一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂盒

摘要

本发明涉及一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂盒，各组分原料含量如下：组分1中含有pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L，氯化钠150mmol/L，蔗糖酯1%；组分2中含有pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L，3%的蔗糖，8%的甘油，0.1%EDTA，3%的羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒。本发明准确性好，在2℃-8℃能稳定保存1年。

权利要求

1.一种肌钙蛋白I检测试剂，包括体积比为3:1的组分1和组分2，各组分的原料及含量为：组分1：

pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L、氯化钠150mmol/L、蔗糖酯1%；

组分2：

pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L、的蔗糖1-10%、的甘油1-20%、EDTA0.1%-1%、羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3%。

说明书

一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂盒

技术领域

[0001] 本发明涉及一种稳定的肌钙蛋白I检测试剂盒，属于临床体外检测试剂技术领域。

背景技术

[0002] 心肌肌钙蛋白是1987年Cummins等诊断急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)时首次报道的。肌钙蛋白(Troponin，Tn)是心肌的主要结构收缩蛋白，由三个亚单位组成：肌钙蛋白c(TnC)、肌钙蛋白T(TnT)和肌钙蛋白I(TnI)。其中TnI又分为3种亚型：快骨骼肌亚型(frnI)、慢骨骼肌亚型(sTnI)和心肌亚型(cTnI)，但个体出生9个月后，心肌中仅存cTnI。cTnI无任何亚型，其分子量24kDa，由209个氨基酸组成，有超过40％ 的氨基酸序列与其他亚型有异源性，且氨基端多延伸出一段32个氨基酸组成的序列；所以cTnI具有高度的心肌组织特异性，已被临床广泛接受，不仅成为诊断急性心肌梗死的“金标准”，而且已成为心肌疾病病情监测、疗效观察及预后评估的最合适标志物。

[0003] 血清cTnI水平定量方法较多，检测性能差异较大。常用的检测方法主要有：酶联免疫吸附试验法、化学发光法、荧光分析法、金标免疫法、免疫比浊法。酶联免疫吸附试验法在临床检测中应用比较成熟，但是由于cTnI血清含量偏低，且该法测定周期长，灵敏度相对较低，线性范围偏窄等诸多不足，因而限制了该法在cTnI检测方面的进一步应用；化学发光法具有很好的特异性与临床复合性，但是需要专门的仪器及配套试剂，且多为进口，成本较为昂贵，在基层实验室很难开展；而荧光分析法相对来说对实验室条件和操作人员条件要求高；金标免疫法在准确度、灵敏度、特异性方面有所欠缺。与其他方法相比免疫比浊法操作简便、结果准确可靠、自动化程度高，且检测快速，具有较高的临床可用度。

[0004] 免疫比浊法源于1897年Krans发现的沉淀反应并在比色法基础上发展起来的，其原理是当抗原与抗体在特殊稀释系统中反应而且比例合适(一般规定抗体过量)时，形成的可溶性免疫复合物在稀释系统中的促聚剂（聚乙二醇等）的作用下，自液相析出，形成微粒，使反应液出现浊度。当抗体浓度固定时，形成的免疫复合物的量随着检样中抗原量的增加而增加，反应液的浊度也随之增加。通过测定反应液的浊度与一系列标准品对照，即可计算出检样中抗原的含量。免疫比浊法包括免疫透射比浊法 、免疫散射比浊法、胶乳增强免疫比浊法。

[0005] 其中胶乳增强免疫比浊法是临床检测的常用方法。该法是将待测物质相对应的抗体包被在直径为15－60nm的胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而提高试验的敏感性。该技术的关键在于两点：其一是选择适用的胶乳，其大小（直径）要稍小于波长；其二是胶乳与抗体结合要好，目前一般采用吸附法。结合到胶乳颗粒表面上抗体的免疫活性，决定了用其为原材料制备的试剂盒的性能指标，常规的肌钙蛋白I检测试剂盒用氯化钠来保证了离子平衡，但是抗体的免疫活性还是随着放置时间逐渐衰减，这大大制约了利用胶乳增强免疫比浊法对肌钙蛋白I的检测应用。

发明内容

[0006] 针对于上述常规肌钙蛋白I检测试剂存在的问题，本发明对常规现有试剂进行了改进，加入了蔗糖酯、蔗糖，甘油和EDTA在试剂中，有效增强了抗体的免疫活性，从而提供一种稳定高效、保存时间长的肌钙蛋白I检测试剂，保证试剂能在2-8℃条件下稳定放置1年。

[0007] 本发明是通过以下措施实现的：

[0008] 一种肌钙蛋白I检测试剂，包括组分1、组分2，各组分原料含量如下：

[0009] 组分1中含有pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L，氯化钠150mmol/L，蔗糖酯1%；

[0010] 组分2中含有pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L，1-10%的蔗糖，1-20%的甘油，0.1%-1%EDTA，羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒3%。

[0011] 所述的肌钙蛋白I检测试剂，各组分原料含量如下：

[0012] 组分1中含有pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L，氯化钠150mmol/L，蔗糖酯1%；

[0013] 组分2中含有pH为7.6的甘氨酸缓冲液25mmol/L，3%的蔗糖，8%的甘油，0.1%EDTA，3%的羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒。

