例1 试验例2 试验例3
阿拉伯胶 5.000 - -
α-生育酚 0.200 - -
硼酸 - 1.300 1.300
硼砂 - 0.400 0.400
聚山梨醇酯80 - 2.000 2.000
POE硬化蓖麻油60 - 2.000 2.000
POE蓖麻油 - 0.100 0.100
二丁基羟基甲苯 - 0.005 0.005
纯化水 适量 适量 适量

[0430] 在给用NMDA 3天后摘除眼球，利用Half Karnovsky固定液固定24小时后，用石蜡进行包埋，切成薄片，制作经过苏木精-伊红(HE)染色后的病理组织切片。利用光学显微镜观察组织切片，测定视网膜的内网状层(IPL)的厚度(μm)，并以视网膜的内网状层(IPL)的厚度作为指标对由受试制剂产生的神经保护效果进行了评价。

[0431] 结果

[0432] 试验例1的结果如图6所示。由图6可知，在经口给药的情况下，全反式体及5Z单顺式体对由NMDA所致的神经损伤分别显示出比基剂更显著的神经保护效果(基于*p＜0.05、**＜0.01、dunnett多重比较检验)。另一方面，替普瑞酮(全反式体:5Z单顺式体的重量比为6:4)未显示显著的神经保护效果。

[0433] 试验例2的结果如图7所示。由图7可知，在玻璃体内给药的情况下，全反式体及5Z单顺式体对由NMDA所致的神经损伤显示出比基剂更显著的神经保护效果(基于***p<0.001、Tukey-kramer多重比较检验)。此外，全反式体与据称有神经保护效果的AIPHAGAN(商品名)滴眼液0.1％(千寿制药)相比，也显示出更显著优良的神经保护效果(基于*p<
0.05、Tukey-kramer多重比较检验)。

[0434] 此外，试验例2的组织切片的显微镜照片如图8所示。

[0435] 试验例3的结果如图9所示。由图9可知，在滴眼给药的情况下，全反式体对由NMDA所致的神经损伤显示出比基剂更显著的神经保护效果(基于*p<0.05、t检验)。

[0436] (7)抑制低温保存时的白浊的试验

[0437] 滴眼液的制备

[0438] 按照以下方式制备分别含有市售的替普瑞酮、各重量比(全反式体:5Z单顺式体＝重量比7:3、8:2、9:1等)的GGA及利用上述方法纯化的全反式体的滴眼剂。

[0439] 具体而言，在加热到65℃的表面活性剂(聚山梨醇酯80)中投入GGA或全反式体，在65℃的热水浴中搅拌溶解2分钟，再加入65℃的水，之后，混合搅拌各缓冲液，制成均匀溶液，利用盐酸和/或氢氧化钠调节pH及渗透压。将该溶液用孔径0.2μm的膜滤器(赛默飞世尔公司制造，瓶顶过滤器)进行过滤，制成澄清的无菌滴眼剂。

[0440] 将各滴眼剂的组成示于后文公开的表3～表8中。

[0441] 另外，在各操作中，在预先利用后述的HPLC确认到不会因GGA吸附于器具等而使含量降低后，制备无菌滴眼剂。

[0442] GGA浓度的确认方法

[0443] 以日本药典“替普瑞酮标准品(全反式体:5Z单顺式体＝重量比约6:4，一般财团法人医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団制)”或替普瑞酮(和光纯药公司)作为标准品，依据药食审查发第0412007号“替普瑞酮100mg/g细粒”中记载的溶出试验的测定条件，在以下的HPLC测定条件下，由5Z单顺式体的面积值(Ac)及全反式体的面积值(At)测定各滴眼剂中所含的GGA的浓度。另外，计算替普瑞酮(全反式体:5Z单顺式体＝重量比3:2)中的全反式体及5Z单顺式体的总量作为GGA含量。

[0444] ＜HPLC测定条件＞

[0445] 检测器：紫外吸光光度计(测定波长：210nm)

[0446] 色谱柱：YMC-Pack ODS-A(内径4.6mm、长度15cm、粒径3μm)

[0447] 柱温：30℃

[0448] 流动相：90％乙腈溶液

[0449] 流量：1.2～1.3mL/分钟(以5Z单顺式体、全反式体的顺序溶出)

[0450] 注入量：注入0.05g/100mL的试样5μL

[0451] 低温下的保存

[0452] 将制备的滴眼剂以满量(以无空隙的方式)填充到容量为10mL的透明玻璃制容器(日电理化硝子制)中，将其盖严后，在4℃下保存。对于刚制备后、在4℃下保存3天的保存品，利用玻璃制刻度移液管各分注0.2mL至96孔板(平底、聚苯乙烯制)上，利用酶标仪(分子仪器公司制，VersaMax)测定660nm(装置内温度20～25℃)的吸光度。参照JIS K0101(工业用水试验方法透射光浊度测定)，将各试样在660nm下的吸光度作为白浊的指标(浊度)。

[0453] 另外，试验操作快速进行，在预先确认到在4℃保管中及吸光度测定中未出现GGA含量降低后实施试验。

[0454] 将浊度一并示于下述表3～表6中。

[0455] [表3]

