二肽基肽酶IV抑制剂

摘要

本发明提供优异的肽基肽酶IV抑制剂等。由Val‑Pro‑X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L‑脯氨酸残基)]；上述X优选选自碱性氨基酸残基、脂肪族中性氨基酸残基、具有酰胺基的中性氨基酸残基或具有芳香族的中性氨基酸残基；上述X优选选自丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、甘氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、丝氨酸残基和赖氨酸残基；含有上述肽作为有效成分的二肽基肽酶IV抑制剂、血糖值上升抑制剂、血管内皮功能障碍抑制剂、血管紧张素转换酶抑制剂。

权利要求

1.一种肽，其选自由Val-Pro-Met(序列号4)、Val-Pro-Asn(序列号5)、Val-Pro-Ser(序列号9)和Val-Pro-Lys(序列号10)组成的组。

说明书

二肽基肽酶IV抑制剂

技术领域

[0001] 本发明涉及二肽基肽酶IV抑制剂等。

背景技术

[0002] 二肽基肽酶IV(di-peptidyl peptidase-IV：下文中也称为“DPP-4”)是具有N末端二肽酶活性的多功能性的跨膜糖蛋白。其存在于大部分的哺乳类的细胞上，存在于肝脏、肾脏、小肠、唾液腺、血液细胞和血浆等各种组织中，因而设想其在生物体内发挥广泛作用，是近年来作为药物开发的靶标而受到瞩目的酶。

[0003] 已知二肽基肽酶IV为肠促胰岛素的胰高血糖素样肽1(下文中称为“GLP-1”)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(下文中称为“GIP”)的分解酶。该GLP-1是在饭后释放出的，具有以针对胰岛素的生物合成和分泌的葡萄糖诱导性的刺激、胰高血糖素分泌抑制、基因表达的调整、对于Β细胞的营养性的效果、食物摄取的抑制以及胃排空的徐缓化为代表的多种作用。并且，通过抑制二肽基肽酶IV，肠促胰岛素的GLP-1和GIP的分解受到抑制，血中的GLP-1和GIP的浓度上升。其结果，已知胰岛素分泌被促进，使血糖值降低。对于该肠促胰岛素所引起的胰岛素的分泌促进，血糖值为高值是工作条件。因此，在II型糖尿病中、在胰岛素分泌降低所导致的糖尿病中，可以说抑制二肽基肽酶IV的情况下现有胰岛素分泌促进剂所产生的低血糖症的副作用的危险性小。

[0004] 这样，关于具有抑制二肽基肽酶IV活性的作用的二肽基肽酶IV抑制剂，被期待作为抗糖尿病剂使用。但是，与胰岛素分泌抑制剂和葡萄糖吸收抑制剂等相比，二肽基肽酶IV抑制剂可以说还是新类型的治疗药，希望发现多种新的具有二肽基肽酶IV抑制作用的物质。此外现状是，糖尿病治疗的第一步是饮食疗法和运动疗法，即便如此也无法控制血糖值的情况下则使用糖尿病治疗用药品。由此认为，若能够将具有二肽基肽酶IV抑制活性的物质作为补充物或食品添加物来进行提供，则能够广泛地有助于血糖值的改善。

[0005] 例如，专利文献1中公开了使用双环系嘧啶作为糖尿病治疗用或预防用的二肽基肽酶IV抑制剂。

[0006] 另外，例如，专利文献2中公开了下述内容：对酪蛋白进行pH和温度调节并进行碱分解后，进一步调整蛋白酶等各种酶而进行酶水解，由所得到的水解物分离纯化各种肽，进而由其中发现了具有二肽基肽酶IV抑制作用的物质。除此以外，还公开了来自食品的二肽基肽酶IV抑制物质(例如，参照专利文献3～5)。

[0007] 另外，例如，专利文献6的表2中记载了由酪蛋白或乳清水解物仅分离了1个肽的分离肽、即IPI、LPL、KVLP、LPVPQK、VPLGTQ、VPYPQ、PLLQ、GPFP、LPVPQ、LPQYL、MPLW、YVPEPF、PQSVLS、PFP、LPVP、EMPFPK、LPLP、GPFPIIV、APFPE、HPIK和APFPEVF，并且公开了这些分离肽的二肽基肽酶IV抑制试验结果。

[0008] 现有技术文献

[0009] 专利文献

[0010] 专利文献1：日本特表2008-527011号公报

[0011] 专利文献2：美国专利申请公开第2008/0075904号说明书

[0012] 专利文献3：日本特开2011-144167号公报

[0013] 专利文献4：日本特开2007-039424号公报

[0014] 专利文献5：日本特开2008-280291号公报

[0015] 专利文献6：国际公开2006/068480号小册子

发明内容

[0016] 发明要解决的问题

[0017] 这样，以往虽然公开了二肽基肽酶IV抑制剂，但是，例如在专利文献1中，有机合成化合物需要复杂的合成过程，在安全性方面今后需要验证。所有的二肽基肽酶IV抑制剂均存在需要进行研究的方面，关于二肽基肽酶IV抑制物质的研究目前并不充分。

[0018] 另外，肽有时具有有益的生理活性作用，因而正在进行新型肽的探索和肽的各种生理活性作用的研究。但是，如果肽中的氨基酸增减、或者氨基酸的一部分不同，则生理活性作用有时会降低或消失，而且，即便在酪蛋白等乳来源蛋白质的水解物中也混杂有无数的肽，因此难以发现具有目标生理活性作用的新型或已知的肽。

[0019] 由此，本发明提供优异的二肽基肽酶IV抑制剂。

[0020] 用于解决问题的方案

[0021] 为了解决上述课题，本发明人进行了深入研究，结果发现：在利用特定的酶将酪蛋白水解而得到的酪蛋白水解物中存在多种具有二肽基肽酶IV抑制作用的肽，而且其中存在新型的肽。由该结果发现了一种肽，该肽具有Val-Pro-X[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。](序列号1)表示的序列(下文中也称为“肽VPX”)，由此完成了本发明。

[0022] 而且，该肽为食品来源的成分，因此认为安全性高，该肽VPX还能够作为补充物或食品添加物来进行提供。由此，认为本公开的肽VPX能够广泛地有助于血糖值的改善。另外，本公开的肽VPX中还存在具有血管紧张素转换酶抑制作用的肽，因而认为本公开的肽VPX能够广泛地有助于高血压的改善。

[0023] 根据上述结果，可以说本公开的肽VPX是更具有附加价值的有效物质。

[0024] 即，本发明涉及一种肽，其由Val-Pro-X构成[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]。

[0025] 另外，涉及一种二肽基肽酶IV抑制剂和/或血管紧张素转换酶抑制剂，其含有由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]作为有效成分。

