一种忘萱草鳞茎芽的组培方法

摘要

本发明涉及一种忘萱草鳞茎芽的组培方法，选取忘萱草‘红宝石’鳞茎盘两侧具有分生能力的鳞茎芽，将鳞茎盘切割成0.4立方厘米带有鳞茎芽的外植体小块，用质量百分比浓度为0.2％的升汞溶液浸泡18分钟灭菌，带有鳞茎芽的外植体小块3‑4天后会直接分化成芽，每个鳞茎芽基芽8‑12天能分化出7‑10个丛生侧芽，当丛生苗长到3‑4厘米左右时放入生根诱导培养基中培养，当诱导根3‑4条时再进行炼苗，本过程可使组培苗移栽成活率达98％以上。与现有技术相比，本培养方法具有简化组培操作程序、提高丛生芽增殖系数、缩短组培生产周期等优势，利用该方法可以进行忘萱草‘红宝石’大规模快繁生产。

权利要求

1.一种忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法，其特征在于包括以下步骤：

①外植体选择和处理：依据忘萱草‘红宝石’每年春季3-4月份具有分株繁殖特性，外植体选取鳞茎盘两侧具有分生能力的鳞茎芽，首先将鳞茎盘切割成0.4立方厘米带有鳞茎芽的外植体小块放入三角瓶中流水冲洗2-3小时，冲洗干净后用质量百分比浓度为70％酒精浸泡30秒进行杀菌，再用质量百分比浓度为0.2％的升汞溶液浸泡消毒18分钟，最后用无菌水震荡清洗5次；

②丛生芽诱导和增殖：将无菌的带有鳞茎芽外植体小块放入丛生芽增殖诱导培养基中

3-4天后会直接分化成芽，随着芽的生长会在芽基部分化出新的侧芽，每个鳞茎芽基芽8-12天后能分化出7-10个丛生侧芽，丛生芽诱导增殖培养基：MS+土豆泥20mg/L+6-苄基嘌呤

1.5mg/L+激动素1.0mg/L；

③丛生苗生根诱导：当丛生苗长到3-4厘米左右的时放入生根培养基中培养，生根培养基是1/4MS+土豆泥5mg/L+萘乙酸0.3mg/L，当诱导根3-4条时再进行炼苗，根生长极为健壮，组培苗长势极好，本过程组培苗移栽成活率达98％以上。

2.根据权利要求1所述的忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法，其特征在于步骤①所述的外植体为鳞茎芽。

3.根据权利要求1所述的忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法，其特征在于步骤①所述的带有鳞茎芽的外植体小块用质量百分比浓度0.2％的升汞溶液消毒18分钟。

4.根据权利要求1所述的忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法，其特征在于步骤②所述的丛生芽诱导增殖培养基是MS+土豆泥20mg/L+6-苄基嘌呤1.5mg/L+激动素1.0mg/L。

5.根据权利要求1所述的忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法，其特征在于步骤③所述的生根培养基是1/4MS+土豆泥5mg/L+萘乙酸0.3mg/L。

说明书

一种忘萱草鳞茎芽的组培方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种宿根花卉忘萱草组织培养技术，具体涉及一种忘萱草‘红宝石’鳞茎芽的组培方法。

背景技术

[0002] 黑龙江地理气候条件使黑龙江省园林绿化苗木种类单一，抗寒、抗逆品种缺乏，特别是能够应用于绿化的花卉品种少之又少，据哈尔滨园林处统计，园林绿化花卉在2013年的一年缺口量达一亿株左右，尤其是宿根花卉，各大苗圃几乎没有现苗，而萱草属于多年生宿根花卉，具有抗寒越冬能力，在城市极端逆境环境中能够正常生长。

[0003] 萱草不能用种子进行大量生产繁殖，只有靠分株繁殖，而一年只能分4～5株，分株繁殖生产技术是严重制约萱草生产的瓶颈，目前市场上供应只有黄花萱草，而忘萱草在花色、株型、抗寒性等方面均优于黄花萱草，因此对忘萱草简约化快繁技术进行研究具有广阔的市场前景；忘萱草(Hemerocallis fulva(L.)L.Var.disticha(Donn.)Baker)，为百合科多年生草本宿根花卉，叶狭长，花呈喇叭形，花茎短而适中，花色为深红，色彩华丽，具有观赏价值高、适应性强、栽培管理粗放等特点，能广泛用于城市绿化和园林景观建设。

