用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物转让专利
申请号 : CN201380023259.1
文献号 : CN104302181B
文献日 : 2017-09-15
发明人 : 长勋·李 , 崔珣奎 , 加里·米切尔·卡普 , 小山广尾 , 哈撒尼·拉特尼
申请人 : PTC医疗公司 , 弗.哈夫曼-拉罗切有限公司
摘要 :
权利要求 :
1.式(IIa1)或式(IIIa1)的化合物:
或其游离酸、游离碱、药学上可接受的盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体,其中R1独立地选自哌嗪基、1,4-二氮杂环庚烷基和2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基,其每一个可选地被一个、两个或三个独立地选自C1-6烷基、卤代-C16烷基、羟基-C1-6烷基、羟基-甲氧基、C1-6烷氧基-羰基的取代基取代;
R2独立地选自咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、噻唑基、1,3-苯并噻唑基、吡唑并[1,5-a]吡啶基和1,3-苯并噁唑基,其每一个可选地被一个、两个或三个独立地选自C1-6烷基、卤素和卤代-C1-6烷基的取代基取代;
Ra是氢;
Rb是氢。
2.权利要求1所述的化合物,其中该药学上可接受的盐是氢溴酸盐、盐酸盐、二盐酸盐、乙酸盐或三氟代醋酸盐。
3.选自如下的化合物:
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-氯代乙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-羟基苯甲基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
4-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯
4-[3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(哌嗪-1-基)-3-[4-(三氟代甲基)-1,3-噻唑-2-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(丙烷-2-基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-7-(4-丙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(丙烷-2-基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2-羟基乙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[4-(2,3-二羟基丙基)哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(8-氯代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-
2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噁唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基哌嗪-1-基)-3-(5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-
2-酮
3-(2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2S)-2-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2S)-2,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-
2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-
2-酮
7-[(3S)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R)-3,4-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-
2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-
2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-甲基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R,5S)-3,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
7-[(2R,5S)-2,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-
2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(2R,5S)-2,4,5-三甲基哌嗪-1-基]-
2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3R,5S)-4-乙基-3,5-二甲基哌嗪-1-基]-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基哌嗪-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,
3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-
2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-
2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-
2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-(4-乙基哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-(4-乙基-1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-4-乙基-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮或
3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮或其盐、同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
4.权利要求3的化合物,其中该化合物的盐形式选自:
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(4-甲基-1,3-噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(哌嗪-1-基)-3-[4-(三氟代甲基)-1,3-噻唑-2-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(8-氯代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-
2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(8-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(1,3-苯并噻唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(1,3-苯并噁唑-2-基)-7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-
2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-
2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3S)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
3-(咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基)-7-[(3R)-3-甲基哌嗪-1-基]-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
7-(1,4-二氮杂环庚烷-1-基)-3-(8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐或
3-(咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐或其同位素物、立体异构体、外消旋体、对映异构体、非对映体或互变异构体。
5.药物组合物,其包含有效量的权利要求1-4任意一项所述的化合物以及药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
6.权利要求5所述的药物组合物在制备用于脊髓性肌萎缩(SMA)的治疗的药物中的用途。
7.权利要求1-4任意一项所述的化合物在制备用于在人细胞中增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的药物中的用途。
8.权利要求1-4任意一项所述的化合物在制备用于在人细胞中增加Smn蛋白质的量的药物中的用途。
9.权利要求7或8的用途,其中该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。
10.权利要求1-4任意一项所述的化合物在制备用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的药物中的用途。
说明书 :
用于治疗脊髓性肌萎缩的化合物
病的集合。最常见形式的SMA由存活的运动神经元(SMN)基因中的突变造成并显示影响婴幼
儿乃至成年人的大范围严重性(Crawford和Pardo,Neurobiol.Dis.,1996,3:97)。
持呼吸的肌肉的无力而经常患有呼吸系统疾病。患有稍轻度形式的SMA的孩子活得更长,尽管他们,特别是该范围里面更严重端的那些孩子,可能需要广泛的医疗支持。已经将SMA病症的临床范围分为以下五组。
染色体中的基因(SMN1)的端粒拷贝拷贝的失活突变或缺失从而导致SMN1基因功能缺失而
造成的。然而,所有患者都保持着基因(SMN2)的着丝粒复制,以及SMA患者中SMN2基因的拷贝拷贝数通常与疾病的严重程度成反比;也就是说,SMA病情较轻的患者有更多的SMN2拷贝拷贝。然而,SMN2无法完全补偿外显子7中翻译沉默C至T突变所引起的外显子7的选择性剪
接所导致的SMN1功能的缺失。结果,从SMN2所产生的大部分转录物缺乏外显子7(SMN2Δ7),以及编码功能受损并迅速退化的截断Smn蛋白质。
能,但是其在预防运动神经元的替代性退行性变方面的作用没有很好地确立。
1型SMA的主要管控问题是对肺部问题的预防和早期治疗,肺部问题是大多数病例中死亡的
首要原因。虽然患有SMA的一些婴幼儿成长为成年人,但是那些患有1型SMA的婴幼儿的预期寿命不到两年。
该SMNΔ7模型可用于SMN2表达研究以及对运动功能和存活率的评价。C/C-等位基因小鼠模
型(杰克逊实验室菌株编号:008714)提供了一种不太严重的SMA疾病模型,其小鼠具有降低的SMN2全长(SMN2FL)mRNA和Smn蛋白质水平。C/C-等位基因小鼠表型具有SMN2基因和经历
选择性剪接但没有明显的肌肉无力的杂合mSmn1-SMN2基因。将C/C-等位基因小鼠模型用于
SMN2表达研究。
要求需要更多的研究,之后,才可以将这些方法应用于人类。
2011,478:123)以及(ii)分子间剪接RNA分子,其提供全功能的RNA序列,在剪接期间取代突变 体片段并生成全长的SMN1mRNA(Coady和Lorson,J Neurosci.,2010,30:126)。
Δ7mRNA的稳定化的Smn蛋白质的表达,但其中枢神经系统渗透性差以及在重复给药后有毒
性。化疗剂(如阿柔比星)已显示增加了细胞培养物中的Smn蛋白质;然而,这些药物的毒性特征禁止SMA患者长期服用。临床研究中用于治疗SMA的一些药物包括转录活化剂,例如组
蛋白质脱乙酰基酶(“HDAC”)抑制剂(如丁酸盐、丙戊酸和羟基脲);和mRNA稳定剂(来自
Repligen的mRNA脱帽抑制剂RG3039),其意在增加转录自SMN2基因的总RNA的量。然而,HDAC抑制剂或mRNA稳定剂的使用并没有解决SMA的根本原因,并且可能导致人体中有安全隐患
的转录和基因表达的全面性提高。
神经退行性疾病。
国际申请PCT/US2009/003238(作为国际公布号WO2009/151546和美国公开号US2011/
0086833进行公布)中得以描述。经设计以确认从SMN2Δ7mRNA生产稳定的Smn蛋白质的化合
物的系统和由此确认的某些异吲哚啉化合物已经在2009年8月13日提交的国际申请PCT/
US2009/004625(作为国际公布号WO2010/019236和美国公开号US2011/0172284进行公布)
中得以描述。上述各文献全部并入本文并用于所有的目的。
其一种形式或其药物组合物。
的纳入。该小基因再现SMN2外显子7的选择性剪接反应,这导致了大多数SMN2转录物中外显子7的遗漏(skipping)。因此,可以使用式(I)的化合物或其一种形式来调节转录自SMN2基
因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。申请人还已发现,式(I)的化合物增加转录自SMN1小基因
的mRNA对SMN1外显子7的纳入。因此,可以使用式(I)的化合物或其一种形式来调节转录自
SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
调节转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。在仍然
另一实施方式中,本文提供了可用来调节分别转录自SMN1和SMN2基因的mRNA对SMN1和SMN2
外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式。
物组合物被施用至人类对象。在另一具体的实施方式中,本文提供式(I)的化合物用于治疗SMA的用途,其中该化合物增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。不受理论限
制,式(I)的化合物增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外 显子7的纳入并提高产自SMN2基
因的Smn蛋白质的水平,因此可被用来治疗有这类需要的人类对象体内的SMA。
10)和那些引物和/或探针的用途。在具体的实施方式中,本文提供包括SEQ ID NO.1、2、3、
7、8、9、10、11、12或13的分离的核苷酸序列。在另一具体的实施方式中,本文提供基本上由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13构成的分离的核苷酸序列。在另一具体的实施方式中,本文提供由SEQ ID NO.1、2、3、7、8、9、10、11、12或13构成的分离的核苷酸序列。
物治疗患者的生物标记,如本文所披露。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中,该患者不是SMA患者。
被用作用于使用化合物治疗患者的生物标记,如本文所披露。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中,该患者不是SMA患者。
和/或SMN2基因以及包括或不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量。
10)被用于检测,例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测,如下文生物实施例中所述的检测),以测定化合物(如式(I)的化
合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
10)被用于检测,例如RT-PCR、 RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测,如下文生物实施例中所述的检测),以测定化合物(如式(I)的化
合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
10)被用于检测,例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹(例如检测,如下文生物实施例中所述的检测),以测定化合物(如式(I)的化
合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子
7的纳入。
包括SMN2外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中,该患者不是SMA患者。
包括SMN1外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中,该患者不是SMA患者。
SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中,该患者不是SMA患者。
物或其一种形式)的反应。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。在另一具体的实施方式中,该患者不是SMA患者。
(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下,转录自本文或2009年8月13日提交的国际申请
PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284
中所述的SMN2小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1和/或2)连同适用于,如RT-
PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的组分接触;以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2
外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA
的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入;以及(2)在
该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物
时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物
没有增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下,转录自2009年8月13日提交的国际申请PCT/
US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所
述的SMN1小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1和/或2)连同适用于,如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR或滚环扩增的组分接触;以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显
子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量
的增加表明该化合物增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入;以及(2)在该化
合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转
录自该小基 因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没
有增强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下,转录自本文或2009年8月13日提交的国际申请
PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284
中所述的SMN2小基因的mRNA与本文所述的探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于,如RT-
PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触;以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量,其中
(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该
化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录
自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入;以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并
包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子
7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN2基因的mRNA对
SMN2外显子7的纳入。
(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下,转录自2009年8月13日提交的国际申请PCT/
US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所
述的SMN1小基因的mRNA与本文所述的探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于,如RT-PCR、
RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触;以及(b)检测转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量,其中(1)在
该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物
时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的增加表明该化合物增强了转录自SMN1
基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入;以及(2)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括
SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的
mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2
外显子7的纳入。
(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下,转录自本文或2009年8月13日提交的国际申请
