抗癌药物

摘要

本发明提出了式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，该药物用于抑制恶性肿瘤细胞和耐药性恶性肿瘤细胞的增殖以及治疗癌症。由此以该药物为活性成分具有显著地治疗癌症的效果。

权利要求

1.式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于抑制耐药性恶性肿瘤的增殖，所述恶性肿瘤为肝癌，

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药学上可接受的盐为钠盐或钾盐。

说明书

抗癌药物

技术领域

[0001] 本发明涉及生物医药领域，具体涉及J1-001化合物作为抗癌药物的用途。

[0002] 目前，癌症已经成为导致人类死亡的主要原因之一。临床多采用化疗、放射疗法及生物免疫治疗等方法来杀死肿瘤细胞，但无法从根本上治愈肿瘤，多数是因为肿瘤细胞的耐药性严重影响临床化疗效果（据美国癌症协会估计，90%以上的肿瘤患者死于不同程度的肿瘤细胞耐药性）。因此，寻找到一种高效低毒的、耐药肿瘤细胞敏感的药物，对癌症的治疗具有十分积极的作用。

[0003] 本发明旨在至少在一定程度上解决上述技术问题之一或至少提供一种有用的商业选择。

[0004] 为此，本发明的目的在于提出J1-001化合物在制备药物中的用途，所述J1-001化合物用于抑制肿瘤细胞增殖进而可以用于治疗癌症。

[0005] 本发明是基于发明人的下列发现而完成的：式Ⅰ所示化合物

[0006]

[0007] 或其药学上可以接受的盐（在本文中将式Ⅰ所示化合物及其药学上可以接受的盐统称为J1-001化合物）可单独用于抑制恶性肿瘤细胞和耐药性恶性肿瘤细胞的增殖。

[0008] 在本发明的第一方面，根据本发明的实施例，式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于抑制肿瘤细胞的增殖

[0009]

[0010] 根据本发明的实施例，发明人发现，式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐可单独用于抑制恶性肿瘤细胞和耐药性恶性肿瘤细胞的增殖。发明人意外发现通过将J1-001化合物与恶性肿瘤细胞、耐药性恶性肿瘤细胞混合培养，J1-001化合物可以有效抑制恶性肿瘤细胞、耐药性恶性肿瘤细胞增殖。由此，式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐可用于治疗恶性肿瘤细胞、耐药性恶性肿瘤细胞，从而为治疗这类疾病提供了一种新的药物。

[0011] 这里所使用的术语“药学上可接受的盐”意指药物化学领域常用的盐形式，即实质上是无毒的并且能提供所需药代动力学特性、可口服、吸收、分布、代谢或排泄作用的盐形式。根据本发明的实施例，该“药学上可接受的盐”可以为常见的酸加成盐或碱加成盐，例如钾盐或钠盐。

[0012] 根据本发明上述实施例，本发明还可以具有如下附加的技术特征：

[0013] 根据本发明的实施例，所述肿瘤细胞为恶性肿瘤细胞和耐药性恶性肿瘤细胞。根据本发明的实施例，所述恶性肿瘤细胞为选自乳腺癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞及卵巢癌细胞至少一种。发明人通过研究J1-001化合物的用途，意外发现其具有抑制恶性肿瘤细胞的增殖，因此对其进一步研究发现，其对乳腺癌细胞、肝癌细胞、肺癌细胞、胃癌细胞及卵巢癌细胞的增殖均具有抑制作用。根据本发明的具体实施例，发明人将MCF-7(人乳腺癌细胞)、Bel-7402（人肝癌细胞）、HepG2（人肝癌细胞）、NCI-H460（人肺癌细胞）、SGC-7901（人胃癌细胞）及HO-8910（人卵巢癌细胞）分别与J1-001化合物尤其是其钠盐在体外混合培养。利用MTT比色法，计算J1-001化合物对肿瘤细胞增殖的抑制率及IC5（0 半数抑制率），发明人发现，J1-001化合物对MCF-7、Bel-7402、HepG2、NCI-H460、SGC-7901及HO-8910有不同程度的抑制作用，由此可以得出J1-001化合物对以上肿瘤细胞均有较好的抑制作用。发明人通过对实施例结果分析还惊奇地发现，J1-001化合物对卵巢癌细胞的增殖抑制作用明显强于紫杉醇，由此，进一步说明了J1-001化合物在此条件下用于治疗恶性肿瘤药物的优越性。