[0004] 对忘萱草‘红宝石’这个品种的研究报道较少，目前还尚未有对忘萱草‘红宝石’鳞茎芽组培方法的报道，本组培快繁中心多年对忘萱草‘红宝石’快繁技术进行研究，卢宝伟等对忘萱草‘红宝石’花托为外植体进行组培快繁试验中，获得快繁组培苗；在安凤霞、卢宝伟等的研究中用红花萱草的地下块茎作为外植体获得组培试验苗；与目前组培技术相比，更需要开发出具有周期短，能大量快速繁殖的忘萱草‘红宝石’组培方法，来满足日趋增大的市场需求。

发明内容

[0005] 本发明的目的：提供一种忘萱草‘红宝石’的鳞茎芽组培快繁方法，该培养方法具有培养程序少、增殖系数高、周期短等诸多优点。

[0006] 本发明的技术方案：是一种忘萱草‘红宝石’鳞茎芽快速组培成苗的方法，其特征在于按照以下步骤进行：

[0007] ①外植体选择和处理：依据忘萱草‘红宝石’每年春季3-4月份具有分株繁殖特性，外植体选取鳞茎盘两侧具有分生能力的鳞茎芽，首先将鳞茎盘切割成0.4立方厘米带有鳞茎芽的外植体小块放入三角瓶中流水冲洗2-3小时，冲洗干净后用质量百分比浓度为70％酒精浸泡30秒进行杀菌，再用质量百分比浓度为0.2％的升汞溶液浸泡消毒18分钟，最后用无菌水震荡清洗5次。

[0008] ②丛生芽诱导和增殖：将无菌的带有鳞茎芽外植体小块放入丛生芽增殖诱导培养基中3-4天后会直接分化成芽，随着芽的生长会在芽基部分化出新的侧芽，每个鳞茎芽基芽8-12天后能分化出7-10个丛生侧芽，丛生芽诱导增殖培养基是MS+土豆泥20mg/L+6-苄基嘌呤1.5mg/L+激动素1.0mg/L。

[0009] ③丛生苗生根诱导：当丛生苗长到3-4厘米左右的时放入生根培养基中培养，生根培养基是1/4MS+土豆泥5mg/L+萘乙酸0.3mg/L，当诱导根3-4条时再进行炼苗，根生长极为健壮，组培苗长势极好，本过程组培苗移栽成活率达98％以上。

[0010] 上述丛生芽诱导增殖和丛生苗生根诱导的基础培养液为MS(Murashige and Skoog)

[0011] 上述培养基均添加3％(质量百分比)蔗糖和0.6％(质量百分比)卡拉胶，pH值5.8。将分装好的培养基置于高压蒸汽灭菌锅中在110℃灭菌20min，取出冷却，放置2-3d即可使用。

[0012] 本发明获得的有益效果：

[0013] 与现有的忘萱草‘红宝石’其他组培方法相比，本发明创新点是所采用的外植体鳞茎芽，鳞茎芽是鳞茎盘两侧具有分生能力的芽点，其优点在于不仅诱导启动时间短，一般3-4天即可直接诱导启动出芽，诱导率达100％，而且增殖诱导率高，每个鳞茎芽基芽8-12天后能分化出7-10个丛生侧芽；本人曾用过花托作为外植体进行组织培养，但花托外植体诱导启动时间较长，需要15-20天，且诱导启动和增殖要分开进行，而该方法将诱导和增殖分化结合成一步进行，不仅节省诱导分化时间也简化了组培操作程序。

[0014] 丛生芽增殖诱导和丛生苗生根诱导中加入土豆泥目的是为组培苗提供营养物质，加速丛生芽快速生长，这样缩短组培快繁实施周期到45-50天左右，比忘萱草‘红宝石’花托为外植体的组培快繁周期(2个月)短10-15天，采用本发明实施方式可以进行大规模快速组培苗生产。