PCT/US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284
中所述的SMN2小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1或2)和/或探针(如SEQ ID
NO.3或10)连同适用于,如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触;以及(b)检测转录自该小基因并包括
SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子
7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的
增加表明该化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入;以及(2)在该化合
物的存在下转录自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录
自该小基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增
强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。
(如本文披露的式(I)的化合物)的存在下,转录自2009年8月13日提交的国际申请PCT/
US2009/004625(作为国际公开号WO2010/019236公开)或美国公开号US2011/0172284中所
述的SMN1小基因的mRNA与本文所述的引物(如SEQ ID NO.1或2)和/或探针(如SEQ ID NO.3
或10)连同适用于,如RT-PCR、RT-qPCR、PCR、终点RT-PCR、qPCR、滚环扩增以及适用于
Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触;以及(b)检测转录自该小基因并包括
SMN1外显子7的mRNA的量,其中(1)在该化合物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子
7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的
增加表明该化合物增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入;以及(2)在该化合
物的存在下转录自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量相对于不存在该化合物时转录
自该小基因并包括SMN1外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该化合物没有增
强转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入。
因构建体被称为SMN1-A。类似地,在外显子7的核酸残基48之后插入该SMN1小基因构建体的核苷酸也可以替代性地选自胞嘧啶或胸腺嘧啶。
对SMN2小基因全长mRNA的水平进行定量。化合物处理的样本中SMN2小基因全长mRNA的水平
被归一化为溶媒处理的样本中的所述水平并被绘制成化合物浓度的函数。
SMN2全长和Δ7mRNA的水平进行定量。化合物处理的样本中全长和SMN2Δ7mRNA的水平被归
一化为溶媒处理的样本中的所述水平并被绘制成化合物浓度的函数。
PCR(RT-PCR)扩增SMN2全长和SMN2Δ7mRNA以及使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶部和
底部的条带分别对应于SMN2全长和Δ7mRNA。每个条带的强度与样本中存在的RNA的量成比
例。
小斑点的数目被归一化为溶媒处理的样本中的所述数目并被绘制成化合物浓度的函数。
通过方差分析的p值用三颗星(***)表示为P<0.001。
赖性增加。通过方差分析的p值用一颗星(*)表示为P<0.05以及用三颗星(***)表示为P<
0.001。
7mRNA中的剂量依赖性下降。使用RT-PCR对该SMN1小基因全长和Δ7mRNA的每个进行扩增。
使用琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物。顶部和底部条带分别对应于该SMN1小基因全长和Δ
7mRNA。每个条带的强度与样本中存在的RNA的量成比例。
b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-
基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、
(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-
2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环
[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]
癸基;其中,每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
1(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-
2(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶-5-基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,
7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-6(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡 咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯
并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并
[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基、
8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、8-氮杂双环[3.2.1]
辛-2-烯-3-基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯-3-基、9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、(1S,4S)-2,5-二
氮杂双环[2.2.1]庚-2-基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛-2-基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-
3-基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬-4-基、氮杂螺[3.3]庚-2-基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚-2-基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬-7-基、5,8-二氮杂螺
[3.5]壬-8-基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基或6,9-二氮杂螺[4.5]癸-9-基;其中,每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
基、(3aR,6aR)-1-甲基六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-5(1H)-基、(3aR,6aS)-5-甲基六氢吡咯并
[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-(2-羟基乙基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、
(3aR,6aS)-5-(丙烷-2-基)六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(3aR,6aS)-5-乙基六氢吡
咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-基、(4aR,7aR)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,
7aR)-1-乙基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aR,7aR)-1-(2-羟基乙基)八氢-6H-吡
咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,7aS)-1-甲基八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(4aS,
7aS)-1-(2-羟基乙基)八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶-6-基、(7R,8aS)-7-羟基六氢吡咯并
[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aS)-8a-甲基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(8aR)-8a-甲
基八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-2(1H)-基、(1R,5S,6s)-6-(di甲基氨基)-3-氮杂双环[3.1.0]
己-3-基、(1R,5S)-8-甲基-8-氮杂双环[3.2.1]辛-3-基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(3-exo)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基、(1R,5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]
壬-3-基、(1S,4S)-5-甲基-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚-2-基或(1S,4S)-5-乙基-2,5-二氮
杂双环[2.2.1]庚-2-基。
1-基-甲氧基、哌啶-1-基-乙氧基、吗啉-4-基-甲氧基或吗啉-4-基-乙氧基;其中,每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
以及,其中,每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基、(3-外
向)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-3-基-氨基或(1R,5S)-9-甲基-9-氮杂双环[3.3.1]壬-
3-基-氨基;其中,每种情况的杂环基可选地用R3和R4取代基取代。
芳基-C1-8烷基-氨基-C1-8烷基;其中,每种情况的杂芳基可选地用R3和R4取代基取代。
基、吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基、吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基、吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、咪唑并[1,2-a]嘧啶-6-基、咪唑并[1,2-c]嘧啶-2-基、咪唑并[1,2-b]哒嗪-
2-基、咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶-2-基或喹喔啉-2-基;其中,每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
啶-2-基、6-(吡咯烷-1-基)吡啶-2-基、2-甲基嘧啶-4-基、2-(丙烷-2-基)嘧啶-4-基、2-环丙基嘧啶-4-基、1-甲基-1H-吲哚-3- 基、2-甲基-2H-吲唑-5-基、2-甲基-1-苯并呋喃-5-
基、1-甲基-1H-苯并咪唑-2-基、4-甲基-1H-苯并咪唑-2-基5-氟代-1H-苯并咪唑-2-基、4-氟代-1,3-苯并噻唑-2-基、5-氟代-1,3-苯并噻唑-2-基、4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基、4-碘代-1,3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-基、4-甲基-1,3-苯并噻唑-2-基、4-(三氟代甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、7-(三氟代甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并
噻唑-2-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-5-基、2-甲基-1,3-苯并噻唑-6-基、4-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基、7-氯代-1,3-苯并噻唑-2-基、4-(三氟代甲基)-1,3-苯并噻唑-2-基、5-甲基呋喃并[3,2-b]吡啶-2-基、4,6-二甲基呋喃并[3,2-c]吡啶-2-基、5,7-二甲基呋喃并[2,3-c]吡啶-2-基、4,6-二甲基噻吩并[3,2-c]吡啶-2-基、2,4-二甲基噻吩并[2,3-d]嘧啶-6-基、1-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、3-甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、1,3-二甲基吡咯并[1,2-a]吡嗪-7-基、2-甲基吡咯并[1,2-b]哒嗪-2-基、4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、5-甲基吡唑并[1,5-a]吡啶-2-基、4,6-二甲基吡唑并[1,5-a]吡嗪-2-基、2-氯代咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-乙基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基、6-氰基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基(也被称为2-咪唑并[1,2-a]吡啶-6-腈)、6-氟代咪唑
并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6,8-二氟代咪唑并[1,2-a]吡啶-
2-基、7-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-2-
基、6-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-氯代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氯代咪唑并[1,
2-a]吡啶-2-基、8-溴代咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、5-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-甲基咪唑并[1,2-a]吡
啶-2-基、8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、7-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-乙基-6-甲基咪唑并[1,2-
a]吡啶-2-基、7-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-甲氧基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-氟代-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氟代-6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-氯代-
6-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、6-甲基-8-硝基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、8-环丙基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2-乙基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、
2,3-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、2-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、8-氯代-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、8-氟代-2-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基、6-氟代咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、6-氯代咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-
基、6-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、7-甲基咪唑并[1,2-a]嘧啶-2-基、2-甲基咪唑并[1,
2-a]嘧啶-6-基、6-甲基咪唑并[1,2-b]哒嗪-2-基、2-甲基-3-(1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)咪唑并 [1,2-b]哒嗪-6-基、6-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、8-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6-氯代-8-甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、6-甲基-8-(三氟代甲基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、8-(甲基硫烷基)咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基、
2-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基、3-甲基咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑-6-基或2-甲基咪
唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑-6-基。
1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、吡咯并[1,2-a]嘧啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、咪唑并[1,
2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹
喔啉基;其中,每种情况的杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-
基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、
(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-
2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环
[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2] 壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺
[4.5]癸基。
基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,
1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基;以及,其中,每种情况的芳基、杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-
(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-
基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、
(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、八氢-
2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环
[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基或6,9-二氮杂螺[4.5]
癸基;以及,其中,每种情况的杂环基、C3-14环烷基、芳基和杂芳基可选地用R3和R4取代基取代;以及
基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,
1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,3]噁唑并[4,5-b]吡啶基或喹喔啉基;以及,其中,每种情况的杂环基和杂芳基可选地用R6和R7取代基取代。
1H-吲唑基、2H-吲唑基、吲嗪基、异吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基(也被称为苯并硫代苯基)、苯并咪唑基、1H-苯并咪唑基、1,3-苯并噻唑基、1,3-苯并噁唑基(也被称为1,3-苯并噁唑基)、嘌呤基、9H-嘌呤基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉、喹喔啉基、1,3-二嗪基、1,2-二嗪基、
1,2-二唑基、1,4-二氮杂萘基、吖啶基、呋喃并[3,2-b]吡啶基、呋喃并[3,2-c]吡啶基、呋喃并[2,3-c]吡啶基、6H-噻吩并[2,3-b]吡咯基、噻吩并[3,2-c]吡啶基、噻吩并[2,3-d]嘧啶基、1H-吡咯并[2,3-b]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、1H-吡咯并[3,2-b]吡啶基、吡咯并[1,2-a]吡嗪基、吡咯并[1,2-b]哒嗪基、吡唑并[1,5-a]吡啶基、吡唑并[1,5-a]吡嗪基、咪唑并[1,2-a]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-b]吡啶基、咪唑并[1,2-a]嘧啶基、咪唑并[1,2-c]嘧啶基、咪唑并[1,2-b]哒嗪基、咪唑并[1,2-a]吡嗪基、咪唑并[2,1-b][1,3]噻唑基、咪唑并[2,1-b][1,3,4]噻二唑基、[1,2,4]三唑并[1,5-a]吡啶基、[1,2,4]三唑并[4,3-a]吡啶
