一种杏鲍菇固体菌种液化工艺，包括如下步骤：（1）液体培养；（2）固体培养；（3）粉碎；（4）稀释，即得。本发明工艺简单，接种简便，发菌快，出菇早，优质高产，效率高，污染风险小，投资和运行成本低，经济效益好。使用该方法制备的杏鲍菇液化菌种接种后，菌种的渗透力强，发菌快。而且，杏鲍菇液化菌种的栽培出菇时间大大缩短、出菇整齐、生长速度快，产量明显提高。
1.一种杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，包括如下步骤：
（1）液体培养：将杏鲍菇菌种接种在液体培养基上，杏鲍菇菌种的接种量为相当于液体培养基质量的3-5%，进行液体培养，培养温度23－25℃,初始pH 7-7.5，摇床转速250－
所述液体培养基的配方：无菌水1000ml、马铃薯80－120克、红糖12－18克、葡萄糖8－
12克、麦麸38－42克、蛋白胨1.8－2.2克、磷酸二氢钾1.8－2.2克、硫酸镁0.8－2.2克、维生素B1 5－10mg ，pH值自然；
（2）固体培养：将步骤（1）所得菌丝体在麦粒培养基上进行纯培养，培养温度为24-25℃，培养20-22天，得菌丝体的菌块；
所述麦粒培养基由以下质量百分比的原料制成：小麦96－98%，石膏1－2％，碳酸钙1－
所述麦粒培养基的制备方法：①称量小麦：用500毫升的菌种瓶时，每瓶用小麦干重
0.18－0.22千克；用750毫升的菌种瓶时，每瓶用干小麦0.28－0.32千克；②漂洗：用清水将麦粒漂洗2－3遍；③浸泡：在制种的前一天下午，用质量浓度为0.8－1.2wt％的石灰水浸泡小麦，夏天浸泡10－12小时，春秋冬季气温低时浸泡15－20小时；④煮沸：小麦捞出后在煮麦锅内煮沸，水沸腾后再煮18－22分钟，当麦粒达到“无白心，不开花”的标准后及时捞出，沥干多余水分；⑤晾晒：将麦粒摊开，晾去表面水分，麦粒不沾手时及时收起；⑥加辅料：把石膏、碳酸钙按比例加入，搅拌均匀；⑦装瓶、加棉塞：麦粒装至瓶肩即可；⑧灭菌：采用高压锅在0.14－0.16MPa灭菌，控温灭菌时间保持在2－2.5小时；⑨冷却：灭菌结束后，自然冷却，当压力回复到0时，打开锅盖，利用锅体余热烘干棉塞，当培养基温度降低到45－50℃时取出，放到干净的地方冷却到常温后才能接种；⑩将冷却后的培养基移入接种室接种；
（3）粉碎：将步骤（2）所得菌丝体的菌块采用菌块粉碎机粉碎至40目筛以下；
（4）稀释：将粉碎后的菌块经无菌水稀释，以无菌操纵取菌块10g，放于800－1000mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶内，瓶内预置3-5个的玻璃珠，经振荡或研磨制成1∶80－100的均匀稀释液，即得。
2.根据权利要求1所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（1）中，液体培养时液体培养基的装瓶量为250mL的培养瓶装100mL。
3.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（1）中，培养温度为24℃。
4.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（1）中，摇床转速为270r/min。
5.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（1）中，液体培养基的配方：无菌水1000ml、马铃薯100克、红糖15克、葡萄糖10克、麦麸40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁1.0克、维生素B1 10mg，pH值自然。