[0026] 另外，涉及一种血糖值上升抑制剂、高血糖改善剂、抗糖尿病剂、血压降低剂、抗高血压剂或血管内皮功能障碍抑制剂，其含有由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]作为有效成分。

[0027] 上述X优选为碱性氨基酸残基、脂肪族中性氨基酸残基、具有羟基的中性氨基酸残基、具有酰胺基的中性氨基酸残基或具有芳香族的中性氨基酸残基。

[0028] 上述X优选选自丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、甘氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、丝氨酸残基和赖氨酸残基。另外，优选L-氨基酸。

[0029] 上述肽优选选自由下述(a)～(i)中的任一种氨基酸序列构成的肽。

[0030] (a)Val-Pro-Ala(VPA：序列号2)

[0031] (b)Val-Pro-Gln(VPQ：序列号3)

[0032] (c)Val-Pro-Met(VPM：序列号4)

[0033] (d)Val-Pro-Asn(VPN：序列号5)

[0034] (e)Val-Pro-Gly(VPG：序列号6)

[0035] (f)Val-Pro-Val(VPV：序列号7)

[0036] (g)Val-Pro-Tyr(VPY：序列号8)

[0037] (h)Val-Pro-Ser(VPS：序列号9)

[0038] (i)Val-Pro-Lys(VPK：序列号10)

[0039] 发明的效果

[0040] 由于本发明的肽VPX具有优异的二肽基肽酶IV抑制作用，因而本发明能够提供二肽基肽酶IV抑制剂、血糖值上升抑制剂和血管内皮功能障碍抑制剂等。

附图说明

[0041] 图1是示出本公开的肽VPA的MS/MS分析的结果的图。

[0042] 图2是示出本公开的肽VPQ的MS/MS分析的结果的图。

具体实施方式

[0043] 本公开的肽具有由Val-Pro-X构成的肽所表示的氨基酸序列(序列号1)。

[0044] 本公开中，Val(V)表示缬氨酸残基，Pro(P)表示脯氨酸残基，X表示任意的氨基酸残基。这些氨基酸残基优选为L型。

[0045] 对上述X没有特别限定，例如，可以举出能够由乳蛋白质分解物得到的氨基酸残基，优选选自这些氨基酸残基。另外，上述X优选20种天然氨基酸。需要说明的是，游离氨基酸一般用“+H3N-(R1)CH-COO-”表示，本公开的肽还能够表示为“Val-Pro-HN-(R1)CH-COOH”。

[0046] 上述X表示的氨基酸残基能够分类为酸性氨基酸残基、碱性氨基酸残基、中性氨基酸残基。上述X能够由以下的氨基酸残基的例示中选择1种或2种以上。

[0047] 作为上述酸性氨基酸残基，例如，可以举出天冬氨酸残基(Asp(D))和谷氨酸残基(Glu(E))等。其中，优选具有两个羰基的氨基酸残基。

[0048] 作为上述碱性氨基酸残基，例如，可以举出赖氨酸残基(Lys(K))、精氨酸残基(Arg(R))、组氨酸残基(His(H))等。其中，优选具有2～4个氨基的氨基酸残基。

[0049] 作为上述中性氨基酸残基，例如，可以举出上述氨基酸残基X的R1具有氢和烷基、羟基、硫、酸性酰胺、芳香族的氨基酸残基等，通常将这些分别称为脂肪族中性氨基酸残基、具有羟基的中性氨基酸残基、具有硫的中性氨基酸残基、具有酰胺基的中性氨基酸残基、具有芳香族的中性氨基酸残基。

[0050] 作为上述脂肪族中性氨基酸残基，可以举出丙氨酸残基(Ala(A))、甘氨酸残基(Gly(G))、缬氨酸残基(Val(V))、亮氨酸残基(Leu(L))、异亮氨酸残基(Ile(I))等。其中，优选上述氨基酸残基X的R1为氢或烷基的具有氢或烷基的中性氨基酸残基。该烷基优选直链和支链，更优选支链。另外，上述脂肪族中性氨基酸残基中的R1的碳原子数优选为0～4、更优选为0～3。进一步优选R1＝氢、甲基(-CH3)或异丙基(-CH(CH3)2)。

[0051] 作为上述具有羟基的中性氨基酸残基，可以举出丝氨酸残基(Ser(S))、苏氨酸残基(Thr(T))等。上述氨基酸残基X的R1优选具有羟基的碳原子数为1～2的烷基。

[0052] 作为上述具有硫的中性氨基酸残基，可以举出半胱氨酸残基(Cys(C))和甲硫氨酸残基(Met(M))等。

[0053] 作为上述具有酰胺基的中性氨基酸残基，可以举出谷氨酰胺残基(Gln(Q))、天冬酰胺残基(Asn(N))等。其中，优选具有两个氨基的氨基酸残基。另外，上述氨基酸残基X的R1优选具有酰胺基的碳原子数为1～2的烷基。

[0054] 作为上述具有芳香族的中性氨基酸残基，可以举出苯丙氨酸残基(Phe(F))、酪氨酸残基(Tyr(Y))、色氨酸残基(Trp(W))等。上述氨基酸残基X的R1优选可以具有羟基的苄基(例如，HO-C6H4-CH2-或H-C6H4-CH2-等)，该羟基的个数优选0～1。

[0055] 在上述氨基酸残基中，优选碱性氨基酸残基和中性氨基酸残基。在上述中性氨基酸残基中，进一步优选脂肪族中性氨基酸残基、具有羟基的中性氨基酸残基、具有酰胺基的中性氨基酸残基和具有芳香族的中性氨基酸残基。此外，优选脂肪族中性氨基酸残基、具有酰胺基的中性氨基酸残基。

[0056] 在上述X所示的氨基酸残基中，优选选自丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、甘氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、丝氨酸残基和赖氨酸残基中的氨基酸残基。其中，优选丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、天冬酰胺残基、甘氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基和丝氨酸残基。此外，从生理活性的方面出发，优选丙氨酸残基、谷氨酰胺残基和缬氨酸残基。

[0057] 从二肽基肽酶IV抑制活性的方面出发，优选为丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、天冬酰胺残基、甘氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、丝氨酸残基和赖氨酸残基，另外从血管紧张素转换酶抑制活性的方面出发，特别优选为丙氨酸残基和赖氨酸残基。

[0058] 另外，作为本公开的新型肽的具体示例，可以举出由以下氨基酸序列构成的肽。

[0059] 可以举出Val-Pro-Ala(VPA：序列号2)、Val-Pro-Gln(VPQ：序列号3)、Val-Pro-Met(VPM：序列号4)、Val-Pro-Asn(VPN：序列号5)、Val-Pro-Gly(VPG：序列号6)、Val-Pro-Val(VPV：序列号7)、Val-Pro-Tyr(VPY：序列号8)、Val-Pro-Ser(VPS：序列号9)、Val-Pro-Lys(VPK：序列号10)等三肽。