[0456]

[0457] [表4]

[0458]

[0459] [表5]

[0460]

[0461] [表6]

[0462]

[0463] 由表3～表6可知，通过使全反式体的比率为80重量％以上，可以显著抑制在4℃下保存时的白浊。

[0464] 将制备的滴眼剂以满量(以无空隙的方式)填充到容量为10mL的透明玻璃制容器(日电理化玻璃制)中，将其盖严后，在4℃下保存。对于在4℃下保存6天或14天的保存品，利用上述的方法测定660nm的吸光度，将其作为浊度。对各试样进行n＝4或n＝5的测定，利用Dunnett法进行与对照(水)的比较。

[0465] 将浊度及检验的结果一并示于以下的表7中。此外，将在4℃下保存14天的保存品的照片示于图10中(左：比较例10、右：实施例13)。

[0466] [表7]

[0467]

[0468] 由表7可知，通过使全反式体的比率为80重量％以上，可以显著抑制在4℃下保存时的白浊。

[0469] 将实施例7～12的结果从表5及表6摘录示于表8中。

[0470] [表8]

[0471]

[0472] 与含有硼酸缓冲剂的情况相比，含有磷酸缓冲剂时更能显著抑制低温保存时的白浊。

[0473] (8)抑制常温保存时的白浊的试验

[0474] 滴眼液的制备及GGA浓度的确认与“(7)抑制低温保存时的白浊的试验”同样地进行。但是，由于GGA浓度高，因此在滴眼液的制备时并未进行过滤。滴眼剂的组成如表9所示。

[0475] 将制备的滴眼剂以满量(以无空隙的方式)填充到容量为10mL的透明玻璃制容器(日电理化硝子制)中，将其盖严后，在室温(约25℃)下保存。对于保存3天的保存品，利用玻璃制刻度移液管分注0.2mL至96孔板(平底、聚苯乙烯制)上，利用酶标仪(分子仪器公司制，VersaMax)测定660nm(装置内温度20～25℃)的吸光度。参照JIS K0101(工业用水试验方法透射光浊度测定)，将各试样在660nm下的吸光度作为白浊的指标(浊度)。

[0476] 对各试样进行n＝4的测定，利用t-检验法进行比较例11与实施例13的对比、比较例12与实施例14的对比。结果如表9所示。

[0477] [表9]

[0478]

[0479] 由表9可知，在全反式体为较高浓度时，与替普瑞酮(全反式体:5Z单顺式体的重量比为6:4)相比，更显著地抑制了白浊。

[0480] (9)官能试验

[0481] 在加热到65℃的表面活性剂(聚山梨醇酯80、POE蓖麻油)中投入替普瑞酮或全反式体，在65℃的热水浴中搅拌溶解2分钟，再加入65℃的水，之后，混合搅拌各缓冲液，制成均匀溶液，利用盐酸和/或氢氧化钠调节pH及渗透压。将该溶液用孔径0.2μm的膜滤器(赛默飞世尔公司制造，瓶顶过滤器)进行过滤，制成澄清的无菌滴眼剂。将各滴眼剂的组成示于后文公开的表10中。将这些滴眼剂无菌填充于聚对苯二甲酸乙二醇酯制容器(8mL)中。

[0482] 对于这些滴眼剂，在未配戴角膜接触镜的状态下，将约30μL的滴眼剂滴眼于对刺激感敏感的9名健康志愿者(年龄33.8±6.6岁：男性8名、女性1名)，利用VAS法(Visual Analogue Scale(视觉模拟评分法)：视觉评价标尺)对刚滴眼后及滴眼3分钟后感受到的“刺痛”程度进行了评价(双重盲检试验)。

[0483] 结果如表10所示。

[0484] [表10]

[0485]

[0486] 由表10可知，全反式体与替普瑞酮相比，在刚滴眼后及滴眼3分钟后这两种情况下均更显著地抑制“刺痛”。

[0487] (10)热稳定性试验

[0488] 在加热到65℃的表面活性剂(聚山梨醇酯80、POE蓖麻油)中投入全反式体，在65℃的热水浴中搅拌溶解2分钟，再加入65℃的水，之后，混合搅拌各缓冲液，制成均匀溶液，利用盐酸和/或氢氧化钠调节pH及渗透压。将该溶液用孔径0.2μm的膜滤器(赛默飞世尔公司制造，瓶顶过滤器)进行过滤，制成澄清的无菌滴眼剂。将各滴眼剂的组成示于后文公开的表11中。将这些滴眼剂以满量的8mL无菌填充到聚对苯二甲酸乙二醇酯制容器(乐敦制药，Rohto Dryaid EX用容器)中。

[0489] 将这些滴眼剂在40℃、50℃或60℃下直立静置10天或20天，由此实施稳定性试验。以日本药典“替普瑞酮标准品(全反式体:单顺式体＝重量比约6:4、一般财团法人医薬品医療機器レギュラトリーサイエンス財団制)”作为标准品，对各试样中的全反式体含量进行定量，计算出残留率(％)。另外，计算标准品中的全反式体及单顺式体的总量作为GGA。