附图说明

[0015] 图1三年生开花的忘萱草‘红宝石’；图2采集春季3-4月份忘萱草‘红宝石’植物材料；图3切割带有鳞茎芽外植体小块；图4启动3-4天的鳞茎芽；图5 8-12天后分化增殖出的7-8个丛生芽；图6诱导苗发出3-4个侧根。

具体实施方式

[0016] 以下结合实施例对本发明做进一步详细描述：

[0017] ①外植体选择和处理：忘萱草‘红宝石’植物取材于黑龙江生态工程职业学院院内组培苗驯化基地，忘萱草‘红宝石’材料是早期生产的三年生组培苗，抗寒性状好，花色纯正。

[0018] 依据忘萱草‘红宝石’每年春季3-4月份具有分株繁殖特性，本发明外植体选取鳞茎盘两侧具有分生能力的鳞茎芽，首先鳞茎盘两侧发白芽点(鳞茎芽)切割成0.4立方厘米外植体小块放入三角瓶中流水下进行冲洗2-3小时，冲洗干净后用质量百分比浓度70％酒精浸泡30秒进行杀菌，再用质量百分比浓度的0.2％的升汞溶液浸泡消毒18分钟，最后用无菌水震荡清洗5次。

[0019] 本发明所选用的鳞茎芽切割成0.4立方厘米小块用质量百分比浓度0.2％的升汞溶液浸泡消毒18分钟左右，当升汞处理时间在一定的情况下，随着升汞浓度的升高其外植体污染率不断降低，当升汞浓度达0.2％时，其外植体污染率降到最低，当升汞浓度超过0.2％时，鳞茎芽刚开始出现发白，3-4天就开始死亡；当升汞处理浓度在0.2％不变情况下，外植体污染率随灭菌时间增加而降低，当升汞溶液浸泡18分钟左右时，污染率降到最低，当超过18分钟以后，外植体出现发白死亡现象，故用0.2％的升汞溶液浸泡18分钟对鳞茎芽灭菌消毒最为适宜。

[0020] 外植体取材时间是诱导丛生芽的关键，取材时间应在鳞茎盘分株期间，一般应在每年春季3-4月份，外植体取材部位和大小必须适中，取对应鳞茎盘两侧有一点发白的芽点切取大小为0.4立方厘米的小块，切取鳞茎芽外植体过大容易长菌，过小容易把分生组织切掉。

[0021] ②丛生芽诱导和增殖：将带有鳞茎芽无菌外植体小块接种到丛生芽诱导增殖培养上3-4天后会直接分化成芽，8-12天后芽基部分化出新的侧芽，每一个鳞茎芽基芽能分化出7-10个丛生侧芽，该方法将芽启动诱导和分化增殖结合成一步进行达到简化组培程序，同时又降低了生产成本。

[0022] 先用较高浓度的6-苄基嘌呤和激动素，鳞茎芽和丛生侧芽分化状态较好，但是丛生苗的叶片会发生卷曲，严重时会发生畸形；再用较低浓度的6-苄基嘌呤和激动素处理时，丛生侧芽分化状态较好，但是分化率较低，只是从鳞茎芽两侧分化出1-2个丛生芽。

[0023] 加入土豆泥是丛生芽快速生长的营养基础，有利于缩短组培快繁时间，当土豆泥浓度为20mg/L左右时，丛生芽健壮且生长迅速，丛生芽诱导增殖培养基是MS+土豆泥20mg/L+6-苄基嘌呤1.5mg/L+激动素1.0mg/L。

[0024] ③丛生苗生根诱导：当无菌丛生苗长到3-4厘米左右的时放入生根培养基中培养，当诱导根3-4条时再进行炼苗，本过程组培苗移栽成活率达98％以上。

[0025] 丛生苗生根诱导中用1/4MS+土豆泥5mg/L，降低MS和土豆泥的浓度目的是为了控制丛生芽营养供应量，提高丛生芽生根能力；生根率随萘乙酸浓度提高而不断提高，当浓度达到0.3mg/L，根生长极为迅速且健壮，当浓度超过0.3mg/L时，根生长缓慢，苗的长势降低，生根培养基是1/4MS+土豆泥5mg/L+萘乙酸0.3mg/L。