[0014] 根据本发明的实施例，所述耐药性恶性肿瘤细胞为选自Bel-7402肝癌耐药细胞。发明人通过研究J1-001化合物的用途，意外发现其具有抑制耐药性恶性肿瘤细胞的增殖。
根据 本发明的具体实施例，发明人将Bel-7402/5-Fu（人肝癌耐药细胞）与J1-001化合物尤其是J1-001钠盐在体外混合培养。利用MTT比色法，计算J1-001钠盐对肿瘤细胞增殖的抑制率及IC5（0 半数抑制率），发明人发现，J1-001钠盐对人肝癌耐药细胞有抑制作用。由此，可以得出J1-001钠盐在此条件下对耐药性恶性肿瘤细胞有较好的抑制作用。

[0015] 由此，在本发明的第二方面，本发明提出了式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐在制备药物中的用途，所述药物用于治疗癌症

[0016]

[0017] 根据本发明的实施例，所述药学上可接受的盐为钠盐或钾盐。

[0018] 根据本发明的实施例，所述癌症为选自乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌及卵巢癌至少一种。

[0019] 目前式Ⅰ或其药学上可接受的盐在制备抗癌药物中的用途在世界范围内未见文献报道。根据本发明的具体实施例，发明人意外地发现式Ⅰ或其药学上可接受的盐具有抑制恶性肿瘤细胞和耐药性恶性肿瘤细胞的增殖的作用，进一步地，发明人发现，将式Ⅰ或其药学上可接受的盐用于作为治疗抗癌药物中的活性成分制备抗癌药物，发现其抗癌效果显著。由此说明式Ⅰ或其药学上可接受的盐可以作为治疗癌症药物的活性成分。根据本发明的一个实施例，上述包含有式Ⅰ或其药学上可接受的盐的抗癌药物可以用于治疗或者预防乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌及卵巢癌。由此本发明提供了式Ⅰ或其药学上可接受的盐的新用途，从而为治疗癌症方面提供了一类新的抗癌药物。根据本发明的具体实施例，式Ⅰ或其药学上可接受的盐可以作为抗癌药物中的活性成分，尤其对耐药性肿瘤细胞的增殖具有显著抑制作用，因而能够从根本上达到预防和治疗癌症的目的。

[0020] 进一步，在本发明的第三方面，根据本发明的实施例，本发明提出了一种药物组合物，其包括：式Ⅰ所示化合物或其药学上可接受的盐（统称为J1-001化合物）；以及药学上可以接受的赋形剂，

[0021]

[0022] 如前所述，利用该药物组合物能够有效地抑制肿瘤细胞的增殖，以及用于治疗癌症。另外，根据本发明的实施例，该式Ⅰ所示化合物可以是通过化学合成或者生物合成例如通过微生物发酵的方法制备的。根据本发明的实施例，所述药学上可接受的盐为钠盐或钾盐。

[0023] 在这里所使用的术语“药学上可接受的赋形剂”可以包括任何药学上可以使用的常见赋形剂，例如包括但不限于粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂、润滑剂等。

[0024] 根据本发明的具体实施例，该药物组合物可以进一步包含少量辅助物质，例如湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲液，所述辅助物质可以增强药物组合物的保存期限或效力。通过本发明的实施例，递送该药物组合物的方式不受任何限制，可以采用已知的各种递送系统，只要可以有效地施用J1-001化合物或J1-001化合物与其他药物的组合，用于预防、管理、治疗或改善病症或其一种或多种症状，例如癌症。

[0025] 根据本发明的实施例，所述药物组合物可以呈经胃肠道给药剂型和非经肠道给药剂型。根据本发明的实施例，所述经胃肠道给药剂型为所述药物组合物经口服用后进入胃肠道，在给药部位起局部作用或经吸收而发挥功效的制剂。根据本发明的实施例，所述非经胃肠道给药剂型为所述药物组合物除口服给药途径以外在给药部位起局部作用或被吸收后发挥功效的制剂。由此，可以进一步保证J1-001化合物或其药学上可接受的盐以多种形式作用于恶性肿瘤细胞、耐药性恶性肿瘤细胞，以多种途径提高治疗恶性肿瘤细胞、耐药性恶性肿瘤细胞的效果。

[0026] 根据本发明的实施例，所述J1-001化合物是一种酸性酯溶性聚醚类抗生素，对革兰氏阳性、阴性细菌均有抑制作用；具有很强的抗球虫活性，现多用于防治蛋鸡和肉鸡的球虫病；同时，经毒性和三致试验结果表明该抗生素安全、无副作用。根据本发明的实施例，获得J1-001化合物的方式并不受特别限制，根据本发明的具体实施例，J1-001化合物可以由含有编码合成该化合物的基因簇的微生物发酵生产，也可以由化学合成或化学半合成的方式生产得到。因此，利用J1-001化合物制备治疗恶性肿瘤细胞及耐药性恶性肿瘤细胞具有很好工业实用性。另一方面，J1-001化合物作为抗生素长期应用于鸡球虫防治，同时， 该抗生素毒性和三致试验结果表明其安全、无副作用。因此，J1-001化合物在制备药物用途上具有可操作性、适用性。由上所述，J1-001化合物用于制备治疗恶性肿瘤药物具有很大市场发展前景。