基等等。在可用化合价允许的情况下,在碳或氮原子环元上可选地用本文所述的取代基种
类取代杂芳基。
4-苯并二噁英基(也被称为2,3-二氢苯并[b][1,4]二噁英基)、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-
(1H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(1H)-基、六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、(3aS,6aS)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-
(2H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-b]吡咯-(2H)-基、六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-
基、(3aR,6aS)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-(1H)-基、(3aR,6aR)-六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-
(1H)-基、八氢-5H-吡咯并[3,2-c]吡啶基、八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aR,7aR)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、(4aS,7aS)-八氢-6H-吡咯并[3,4-b]吡啶基、六氢吡咯并[1,
2-a]吡嗪-(1H)-基、(7R,8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aR)-六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、(8aS)-八氢吡咯并[1,2-a]吡
嗪-(1H)-基、(8aR)-八氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(1H)-基、六氢吡咯并[1,2-a]吡嗪-(2H)-酮、八氢-2H-吡啶并[1,2-a]吡嗪基、3-氮杂双环[3.1.0]己基、(1R,5S)-3-氮杂双环[3.1.0]己基、8-氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛基、8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、(1R,5S)-8-氮杂双环[3.2.1]辛-2-烯基、9-氮杂双环[3.3.1]壬基、(1R,5S)-9-氮杂双环[3.3.1]壬基、2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、(1S,4S)-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚基、
2,5-二氮杂双环[2.2.2]辛基、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛基、(1R,5S)-3,8-二氮杂双环
[3.2.1]辛基、1,4-二氮杂双环[3.2.2]壬基、氮杂螺[3.3]庚基、2,6-二氮杂螺[3.3]庚基、
2,7-二氮杂螺[3.5]壬基、5,8-二氮杂螺[3.5]壬基、2,7-二氮杂螺[4.4]壬基、6,9-二氮杂螺[4.5]癸基等等。在可用化合价允许的情况下,在碳或氮原子环元上可选地用本文所述的取代基种类取代杂环基。
所述或所示的化合价。
被选定,以及适当的时候,独立地和/或可选地被取代。
类包含在内的特定取代基取代该一般取代基,例如,芳基可以独立地被苯基或萘基等等取
代,以便所得到的化合物意在被包括在本文所述的化合物的范围之内。
结构相冲突时,示出的结构将替代名称而被用于定义目标化合物。本文所定义的取代基的
命名可以与其衍生来的化学名称略有不同;本领域的技术人员将认识到,该取代基的定义
意在包括在化学名称中找到的自由基。
施例中SMN2外显子6、7和8以及内含子6和7的核苷酸序列被用于本文所述的SMN2小基因核
酸构建体中。
在另一具体的实施方式中,该Smn蛋白质具有以GenBank登录号NP_000335、AAC50473.1、
AAA66242.1或NP_059107发现的氨基酸序列。
体内从SMN2基因产生增加水平的Smn蛋白质;或者,以便通过本领域技术人员已知的方法评价,在活体外和/或活体内从SMN2基因产生表达增加的具有稳定性和功能性的Smn蛋白质;
或者,以便通过本领域技术人员已知的方法评价,在活体外和/或活体内由该小基因编码的融合蛋白质的表达增加;或者,以便有这类需要的对象(如SMA动物模型或人类对象或SMA患者)体内产自SMN2基因的Smn蛋白质的表达增加。
或者,以便通过本领域技术人员已知的方法评价,在活体外和/或活体内由该小基因编码的融合蛋白质的表达增加;或者,以便有这类需要的对象(如SMA动物模型或人类对象)体内产自SMN1基因的Smn蛋白质的表达增加。
(IVa2)的化合物或其一种形式、式(V)的化合物或其一种形式、式(Va)的化合物或其一种形式、式(Va1)的化合物或其一种形式、式(Va2)的化合物或其一种形式、式(VI)的化合物或其一种形式、式(VIa)的化合物或其一种形式、式(VIa1)的化合物或其一种形式、式(VIa2)的化合物或其一种形式、式(VII)的化合物或其一种形式、式(VIIa)的化合物或其一种形式、式(VIIa1)的化合物或其一种形式、式(VIIa2)的化合物或其一种形式、式(VIII)的化合物
或其一种形式、式(VIIIa)的化合物或其一种形式、式(VIIIa1)的化合物或其一种形式、式(VIIIa2)的化合物或其一种形式、式(IX)的化合物或其一种形式、式(IXa)的化合物或其一种形式、式(IXa1)的化合物或其一种形式、式(IXa2)的化合物或其一种形式、式(X)的化合物或其一种形式、式(Xa)的化合物或其一种形式、式(Xa1)的化合物或其一种形式、式(Xa2)的化合物或其一种形式、式(XI)的化合物或其一种形式、式(XIa)的化合物或其一种形式、式(XIa1)的化合物或其一种形式或式(XIa2)的化合物或其一种形式。
Synthesis(1991),Wiley,纽约)来确认。
例),通过在血液、肝脏和/或其它器官和组织中水解和/或代谢发生。关于前药用途的讨论由V.J..Stella,等人“, Biotechnology:Pharmaceutical Aspects,Prodrugs:Challenges and Rewards,”American Association of Pharmaceutical Scientists and Springer
Press,2007提供。
置换醇基的氢原子而形成。在另一个实施例中,当式(I)的化合物或其一种形式包含胺官能团时,前药可以通过用官能团(如烷基或被取代的羰基等)置换一个或多个胺氢原子而形
成。在另一个实施例中,式(I)的化合物或其一种形式包含氢取代基时,前药可以通过用烷基取代基置换一个或多个氢原子而形成。
时,两性离子(“内盐”)可以形成并被包括在如本文中所用的术语“盐”中。
Pharmaceutics(1986)33,201-217;Anderson等人,The Practice of Medicinal
Chemistry(1996),Academic Press,New York;以及在The Orange Book(见,华盛顿特区食品与药品管理局的网站)中对通常被认为适合于从碱性药用化合物形成药学上有用的盐的
酸进行了讨论。这些披露以引用方式被并入本文。
物)。
本上纯的(R)或(S)对映异构体存在(当存在一个手性中心时)。在一个实施方式中,本文所
述的该式(I)的化合物是(S)异构体以及可以作为基本上仅包括该(S)异构体的对映体纯的
组合物而存在。在另一实施方式中,本文所述的该式(I)的化合物是(R)异构体以及可以作
为基本上仅包括该(R)异构体的对映体纯的组合物而存在。如本领域技术人员将认识到的,当存在多于一个的手性中心时,本文所述的该式(I)的化合物也可以包括,如IUPAC命名法
推荐所定义的,描述为(R,R)、(R,S)、(S,R)或(S,S)异构体的部分。
分离非对映体并将个体的非对映体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。此外,式(I)的化合物的某些可以是阻转异构体(例如被取代的联芳基)并且被认为是本说明书的一部分。
如,如果式(I)的化合物包含双键或稠环,则顺式和反式形式及其混合物都被包含在本文说明书的范围内。此外,例如,该化合物的所有酮-烯醇和亚胺-烯胺互变异构形式都包括在本文说明书中。本文所述的该式(I)的化合物的个体立体异构体可以,如上文所述,例如基本上不含其它异构体或可存在于外消旋混合物中。
富集的化合物。可以掺入本文所述的化合物的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、氟和氯的同位素,分别如H2、H3、C13、C14、N15、O18、O17、P31、P32、S35、F18、Cl35和Cl36,其中每个也在本说明书的范围之内。
情况下可以是优选的。同位素富集的式(I)的化合物通常可以使用本领域中普通技术人员
已知的操作,通过由适当的同位素富集的试剂取代非同位素富集的试剂来制备。
素物。
剂(有机或水或其混合物)中溶解化合物,并 以足以形成晶体的比率冷却溶液,然后通过标准方法分离该晶体。分析技术,例如(作为举例)红外光谱,表明作为溶剂化物(或水合物)的晶体中溶剂(或水)的存在。
内。
合物或其一种形式可用作转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的增强子。
转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入的增强子。
(I)的化合物或其一种形式接触,该式(I)的化合物或其一种形式调节本文或国际公开号
WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中
所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中,该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在另一实施方式中,该小基因是
下文生物实施例1中所述的小基因。该人细胞可以在活体外和/或活体内,如在非人类动物
或在人类体内,与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中,该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体
内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内,其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在另一
实施方式中,该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中,该人细胞来自细胞系,例如GM03813、GM00232、GM09677和/或 GM23240(可从Coriell Institute处获得)。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
式中,本文提供了一种用于增强转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方法,其包
括使人细胞与式(I)的化合物或其一种形式接触,该式(I)的化合物或其一种形式增强本文
或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全
部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中,该小基因是国际公开号
WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小基因。在另一实施
方式中,该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。该人细胞可以在活体外和/或活体
内,如在非人类动物或在人类体内,与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中,该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内,其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧
失所造成的。在另一实施方式中,该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中,该人细胞来自细胞系,例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可从Coriell
Institute处获得)。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
(I)的化合物或其一种形式接触。在另一具体的实施方式中,本文提供了用于增强转录自
SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方法,其包括使人细胞与式(I)的化合物或其一种
形式接触,该式(I)的化合物或其一种形式调节国际公开号WO2009/151546或美国专利申请
公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中的SMN1小基因的表达。在一个实
施方式中,该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的
例子中所述的小基因。该人细胞可以在活体外和/或活体内,如在非人类动物或在人类体
内,与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中,该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方 式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
人细胞可以在活体外和/或活体内,如在非人类动物或在人类体内,与式(I)的化合物或其
一种形式接触。在具体的实施方式中,该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内。在一个实施方式中,该化合物是式
(I)的化合物或其一种形式。
实施方式中,本文提供了一种用于调节转录自SMN2基因的RNA对SMN2外显子7的纳入的方
法,其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式,该式(I)的化合物或其一种形式调节本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833
(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施方式中,该小
基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小
基因。在另一实施方式中,该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
的纳入的方法,其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式,该式(I)的化合物或其一种形式增强本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号
2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN2小基因的表达。在一个实施
方式中,该小基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例
子中所述的小基因。在另一实施方式中,该小基因是下文生物实施例1中所述的小基因。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
实施方式中,本文提供了一种用于增强转录自SMN1基因的RNA对SMN1外显子7的纳入的方
法,其包括向SMA 的非人类动物模型施用式(I)的化合物或其一种形式,该式(I)的化合物
或其一种形式调节本文或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833
(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的SMN1小基因的表达。在一个实施方式中,该小
基因是国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833的例子中所述的小
基因。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
或其一种形式。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
SMN2外显子7的纳入。在另一具体的实施方式中,本文提供一种增加Smn蛋白质量的方法,其包括使人细胞与式(I)的化合物接触,该式(I)的化合物增强转录自SMN1和/或SMN2基因的
mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。该人细胞可以在活体外和/或活体内,如在非人类动物或在人类体内,与式(I)的化合物或其一种形式接触。在具体的实施方式中,该人细胞来自人类或在人类体内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者
体内。在另一具体的实施方式中,该人细胞来自人SMA患者或在人SMA患者体内,其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在另
一实施方式中,该人细胞是来自人SMA患者的人细胞。在某些实施方式中,该人细胞来自细胞系,例如GM03813、GM00232、GM09677和/或GM23240(可从Coriell Institute处获得)。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
质量的方法,其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物,例如下文生物实施例部
分所述,如在基于细胞的或者不含细胞的测试中,该式(I)的化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。在另一具体的实施方式中,本文提供一种增加Smn蛋白质量
的方法,其包括向SMA的非人类动物模型施用式(I)的化合物,如在基于细胞的或者不含细
胞的测试中,该式(I)的化合物增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2
外显子7的纳入。
达。在具体的实施方式中,该式(I)的化合物增强国际公开号WO2009/151546或美国专利申
请公开号2011/0086833的实施例中所述的小基因的表达。在另一具体的实施方式中,该式
(I)的化合物增强下文生物实施例1中所述的小基因的表达。在一个实施方式中,该化合物
是式(I)的化合物或其一种形式。
的化合物或其一种形式用于制备增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入,从而
增加有这类需要的人类对象体内的Smn蛋白质的表达的药剂的用途。在特定的实施方式中,在本文所述的检测中,该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对
SMN2外显子7的纳入(见,如下文的生物实施例)。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
式中,本文提供式(I)的化合物或其一种形式用于制备增强转录自SMN1和/或SMN2基因的
mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入,从而增加有这类需要的人类对象体内的Smn蛋白质
的表达的药剂的用途。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
一种形式。在具体的实施方式中,本文提供了一种用于增强有这类需要的人类对象体内转
录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的方法,其包括向该人类对象施用有效量的式
(I)的化合物或其一种形式,如本文所述的检测中所测定的,该式(I)的化合物或其一种形
式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见,如下文生物实施例)。在具体的实施方式中,该有效量的式(I)的化合物或其一种形式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中,被施用至该人类对象。在特定的实施方式中,在本文所述的检测中,该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入
(见,如下文生物实施例)。在具体的实施方式中,该人类对象是人SMA患者。在另一具体的实施方式中,该人类 对象是人SMA患者,其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
一种形式。在具体的实施方式中,在国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号
2011/0086833中所述的检测中,该式(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN1基因的
mRNA对SMN1外显子7的纳入。在具体的实施方式中,该有效量的式(I)的化合物或其一种形
式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中,被施用至该人类对象。
在具体的实施方式中,该人类对象是人SMA患者。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中,在国际公开号WO2009/151546或美国
专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中,该式
(I)的化合物或其一种形式增强了转录自SMN1基因的mRNA对SMN1外显子7的纳入(见,例如
这些公开文本中的实施例)。在具体的实施方式中,该有效量的式(I)的化合物或其一种形
式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物中,被施用至该人类对象。
在具体的实施方式中,该人类对象是人SMA患者。在另一具体的实施方式中,该人类对象是人SMA患者,其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能
的丧失所造成的。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入。在另一具体的实施方式中,本文提供了一种用于增强有这类需要的人类对象体内Smn蛋白质表达的方法,其包括向该人类对象施用
有效量的式(I)的化合物或其一种形式,该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN1
