一种抗氧化天然植物多糖及其制备方法

摘要

本发明属于中药领域，具体涉及一种抗氧化天然植物多糖。本发明以天然中草药白花蛇舌草、半枝莲和淫羊藿为核心，对其药效成分多糖提取进行了提取，并经过科学合理的配伍获得了最大抗氧化能力的配方，所发明的配方起到了对三味源药物多糖互补协同的增效作用。配方中的多糖成分来源于天然植物，无化学合成成分，无激素，重金属或任何西药成分，具有较强的抗氧化、抗衰老和免疫力提升等药效功能，极具产业化开发潜力。

权利要求

1.一种抗氧化天然植物多糖，其特征在于：其制备方法包括以下步骤：

步骤一、白花蛇舌草多糖的制备

将粉碎后的白花蛇舌草和蒸馏水按1：14的重量比混合，之后用频率为40kHz的超声波提取30-40min，提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程2-3次，合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅰ，向混合物Ⅰ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为60%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得白花蛇舌草多糖；

步骤二、半枝莲多糖的制备

将粉碎后的半枝莲和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克半枝莲对应的蒸馏水体积为14mL，之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20 μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程5-6次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅱ，向混合物Ⅱ加入体积百分比浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为

80%，静置24 h后，用孔径为20 μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得半枝莲多糖；

步骤三、 淫羊藿多糖的制备

将粉碎后的淫羊藿和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克淫羊藿对应的蒸馏水体积为10mL，之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程4-5次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅲ，向混合物Ⅲ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为70%，静置

24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得淫羊藿多糖；

步骤四、配制

将制得的白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖按1:1:1的重量比混合并搅拌均匀后即制得植物多糖。

说明书

一种抗氧化天然植物多糖及其制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种抗氧化天然植物多糖。

背景技术

[0002] 近年来, 随着社会、生活、工作、环境的变化, 人类疾病谱发生了巨大的变化。 发生率高和危害最大的疾病已由传统的感染性单因素性疾病转向新发型变异性病毒、机体衰老性或是机体自身代谢和调控失常为主要谱群的复杂多因素性疾病。在此趋势下，众多以单一疾病靶点为目标的传统药物已越来越不能够满足人类治病防病的需要。因此，从增强机体抗氧化性和自身免疫力出发，利用中草药物特有的多成分、多环节、多靶点的整合调节能力对人体抗衰老抗氧化和免疫系统进行改善，从而达到提高人体健康水平的目的，已成为医疗或是保健活动中的一个热点。

[0003] 现代医学研究成果表明，很多中草药含有多糖类、有机酸类、生物碱类、甙类和挥发油类等，这些物质在人体内通过促进机体的抗氧化能力，增强免疫细胞功能，提高细胞因子分泌等作用，可实现对机体各器官功能的巩固和提升，对疾病的防治有着重要的意义。

[0004] 半枝莲，白花蛇舌草和淫羊藿是河南伏牛山区的原生药用植物。据传统医书记载，这三味药物有补中益气，活血化瘀，清热解毒的功效，如合理配伍使用，当可在抗氧化及免疫提升方面起重要作用。通过现代科学文献报道，半枝莲多糖在体外可促进ConA诱导的小鼠脾细胞淋巴细胞转化,其最适浓度为400μg/ml。皮下注射给药一周后可明显提高小鼠外周血淋巴细胞中酯酶阳性细胞的百分率, 腹腔给药后促进DNCB诱发的小鼠迟发型变态反应。半枝莲水提多糖对H2O2有较强的清除作用, 且呈量效关系。经小鼠实验表明, 其抗氧化衰老作用是通过提高SOD活力和对负氧自由基的清除作用及抗脂质过氧化作用来抵抗衰老延长寿命。白花蛇舌草多糖提取物可以增强免疫吞噬细胞活性，对小鼠脾细胞的增殖活性有很强的促进作用, 增强Ｂ细胞抗体的产生以及单核细胞的细胞因子产生，加强单核细胞对肿瘤细胞的吞噬功能, 并促进小鼠骨髓细胞增殖反应和IL2的分泌。另外，白花蛇舌草多糖具有增强机体特异性免疫功能和非特异性免疫功能的作用。淫羊藿可以提高小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能并 能使受环磷酰胺损伤的小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能恢复至正常水平。 淫羊藿对大剂量氢化可的松和羟基脲所致免疫功能低下模型小鼠巨噬细胞的吞噬功能有明显增强作用。淫羊藿多糖对巨噬细胞分泌IL-1和肿瘤坏死因子具有双向调节作用， 并促进T/B淋巴细胞的增殖分化以及自然杀伤细胞活性，提高机体细胞免疫功能。另外，淫羊藿可促进多种免疫细胞因子的分泌，如干扰素和IL-2等。