[0027] 另外，根据本发明的实施例，发明人意外发现，所述J1-001化合物对耐药性肿瘤细胞的抑制增殖作用明显强于紫杉醇。在现代医疗技术领域中，已有的抗癌药物在一定时期内对癌症的治疗具有较好疗效，但由于治疗癌症周期往往较长，所以长期使用某一种抗癌药物容易产生耐药性。由此，需要研发出更多治疗癌症的药物，尤其是对已经产生耐药性的肿瘤细胞具有明显抑制作用的药物。发明人惊奇地发现，J1-001化合物能有效抑制多种人类恶性肿瘤细胞，特别是耐药性肿瘤细胞，且其效果优于现有多种化疗药物。由此，进一步提高了J1-001化合物作为治疗恶性肿瘤药物的优越性。

[0028] 另外，根据本发明的实施例，施用所制备的药物的手段也不受特别限制，例如肠胃外施用（例如，皮内、肌内、腹膜内、静脉内和皮下），硬膜外施用，瘤内施用和粘膜施用（例如，鼻内和经口途径）。在具体实施方案中，本发明的药物可以通过肌内、静脉内、瘤内、经口、鼻内、肺、或皮下施用。J1-001化合物可以通过任何方便的途径施用，例如通过输注或单次快速静脉注射，通过经由上皮或粘膜皮肤衬里（例如，口腔粘膜、直肠和肠粘膜等）吸收，通过抗体蛋白特异性治疗等，且可以连同其他生物学活性剂一起施用。根据本发明的实施例，J1-001化合物的施用可以是全身或局部的施用。

[0029] 在具体实施方案中，可能需要使本发明的治疗剂局部施用在需要治疗的区域；这可以通过例如但不限于局部输注、注射、或通过植入物来完成，所述植入物为多孔或无孔材料，包括膜和基质，例如硅橡胶膜、聚合物、纤维基质（例如， )、或胶原基质。

[0030] 本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。

附图说明

[0031] 本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：

[0032] 图1显示了在J1-001钠盐作用下各种细胞株IC50的检测结果。

[0033] 图2显示了J1-001钠盐对小鼠体内肿瘤作用的结果。

具体实施方式

[0034] 下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性 的，而不以任何方式限制本发明。并且在下列的实施例中所采用的J1-001钠盐具有下列结构式

[0035]

[0036] 实施例1：J1-001钠盐与紫杉醇对HO-8910细胞增殖的抑制作用

[0037] 分别取对数生长期的HO-8910（卵巢癌细胞），采用0.25%-EDTA胰蛋白酶消化后制成浓度为5×104个/mL的细胞悬液。将该细胞悬液接种于96孔细胞培养板中，每孔200μL；空白组为每孔加入200μL不含细胞的培养基的组。将上述接种了细胞的96孔细胞培养板放入细胞培养箱中孵育过夜，使细胞贴壁。样品J1-001钠盐和现有抗癌药物紫杉醇分别用DMSO溶解，配制为100mmol/L的储存液，然后使用前用相应培养基稀释成不同浓度（DMSO终浓度小于0.1%）的样品溶液。在不同的实验组中分别加入200μL不同浓度的样品溶液（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L）或紫杉醇溶液（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L）；对照组为往贴壁细胞中加入200μL培养基的组；空白组为无细胞只加200μL培养基的组。然后将此加过不同浓度药物溶液（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0μmol/L样品溶液或紫杉醇溶液）的96孔细胞培养板在细胞培养箱中培养48小时后，在取出的上述96孔细胞培养板的每个孔中加入20μL0.5mg/mL的噻唑蓝（MTT），然后继续放入细胞培养箱中培养。2小时后，将与MTT共同孵育的96孔细胞培养板在高速离心机中以2000rpm离心10分钟。
离心后，去除96孔细胞培养板中上清液，然后通过向每孔加200μL二甲基亚砜（DMSO）溶解在
96孔板底部生成的甲臢蓝色结晶。该加过DMSO的96孔细胞培养板在平板振荡器上振荡5分钟后，利用酶联免疫检测仪，在570nm波长下检测OD值（参比波长为490nm），计算抑制率及IC5（0 半数抑制率）。

[0038] 抑制率%=（A-A0）/（A-A1）×100%

[0039] 式中：A代表对照组的OD值；A0代表样品组的OD值；A1代表空白组的OD值。

[0040] 表1.J1-001钠盐及紫杉醇HO-8910的IC50值

[0041]受试物 对HO-8910的IC5（0μmol/L）
J1-001钠盐 1.43
紫杉醇 7.41

[0042] 由表1所示的结果可知，与紫杉醇相比，J1-001钠盐对HO-8910细胞体外增殖均有更 显著的抑制作用，其对HO-8910细胞株的IC50值较紫杉醇降低了5.18倍。说明J1-001钠盐对HO-8910肿瘤细胞增殖有较强的抑制作用，其抑制作用明显强于紫杉醇的抑制作用。