和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在具体的实施方式中,该有效量的式(I)的化 合物或其一种形式含于包括药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合
物中,被施用至该人类对象。在具体的实施方式中,在本文(见,如下文生物实施例)或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见,例如这些公开文本中的实
施例;其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中,该式(I)的化合物或其一种形式
增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。
导致的SMN1基因功能的丧失所造成的。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
子7的纳入(见,如下文生物实施例)。在另一实施方式中,如本文(见,如下文生物实施例)或国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见,例如这些公开文本中
的实施例;其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中所测定的,该式(I)的化合物
或其一种形式增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。
在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
种形式。在另一具体的实施方式中,本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的
SMA的方法,其包括向该对象施用一种药物组合物,该药物组合物包括有效量的式(I)的化
合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在一个实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中,本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法,其包括向该对象施用一种药物组合物,该药物组合物包括有效量的增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入的式(I)的化合物或其一种形式和
药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在另一具体的实 施方式中,本文提供一种用于治疗有这类需要的人类对象体内的SMA的方法,其包括向该对象施用一种药物组合物,该药物组合物包括有效量的增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳
入的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。在特定的实施方式中,在本文所述的检测中,该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入(见,如下文的生物实施例)。在另一实施方式中,如本文(见,如下文的生物实施例)或者国际公开号WO2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(见,
例如这些公开文本中的实施例;其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中所测定
的,该式(I)的化合物或其一种形式增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或
SMN2外显子7的纳入。在具体的实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
例;其每个以引用方式全部并入本文)中所述的检测中所测定的,该式(I)的化合物或其一
种形式增强转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在具体的
实施方式中,该化合物是式(I)的化合物或其一种形式。
时或随后,一种或多种式(I)的化合物或其一种形式可以被施用至该对象或与该细胞接触。
一种或多种式(I)的化合物或其一种形式和一种或多种附加的试剂可以含于单一组合物或
不同的组合物中,被施用至对象或与细胞接触。在具体的实施方式中,一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与SMN1的基因置换(使用,如病毒递送载体)组合使用。在另一具体的
实施方式中,一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与利用差异化SMN1+/+和/或SMN2+/+细胞的细胞置换组合使用。在另一具体的实施方式中,一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与利用差异化SMN1+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一具体的实施方式中,一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与利用差异化SMN2+/+干细胞的细胞置换组合使用。在另一
具体的实施方式中,一种或多种式(I)的化合物或其一种形 式与阿克拉霉素A组合使用。在另一具体的实施方式中,一种或多种式(I)的化合物或其一种形式与转录活化剂,例如组蛋白质脱乙酰基酶(“HDAC”)抑制剂(如丁酸盐、丙戊酸和羟基脲);和mRNA稳定剂(来自
Repligen的mRNA脱帽抑制剂RG3039)。
和/或(xiii)抑制与SMA相关的症状的进展。
(iii)减少肌肉萎缩;(iv)减少运动功能的损失;(v)增加运动神经元;(vii)减少运动神经元的损失;(viii)保护缺乏SMN的运动神经元免于退行性变;(ix)增加运动功能;(x)增加肺功能;和/或(xi)减少肺功能损失。
或成年人独立站立的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中,用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童 或成年人
独立行走的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中,用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立跑动的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中,用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立呼吸的机能能力或有助于保持这种机能能力。在另一实施方式中,用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与
附加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人睡眠中独立翻身的机能能力或有
助于保持这种机能能力。在另一实施方式中,用式(I)的化合物或其一种形式(单独或与附
加的试剂组合)治疗SMA产生婴儿、幼童、儿童或成年人独立吞咽的机能能力或有助于保持
这种机能能力。
Southern印迹,以测定式(I)的化合物或其一种形式是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因
的mRNA对SMN1和/或SMN2外显子7的纳入。在某些实施方式中,下文生物实施例中所述的引
物和/或探针(例如,SMN引物,如SEQ ID NO.1、7、8、11或13和/或SEQ ID NO.2、9或12;以及SMN探针,如SEQ ID NO.3或10)被用于检测,例如RT-PCR、RT-qPCR、终点RT-PCR、PCR、qPCR、滚环扩增、Northern印迹或Southern印迹;或如下文所述的药物或检测试剂盒,以监测患者对式(I)的化合物或其一种形式的应答。
功能的丧失所造成的。在某些实施方式中,在施用式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物之前对该人类对象进行基因分型以测定该对象是否具有两个染色体中的SMN1基因的
端粒拷贝中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失。在一些实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有0型SMA的对象。在一些实施方式中,式
(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有1型SMA的对象。在其他的实施方
式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有2型SMA的对象。在其他的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有3型SMA的对象。在一些实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患有4型SMA的对
象。在某些实施方式中,该人类对象是SMA患者。
的纳入。在具体的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至对
象,该对象会或可以得益于增强的Smn蛋白质表达。
从约25至约30岁;从约30至约35岁;从约35至约40岁;从约40至约45岁;从约45至约50岁;从约50至约55岁;从约55至约60岁;从约60至约65岁;从约65至约70岁;从约70至约75岁;从约
75至约80岁;从约80至约85岁;从约85至约90岁;从约90至约95岁或从约95至约100岁。
施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至成年人。在仍然其他的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至老年人。
其他的实施方式中,预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至
患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中,治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA
的发作。
物组合物被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。在其他的实施方式中,预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至SMA患者以预防SMA的进展。在其他的实施方
式中,治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药物组合物被施用至SMA患者以治疗
或缓解SMA。
在具体的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有SMA的人类对
象,其中SMA是两个染色体上SMN1基因中的失活突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失
所造成的。在某些实施方式中,在施用式(I)的化合物或其一种形式或其药剂之前对该人类对象进行基因分型以测定该对象是否具有两个染色体中的SMN1基因的端粒拷贝中的失活
突变或缺失而导致的SMN1基因功能的丧失。在一些实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有0型SMA的对象。在一些实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有1型SMA的对象。在其他的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有2型SMA的对象。在其他的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有3型SMA的对象。在一些实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患有4型SMA的对象。在某些实施方式中,该人类对象是SMA患者。
入。在具体的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至对象,该对象会或可以得益于增强的Smn蛋白质表达。
80岁;从约80至约85岁;从约85至约90岁;从约90至约95岁或从约95至约100岁。
中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至儿童。在其他的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至成年人。在仍然其他的实施方式中,式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至老年人。
式中,预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至患者以预防有患SMA风
险的患者体内SMA的发作。在其他的实施方式中,治疗有效量的式(I)的化合物或其一种形
式或其药剂被施用至患者以预防有患SMA风险的患者体内SMA的发作。
用至SMA患者以治疗或缓解SMA。在其他的实施方式中,预防有效量的式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至SMA患者以预防SMA的进展。在其他的实施方式中,治疗有效量的
式(I)的化合物或其一种形式或其药剂被施用至SMA患者以治疗或缓解SMA。
它方便的途径,例如通过输注或弹丸注射,通 过粘膜上皮或粘膜皮肤(例如,口腔粘膜、直肠和肠粘膜)给药,并且可以与另一种生物活性剂一起给药。给药可以是全身或局部的。各种递送系统是已知的,例如,包封在脂质体、微粒、微胶囊、胶囊剂内,并且可以用于施用该化合物。
量;(viii)降低与SMA相关的症状数;(ix)降低或缓解与SMA相关的一种或多种症状的严重
度;(x)减少与SMA相关的症状的持续时间;(xi)防止与SMA相关的症状的复发;(xii)抑制
SMA的症状的进展或发作;和/或(xiii)抑制与SMA相关的症状的进展。在某些实施方式中,有效量的式(I)的化合物或其一种形式是有效地增强转录自SMN2基因的SMN2mRNA对SMN2外
显子7的纳入以及提高产自SMN2基因的Smn蛋白质的水平并因此在有这类需要的对象体内
产生所需的有益效果的量。在一些情况下,该所需的效果可以通过如下分析或量化来测定:
(1)转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入;或(2)产自SMN2基因的Smn蛋白质的水
平。式(I)的化合物或其一种形式的有效量的非限制性例子如本文所述。
有这类需要的人类对象体内产自SMN2 基因的Smn蛋白质的水平所需的量。在具体的实施方
式中,该人类对象是SMA患者。
约70到约100kg之间。
在包括从约0.001mg到约35,000mg范围的量。在具体的实施方式中,该人类对象是SMA患者。
的赋形剂的式(I)的化合物或其一种形式。在具体的实施方式中,该人类对象是SMA患者。
包含有效量的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药
物组合物。在具体的实施方式中,该药物组合物适于兽用和/或人类给药。本文提供的该药物组合物可以是允许该组合物被施用至对象的任何形式。
油溶液也可以用作液体载体,特别是用于可注射溶液。
和剂型。该组合物和单一单位剂型可以采取溶液剂或糖浆(可选地具有调味剂)、混悬液(可选地具有调味剂)、乳剂、片剂(例如,咀嚼片)、丸剂、胶囊剂、颗粒剂、粉剂(可选地用于复溶)、掩味或缓释制剂等等的形式。
文披露的化合物进行治疗的SMA患者的生物标记。在其他的实施方式中,转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量被用作正用例如本文披露的化
合物进行治疗的SMA患者的生物标记。在一些实施方式中,转录自SMN1和/或SMN2基因并包
括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的变化以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应变化是正用例如本文披露的化合物进行治疗
的患者的生物标记。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的相应增加表明该化合物
可以有效地治疗SMA。在另一具体的实施方式中,在施用化合物(如本文披露的式(I)的化合物)之后,转录自SMN2基因并包括SMN2外显子7的mRNA的量的减少以及转录自SMN2基因以及
不包括SMN2外显子7的mRNA的量的 相应增加表明该化合物不能有效地治疗SMA。根据这些
实施方式,下文所述的一种或多种SMN引物和/或一种SMN探针可以被用于检测,例如PCR(如qPCR)和RT-PCR(如RT-qPCR或终点RT-PCR)以评价和/或量化转录自SMN1基因和/或SMN2基
因以及包括或不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
和/或具有SEQ ID NO.9或12的核苷酸序列的反向引物该;和/或SMN探针,例如SEQ ID NO.3或10)。这些引物可以作为引物,被用于,如RT-PCR(例如本文所述的或本领域技术人员已知的RT-PCR、终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(例如qPCR)或滚环扩增;以及作为探针,被用于杂化检测,例如Northern印迹和/或Southern印迹检测。如本文中生物实施例中所用,终点RT-PCR是一种逆转录-聚合酶链式反应,该反应按一定数目的扩增循环进行(或直至起始原
料耗尽),然后使用,例如凝胶电泳分离、用荧光染料染色、荧光定量等等对每个DNA产物进行定量。
酸的DNA或RNA杂交;SEQ ID NO.7与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸32至54
和SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸1至4的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交,
SEQ ID NO.8与包括依次对应于SMN1和/或SMN2的外显子7的核苷酸87至111和SMN1和/或
SMN2的外显子8的核苷酸1至3的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交,SEQ ID NO.9
与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸39至62的核苷酸的核酸序列(如DNA或RNA
的反意义链)杂交,SEQ ID NO.11与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸43至63
的核苷酸的核酸序列(如DNA的有意义链)杂交,SEQ ID NO.12与包括对应于SMN1和/或SMN2
的外显子8的核苷酸51至73的核苷酸的核酸序列(如DNA或RNA的反意义链)杂交,以及SEQ
ID NO.13与包括对应于SMN1和/或SMN2的外显子6的核苷酸22至46的核苷酸的核酸序列(如
DNA的有意义链)杂交。
和/或SMN2外显子7的人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸以及结合下游反向引物(如SEQ
ID NO.9或12)、对应于SEQ ID NO.1和7的低聚核苷酸可被用来扩增编码包括SMN1和/或
SMN2外显子7的人SMN1和/或SMN2或由其编码的核酸。
及SEQ ID NO.10与包括对应于人SMN1和/或SMN2的外显子8的核苷酸7至36的核苷酸的核酸
序列(如DNA的有意义链)杂交。SEQ ID NO.3可作为探针,被用以如本文中所述或在国际公
开号WO 2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方式全部并入本
文)中所述,检测转录自小基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA,以及用以检测转录自人SMN1和/或SMN2以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA。此外,SEQ ID NO.10可作为探针,被用以如本文中所述或在国际公开号WO 2009/151546或美国专利申请公开号2011/
0086833(其每个以引用方式全部并入本文)中所述,检测转录自小基因以及包括或不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及用以检测转录自人SMN1和/或SMN2的mRNA。
Northern印迹或Southern印迹(如下文生物实施例中所述的检测),以测定化合物(如式(I)
的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2的
外显子7的纳入。
和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
化合物或其一种形式)的响应。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
于检测(如PCR、RT-PCR、RT-qPCR、qPCR、终点RT-PCR、滚环扩增、Northern印迹和Southern印迹)以测定转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量(如转录自SMN2基因并包括SMN2外显子7
的mRNA的量)。来源于患者的样本指从该患者中获得之后使用本领域技术人员已知的技术
进行处理和/或处置的样本。例如,可以使用本领域技术人员已知的技术对来自患者的样本进行处理以,如提取RNA。可以对来自患者的样本进行处理以,如提取RNA以及对该RNA进行逆转录以产生cDNA。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)
连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接
触;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。
在某些实施方式中,该样本来自或来源于施用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、
11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终
点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(b)检测转录自SMN1
和/或SMN2基因的mRNA的量。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA生
成的RNA或DNA片段的大小而彼此区分。
组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所
述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9
或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组