[0060] 另外，本公开的肽可以为该肽的盐类。作为该盐类，例如，可以举出钾、钠等碱金属类；钙、镁等碱土金属类等，其中可以适当使用1种或2种以上。

[0061] 关于本公开的肽VPX的制造方法，能够根据例如国际公开2003/044044号小册子[参考文献1]等中记载的方法进行，可例示出以下方法，但不特别限定于此。

[0062] 例如，可以举出下述方法：将包含Val-Pro-X(序列号1)表示的氨基酸序列或序列号2～10表示的氨基酸序列的蛋白质、肽通过水解等分解，由所得到的分解物分离纯化而获得的方法；通过肽的化学合成方法合成肽VPX后，由所得到的合成物分离纯化肽VPX而获得的方法；由生产肽VPX和包含肽VPX的肽等的植物、动物或微生物进行提取，由所得到的提取物分离纯化的方法；等。

[0063] 本公开的肽VPX可以通过将例如酪蛋白等蛋白质适当用酸碱或酶等水解来制造。

[0064] 例示出用水解酶水解原料蛋白质而得到上述肽VPX的方法。

[0065] 首先，在用酶水解原料蛋白质之前，使蛋白质溶解、分散或悬浮于水中。

[0066] 上述原料蛋白质只要为包含VPX的蛋白质、用水解酶适当消化时能够生成本公开的肽则没有特别限定。作为上述蛋白质，例如，可以举出动物来源的蛋白质或微生物来源的蛋白质等，优选能够大量获得的酪蛋白。

[0067] 此时，处理方法根据原料蛋白质的性状而不同，在原料蛋白质为可溶性的情况下，将原料蛋白质分散、溶解于水或温水中即可，另外，在原料蛋白质为难溶性的情况下，通过混合搅拌将蛋白质在热水中均化即可。

[0068] 另外，可以在含有上述蛋白质的溶液中添加碱剂或酸剂而适当调整pH(例如pH7～10)。该pH优选调整为所使用的水解酶的最适pH或其附近。

[0069] 作为上述碱剂或酸剂，没有特别限定，使用食品或药品上所允许的碱剂或酸剂即可。作为碱剂，例如，可以举出氢氧化钠或氢氧化钙等氢氧化物；碳酸钾等碳酸盐等，它们可以为碱金属盐或碱土金属盐。另外，作为酸剂，例如，可以举出盐酸、磷酸等无机酸；柠檬酸、乙酸、甲酸等有机酸；等。这些之中，可以适当使用1种或2种以上。

[0070] 另外，从防止杂菌污染导致的腐坏的方面出发，优选于70～90℃对含有上述蛋白质的溶液进行15秒～10分钟左右加热灭菌。

[0071] 接下来，在含有上述蛋白质的溶液中加入预定量的水解酶，在温度为10～85℃左右进行0.1～48小时反应，得到水解物。

[0072] 此时，在添加上述水解酶后，优选根据酶的种类将该溶液保持为适当的温度、例如30～60℃、优选45～55℃，开始蛋白质的水解。

[0073] 另外，关于水解反应时间，一边监控酶反应的分解率，一边继续反应至达到优选的分解率即可。为了得到本公开的肽，上述原料蛋白质的分解率优选为20～55％。

[0074] 上述水解酶反应的终止例如通过水解液中的酶的失活来进行，可以通过利用常规方法进行的加热失活处理来实施。加热失活处理的加热温度和保持时间可以考虑所使用的酶的热稳定性适当设定能够充分失活的条件，例如，可以在80～130℃的温度范围以30分钟～2秒的保持时间进行加热失活处理。

[0075] 对上述水解酶没有特别限定，优选为能够将上述原料蛋白质水解而生成本公开的肽的酶，作为该能够生成本公开的肽的酶，具体地说优选内肽酶。

[0076] 作为上述内肽酶，例如有微生物来源的内肽酶、动物来源的内肽酶，具体地说，可以举出芽孢杆菌(Bacillus)属或曲霉菌属(Aspergillus)属细菌来源的蛋白酶以及动物胰脏来源的蛋白酶等。上述蛋白酶可以利用市售的蛋白酶。作为市售品的蛋白酶，例如，可例示出蛋白酶A(Amano Enzyme inc.制)等曲霉菌属细菌来源的蛋白酶；胰酶制剂(Amano Enzyme inc.制)等动物胰脏来源的蛋白酶等作为优选的蛋白酶。

[0077] 例如，在使用曲霉菌属细菌来源的蛋白酶时，相对于1g蛋白质优选以100～5000活性单位的比例添加是理想的。另外，在使用动物胰脏来源的蛋白酶时，相对于1g蛋白质优选以3000～8000活性单位的比例添加是理想的。

[0078] 本公开中使用的水解酶可以单独使用或将2种以上组合使用。在使用2种以上酶的情况下，各个酶反应可以同时或分别进行。

[0079] 本公开中，优选将胰酶制剂和蛋白酶合用，特别优选将这两种酶混合使用。

[0080] 需要说明的是，原料蛋白质的分解率的计算方法为，利用凯氏定氮法(日本食品工业学会编、“食品分析法”、第102页、株式会社光琳、昭和59年)测定试样的总氮量，利用甲醛滴定法(满田等人编、“食品工学实验书”、上卷、第547页、养贤堂、1970年)测定试样的甲醛态氮量，由这些测定值根据下式计算出分解率。

[0081] 分解率(％)＝(甲醛态氮量/总氮量)×100

[0082] 优选由上述水解液物分离或纯化本公开的肽VPX。

[0083] 本公开的肽VPX的纯化可以通过对与通常寡肽的纯化中使用的方法相同的方法、例如离子交换色谱、吸附色谱、反相色谱、分配色谱、凝胶渗透色谱等各种色谱、溶剂沉淀、盐析、2种液相间的分配等方法进行适当组合来进行。

[0084] 在本公开的肽VPX的分离或纯化时，包含目标物质的级分可以通过将后述的二肽基肽酶IV抑制作用和/或血管紧张素转换酶抑制作用作为指标来决定。另外，这些级分的活性成分可以通过质谱分析法来鉴定。

[0085] 另外，由水解酶得到的蛋白质分解物优选至少包含VPX，进而从容易回收更良好的活性成分的方面出发，优选以含有序列号2～10表示的氨基酸序列的方式制备。

[0086] 另外，本公开的肽VPX还可以通过化学合成来制造。

[0087] 本公开的肽VPX的化学合成可以通过寡肽的合成中通常使用的液相法或固相法来进行。对于所合成的肽，根据需要去保护，将未反应试剂及副产物等除去，能够分离本公开的肽VPX。