[0005] 综上所述，传统药用植物半枝莲，白花蛇舌草以及淫羊藿无论基于传统中医理论，还是现代药理学研究基础，都显示了极强的抗氧化活性和增强机体免疫功能的潜力，其主要活性部位为多糖。因此，靶向优化分离半枝莲，白花蛇舌草以及淫羊藿多糖，并在药效指导下进行复配，将可实现一种有效的抗氧化天然植物多糖的复合配方。

发明内容

[0006] 本发明的目的是提供一种抗氧化天然植物多糖，在不添加任何人工合成化学成分的前提下，开发具有抗氧化、防衰老和提升免疫力的天然植物多糖。

[0007] 本发明为解决上述问题，所采取的的技术方案是：一种抗氧化天然植物多糖，所述植物多糖由白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖制成，且制备植物多糖所需各组分的重量比为1:1:1；

[0008] 所述白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖是将白花蛇舌草、半枝莲和淫羊藿分别通过超声波处理制得白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液，再分别将白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液进一步蒸干制得。

[0009] 所述抗氧化天然植物多糖的制备方法，包括以下步骤：

[0010] 步骤一、白花蛇舌草多糖的制备

[0011] 将粉碎后的白花蛇舌草和蒸馏水按1：14的重量比混合，之后用频率为40kHz的超声波提取30-40min，提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程2-3次，合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅰ，向混合物Ⅰ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为60%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得白花蛇舌草多糖；

[0012] 步骤二、半枝莲多糖的制备

[0013] 将粉碎后的半枝莲和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克半枝莲对应的蒸馏水体积为14ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20 μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程5-6次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅱ，向混合物Ⅱ加入体积百分比浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为80%，静置24 h后，用孔径为20 μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得半枝莲多糖；

[0014] 步骤三、 淫羊藿多糖的制备

[0015] 将粉碎后的淫羊藿和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克淫羊藿对应的蒸馏水体积为10ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程4-5次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅲ，向混合物Ⅲ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为
70%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得淫羊藿多糖；

[0016] 步骤四、配制

[0017] 将制得的白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖按1:1:1的重量比混合并搅拌均匀后即制得植物多糖。

[0018] 有益效果

[0019] 本发明以天然中草药白花蛇舌草、半枝莲和淫羊藿为核心，对其药效成分多糖提取进行了提取，并经过科学合理的配伍获得了最大抗氧化能力的配方，所发明的配方起到了对三味源药物多糖互补协同的增效作用。配方中的多糖成分来源于天然植物，无化学合成成分，无激素，重金属或任何西药成分，具有较强的抗氧化、抗衰老和免疫力提升等药效功能，极具产业化开发潜力。

具体实施方式

[0020] 一种抗氧化天然植物多糖，所述植物多糖由白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖制成，且制备植物多糖所需各组分的重量比为1:1:1；

[0021] 所述白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖是将白花蛇舌草、半枝莲和淫羊藿分别通过超声波处理制得白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液，再分别将白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液进一步蒸干制得。

[0022] 所述抗氧化天然植物多糖的制备方法，包括以下步骤：

[0023] 步骤一、白花蛇舌草多糖的制备

[0024] 将粉碎后的白花蛇舌草和蒸馏水按1：14的重量比混合，之后用频率为40kHz的超声波提取30-40min，提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程2-3次，合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅰ，向混合物Ⅰ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为60%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得白花蛇舌草多糖；

[0025] 步骤二、半枝莲多糖的制备

[0026] 将粉碎后的半枝莲和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克半枝莲对应的蒸馏水体积为14ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20 μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程5-6次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅱ，向混合物Ⅱ加入体积百分比浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为80%，静置24 h后，用孔径为20 μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得半枝莲多糖；