分接触;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如
qPCR)或滚环扩增以及适用于Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触;以及(b)
检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施
方式中,该样本来自或来源于施用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连
同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增以及适用于
Northern印迹或Southern印迹(如适用)的组分接触;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基
因的mRNA的量。
SMN2的外显子7 的SMN1和SMN2mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA生
成的RNA或DNA片段的大小而彼此区分。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施用了化
合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
组织样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所
述的SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR
(如qPCR)、滚环扩增或者Northern印迹或Southern印迹的组分接触;以及(b)检测转录自
SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)
和/或本文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/
或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施
用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、8、11或13)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或本文所述的SMN探针(如
SEQ ID NO.3或10)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增(如适用)的组分接触;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA的量。在具体
的实施方式中,该患者是SMA患者。
SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA和从不包括SMN1和SMN2的外显子7的SMN1和SMN2mRNA生
成的RNA或DNA片段的大小而彼此区分。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施用了化
合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
样本)或来源于患者的样本(如已经经过处理以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的
正向SMN引物(如SEQ ID NO.8)和/或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或
本文所述的SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及
不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量。在某些实施方式中,该样本来自或来源于施
用了化合物,如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式的患者。在具体的实施方式中,该患者是SMA患者。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或
本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或
RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物
(如本文所述的化合物)的SMA患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本
(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外
显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是
或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本
(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7
的 mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该
患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、
12个月或更长时间进行评定。
PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括
SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相
同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有
益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相
同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患
者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合
物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、
12个月或更长时间进行评定。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/或
本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适
用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合 物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患
者;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的
量,其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)
中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该
患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价
值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)
中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无
实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或
不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中
转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合
物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2
基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以
及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转
录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物
之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基
因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该
化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在 某些实
施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、
1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本
文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或
RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物
(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自
SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物
之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应
以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中
转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该
化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明
该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价
值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1
和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1) 该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不
包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样
本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来
说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者
的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响
应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小
时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或本
文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,
如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及
(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中
(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA
的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的
转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该
患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价
值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7
的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样
本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无
变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有
益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该 患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR
(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自
SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中
转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该
化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物
有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者
样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于
施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1
和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化
表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗
价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、
7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文
所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基
因并包括SMN1和 /或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基
因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类
似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及
不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似
样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者
来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或
SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患
者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1
和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之
前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及
不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患者对该化
合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施
方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的
1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR
(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显
子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患 者的类似样本(如来自相
同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如来自相同
类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有
益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如相
同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以
及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类
似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患者对该化合物没有响应以
及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
提取RNA的血样或组织样本)与SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR(如终点
RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施
用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自
SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1
和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来
自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相 对于施用该化合物之前,来
自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不
包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化
合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录
自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之
前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包
括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中
转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该
化合物之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2
基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患
者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在
某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本
(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外
显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的类似样本
(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2
的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说
可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基
因并包括 SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者的
类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2
的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自
该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患者对该化合物没
有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文
所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如
RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或PCR(如qPCR)的组分接触,其中该样本来自或来源
于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转
录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录
自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之
前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因
并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1
和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之
前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因
以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以
及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本
中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化
合物之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或 SMN2基
因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者
样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于
施用该化合物之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/
或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表
明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价
值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR(如
终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以