[0043] 实施例2：J1-001钠盐对体外各种细胞株增殖的抑制作用

[0044] 实验方法同实施例1，所不同的是，所选的细胞株为MCF-7(人乳腺癌细胞)、Bel-7402（人肝癌细胞）、HepG2（人肝癌细胞）、NCI-H460（人肺癌细胞）、SGC-7901（人胃癌细胞）和HO-8910（人卵巢癌细胞）。

[0045] 由图1所示的结果可知，J1-001钠盐对MCF-8、Bel-7402、HepG2、NCI-H460、SGC-7901及HO-8910细胞体外增殖有不同程度的抑制作用，其中，MCF-7对J1-001钠盐最为敏感，表现为最低IC50值。由此可知，J1-001钠盐对以上肿瘤细胞的增殖均有较好的抑制作用。

[0046] 实施例3：J1-001钠盐对体外耐药肿瘤细胞增殖的抑制作用

[0047] 实验方法同实施例1，所不同的是，所选细胞为Bel-7402（人肝癌细胞）；Bel-7402/5-Fu（人肝癌耐药细胞）。

[0048] 表2.J1-001钠盐、紫杉醇与阿霉素对Bel-7402及Bel-7402/5-Fu的IC50值

[0049]

[0050] 由表2所示的实验结果可知，J1-001钠盐对耐药Bel-7402/5-Fu与非耐药肿瘤细胞株Bel-7402的细胞增殖均有较好抑制作用，对非耐药肿瘤细胞株Bel-7402的抑制细胞增殖的活性与紫杉醇的抑制癌细胞增殖的活性相近，并且优于阿霉素的抑制癌细胞增殖的活性；值得一提的是，J1-001钠盐对耐药Bel-7402/5-Fu肿瘤细胞株株表现为最低的IC50值。紫杉醇、阿霉素对耐5-Fu的Bel-7402肝癌细胞株的抗瘤活性显著下降。由此，以上实验提示J1-001在抗肿瘤耐药性方面有独特的优势，是一个有开发前景的潜在药物。

[0051] 实施例4：J1-001钠盐体内抗肿瘤作用

[0052] 37℃迅速解冻冻存的HepG2一支，加RPMIl640培养液10mL，1000r·min-1离心洗涤2次，加入含10％胎牛血清的RPMIl640培养液，37℃，5％CO2的培养箱中培养，间日更换细胞培养液，细胞长至70％-80％满度时传代，培养l周后，收集细胞悬液，1000r·min-1离心5min， 用无血清培养液调节细胞为每1mL含1×107个，备用。5周龄左右的BABL/c裸鼠，3天后于腋窝皮下接种HepG2细胞每只0.2mL(每1mL含2×107个HepG2细胞)。待瘤块长至一定大小后，处死荷瘤裸鼠。无菌条件下取出荷瘤鼠瘤块，接种，体内传3代，取瘤组织于无菌PBS中剪碎成1-3mm3小块采用插块法接种，于30只6周龄左右的裸鼠腋窝皮下接种0.2mL，观察接
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种情况。肿瘤体积长至100mm 左右时筛选出瘤质均一的裸鼠随机分为2组，分别为模型组、J1-001组，每组6只，另设空白组。21天疗程，空白、模型组给予相应体积的稀释液。每4天给药1次，共5次。给药时观察裸鼠的活动及死亡情况，同时测量瘤体大小，用游标卡尺测量瘤体的长径a及短径b(mm)，动物死亡后取肿瘤称重。以下是具体分组及给药情况：

[0053] 空白组：腹腔给药（i.p.）0.2mL/10g稀释用液

[0054] 模型组：腹腔给药（i.p.）0.2mL/10g稀释用液

[0055] J1-001组：腹腔给药（i.p.）0.2mL/10g0.05mg/mL剂量为1mg/kg

[0056] 给药第20天后取血后处死动物（取血后静置分离血清），剥离各组瘤块并称重，摆放后拍照记录。

[0057] 抑瘤率(％)=(模型组肿瘤体积-实验组肿瘤体积)/模型组肿瘤体积×100％；

[0058] 结果：模型组、J1-001组各死亡2只，同时从图2结果可知：经J1-001治疗后动物体内的肿瘤大小明显小于模型组肿瘤，经计算得到其抑瘤率为50%左右。该结果证明J1-001能够抑制体内肿瘤增长。

[0059] 在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。

[0060] 尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。