[0027] 步骤三、 淫羊藿多糖的制备

[0028] 将粉碎后的淫羊藿和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克淫羊藿对应的蒸馏水体积为10ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程4-5次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅲ，向混合物Ⅲ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为
70%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得淫羊藿多糖；

[0029] 步骤四、配制

[0030] 将制得的白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖按1:1:1的重量比混合并搅拌均匀后即制得植物多糖。

[0031] 实施例1

[0032] 一种抗氧化天然植物多糖，所述植物多糖由白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖制成，且制备植物多糖所需各组分的重量比为1:1:1；

[0033] 所述白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖是将白花蛇舌草、半枝莲和淫羊藿分别通过超声波处理制得白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液，再分别将白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液进一步蒸干制得。

[0034] 所述抗氧化天然植物多糖的制备方法，包括以下步骤：

[0035] 步骤一、白花蛇舌草多糖的制备

[0036] 将粉碎后的白花蛇舌草和蒸馏水按1：14的重量比混合，之后用频率为40kHz的超声波提取30min，提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程2次，合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅰ，向混合物Ⅰ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为60%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得白花蛇舌草多糖；

[0037] 步骤二、半枝莲多糖的制备

[0038] 将粉碎后的半枝莲和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克半枝莲对应的蒸馏水体积为14ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程5次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅱ，向混合物Ⅱ加入体积百分比浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为80%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得半枝莲多糖；

[0039] 步骤三、 淫羊藿多糖的制备

[0040] 将粉碎后的淫羊藿和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克淫羊藿对应的蒸馏水体积为10ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程4-5次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅲ，向混合物Ⅲ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为
70%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得淫羊藿多糖；

[0041] 步骤四、配制

[0042] 将制得的白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖按1:1:1的重量比混合并搅拌均匀后即制得植物多糖。

[0043] 实施例2

[0044] 一种抗氧化天然植物多糖，所述植物多糖由白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖制成，且制备植物多糖所需各组分的重量比为1:1:1；

[0045] 所述白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖是将白花蛇舌草、半枝莲和淫羊藿分别通过超声波处理制得白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液，再分别将白花蛇舌草提取液、半枝莲提取液和淫羊藿提取液进一步蒸干制得。

[0046] 所述抗氧化天然植物多糖的制备方法，包括以下步骤：

[0047] 步骤一、白花蛇舌草多糖的制备

[0048] 将粉碎后的白花蛇舌草和蒸馏水按1：14的重量比混合，之后用频率为40kHz的超声波提取40min，提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程3次，合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅰ，向混合物Ⅰ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为60%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得白花蛇舌草多糖；

[0049] 步骤二、半枝莲多糖的制备

[0050] 将粉碎后的半枝莲和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克半枝莲对应的蒸馏水体积为14ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程6次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅱ，向混合物Ⅱ加入体积百分比浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为80%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得半枝莲多糖；

[0051] 步骤三、 淫羊藿多糖的制备

[0052] 将粉碎后的淫羊藿和蒸馏水混合并搅拌均匀，每克淫羊藿对应的蒸馏水体积为10ml,之后用频率为40kHz的超声波提取10min，将提取液用孔径为20μm的滤纸过滤，收集滤液，重复上述提取过程4-5次后合并滤液，并将滤液放入旋转蒸发仪中浓缩至原体积四分之一，制得混合物Ⅲ，向混合物Ⅲ加入体积浓度为95%的乙醇，使混合后乙醇的体积浓度为
70%，静置24 h后，用孔径为20μm的滤纸过滤，将滤液蒸干后即制得淫羊藿多糖；

[0053] 步骤四、配制

[0054] 将制得的白花蛇舌草多糖、半枝莲多糖和淫羊藿多糖按1:1:1的重量比混合并搅拌均匀后即制得植物多糖。

[0055] 实验一、整个配方搭配及制备可划分为以下四个步骤

[0056] 一、 白花蛇舌草多糖制备工艺

[0057] 白花蛇舌草多糖提取制备步骤如下，将白花蛇舌草粉碎成粉末，与蒸馏水以一定料液比混合，以设定的时间进行超声提取，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液。旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到预设百分比，静置过夜，过滤除去不溶物，蒸干得多糖。为优化多糖产量及纯度，首先进行单因素实验如下：