及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/
或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该
患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物之前,来自该患者
的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该SMN1和/或患者对该化合物有响应以及该
化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转
录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物
之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并
包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本
中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用
该化合物之前,来自该患 者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明
该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价
值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行评定。
以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/
或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/
或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或
SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自
SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一
定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类
型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的
量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/
或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2
的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日
期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2
基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对
该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些
实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物 或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-
100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。
在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及
包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因
并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化
合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的
转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者
对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以
及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的
量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者
的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以
及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、
2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I) 的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.1、7、11或13)和/
或本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同
适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA
患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的
量,其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自
该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物
对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1
和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数
量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的
组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的
无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是
有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、
13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-
15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.3或10)连同适用于,
如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检
测转录自SMN1和/或SMN2基因以及包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者
样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用
该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本
(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外
显子7的mRNA的量的增加表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是
或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或
在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自
SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化
表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗
价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、
5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、
40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患
者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或
本文所述的反 向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/
或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自
SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物
或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相
同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7
的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是
有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或
在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自
SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性
变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有
治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、
4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。
在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、
18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、
30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或 SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量
的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样
本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减
少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有
治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的
外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期
之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者
对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某
些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-
100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。
在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
以提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.8、11或13)和/或
本文所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用
于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的患者;以
及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其
中(1)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/ 或SMN2的外显子7的
mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自
该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包
括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合
物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1
和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一
定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类
型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的无变化或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患
者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合
物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、
8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用
1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合
物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-
PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2外显子7的mRNA的量,其中(1)该患者样本
中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用
该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本
(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2
的外显子7的mRNA的量的 减少表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说
可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因
以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的
该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)
中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化
或无实质性变化表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的
和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、
15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-
20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式
(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文
所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基
因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并
包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合
物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转
录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该
患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相
对于施用该化 合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的
类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1
和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该
患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/
或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量
剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样
本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化
或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早
的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2
基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患
者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在
某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、
14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、
22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或
50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响
应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)连同适用于,如RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR
(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显
子7的mRNA 的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早
的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或
SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录
自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合
物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自
相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子
7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者来说可能是或
是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或
在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1
和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,以
及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自
该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患者对该化合物没
有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
以提取RNA的血样或组织样本)与SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR(如终点
RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施
用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及(b)检测转录自
SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基
因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1
和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数
量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的
组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的
增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显
子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之
前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因
以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以
及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本
中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化
合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相
同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的
mRNA的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以
及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该
化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转
录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实
质性变化,表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或