[0490] 残留率(％)＝100×[静置规定时间后的全反式体含量(g/100mL)/刚制造后的全反式体含量(g/100mL)]

[0491] 结果如表11所示。

[0492] [表11]

[0493]

[0494] 与含有硼酸缓冲剂的情况相比，在含有磷酸缓冲剂时全反式体的残留率显著高，热稳定性优良。此外，在pH为5.7～7.5的范围内，在pH较高时，全反式体的残留率更高，热稳定性更优良。

[0495] (11)光稳定性试验

[0496] 在加热到65℃的表面活性剂(聚山梨醇酯80、POE蓖麻油)中投入全反式体，在65℃的热水浴中搅拌溶解2分钟，再加入65℃的水，之后，混合搅拌各缓冲液，制成均匀溶液，利用盐酸和/或氢氧化钠调节pH及渗透压。将该溶液用孔径0.2μm的膜滤器(赛默飞世尔公司制造，瓶顶过滤器)进行过滤，制成澄清的无菌滴眼剂。将各滴眼剂的组成示于后文公开的表12中。将这些滴眼剂以满量的8mL无菌填充到聚对苯二甲酸乙二醇酯制容器(乐敦制药，Rohto Dryaid EX用容器)中。

[0497] 在以下的条件下对各滴眼剂进行光照射，并对刚制造后及照射后的试样中的全反式体含量进行定量，计算出残留率(％)。

[0498] 照射装置：LTL-200A-15WCD(Nagano Science制)

[0499] 光源：D-65灯

[0500] 总照射量及温湿度：130万lx·小时(4000lx×325小时)、25℃60％RH光照射方向：在使容器直立于容器内旋转盘的状态下从上方照射

[0501] 残留率(％)＝100×[光照射后的全反式体含量(g/100mL)/刚制造后的全反式体含量(g/100mL)]

[0502] 结果如表12所示。

[0503] [表12]

[0504]g/100mL 实施例22 实施例23 实施例24 实施例25
全反式体 0.005 0.05 0.005 0.05
磷酸二氢钠二水合物 0.30 0.30 ― ―
磷酸氢二钠十二水合物 3.20 3.20 ― ―
硼酸 ― ― 1.30 1.30
硼砂 ― ― 0.40 0.40
POE蓖麻油 0.002 0.02 0.002 0.02
聚山梨醇酯80 0.050 0.50 0.050 0.50
盐酸 适量 适量 适量 适量
氢氧化钠 适量 适量 适量 适量
纯化水 适量 适量 适量 适量
pH 7.5 7.5 7.5 7.5
渗透压mOsm 260 260 240 240
残留率(％) 90.5 92.8 86.1 89.0

[0505] 与含有硼酸缓冲剂的情况相比，在含有磷酸缓冲剂时全反式体的残留率显著高，光稳定性优良。

[0506] (12)抑制向角膜接触镜吸附的试验

[0507] 在加热到65℃的表面活性剂(聚山梨醇酯80)中投入全反式体或全反式体与5Z单顺式体的混合物(重量比8:2)，在65℃的热水浴中搅拌溶解2分钟，再加入65℃的水，之后，混合搅拌各缓冲液，制成均匀溶液，利用盐酸和/或氢氧化钠调节pH及渗透压。将该溶液用孔径0.2μm的膜滤器(赛默飞世尔公司制造，瓶顶过滤器)进行过滤，制成澄清的无菌滴眼剂。将各滴眼剂的组成示于后文公开的表13中。将这些滴眼剂填充4mL到容量为4mL的透明玻璃制容器(日电理化硝子制)中。

[0508] 在每4mL的各滴眼剂中浸渍1片软性角膜接触镜(以下称为SCL：ACUVUE OASIS(Johnson&Johnson制，认证编号21800BZY10252000、基弧8.4mm、直径14.0mm、度数-3.00D))，在25℃下直立静置保存14小时(浸渍液)。另外，SCL使用从包装液中取出后、将每1片SCL在10mL生理盐水(大塚生食注)中浸渍过夜而初始化后的软性角膜接触镜。

[0509] 将未浸渍SCL的滴眼剂(空白液)4mL在与浸渍SCL后的滴眼剂(浸渍液)相同的条件下进行操作。利用HPLC对空白液和浸渍液中的的各全反式体或全反式体与5Z单顺式体的混合物的含量进行定量，由其含量差算出向SCL吸附的吸附量(μg/片)(各n＝2)。

[0510] 吸附量(μg/片)＝[(空白液中的全反式体或全反式体与5Z单顺式体的混合物(重量比8:2)含量(g/100mL)-浸渍液中的全反式体或全反式体与5Z单顺式体的混合物(重量比8:2)含量(g/100mL))/100]×4×1000×1000

[0511] 结果如表13所示。

[0512] [表13]

[0513]

[0514] 与含有硼酸缓冲剂的情况相比，在含有磷酸缓冲剂时，更显著地抑制GGA向角膜接触镜吸附。

[0515] 产业上的可利用性

[0516] 本发明的药剂的视网膜疾病的预防、改善或治疗效果优良，并且能够抑制低温白浊等，其是作为制剂也优良的药剂。