[0088] 这样的肽的合成可以使用市售的肽合成装置进行。可以通过将后述的二肽基肽酶IV抑制作用和/或血管紧张素转换酶抑制作用作为指标来确认得到目标肽。

[0089] 如后述实施例所示，本公开的肽VPX具有二肽基肽酶IV抑制作用。

[0090] 二肽基肽酶IV分解生物体内的与生理功能有关的化合物，从而有时会产生各种疾病或症状。因此，若抑制二肽基肽酶IV，则受到二肽基肽酶IV分解的生物体内的与生理功能有关的化合物的寿命延长，能够对起因于二肽基肽酶IV的疾病或症状进行预防、改善或治疗。

[0091] 作为与上述生理功能有关的化合物，例如，可以举出肠促胰岛素的胰高血糖素样肽1(GLP-1)和葡萄糖依赖性促胰岛素分泌多肽(GIP)。另外，通过抑制该肠促胰岛素的胰高血糖素样肽1的分解，能够起到针对胰岛素的生物合成和分泌的葡萄糖诱导性的刺激、胰高血糖素分泌抑制、基因表达的调整、对于Β细胞的营养性的效果、食物摄取的抑制以及胃排空的徐缓化等各种作用。

[0092] 由此，能够有助于上升的血糖值的正常化、以及空腹感和体重的改善/调整。

[0093] 另外，已知：二肽基肽酶IV的作用会使血管的内皮细胞的功能降低，或者血管的内皮细胞发生障碍。通过该血管的内皮细胞的功能降低或障碍，会因血管的紧张增加而产生血管收缩、动脉硬化、血栓形成等血管障碍，这些原因会导致产生脏器的血流障碍，形成器官功能障碍，诱发糖尿病的并发症。

[0094] 近年来，报道了许多二肽基肽酶IV抑制药的给药引起的内皮细胞的功能改善效果(例如，参照参考文献2～5[参考文献2]Endocrine Journal 2011,58(1),69-73；[参考文献3]J Am Coll Cardiol.2012,59(3),265-76；[参考文献4]Diabetes Care.2011,34(9),
2072-7；[参考文献5]Cardiovascular Diabetology2011,10(85)(http://
www.cardiab.com/content/10/1/85))。

[0095] 除了仅通过降低血糖值而进行改善外，认为这些效果还藉由肠促胰岛素产生的血管的保护作用。若因高血糖而使内皮细胞的功能降低、血管的柔软性丧失，则血压上升、上升的血压进一步损伤血管，当这样的恶性循环出现时，对心脏、肾脏、脑等器官产生不良影响。为了断绝该恶性循环，还尝试了合用二肽基肽酶IV抑制药和血管紧张素转换酶抑制药，认为二肽基肽酶IV的抑制剂在循环器官系统的治疗中也起到重要的作用。

[0096] 即，本公开的肽VPX具有二肽基肽酶IV抑制作用，因此显示出血糖值上升抑制作用、高血糖改善作用、血管内皮功能降低抑制作用、血管内皮功能障碍抑制作用、血管障碍抑制作用、血管内皮细胞的保护作用和食欲抑制作用等。另外，认为本公开的肽VPX还能够进行食欲抑制和血管内皮细胞的保护等。需要说明的是，此处所说的“血糖值上升抑制”是指包括血糖值降低的含义，特别是指“能够使上升至正常值以上或所需以上的血糖值降低”。血糖值的正常值的判断参考日本糖尿病学会的2010年的诊断基准即可。

[0097] 此外，通过利用本公开的肽VPX来抑制二肽基肽酶IV，认为能够对起因于二肽基肽酶IV的疾病或症状进行预防、改善或治疗。由此，本公开的肽VPX能够用于通过使包括人在内的动物进行摄取或对其给药而实现起因于二肽基肽酶IV的疾病或症状等的预防、改善和/或治疗的方法。

[0098] 作为本公开的起因于二肽基肽酶IV的各种疾病或症状，例如，可以举出高血糖症、糖尿病、糖尿病并发症、血管内皮功能障碍、血管障碍等。需要说明的是，起因于二肽基肽酶IV的各种疾病等也可以是二肽基肽酶IV介导的各种疾病等。

[0099] 此外，作为由高血糖症、糖尿病和高血糖状态引起的各种疾病，例如，可以举出糖尿病微血管病变(例如，视网膜病变、肾病、神经损伤等)和大血管并发症(例如，心绞痛/心肌梗塞等缺血性心脏疾病、脑梗塞、闭塞性动脉硬化、坏疽(necropathy)等)等。

[0100] 需要说明的是，二肽基肽酶IV抑制剂能够用作上述各种疾病的预防剂或治疗剂也已经在上述专利文献1～5和参考文献2～5中公开，本公开的肽VPX当然也可以同样地作为上述各种疾病的预防剂或治疗剂来实施。

[0101] 由此，本公开的肽VPX可以用于上述那样的二肽基肽酶IV抑制、血糖值上升抑制、高血糖改善、血管内皮功能障碍抑制和抗糖尿病等，另外，能够用于二肽基肽酶IV抑制剂、血糖值上升抑制剂、血管内皮功能障碍抑制剂和抗糖尿病剂等以上述应用为目的的各种制剂，能够用于制造这些各种制剂。

[0102] 另外，如后述实施例所示，本公开的肽VPX中还存在具有血管紧张素转换酶(下文中也称为“ACE”)抑制作用的物质。

[0103] 此处，血管紧张素转换酶是指下述酶：其作用于血管紧张素原酶切断而由血管紧张素原生成的血管紧张素I，使C末端的2个氨基酸游离，转换成血管紧张素II。

[0104] 血管紧张素转换酶还具有下述作用：生成具有强升压作用的血管紧张素II，同时使具有降压作用的缓激肽失活。因此，血管紧张素转换酶抑制剂已经被用作高血压的治疗药，卡托普利和马来酸依那普利(Renivace)等被用于药品。但是，作为副作用，在卡托普利和马来酸依那普利中有时会发现过度的降压作用及肾功能障碍。由此，希望即便作为补充物或食品添加物提供也具有高安全性的产品，报道了许多对具有血管紧张素转换酶抑制作用的物质的探索(参照参考文献1、6～8。[参考文献1]国际公开2003/044044号小册子；[参考文献6]日本特开平6-40944号公报；[专利文献7]日本特开2001-136995号公报：[参考文献8]日本特开平7-101982号公报)。