不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、
16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施 方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、
20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/
或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或
在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自
SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增加,以及(ii)该患者
样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于
施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样
本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及该化合物对该患者
来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中转录自SMN1和/或
SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂
量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)
中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无
实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2
的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日
期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因
以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明该患者对
该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价值。在某些
实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8 小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、
23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50或50-
100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。
在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
提取RNA的血样或组织样本)与下文所述的正向SMN引物(如SEQ ID NO.11或13)和/或本文
所述的反向SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如
RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触,其中该样本来自或来源于施用了化合物(如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式)的SMA患者;以及
(b)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自
SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者
样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用
该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本
(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN2的外显子7的
mRNA的量的增加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或
SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早
的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物
有响应以及该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该
患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于
施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样
本(如相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显
子7的mRNA的量的无变化或无实 质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2
基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂
量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)
中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化
或无实质性变化,表明该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的
和/或不具有治疗价值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、
15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-
20、20-30、30-40、40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式
(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
SMN引物(如SEQ ID NO.9或12)和/或SMN探针(如SEQ ID NO.10)连同适用于,如RT-PCR(如
终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增的组分接触;以及(c)检测转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA以及转录自SMN1和/或SMN2基因以
及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量,其中(1)(i)该患者样本中转录自SMN1和/
或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量
剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组
织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的增
加,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子
7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,
来自该患者的类似样本(如来自相同类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因以及
不包括SMN1 和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的减少,表明该患者对该化合物有响应以及
该化合物对该患者来说可能是或是有益的和/或具有治疗价值;以及(2)(i)该患者样本中
转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合
物或一定数量剂量的该化合物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同
类型的组织样本)中的转录自SMN1和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA
的量的无变化或无实质性变化,以及(ii)该患者样本中转录自SMN1和/或SMN2基因以及不
包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量相对于施用该化合物或一定数量剂量的该化合
物或在某个较早的日期之前,来自该患者的类似样本(如相同类型的组织样本)中的转录自
SMN2基因以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量的无变化或无实质性变化,表明
该患者对该化合物没有响应以及该化合物对该患者来说不是有益的和/或不具有治疗价
值。在某些实施方式中,该患者的响应在施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后的1小时、2小时、4小时、8小时、12小时、16小时、20小时、1天、2天、3天、4天、5天、7天、14天、28天、1个月、2个月、3个月、6个月、9个月、12个月或更长时间进行监测。在一些实施方式中,在该患者已经接受1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、
20、21、22、23、24、25或更多剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患者的响应。在一些实施方式中,在施用1-5、5-10、10-15、15-20、20-30、30-40、
40-50或50-100剂量的化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式之后监测该患
者的响应。在一些实施方式中,在连续施用化合物,例如本文所述的式(I)的化合物或其一种形式期间或之后的数天、数周、数月或数年的时间段内监测该患者的响应。
种容器的一种或多种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9和/或12)和/或一种或多种SMN正向引
物(SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13)以及使用说明书。在另一实施方式中,药物或检测试剂盒包括 含于一个容器的一种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9或12)、一种SMN正向引物(SEQ
ID NO.1、7、8、11或13)以及使用说明书。
用于PCR和RT-PCR以,例如:(i)评价治疗剂(如式(I)的化合物或其一种形式)是否增强了转录自SMN1和/或SMN2基因的mRNA对SMN1和/或SMN2的外显子7的纳入;(ii)监测转录自SMN1
和/或SMN2基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和转录自SMN1和/或SMN2基因
以及不包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量;和/或(iii)监测对象对治疗剂(如式(I)
的化合物或其一种形式)的响应。在其他的实施方式中,该对象是人类对象。在其他的实施方式中,该人类对象是人类患者。在某些其他的实施方式中,该人类患者是人类SMA患者。
物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如
qPCR)或滚环扩增用于扩增由人SMN1小基因或人SMN2小基因编码的核苷酸序列,例如于本
文或于国际公开号WO 2009/151546或美国专利申请公开号2011/0086833(其每个以引用方
式全部并入本文)中所述的那些。在其他的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或Northern印迹。
列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他
的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或Northern印
迹。
列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施
方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或Northern印迹。
的正向引物以及含于另一种容器的具有发现于SEQ ID NO.9的核苷酸序列的反向引物。在
某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他的实施方式中,这
些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或Northern印迹。
序列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。
在其他的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或
Northern印迹。
序列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。
在其他的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或
Northern印迹。
序列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。
在 其他的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或
Northern印迹。
序列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。
在其他的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或
Northern印迹。
列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。在其他
的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或Northern印
迹。
序列的反向引物。在某些实施方式中,这些引物被用于RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-
qPCR)、PCR(如qPCR)或滚环扩增用于扩增由内源性人SMN1和SMN2基因编码的核苷酸序列。
在其他的实施方式中,这些引物作为探针被用于,例如杂化检测,如Southern印迹或
Northern印迹。
Southern印迹或Northern印迹。在具体的实施方式中,该探针被用于RT-qPCR或qPCR。在某些实施方式中,PCR(如qPCR)、RT-PCR(如终点RT-PCR和/或RT-qPCR)或滚环扩增所需的组
分,例如聚合酶、脱氧核苷三磷酸等被包含在这类试剂盒中。在一些实施方式中,杂化所需的组分被包含在这类试剂盒中。
式中,药物或检测试剂盒包括含于一个容器的一种或多种SMN反向引物(如SEQ ID NO.2、9
和/或12)、含于另一个容器的一种或多种SMN正向引物(如SEQ ID NO.1、7、8、11和/或13)和含于另一个容器的一种或多种SMN探针(如SEQ ID NO.3和/或10)以及使用说明书。
基因并包括SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量和转录自SMN1和/或SMN2基因以及不包括
SMN1和/或SMN2的外显子7的mRNA的量;和/或(iii)监测对象对治疗剂(如式(I)的化合物或
其一种形式)的响应。在其他的实施方式中,该对象是人类对象。在其他的实施方式中,该人类对象是人类患者。在某些其他的实施方式中,该人类患者是人类SMA患者。
种药物试剂盒,其包括一种包含式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物以及使用说明书。在另一具体的实施方式中,本文提供一种药物
试剂盒,其包括一种包含有效量的式(I)的化合物或其一种形式和药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂的药物组合物和使用说明书。在一个实施方式中,该使用说明书对如下的一
种、两种或更多种做出解释:针对对象的式(I)的化合物或其一种形式的给药剂量、给药途径、给药频率和给药的副作用。在其他的实施方式中,该对象是人类对象。在其他的实施方式中,该人类对象是人类患者。在某些其他的实施方式中,该人类患者是人类SMA患者。
一个步骤意欲独立以及可在有或没有任何前面或后面的步骤的情况下进行。换言之,本文
所提供的合成方案的每个单独的反应步骤的效能被分开考虑。
备。
人员已知的技术,使合适的起始原料与化合物A1或继而与化合物A3、化合物A4或化合物A6
反应而提供多个R1官能团取代基)与化合物A2(其中L1是合适的亲核离去基团以及R1是包含
至少一种胺基,例如,N-Boc-哌嗪或N-Boc-4-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧硼戊环-2-
基)-5,6-二氢吡啶的单或双环杂环环状系统)在合适的溶剂或溶剂混合物(例如n-BuOH、
DMSO、NMP以及诸如此类或其混合物)中反应以提供化合物A3。
或对应物,例如反应性亲核物质)反应,以提供化合物A5。
反应。
或化合物B4反应而提供多个R1官能团取代基)与试剂(例如,在一种实施方式式中甲醇钠,
其中X是氯代)在合适的溶剂(例如甲醇等等)中反应以提供作为2-X-6-甲氧基和2-甲氧基-
6-X结构异构体的混合物的化合物B2。然后通过还原试剂(例如乙硼烷等等)将化合物B2还
原为相应的醛,接着用合适的氧化剂(例如MnO2或Dess-Martin高碘烷等等)进行氧化以提
供作为结构异构体的混合物的化合物B3。用BBr3使化合物B3脱甲基以提供作为结构异构体
的混合物的化合物B4。分离2-羟基-6-X化合物B4结构异构体以及根据方案A的程序进一步
用其替代化合物A4。
物C2与化合物A10反应以提供化合物C3。
或继而与化合物D2、化合物D3或化合物D4反应而提供多个R1官能团取代基)与化合物A2在
合适的溶剂中反应以提供化合物D2。使用方案A的程序使化合物D2与多聚甲醛反应以提供
化合物D3。使用方案A的程序使化合物D3与化合物A5反应,经历Knoevenagel缩合反应,以提供化合物D4。
定的范围内的、现在已知的或以后开发的本文所述的化合物的这类变化都被认为落入本文
所述的和下文要求保护的化合物的范围内。这些实施例说明某些化合物的制备方法。本领
域的技术人员将理解的是,在这些实施例中描述的技术代表,如本领域普通技术人员所述,在合成实践中起良好作用,并因此构成其实践的优选方式的技术。然而,应当理解的是,本领域的技术人员应该根据本公开,认识到可以以具体方法做出许多被公开的以及仍然获得
相同或类似结果的变更,而不背离本说明书的精神和范围。
“约”得以修改。因此,所有这些数字都表示近似值,其可以依据所需的特性而变化,所述特性试图通过反应或作为可变实验条件的结果而获得。因此,在实验的重复性的预期范围内,在所得到的数据的情况下,术语“约”指所提供的数据的范围,其可根据相对于平均值的标准偏差而变化。还有,对于所提供的实验结果,所得的数据可以被上舍入或下舍入以一致地呈现数据,而不损失显著数字。在最低限度下,并且不试图将等同原则申请限制在本权利要求的范围内,应当按照本领域技术人员所用的有效数字位数和舍入技术解释每个数值参
数。
羧酸叔丁酯。MS m/z 280.2[M+H]+;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)7.40(1H,m),6.04(1H,d,J=8.8Hz),5.64(1H,d,J=7.2Hz),3.62(4H,m),3.36(4H,m),1.51(9H,s)。
18小时,然后冷却至室温。然后用EtOAc(500mL)稀释混合物并用1M Rochelle盐溶液
(200mL)和饱和的NH4Cl溶液(200mL)清洗。减压浓缩有机层并柱色谱法(30%-50%EtOAc/
己烷)纯化,以收获作为白色固体的3.6g(39%)4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)哌嗪-1-羧
酸叔丁酯。MS m/z 308.2[M+H]+; 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)12.35(1H,br),9.55(1H,s),7.66(1H,d,J=8.51Hz),6.26(1H,d,J=8.83Hz),3.79(4H,m),3.56(4H,m),1.51(9H,
s)。
40mmol)的THF(100mL)溶液。除去冷却浴,使反应能够在1小时内升温至室温。将反应混合物浓缩,然后用EtOAc和饱和的NaHCO3溶液稀释。将有机层分离,并用EtOAc两次萃取水层。在无水硫酸钠之上将合并的有机层干燥、过滤、浓缩,以及用EtOAc/己烷的梯度混合物洗脱,
1
在硅胶上通过柱色谱法进行纯化,得到作为黄色固体的11.28g(99%)标题化合物。H-NMR
(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.00(1H,dd,J=1.0,8.0Hz),7.53(1H,dd,J=1.0,8.0Hz),7.36
(1H,t,J=8.0Hz),4.19(2H,s),1.38(9H,s)。
中添加哌啶(0.6mL,6.0mmol)和乙酸(0.25mL,3.0mmol)。将反应混合物加热至90℃达6小时并冷却至室温。向混合物中添加水(30mL),得到沉淀物。过滤沉淀物并用水,然后用乙醚清洗。在氮气流下干燥后,得到作为黄色固体的850mg(85%)4-(3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-
基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 499.3[M+H]+;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)9.04(1H,s),7.87(1H,d,J=6.9Hz),7.85(1H,d,J=8.8Hz),
7.54(1H,m),7.33(1H,t,J=7.9Hz),6.69(1H,d,J=8.8Hz),3.83(4H,m),3.62(4H,m),1.52
(9H,s)。
(5mL)的4N HCl。将混合物搅拌16小时,并过滤。用乙醚清洗固体,并在氮气下干燥。得到定量的3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮盐酸盐
以及无需进一步纯化而用于下一步骤。MS m/z 399.1[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ
(ppm)9.12(1H,s),9.11(2H,br),8.36(1H,d,J=8.8Hz),8.16,(1H,d,J=6.9Hz),7.66(1H,
d,J=8.8Hz),7.45(1H,t,J=7.9Hz),7.14(1H,d,J=8.8Hz),4.03(4H,m),3.26(4H,m).