[0058] 1、白花蛇舌草多糖提取单因素实验

[0059] A）不同料液比试验

[0060] 设定料液比（g/ml）：

[0061] 材料：白花蛇舌草粉末5 g，蒸馏水

[0062] 1:6，1:10，1:14，1:18，1:24。

[0063] 放入超声波处理30min，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0064] B）试验

[0065] 料液比1:10（g/ml）

[0066] 材料：白花蛇舌草粉末5 g，蒸馏水

[0067] 设定放入超声的时间 10min，20min，30min，40min，50min。

[0068] 过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0069] C）不同提取次数

[0070] 料液比1:10（g/ml）

[0071] 材料：白花蛇舌草粉末5 g，蒸馏水

[0072] 设定放入超声30 min，过滤取上清液，设定重复提取1，2，3，4，5，次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0073] D）

[0074] 料液比1:10（g/ml）

[0075] 材料：白花蛇舌草粉末5 g，蒸馏水

[0076] 设定放入超声的时间30 min，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到50%，60%，70%，80%，90%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0077] 单因素实验中各个获取样品的吸光值（即多糖含量）

[0078]

[0079] 由此确定，正交试验中参数料液比为1:6，1:10和1:14；超声时间为20min、30min和40min；提取次数为2、3和4次；乙醇浓度为60%、70%和90%。

[0080] 2、白花蛇舌草多糖提取正交试验

[0081] 正交试验参数

[0082]

[0083] 使用上表中所设计的参数进行如下操作：

[0084] 料液比为白花蛇舌草粉末的质量和蒸馏水的比，每份白花蛇舌草的质量均为5g；将按比例配好的溶液（每份药材的质量为5g）放入超声波中；超声要达到所规定的时间为每
5分钟停1分钟；过滤取上清液，重复提取，合后并上清液；旋转蒸发至原体积四分之一，加入规定的乙醇含量，过夜；过滤除去不溶物，蒸干得多糖；蒽酮比色法测定多糖。

[0085] 正交试验结果分析

[0086]

[0087] 由此得出，白花蛇舌草多糖的最佳提取参数为：料液比=1:14；提取时间30-40min；重复提取次数3次；提取乙醇浓度60%。

[0088] 二、半枝莲多糖制备工艺

[0089] 半枝莲多糖提取制备步骤如下，将半枝莲粉碎成粉末，与蒸馏水以一定料液比混合，以设定的时间进行超声提取，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液。旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到预设百分比，静置过夜，过滤除去不溶物，蒸干得多糖。为优化多糖产量及纯度，首先进行单因素实验如下：

[0090] 1、半枝莲多糖提取单因素实验

[0091] A）不同料液比试验

[0092] 材料：半枝莲粉末5 g，蒸馏水

[0093] 设定料液比（g/ml）：1:6，1:10，1:14，1:18，1:24。

[0094] 放入超声时间30min，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0095] B）不同超声提取时间试验

[0096] 料液比1:10

[0097] 材料：半枝莲粉末5 g，蒸馏水

[0098] 设定放入超声的时间 10min，20min，30min，40min，50min

[0099] 过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0100] C）不同提取次数

[0101] 料液比1:10

[0102] 材料：半枝莲粉末5 g，蒸馏水

[0103] 设定放入超声波处理30 min，过滤取上清液，设定重复提取1，2，3，4，5，次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0104] D）不同乙醇浓度

[0105] 料液比1:10

[0106] 材料：半枝莲粉末5 g，蒸馏水

[0107] 设定放入超声的时间30 min，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到50%，60%，70%，80%，90%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0108] 单因素实验中各个获取样品的吸光值（即多糖含量）

[0109]

[0110] 由此确定，正交试验中参数料液比为1:6、1:10和1:14；超声时间为10min，20min和30min；提取次数为3，5和6次；乙醇浓度为60%，80%和90%。

[0111] 2、半枝莲多糖提取正交试验

[0112] 正交试验参数

[0113]