[0105] 例如，在参考文献6和7中，已知通过乳酸菌或蛋白酶与肽酶的组合分解酪蛋白等得到的Val-Pro-Pro和Ile-Pro-Pro具有血管紧张素转换酶抑制作用。除此以外，作为具有血管紧张素转换酶抑制作用的三肽，例如，在参考文献8中已知Leu-Leu-Trp，另外在参考文献1中已知Met-Lys-Pro。

[0106] 通过抑制血管紧张素转换酶，除了血压降低作用和缓激肽失活作用以外，认为还能够实现心肥大退缩作用、末梢血管扩张作用、肾保护作用、P物质分解抑制作用等，并且还能够实现高血压状态导致的血管内皮功能障碍的抑制作用和血管障碍的抑制作用等。另外，还已知血管紧张素转换酶抑制剂对于原发性高血压症的改善等具有效果。

[0107] 此外，认为通过抑制血管紧张素转换酶能够预防、改善或治疗起因于血管紧张素转换酶的疾病或症状。

[0108] 作为起因于血管紧张素转换酶的疾病或症状，例如，可以举出高血压症、心脏肥大、肾脏肥大等。需要说明的是，起因于血管紧张素转换酶的各种疾病等也可以是血管紧张素转换酶介导的各种疾病等。

[0109] 另外，由高血压症或高血压状态引起的各种疾病或症状例如可以举出脑溢血、脑梗塞、心绞痛、心肌梗塞、肾功能衰竭、视力障碍、血管性水肿等心血管疾病或血管障碍。

[0110] 即，本公开的肽VPX具有血管紧张素转换酶抑制作用，因此显示出上述血压降低作用、缓激肽失活作用、高血压症状的改善作用、高血压状态导致的血管内皮功能障碍的抑制作用和血管障碍的抑制作用等。此外，通过利用本公开的肽VPX来抑制血管紧张素转换酶，认为还能够对起因于上述血管紧张素转换酶的疾病或症状等进行预防、改善或治疗。由此，本公开的肽VPX能够用于通过使包括人在内的动物进行摄取或对其给药而实现起因于血管紧张素转换酶的疾病或症状等的预防、改善和/或治疗的方法。

[0111] 需要说明的是，血管紧张素转换酶抑制剂能够用作上述各种疾病的预防剂或治疗剂也已经在上述专利文献1和6～8中已公开，本公开的肽VPX当然也可以同样地作为上述各种疾病的预防剂或治疗剂来实施。

[0112] 由此，本公开的肽VPX可以用于血管紧张素转换酶抑制、血压降低和高血压症等，另外，能够用于血管紧张素转换酶抑制剂、血压降低剂和抗高血压剂等以上述应用为目的的各种制剂，能够用于制造这些各种制剂。

[0113] 另外，本公开的肽VPX在兼具血糖值上升抑制作用和血压降低作用这两种效能时，进而可以作为有益的化合物来进行提供。

[0114] 另外，若高血糖值状态持续，则血管的内皮细胞的功能降低，容易产生血管内皮功能障碍，进而该对血管提供强负荷的高血压已知会提高引起血管障碍的危险性。由血管内皮细胞产生使血管平滑肌松弛的因子(NO、PGI2)。并且，若因高血糖而使血管内皮细胞的功能降低，则它们的释放能力也降低。其结果，糖尿病患者会并发高血压。此外，会陷入高血压对血管内皮细胞产生负荷的恶性循环。

[0115] 另外，糖尿病的人类或其预备组(该预备组是指虽未达到糖尿病，但为高血糖值状态的人类。)的人类需要注意高血压。然而，一般而言，即便用高血糖改善药使血糖值降低，也不能说使血压降低；另一方面，即便用血压降低药使血压降低，也不能说使血糖降低。因此，对糖尿病且高血压的人类多开出高血糖改善药和血压降低药两者，还担心因药的组合而引起副作用。

[0116] 通过兼具这样的效能，还可以减少药剂的使用量，因而能够期待副作用的降低。

[0117] 即，本公开的肽VPX可以说对血管改善、血管内皮功能障碍抑制和糖尿病的预防、改善或治疗非常有效，特别是认为对由高血糖状态引起的血管内皮功能障碍的预防、改善或治疗有效。

[0118] 作为本公开的血管内皮功能障碍的具体疾病和症状，例如，可以举出糖尿病性的血管障碍等。

[0119] 根据上述内容，本公开的肽VPX和含有其作为有效成分的上述各种制剂(下文中称为“上述二肽基肽酶IV抑制剂等”)能够用于通过使包括人在内的动物进行摄取或对其给药而实现上述高血糖症、糖尿病(特别是II型糖尿病)、高血压症和糖尿病并发症(例如，糖尿病性的血管内皮功能障碍或肾病、高血压等)、血管内皮功能障碍、血管障碍等的预防、改善和/或治疗的方法。

[0120] 另外，含有本公开的肽VPX作为有效成分的上述各种制剂通过使包括人在内的动物进行摄取或对其给药，能够用于实现上述高血糖症、糖尿病(特别是II型糖尿病)和糖尿病并发症(例如，糖尿病性的血管内皮功能障碍或肾病、高血压等)、血管内皮功能障碍、血管障碍等的预防、改善和/或治疗的方法。

[0121] 另外，本公开的肽VPX和含有其作为有效成分的上述各种制剂还可以作为用于上述高血糖症、糖尿病、血管障碍、高血压症等的预防、改善和/或治疗的人或动物用的药品、准药物、皮肤外用剂、化妆品和食品等的有效成分混配于其中而使用。

[0122] 在混配于药品中时，可以制成经口给药剂或非经口给药剂等。另外，在混配于食品中时，可以应用于以上述起因于二肽基肽酶IV的各种疾病和/或起因于血管紧张素转换酶的各种疾病、以及由高血糖状态和/或高血压症引起的各种疾病等的预防、改善或治疗、二肽基肽酶IV抑制、血糖值上升抑制、高血糖改善、血管紧张素转换酶抑制和血压降低等生理功能为构思(concept)的功能性食品、病人用食品、特定保健用食品等。

[0123] 本公开的肽VPX和含有其作为有效成分的上述各种制剂可以作为用于上述高血糖症、糖尿病、高血压症、血管障碍等的预防、改善和/或治疗的人或动物用的药品、准药物、皮肤外用剂、化妆品和食品等的有效成分混配于其中而使用。

[0124] 本公开的肽VPX和含有其作为有效成分的上述各种制剂可以为经口给药和非经口给药中的任意一种，优选经口给药。作为非经口给药，可以举出静脉注射、直肠给药、吸入等。作为经口给药的剂形，可以举出片剂、胶囊剂、锭剂、糖浆剂、颗粒剂、粉末剂、软膏等。