[0014] 本发明的有益效果：

[0015] 本发明提供的肌钙蛋白I检测试剂抗体活性高，准确性好，并且本试剂在2℃-8℃能稳定保存1年。

附图说明

[0016] 图1 成品试剂盒与实施例1、2、3试剂放置在2～8℃条件下的稳定性曲线。

具体实施方式

[0017] 为了更好的理解本发明，下面结合具体实施例来进一步说明。

[0018] 实施例1

[0019] 肌钙蛋白I检测试剂组分及浓度为

[0020] 组分1:

[0021] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0022] 氯化钠 150mmol/L

[0023] 蔗糖酯 1%；

[0024] 溶于蒸馏水中制备完成；

[0025] 组分2：

[0026] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0027] 羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3% 。

[0028] 溶于蒸馏水中制备完成。

[0029] 肌钙蛋白I检测试剂的应用流程为：采用具有双试剂功能的自动生化分析仪，如东芝40自动分析仪，操作如表1：

[0030] 表1 肌钙蛋白I检测试剂检测方法

[0031]

[0032] 计算：肌钙蛋白I浓度＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准

[0033] 实施例2

[0034] 肌钙蛋白I检测试剂组分及浓度为

[0035] 组分1

[0036] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0037] 氯化钠 150mmol/L

[0038] 溶于蒸馏水中制备完成；

[0039] 组分2：

[0040] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0041] 蔗糖 3%

[0042] 甘油 8%

[0043] EDTA 0.1%

[0044] 羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3%

[0045] 溶于蒸馏水中制备完成。

[0046] 使用方法同实施例1。

[0047] 实施例3

[0048] 肌钙蛋白I检测试剂组分及浓度为：

[0049] 组分1:

[0050] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0051] 氯化钠 150mmol/L

[0052] 蔗糖酯 1%；

[0053] 溶于蒸馏水中制备完成；

[0054] 组分2：

[0055] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0056] 蔗糖 3%

[0057] 甘油 8%

[0058] EDTA 0.1%

[0059] 羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3%

[0060] 溶于蒸馏水中制备完成。

[0061] 使用方法同实施例1。

[0062] 实施例4

[0063] 肌钙蛋白I检测试剂组分及浓度为

[0064] 组分1:

[0065] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0066] 氯化钠 150mmol/L

[0067] 蔗糖酯 1%；

[0068] 溶于蒸馏水中制备完成；

[0069] 组分2：

[0070] pH为7.6的甘氨酸缓冲液 25mmol/L

[0071] 蔗糖 10%

[0072] 甘油 20%

[0073] EDTA 1%

[0074] 羊抗人TnI抗体包被胶乳颗粒 3%

[0075] 溶于蒸馏水中制备完成。

[0076] 使用方法同实施例1。

[0077] 肌钙蛋白I检测试剂准确度验证：

[0078] 利用肌钙蛋白I标准溶液，以肌钙蛋白I检测试剂盒（胶乳增强免疫比浊法）（下面简称为成品试剂盒）作为对照，对制备的肌钙蛋白I检测试剂进行准确度验证。具体操作步骤为：（采用具有双试剂功能的自动生化分析仪，如东芝40自动分析仪，操作如表2：

[0079] 表2 肌钙蛋白I检测试剂检测方法

[0080]

[0081] 计算：肌钙蛋白I浓度＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准

[0082] 以成品试剂盒作为对照，实施例3试剂检测结果如表3所示：

[0083] 表3 检测结果

[0084]

[0085] 上述相关系数，均为与肌钙蛋白I标准液相比。

[0086] 如表1所示，成品试剂盒检测不同浓度肌钙蛋白I标准液得到的相关系数为0.995，而实施例3所制备的试剂盒检测相关系数分别为0.999，其相关性均优于成品试剂盒。说明实施例3制备的肌钙蛋白I检测试剂准确度更高。

[0087] 肌钙蛋白I检测试剂稳定性验证：

[0088] 对比成品试剂盒及实施例1、实施例2、实施例3的稳定性。具体操作步骤为：分别将成品试剂盒和实施例1、实施例2、实施例3的检测试剂按照产品包装规格（R1 18mL，R26mL）分为13等份，放置2～8℃冰箱中，每月定时取出一组，按照操作流程对肌钙蛋白I质控品（理论值为8μg/L）进行检测。采用具有双试剂功能的自动生化分析仪，如东芝40自动分析仪，操作如表4：

[0089] 表4 肌钙蛋白I检测试剂检测方法

[0090]

[0091] 计算：肌钙蛋白I浓度＝（∆A测定÷∆A标准）×C标准

[0092] 检测结果如图1所示。

[0093] 经过稳定性验证，在试剂放置一年以后，实施例3所配置的检测试剂抗体免疫活性几乎无衰减，检测结果最稳定；而成品试剂盒及实施例1、实施例2的检测试剂放置一年以后其抗体免疫活性都出现显著衰减。因此常规配方的基础上同时加入蔗糖酯、蔗糖，甘油和EDTA在试剂中（如实施例3），可使得试剂在经过2～8℃放置1年后其中抗体的免疫活性依然稳定，检测效果依然能够达到要求的结果，说明实施例3所配制的试剂在2～8℃可稳定保存1年。

[0094] 上述实施例3为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明的精神实质与原理下所做的改变、修饰、组合、替代、简化均应为等效替换方式，都包含在本发明的保护范围之内。