[0114] 使用上表中所设计的参数进行如下操作：

[0115] 料液比为半枝莲粉末的质量比上蒸馏水，每份半枝莲的质量均为5g；将按比例配好的溶液（每份药材的质量为5g）放入超声波中；超声要达到所规定的时间，每5分钟停1分钟；过滤取上清液，重复提取，合并上清液；旋转蒸发至原体积四分之一，加入规定的乙醇含量，过夜；过滤除去不溶物，蒸干得多糖；蒽酮比色法测定多糖。

[0116] 正交试验结果分析

[0117]

[0118] 由此得出，半枝莲多糖的最佳提取参数为料液比=1:14；提取时间=10min；重复提取次数=5次；提取乙醇浓度=80%。

[0119] 三、 淫羊藿多糖制备工艺

[0120] 淫羊藿多糖提取制备步骤如下，将淫羊藿粉碎成粉末，与蒸馏水以一定料液比混合，以设定的时间进行超声提取，过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液。旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到预设百分比，静置过夜，过滤除去不溶物，蒸干得多糖。为优化多糖产量及纯度，首先进行单因素实验如下：

[0121] 1、淫羊藿多糖提取单因素实验

[0122] A）不同料液比试验

[0123] 材料：淫羊藿粉末5 g，蒸馏水

[0124] 设定料液比（g/ml）1:6，1:10，1:14，1:18，1:24；

[0125] 放入超声时间30min；过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液；旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0126] B）不同超声提取时间试验

[0127] 料液比1:10

[0128] 材料：淫羊藿粉末5 g，蒸馏水

[0129] 设定放入超声的时间 10min，20min，30min，40min，50min

[0130] 过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0131] C）不同提取次数

[0132] 料液比1:10

[0133] 材料：淫羊藿粉末5 g，蒸馏水

[0134] 设定放入超声30 min；过滤取上清液，设定重复提取1，2，3，4，5次，合并上清液，旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到60%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0135] D）不同乙醇浓度

[0136] 料液比1:10

[0137] 材料：淫羊藿粉末5 g，蒸馏水

[0138] 设定放入超声的时间30 min；过滤取上清液，重复提取一次，合并上清液；旋转蒸发至原体积四分之一，加入乙醇，使乙醇浓度达到50%，60%，70%，80%，90%，过夜后过滤除去不溶物，蒸干得多糖，蒽酮比色法测定多糖。

[0139] 单因素实验中各个获取样品的吸光值（即多糖含量）

[0140]

[0141] 由此确定，正交试验中参数料液比为1:6，1:10和1:22；超声时间为10，30和50min；提取次数为2，5和6次；乙醇浓度为70%、80%和90%。

[0142] 2、淫羊藿多糖提取正交试验

[0143] 正交试验参数

[0144]

[0145] 使用上表中所设计的参数进行如下操作：

[0146] 料液比为淫羊藿粉末的质量比上蒸馏水，每份淫羊藿的质量均为5g；将按比例配好的溶液（每份药材的质量为5g）放入超声波中；超声波要达到所规定的时间，每5分钟停1分钟；过滤取上清液，重复提取，合后并上清液；旋转蒸发至原体积四分之一，加入规定的乙醇含量，过夜；过滤除去不溶物，蒸干得多糖；蒽酮比色法测定多糖。

[0147] 正交试验结果分析

[0148]

[0149] 由此得出，淫羊藿多糖的最佳提取参数为：料液比=1:10；提取时间=10min；重复提取次数=4次；提取乙醇浓度=70%。

[0150] 四、白花蛇舌草-半枝莲-淫羊藿抗氧化多糖配方及制备

[0151] 为确定白花蛇舌草，半枝莲和淫羊藿多糖的最佳配比，特设计九组配比，将三种多糖分别以白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=1:1:1；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=2:1:2；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=3:1:3；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=1:2:2；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=2:2:3；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=3:2:1；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=1:3:3；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=2:3:1；白花蛇舌草：半枝莲：淫羊藿=3:3:2进行混合。

[0152] 对获得的九组样品在不同浓度下的对DPPH自由基清除率进行测定，从而获取其抗氧化能力，结果如下表：

[0153]

[0154] 表中白：半：淫，表示白花蛇舌草多糖：半枝莲多糖：淫羊藿多糖。

[0155] 使用正交试验对配方中白花蛇舌草，半枝莲和淫羊藿多糖的配比参数关系进行分析，其结果如下：

[0156] 正交试验结果分析