6.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（2）中，煮麦时加水量为相当于麦粒重量的110-120%。
7.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（2）中，采用高压锅在0.15MPa灭菌。
8.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（3）中，粉碎转速≤2000r/min。
9.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（3）中，粉碎选用FFC— 2 3A型爪式粉碎机，卸下筛片。
10.根据权利要求1或2所述的杏鲍菇固体菌种液化工艺，其特征在于，步骤（2）中，所述麦粒培养基含水量50±1wt％，pH7.5－8.8。
一种杏鲍菇固体菌种液化工艺
技术领域
[0001] 本发明涉及一种固体菌种液化工艺，尤其是涉及一种杏鲍菇固体菌种液化工艺。
背景技术
[0002] 杏鲍菇，别名剌芹侧耳，隶属于真菌门中的担子菌纲，是我国近年来开发栽培成功的集食用、药用、食疗于一体的珍稀食用菌新品种。杏鲍菇具有杏仁香味，不仅肉质肥厚、口感鲜嫩、味道清香，而且营养丰富。研究表明，杏鲍菇富含蛋白质、碳水化合物、维生素及钙、镁、铜等矿物质。此外，杏鲍菇还具有降血脂、降胆固醇、促进胃肠消化、增强机体免疫能力、抗癌、防止心血管病及美容等功效。杏鲍菇以其良好的口感和较长的货架期深受消费者的青睐。
[0003] 目前的杏鲍菇工厂化生产和菌种生产，主要还是采用传统的三级固体菌种繁育工艺和人工接种法。但是由于菌种退化、错种等生产事故每年均有发生，杏鲍菇集约化、工厂化生产受到严重制约。而日本、韩国等食用菌产业技术先进国家，在菌种繁育领域已普遍采用液体菌种技术，特别是近两年日本开发成功了国际上最先进的还原型液体菌种技术(又称第三代液体菌种)，并在我国多个省份的工厂化生产中进行应用，菌种由日方公司按时定量提供，在收取高额设备和工艺转让费的同时，还按接种生产量收取推广应用费，对我国和我省食用菌产业的持续、安全生产提出了严峻挑战。此外，以往使用的发酵液体菌种由于含有糖分，培养基经常会粘在喷嘴周围，容易造成污染，因此开机接种半个小时左右就要停机，对喷嘴进行清洗，影响了产率。
发明内容
[0004] 本发明要解决的技术问题是，克服现有技术的不足，提供一种成本较低，菌菇产率高，工艺较简单的杏鲍菇固体菌种液化工艺。
[0005] 本发明解决其技术问题采用的技术方案是，一种杏鲍菇固体菌种液化工艺，包括如下步骤：
[0006] （1）液体培养：将杏鲍菇菌种接种在液体培养基上，杏鲍菇菌种的接种量为相当于液体培养基质量的3-5%（装瓶量优选250mL的培养瓶装100mL），进行液体培养，培养温度23－25℃（优选24℃）,初始pH 7-7.5，摇床转速250－280r/min（优选270r/min），培养时间
6-7d，得菌丝体；
[0007] 所述液体培养基的配方：无菌水1000ml、马铃薯80－120克、红糖12－18克、葡萄糖8－12克、麦麸38－42克、蛋白胨1.8－2.2克、磷酸二氢钾1.8－2.2克、硫酸镁0.8－2.2克、维生素B1 5－10mg ，pH值自然；
[0008] 液体培养基的优选配方：无菌水1000ml、马铃薯100克、红糖15克、葡萄糖10克、麦麸40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁1.0克、维生素B1 10mg，pH值自然；