[0125] 在制剂化时，除了乳蛋白水解物及本公开的肽VPX以外，还可以使用通常制剂化中使用的赋形剂、pH调节剂、着色剂、矫味剂等成分。另外，还可以与公知的或将来发现的具有二肽基肽酶IV抑制作用和/或血管紧张素转换酶抑制作用的药、抗糖尿病药、高血糖改善药、血压降低药等合用。

[0126] 另外，可以将本公开的肽VPX作为有效成分含有在食品中，作为本公开的肽VPX和含有其作为有效成分的上述各种制剂的一个方式，还可以作为具有二肽基肽酶IV作用和/或血管紧张素转换酶抑制作用的食品进行加工。

[0127] 作为这样的食品，液状、糊状、固体、粉末等形态均可，可以举出糖果、流食、饲料(包括宠物用的饲料)等、以及例如小麦粉制品、方便食品、农业加工产品、水产加工产品、畜产加工产品、乳·乳制品、油脂类、基本调料、复合调料·食品类、冷冻食品、饮料、这些以外的市售品等。

[0128] 例如，作为上述小麦粉制品，可以举出面包、通心粉、意大利面、面类、面包混合料、干炸粉、面包粉等。作为上述方便食品类，可以举出方便面、碗面、蒸煮包装食品、烹调罐头、微波炉食品、速食汤·炖制品、速食酱汤·日本清汤、罐装汤、冻干食品、其它方便食品等。

[0129] 例如，作为上述农业加工产品，可以举出罐装农产品、罐装水果、果酱·柑橘果酱类、腌制食品、煮豆类、农业干食品类、谷物(谷物加工产品)等。作为上述水产加工产品，可以举出罐装水产品、鱼火腿·香肠、鱼酱、水产珍味类、佃煮类等。作为上述畜产加工产品，可以举出罐装畜产品·酱类、牲畜肉火腿·香肠等。

[0130] 例如，作为上述乳·乳制品，可以举出加工乳、乳饮料、酸奶类、乳酸菌饮料类、奶酪、冰淇淋类、调制乳粉类、奶油、其它乳制品等。作为上述油脂类，可以举出黄油、人造黄油类、植物油等。

[0131] 例如，作为上述基本调料，可以举出酱油、日本黄酱、沙司类、番茄加工调料、甜料酒类、食醋类等，作为上述复合调料·食品类，可以举出烹调混合料、咖喱预混合料、卤汁、色拉调料类、面条汤类、香辛料类、其它复合调料等。

[0132] 例如，作为上述冷冻食品，可以举出材料冷冻食品、半制冷冻食品、冷冻烹调食品等。

[0133] 例如，作为上述点心类，可以举出焦糖、糖果、口香糖、巧克力、曲奇饼干、饼干、蛋糕、馅饼、小吃、苏打饼干、日式点心、米饼、豆类点心、甜品点心、其它点心等。

[0134] 例如，作为上述饮料类，可以举出碳酸饮料、天然果汁、果汁饮料、含果汁的软饮料、果肉饮料、含浆果的果实饮料、蔬菜饮料、豆奶、豆奶饮料、咖啡饮料、茶饮料、粉末饮料、浓缩饮料、运动饮料、营养饮料、酒类饮料、其它口味饮料等。

[0135] 例如，作为上述以外的市售食品，可以举出婴儿食品、拌饭料、茶泡饭、紫菜等。

[0136] 本公开的二肽基肽酶IV抑制剂等中，本公开的肽VPX的混配量优选相对于制剂的最终组合物至少为0.001质量％。

[0137] 本公开的肽VPX的给药量因年龄、症状等而异，通常为0.001～3000mg/天、优选为0.01～30mg/天，可以每天分1次至3次进行给药。

[0138] 实施例

[0139] 下面说明具体的实施例等，但是本发明(本公开)不限定于此。

[0140] 制造例1：通过酪蛋白的酶分解来制造VPX肽

[0141] <1>酪蛋白的酶分解

[0142] 向市售的酪蛋白(New Zealand Dairy Board制)100g中加入水900g，使其充分分散，添加氢氧化钠而将溶液的pH调节为7.0，使酪蛋白完全溶解。将该酪蛋白水溶液在85℃加热灭菌10分钟，将温度调节为50℃，添加氢氧化钠而将pH调节为9.0，之后分别加入胰酶制剂2g(Amano Enzyme inc.制)、蛋白酶A 4g(Amano Enzyme inc.制)，开始水解反应。在酪蛋白的分解率达到54.9％的时刻，在80℃加热6分钟使酶失活以终止酶反应，并冷却至10℃。对该水解液进行硅藻土过滤，浓缩后冷冻干燥，得到冷冻干燥产物80g。

[0143] <2>通过HPLC分离肽

[0144] 通过反相HPLC进行上述酪蛋白水解物的分离。该HPLC条件示于下述HPLC条件1中。

[0145] [HPLC条件1]

[0146] 柱：Cadenza CD-C18

[0147] 10mmI.D.×250mm(Imtakt Corp.制)

[0148] 检测：UV 215nm

[0149] 流速：3ml/分钟

[0150] 洗脱液A：包含0.2％FA的水溶液

[0151] 洗脱液B：包含0.2％FA的乙腈溶液

[0152] 从洗脱液A的比例为98％起，在30分钟后为75％、40分钟后为50％、43分钟后为20％的梯度条件下，将水解物分离，将洗脱液分别分级成0.75ml。对于洗脱级分测定了二肽基肽酶IV抑制能力，结果在保留时间为16.5分钟时被洗脱的级分(级分1)中确认到强抑制活性能力。

[0153] 此外，为了进行纯化，用其它条件的HPLC进行了纯化。将此时的条件示于下述HPLC条件2中。此时，将条件1的洗脱液A、B分别变更为条件2的洗脱液A、B，其它条件与条件1同样地进行纯化。

[0154] [HPLC条件2]

[0155] 柱：Cadenza CD-C18

[0156] 10mmI.D.×250mm(Imtakt Corp.制)

[0157] 检测：UV 215nm

[0158] 流速：3ml/分钟

[0159] 洗脱液A：包含0.1％TFA的水溶液

[0160] 洗脱液B：包含0.1％TFA的乙腈溶液

[0161] 在相同的梯度条件下将水解物分离，将洗脱液分别分级成0.75ml。对于洗脱级分测定了二肽基肽酶IV抑制能力，结果在保留时间为23.0分钟时被洗脱的级分2和保留时间为22.0分钟时被洗脱的级分3中确认到强抑制活性能力。级分2的酶活性的50％抑制浓度为2.0μg/ml。

[0162] 利用岛津制作所制的蛋白质测序仪(PPSQ-23A)鉴定了上述活性峰值处的级分2的化合物。结果可知具有新型的Val-Pro-Ala(序列号2)结构。需要说明的是，这些氨基酸残基为L-型。

[0163] 此外，利用Thermoquest Corporation制质谱分析仪LTQ鉴定分子量为285.2，通过将m/z＝286.2(MH+)作为前体离子的MS/MS分析，如图1所示检测到m/z＝169.3、187.2、197.1等的产物离子。

[0164] 这样，可以明确具有二肽基肽酶IV抑制能力的肽的结构为Val-Pro-Ala。

[0165] 另外，在后述制造例2中得到的合成肽VPA(序列号2)的情况下的50％抑制浓度为1.9μg/ml，与纯化级分的值一致。

[0166] 另外，对上述活性峰值处的级分3的化合物也同样地进行了鉴定，结果如图2所示，可知具有新型的Val-Pro-Gln(序列号3)结构(分子量342.2)。需要说明的是，这些氨基酸残基全部为L-型。

[0167] 由此，可以确认：在上述<1>酪蛋白酶分解物中包含VPA(序列号2)和VPQ(序列号3)作为具有二肽基肽酶IV抑制活性的新型的肽。

[0168] 此外，在上述<1>酪蛋白水解物中确认到二肽基肽酶IV抑制活性，还确认到在其分解物中包含VPV(序列号7)、VPY(序列号8)、VPK(序列号10)。需要说明的是，这些氨基酸残基全部为L-型。

[0169] 制造例2：VPX肽的化学合成

[0170] 使用肽合成器(433A型、Applied Biosystems公司)并使用Fmoc-Val(株式会社肽研究所))、Fmoc-Pro(株式会社肽研究所)、Fmoc-Ala-Wang-PEG Resin(渡边化学工业株式会社)作为原料，通过固相合成法合成了三肽Val-Pro-Ala。

[0171] 按照Applied Biosystems公司的手册进行操作，之后去保护。在上述HPLC条件1下对该肽进行纯化。

[0172] 对于所得到的三肽，通过质谱分析测定了分子量(M)为285.2，通过将m/z＝286.2(MH+)作为前体离子的MS/MS分析，得到了与纯化级分的谱图同样的谱图。另外，还同样地制作了VPQ(序列号3)，其得到了与纯化级分的谱图同样的谱图(通过质谱分析得到的分子量(M)为342.2)。

[0173] 此外，对于VPM(序列号4)、VPN(序列号5)、VPG(序列号6)、VPV(序列号7)、VPY(序列号8)、VPS(序列号9)和VPK(序列号10)也根据制造例2进行操作，从而化学合成了这些肽。

[0174] 试验例1：各肽的二肽基肽酶IV抑制活性确认试验

[0175] 进行表1所示的制造例2中得到的各肽的二肽基肽酶IV抑制活性确认试验，将其结果示于表1。

[0176] [表1]

[0177]

[0178]

[0179] 试验例2：各肽的血管紧张素转换酶抑制活性确认试验

[0180] 另外，进行了VPA(序列号2)和VPK(序列号10)的ACE抑制活性确认试验，结果50％抑制浓度分别为24.8μg/ml和132μg/ml。由此，可以说该VPA和VPK具有二肽基肽酶IV抑制作用和血管紧张素转换酶抑制作用这两种性质，因此可以说对于血管改善、血管内皮功能障碍抑制和糖尿病的预防、改善或治疗非常有效。

[0181] 由此认为，包含这些三肽(序列号2～10)中的至少一种的酪蛋白的酶分解物能够作为具有二肽基肽酶IV抑制作用或血管紧张素转换酶抑制作用等的原料或食材用于食品、药品等中。

[0182] 对至少包含VPA的市售品的酪蛋白分解物进行了检索，结果在CU5000(森永乳业公司制)的酪蛋白分解物中确认到VPA，这些二肽基肽酶IV抑制的50％抑制浓度为84μg/ml。需要说明的是，关于C800(森永乳业公司制)的二肽基肽酶IV抑制的50％抑制浓度为>1000μg/ml，即便是酪蛋白分解物也未确认到二肽基肽酶IV抑制活性。

[0183] <二肽基肽酶IV抑制活性的测定方法>

[0184] 根据Kato等人的方法“Kato,T.et al.Biochem.Med.19,p351,1978”进行了二肽基肽酶IV(DPP-4)抑制的测定。

[0185] 具体地说，酶(DPP-4)使用重组人DPPIV/CD26(R&D Systems,Inc.)，底物使用H-Gly-Pro-AMC(Biomol GmbH)，进行酶反应。

[0186] 向96孔微孔板(nunc 137101)的各孔中添加水或各浓度的试验物质的水溶液或者HPLC的分级级分，添加20μl Tris-HCl(0.25M,pH8.0)，将总量调节为80μl。搅拌后将板在37℃的保温箱中保温约10分钟左右，添加DPP-4溶液10μl和底物溶液10μl(总液量100μl)，搅拌而开始反应。将代替酶而添加了水的孔作为对照。

[0187] 酶反应的测定使用酶标仪(SH-9000，CORONA ELECTRIC Co.,Ltd.)，在将库内温度保持为37℃的条件下进行测定(间隔5分钟、ex360nm/em460nm)。

[0188] 根据下式，由荧光强度线性地经时增加的期间(反应开始后30分钟以内)的荧光强度的值计算出抑制活性。作为阳性对照，使用了维达列汀(JSResearch Chemicals Trading公司)。

[0189] 抑制率(％)＝100％-[(Y-b)/(X-a)]×100％

[0190] X：水+酶+底物

[0191] Y：试验物质+酶+底物

[0192] a：水+底物

[0193] b：试验物质+底物

[0194]

[0195] 对试验物质的浓度进行系列稀释(10～2000μg/ml)，求出其抑制率。根据其结果，求出试验物质的添加浓度的对数(log10)与抑制率之间的关系式。

[0196] 并且，由该关系式反推出酶的抑制率为50％时的浓度，由此计算出IC50。

[0197] <血管紧张素转换酶抑制活性的测定方法>

[0198] 根据Araujo等人的方法[Araujo,M.C.,et al.,Biochemistry 39,8519,2000]进行了血管紧张素转换酶抑制(ACE抑制)的测定。

[0199] 酶(ACE)使用来自兔肺的血管紧张素转换酶(SIGMA)，底物使用Abz-FRK(Dnp)-P(Enzo Life Sciences International,Inc.)，进行酶反应(Araujo,M.C.,et al.,Biochemistry 39,8519,2000)。

[0200] 向96孔微孔板(nunc 137101)的各孔中添加水或各浓度的试验物质的水溶液或者HPLC的分级级分，添加20μl Tris-HCl(0.25M,pH8.0)，将总量调节为80μl。搅拌后将板在37℃的保温箱中保温约10分钟左右，添加ACE溶液10μl和底物溶液10μl(总液量100μl)，搅拌而开始反应。将代替酶而添加了水的孔作为对照。