[0009] （2）固体培养：将步骤（1）所得菌丝体在麦粒培养基上进行纯培养，培养温度为24-25℃，培养20-22天，得菌丝体的菌块；
[0010] 所述麦粒培养基由以下质量百分比的原料制成：小麦96－98%，石膏1－2％，碳酸钙1－2%；所述麦粒培养基优选含水量50±1wt％，pH7.5－8.8；
[0011] 所述麦粒培养基的制备方法：①称量小麦：用500毫升的菌种瓶时，每瓶用小麦干重0.18－0.22千克；用750毫升的菌种瓶时，每瓶用干小麦0.28－0.32千克；②漂洗：用清水将麦粒漂洗2－3遍，除去灰尘、麦糠等杂物，同时也减少培养基中杂菌的基数；③浸泡：在制种的前一天下午，用质量浓度为0.8－1.2wt％的石灰水浸泡小麦，夏天一般浸泡10－12小时，春秋冬季气温低时浸泡15－20小时；④煮沸：小麦捞出后在煮麦锅内煮沸，水沸腾后再煮18－22分钟，当麦粒达到“无白心，不开花”的标准后及时捞出，沥干多余水分；煮麦时加水不可偏少（加水量优选为相当于麦粒重量的110-120%），麦粒成熟度是关系麦粒菌种制作成败的关键；⑤晾晒：将麦粒摊开，晾去表面水分，麦粒不沾手时及时收起；⑥加辅料：把石膏、碳酸钙按比例加入，搅拌均匀；⑦装瓶、加棉塞：麦粒装至瓶肩即可，棉塞大小、松紧度要适宜；⑧灭菌：采用高压锅在0.14－0.16MPa（优选0.15MPa）灭菌，灭菌过程参照母种的灭菌，不过，由于麦粒培养基中杂菌基数大，培养基体积大，热不易穿透，控温灭菌时间应保持在2－2.5小时，才能保证灭菌彻底；灭菌是否彻底是影响制种成功率的关键；⑨冷却：灭菌结束后，自然冷却，当压力回复到0时，打开锅盖，利用锅体余热烘干棉塞，当培养基温度降低到45－50℃时取出，放到干净的地方冷却到常温后才能接种；如果温度很高时就取出培养基，瓶内麦粒上会有大量的冷凝水，对菌丝生长不利；⑩将冷却后的培养基移入接种室接种；
[0012] （3）粉碎：将步骤（2）所得菌丝体的菌块采用菌块粉碎机粉碎至40目筛以下；
[0013] 粉碎优选转速≤2000r/min，优选FFC— 2 3A型爪式粉碎机，卸下筛片效果不错，被粉碎的物料的温升不会很高的，如效果不理想就再粉一次；
[0014] （4）稀释：将粉碎后的菌块经无菌水稀释，以无菌操纵取菌块10g，放于800－1000mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内，瓶内预置3-5个的玻璃珠，经振荡或研磨制成1∶80－100的均匀稀释液，即得。
[0015] 本发明所制备的液化菌种的接种培养工艺与液体菌种工艺相同。
[0016] 液化菌种是把特殊加工的块状的菌丝打碎后,用无菌水稀释而成的液体菌种。液化菌种不同于通常的发酵液体菌种，也不同于传统的固体菌种。它是将利用微生物发酵技术生产的菌丝块进行粉碎、稀释后做成的菌种。有如下几个特点：一是使用方便，由专业企业生产浓缩菌种块，菇厂只要把菌种稀释搅拌即可使用，200克的菌丝块可以接种5万瓶，生产2吨食用菌；二是可以任意选择菌丝浓度，发菌快，培养与生育时间缩短。以杏鲍菇的生产效率为例，利用固体木屑种的生长周期为55天，利用发酵液体菌种生长周期为48天，而利用本发明制得的固体液化菌种生长周期为42天；三是菇厂所需设备少，初期投资成本低，只需要接种机、接种罐、菌丝块搅拌机及简易无菌箱，而且由于不需要液体发酵罐进行深层培养，因此可以有效控制菌种来源的污染，能解决使用液体菌种污染率高的问题；四是还原型液体菌种不含糖，黏度低，接种时喷射压力低，不容易喷溅，降低污染率。
[0017] 本发明制得之液化菌种属还原型液体菌种，不含糖分，能避免培养基粘在喷嘴周围、造成污染这一问题，不仅可以提高生产效率，而且能降低运营成本。本发明之液化菌种的制备方法也适用于其他菇种。