[0201] 酶反应的测定使用酶标仪(SH-9000，CORONA ELECTRIC Co.,Ltd.)，在将库内温度保持为37℃的条件下进行测定(间隔5分钟、ex320nm/em420nm)。

[0202] 根据下式，由荧光强度线性地经时增加的期间(反应开始后30分钟以内)的荧光强度的值计算出抑制活性。

[0203] 抑制率(％)＝100％-[(Y-b)/(X-a)]×100％

[0204] X：水+酶+底物

[0205] Y：试验物质+酶+底物

[0206] a：水+底物

[0207] b：试验物质+底物

[0208]

[0209] 对试验物质的浓度进行系列稀释(10～2000μg/ml)，求出其抑制率。根据其结果，求出试验物质的添加浓度的对数(log10)与抑制率之间的关系式。并且，由该关系式反推出酶的抑制率为50％时的浓度，由此计算出IC50。

[0210] 工业实用性

[0211] 本发明的肽VPX能够从酪蛋白水解物中分离，因此安全性高，能够在药品、食品、皮肤外用剂和功能性食品等广泛的领域中使用。

[0212] 另外，本技术还可以采取下述构成。

[0213] [1]一种肽，其由Val-Pro-X构成[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]。

[0214] [2]如上述[1]所述的肽，其中，上述X为碱性氨基酸残基、脂肪族中性氨基酸残基、具有酰胺基的中性氨基酸残基或具有芳香族的中性氨基酸残基。

[0215] [3]如上述[1]或[2]所述的肽，其中，上述X选自丙氨酸残基、谷氨酰胺残基、甲硫氨酸残基、天冬酰胺残基、甘氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、丝氨酸残基和赖氨酸残基。

[0216] [4]如上述[1]～[3]中任一项所述的肽，其中，上述肽为选自由下述(a)～(i)中的任一种氨基酸序列构成的肽中的1种或2种以上。

[0217] (a)Val-Pro-Ala(序列号2)

[0218] (b)Val-Pro-Gln(序列号3)

[0219] (c)Val-Pro-Met(序列号4)

[0220] (d)Val-Pro-Asn(序列号5)

[0221] (e)Val-Pro-Gly(序列号6)

[0222] (f)Val-Pro-Val(序列号7)

[0223] (g)Val-Pro-Tyr(序列号8)

[0224] (h)Val-Pro-Ser(序列号9)

[0225] (i)Val-Pro-Lys(序列号10)

[0226] 从生理活性的方面出发，优选为VPA(序列号2)、VPQ(序列号3)、VPN(序列号5)、VPG(序列号6)、VPV(序列号7)、VPY(序列号8)、VPS(序列号9)、VPK(序列号10)。

[0227] 从二肽基肽酶IV抑制活性的方面出发，优选为VPA(序列号2)、VPQ(序列号3)、VPV(序列号7)。

[0228] 从血管紧张素转换酶抑制活性的方面出发，优选为VPA(序列号2)、VPK(序列号10)。

[0229] [5]一种二肽基肽酶IV抑制剂、高血糖改善剂、血糖值上升抑制剂、抗糖尿病剂、血管内皮功能障碍抑制剂、血管改善剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血压降低剂或抗高血压症剂，其含有由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]的单个或多个或者上述[2]～[4]中任一项所述的肽作为有效成分。

[0230] [6]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽的用于制造二肽基肽酶IV抑制剂、高血糖改善剂、血糖值上升抑制剂、抗糖尿病剂、血管内皮功能障碍抑制剂、血管改善剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血压降低剂或抗高血压症剂的应用。

[0231] [7]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽的用于制造二肽基肽酶IV抑制用食品、高血糖改善剂、血糖值上升抑制用食品、抗糖尿病用食品、血管内皮功能障碍抑制用食品、血管改善用食品、血管紧张素转换酶抑制用食品、血压降低用食品的应用。

[0232] [8]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽在

[0233] 二肽基肽酶IV抑制剂、高血糖改善剂、血糖值上升抑制剂、抗糖尿病剂、血管内皮功能障碍抑制剂、血管改善剂、血管紧张素转换酶抑制剂、血压降低剂或抗高血压症剂中的应用。

[0234] [9]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽在

[0235] 二肽基肽酶IV抑制用食品、血糖降低用食品、抗糖尿病用食品、血管内皮功能障碍抑制用食品或血管改善用食品中的应用。

[0236] [10]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽，其用于起因于二肽基肽酶IV的疾病、起因于高血糖状态的疾病、糖尿病、起因于血管内皮功能障碍或血管障碍的疾病、起因于血管紧张素转换酶的疾病、起因于高血压状态的疾病的预防、改善或治疗。

[0237] [11]一种起因于二肽基肽酶IV的疾病、起因于高血糖状态的疾病、糖尿病、起因于血管内皮功能障碍或血管障碍的疾病、起因于血管紧张素转换酶的疾病、起因于高血压状态的疾病的预防、改善或治疗方法，其中，该方法将由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽作为有效成分。

[0238] [12]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽，其用于在起因于二肽基肽酶IV的疾病、起因于高血糖状态的疾病、糖尿病、起因于血管内皮功能障碍或血管障碍的疾病、起因于血管紧张素转换酶的疾病、起因于高血压状态的疾病的预防、改善或治疗中的应用。

[0239] [13]一种由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽的

[0240] 用于起因于二肽基肽酶IV的疾病、起因于高血糖状态的疾病、糖尿病、起因于血管内皮功能障碍或血管障碍的疾病、起因于血管紧张素转换酶的疾病、起因于高血压状态的疾病的预防、改善或治疗的应用。

[0241] [14]上述起因于二肽基肽酶IV的疾病和/或症状优选选自高血糖症、糖尿病、糖尿病并发症、血管内皮功能障碍和血管障碍。

[0242] [15]上述起因于血管紧张素转换酶的疾病和/或症状优选选自高血压症、心血管疾病。

[0243] [16]水解酪蛋白而得到的由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]、或上述[2]～[4]中任一项所述的肽及其制造方法。

[0244] [17]通过以下工序将酪蛋白分离纯化而得到的由Val-Pro-X构成的肽[式中，X表示氨基酸残基(不包括L-脯氨酸残基)。]或上述[2]～[4]中任一项所述的肽及其制造方法。

[0245] (a)利用水解酶(优选内肽酶)进行。优选在10～85℃、0.1～48小时的条件下进行。

[0246] (b)通过色谱将其水解分解物分离纯化。优选使用选自离子交换色谱、反相色谱、分配色谱等中的1种或2种色谱。