[0018] 杏鲍菇液化菌种接种与常规固体菌种接种工艺相比，优势显著：一是菌种用种量节省90%；二是节约接种环节成本78.2%；三是提高接种成品率20%；四是能提高杏鲍菇品质；五是发菌迅速，出菇比较整齐，固体接种工厂化要28天才能满瓶，液化接种只要24天就能满瓶；利用固体木屑种的生长周期为55天，利用发酵液体菌种生长周期为48天，而利用本发明制得的固体液化菌种生长周期为42天，能大大缩短生长周期，提高经济效益；三是从目前的产量来看，固体菌种接种平均每1100毫升的单瓶产量是150克，而液化菌种接种平均每1100毫升的单瓶产量可高达200克，总产提高34%。
[0019] 本发明所用设备，与日本开发出的还原型液体菌种技术所需的全套设备相比，企业应用所耗费用只占设备总值200余万元的十分之一，而结果却有异曲同工之效。
[0020] 本发明所得液化菌种菌丝含量高，菌种培养时间短（原来的固体菌种的菌种培养时间为28天，本发明液化菌种的菌种培养时间为24天），设备投资少，成本低。
[0021] 本发明工艺简单，接种简便，发菌快，出菇早，优质高产，效率高，污染风险小，投资和运行成本低，经济效益好。使用该方法制备的杏鲍菇液化菌种接种后，菌种的渗透力强，发菌快。而且，杏鲍菇液化菌种的栽培出菇时间大大缩短、出菇整齐、生长速度快，产量明显提高。
具体实施方式
[0022] 以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
[0023] 实施例1
[0024] 本实施例包括以下步骤：
[0025] （1）液体培养：将杏鲍菇菌种接种在液体培养基上，杏鲍菇菌种的接种量为相当于液体培养基质量的4%（装瓶量为250mL的培养瓶装100mL），进行液体培养，培养温度24℃,初始pH7-7.5，摇床转速270r/min，培养时间6d，得菌丝体；
[0026] 所述液体培养基的配方：无菌水1000ml、马铃薯100克、红糖15克、葡萄糖10克、麦麸40克、蛋白胨2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁1.0克、维生素B1 10mg，pH值自然；
[0027] （2）固体培养：将步骤（1）所得菌丝体在麦粒培养基上进行纯培养，培养温度为24℃，培养22天，得菌丝体的菌块；
[0028] 所述麦粒培养基由以下质量百分比的原料制成：小麦98%，石膏1％，碳酸钙1%；含水量50±1wt％，pH8.0；
[0029] 所述麦粒培养基的制备方法：①称量小麦：用500毫升的菌种瓶，每瓶用小麦干重0.2千克；②漂洗：用清水将麦粒漂洗3遍，除去灰尘、麦糠等杂物，同时也减少培养基中杂菌的基数；③浸泡：在制种的前一天下午，用质量浓度为1.0wt％的石灰水浸泡小麦，夏天浸泡
12小时，春秋冬季气温低时浸泡20小时；④煮沸：小麦捞出后在煮麦锅内煮沸，水沸腾后再煮20分钟，当麦粒达到“无白心，不开花”的标准后及时捞出，沥干多余水分；煮麦时加水量为相当于麦粒重量的1.2倍；⑤晾晒：将麦粒摊开，晾去表面水分，麦粒不沾手时及时收起；
⑥加辅料：把石膏、碳酸钙按比例加入，搅拌均匀；⑦装瓶、加棉塞：麦粒装至瓶肩即可，棉塞大小、松紧度要适宜；⑧灭菌：采用高压锅在0.15MPa灭菌，灭菌过程参照母种的灭菌（现有技术），由于麦粒培养基中杂菌基数大，培养基体积大，热不易穿透，控温灭菌时间2.5小时，保证灭菌彻底；⑨冷却：灭菌结束后，自然冷却，当压力回复到0时，打开锅盖，利用锅体余热烘干棉塞，当培养基温度降低到50℃时取出，放到干净的地方冷却到常温后才能接种；⑩将