3.4mmol),然后添加NaBH(OAc)3(636mg,3.0mmol)。在室温下将反应混合物搅拌30min。向混合物中添加水(10mL)和饱和的NaHCO3溶液(10mL)中,以形成沉淀物。将该沉淀物滤出,用水清洗并在氮气下干燥,得到作为黄色固体的680mg(97%)标题化合物。 熔点258-260℃;MS m/z 413.2[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.06(1H,s),8.25(1H,d,J=8.8Hz),
8.14(1H,d,J=6.9Hz),7.64(1H,m),7.44(1H,d,J=7.7Hz),7.08(1H,d,J=9.1Hz),3.79
(4H,m),2.44(4H,m),2.25(3H,s)。
夜搅拌后,将反应混合物减压浓缩,然后用CH2Cl2和饱和的NaHCO3溶液稀释。将有机层分离,用CH2Cl2两次萃取水层。在无水硫酸钠之上将合并的有机层干燥、过滤、浓缩,以及在硅胶上通过柱色谱法进行纯化。用二氯甲烷-甲醇的梯度混合物的洗脱收获了作为深棕色油状物
的3.23g(37%)的标题化合物。MS m/z 219.2[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.38(1H,d,J=6.95Hz),7.73(1H,s),7.24(1H,d,J=1.60Hz),6.71(1H,dd,J=1.60,6.95Hz),
4.10(2H,q,J=7.00Hz),3.74(2H,s),2.34(3H,s),1.20(3H,t,J=7.00Hz);
混合物中添加哌啶(0.3mL)和乙酸(0.1mL)。将反应混合物加热至120℃达15小时并冷却至
室温。向混合物中添加水(6mL),以产生沉淀物。将该沉淀物滤出并用水、然后用乙醚清洗。
在氮气下干燥之后,得到作为黄色固体的112mg(60%)的4-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡
啶-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸丁酯。MS m/z 462.4[M+H]+。
噁烷(1.5mL)的4N HCl。将混合物搅拌16小时,并过滤。用乙醚清洗固体,并在氮气下干燥。
得到定量的3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡
啶-2-酮盐酸盐以及无需进一步纯化而用于下一步骤。MS m/z 362.3[M+H]+。
(0.02mL,0.22mmol),然后添加NaBH(OAc)3(52mg,0.22mmol)。在环境温度下将反应混合物搅拌30min。将混合物用CH2Cl2(30mL)稀释并用饱和的NaHCO3溶液清洗。减压浓缩有机层以及通过柱色谱法(5%-10%MeOH/CH2Cl2)纯化,以收获作为黄色固体的25mg(60%)标题化合物。熔点264-268℃;MS m/z 376.3[M+H]+; 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)8.55(1H,s),8.32(1H,s),7.92(1H,d,J=6.94Hz),7.64(1H,d,J=8.83Hz),7.26(1H,s),6.56(2H,m),3.74
(4H,m),2.52(4H,m),2.33(6H,s)。
1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)7.72(1H,d,J=6.62Hz),6.20(1H,dd,J=6.31,2.21Hz),6.02(1H,d,J=1.89Hz),3.56(4H,m),3.42(4H,m),1.50(9H,s)。
(200mL)和饱和的NH4Cl溶液(200mL)清洗混合物。将有机层减压浓缩并通过柱色谱法
(30%-80%EtOAc/己烷)纯化,以收获作为白色固体的1.5g(27%)的4-(5-甲酰基-4-羟基
吡啶-2-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 308.2[M+H]+;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)11.37(1H,s),9.64(1H,s),8.27(1H,s),5.98(1H,s),3.71(4H,m),3.56(4H,m),1.48(9H,s)。
时,并冷却至室温。向该混合物中添加水(6mL),得到沉淀物。过滤该沉淀物并用水、然后用乙醚清洗。在氮气下干燥后,得到作为黄色固体的96mg(96%)的4-(3-(4-氯代苯并[d]噻
唑-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 499.3[M+H
]+;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ(ppm)9.08(1H,s),8.62(1H,s),7.86(1H,d,J=9.14Hz),7.55
(1H,m),7.34(1H,t,J=7.88Hz),6.48(1H,s),3.80(4H,m),3.62(4H,m),1.51(9H,s)。
(1mL)的4N HCl。将混合物搅拌6小时并过滤。将固体用乙醚清洗,并在氮气下干燥,得到
61mg(82%)的3-(4-氯代苯并[d]噻唑-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-2-
酮盐酸盐,其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS m/z 399.1[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.34(2H,br),9.13(1H,s),8.96(1H,s),8.16(1H,d,J= 6.94Hz),7.66(1H,d,J
=6.62Hz),7.46(1H,t,J=7.88Hz),7.00(1H,s),4.01(4H,m),3.22(4H,m)。
NaBH(OAc)3(40mg,0.2mmol)。在室温下将反应混合物搅拌30min。蒸发溶剂并将水(2mL)加入混合物中。将沉淀物滤出,用水清洗并在氮气下干燥,得到作为黄色固体的34mg(82%)的标题化合物。熔点285-288℃;MS m/z 413.2[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)9.08(1H,s),8.89(1H,s),8.14(1H,m),7.66(1H,m),7.44(1H,t,J=7.72Hz),6.89(1H,s),3.77
(4H,m),2.42(4H,m),2.24(3H,s)。
温。向该混合物中添加水(2mL),得到沉淀物。过滤该沉淀物并用水、然后用乙醚清洗。在氮气下干燥后,得到作为黄色固体的115mg(63%)的4-(3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-
基)-2-氧代-2H-吡喃并[3,2-c]吡啶-7-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 462.3[M+H]+。
二噁烷(1mL)的4N HCl。将混合物搅拌2小时,然后过滤。将固体用乙醚清洗并在氮气下干燥以定量提供3-(7-甲基咪唑并[1,2-a]吡啶-2-基)-7-(哌嗪-1-基)-2H-吡喃并[3,2-c]吡
啶-2-酮盐酸盐,其不经进一步纯化即用于下一步骤。MS m/z 362.2[M+H]+。
溶液(0.025mL,0.25mmol),然后添加NaBH(OAc)3(55mg,0.25mmol)。于环境温度下将反应混合物搅拌1h。向该混合物添加水(2mL)和饱和的NaHCO3溶液(2mL)以形成沉淀物。将该沉淀
物滤出,用水清洗以及在氮气下干燥,以提供作为黄色固体的30mg(67%)的标题化合物。MS m/z 376.3[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.63(1H,s),8.59(1H,s),8.41(1H,d,J=6.96Hz),8.32(1H,s),7.22(1H,s),6.71(1H,s),6.66(1H,dd,J=6.94,1.58Hz),3.60
(4H,m),2.49(3H,s),2.28(3H,s),2.22(4H,m)。
水层五次。在MgSO4之上将合并的有机层干燥。将该有机层滤出并浓缩,以提供6-氯代-2-甲氧基烟酸和2-氯代-6-甲氧基烟酸的1:1混合物(20.22g,69%)。MS m/z 188[M+H]+。
和至pH7。加入二氯甲烷并萃取水层。将合并的有机层于K2CO3之上干燥、过滤以及在真空下浓缩,以收获10.6g相应的醇。可以将残留物直接用于氧化步 骤或用乙基乙酸酯和己烷的
混合物于硅胶上纯化。TLC Rf 0.31(含于己烷的30%EtOAc)。MS m/z 174[M+H]+。
于CH2Cl2,38.6mmol)。于0℃将溶液搅拌30min并用饱和的NaHCO3溶液中和至pH 7。将水层用二氯甲烷清洗两次以去除2-氯代-6-甲氧基醛。用盐水处理水层并放置3小时。将沉淀的固
体过滤并于真空下干燥,以提供作为白色粉末的1.07g的6-氯代-2-甲氧基醛(71%)。TLC
Rf0.06(含于EtOAc的70%CH3CN)。MS m/z 158[M+H]+。
咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)乙酸乙酯(5g)。MS m/z 234[M+H]+。
将合并的有机层于K2CO3之上干燥、过滤并在真空下浓缩,以提供2.1g的4-(5-甲酰基-6-羟基吡啶-2-基)-1,4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯。将浓缩的残余物不经进一步纯化而用于
下一步骤。MS m/z 322[M+H]+。
二氯甲烷萃取三次。将合并的有机层合并以及浓缩。浓缩后,将残余物在硅胶上纯化以提供
4-(3-(6,8-二甲基咪唑并[1,2-a]吡嗪-2-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,
4-二氮杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯。MS m/z 491[M+H]+。
2-a]吡嗪-2-基)-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-2-酮的HCl盐(164mg,55%)。游离碱的分析样本
通过将该HCl盐再溶解于二氯甲烷,用饱和的NaHCO3溶液处理混合物,继之以萃取和蒸发而制备。MS m/z 391[M+H]+;1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.74(1H,s),8.51(1H,s),8.33(1H,
br.s),8.08(1H,d,J=8.8Hz),6.80(1H,d,J=8.8Hz),3.9-3.7 (4H,br.m),2.9(2H,br.t),
2.74(3H,s),2.65(2H,br.m),2.38(3H,s),1.8(2H,br.m)。
室温下用甲醛(含于水37wt%,2.56mmol,0.19mL)和三乙酰氧基硼氢钠(165mg,0.78mmol)处理溶液。在室温下将反应混合物搅拌2小时并于真空下浓缩。将残余物载到硅胶柱上并用含于二氯甲烷的甲醇(5-20%)纯化以提供标题化合物(66.9mg,64%)。熔点243-245℃;MS m/z 405.1[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ8.74(1H,s),8.51(1H,s),8.32(1H,br.s),
8.09(1H,d,J=8.8Hz),6.80(1H,d,J=8.8Hz),3.9-3.7(4H,br.m),3.18(2H,br.d),2.74
(3H,s),2.65(2H,br.m),2.38(3H,s),2.25(3H,s),1.8(2H,br.m)。
拌3小时并冷却至室温,以收获粗制的6-(顺式-3,5-二甲基哌嗪-1-基)-2-羟基烟碱醛。MS m/z 236[M+H]+。
基)-顺式-2,6-二甲基哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.03g,89%)。MS m/z 336[M+H]+。
酯。MS m/z 529[M+H]+。
429[M+H]+;1H NMR(DMSO-d6,500MHz)δ9.08(1H,s),8.33(1H,d,J=8.8Hz),8.13(1H,d,J=
7.8Hz),7.64(1H,d,J=7.6Hz),7.43(1H,t,J=7.8Hz),7.16(1H,d,J=8.8Hz),4.70(2H,
br.t),3.4-3.2(2H,br.m),3.0(2H,br.t),1.31(3H,s),1.30(3H,s)。
7.8Hz),7.11(1H,d,J=9.0Hz),4.4(2H,br.m),2.8(2H,br.t),2.22(3H,s),2.15(2H,
br.m),1.12(3H,s),1.14(3H,s)。
62%)。MS m/z 388[M+H]+。
0.903mmol)。在室温下将反应混合物搅拌16小时。过滤沉淀的固体并浓缩母液。于硅胶上纯化残余物以收获4-(3-(2-溴代乙酰基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮
杂环庚烷-1-羧酸叔丁酯(132.2mg,32%)。MS m/z 489[M+Na]+。
(132mg,0.28mmol)。将溶液回流16小时并在真空下浓缩。于硅胶上纯化残余物以提供4-(3-(咪唑并[2,1-b]噻唑-6-基)-2-氧代-2H-吡喃并[2,3-b]吡啶-7-基)-1,4-二氮杂环庚烷-
1-羧酸叔丁酯(64.3mg,49%)。MS m/z 468[M+H]+。
(1H,d,J=8.8Hz),7.98(1H,d,J=4.4Hz),7.30(1H,d,J=4.4Hz),6.89(1H,d,J=8.8Hz),
4.29(1H,br.m),4.02(2H,br.m),3.80(2H,br.m),3.29(2H,br.m),3.17(2H,br.m),2.13
(2H,br.m)。
d,J=8.8Hz),3.95-3.61(4H,br.m),2.89-2.60(4H,br.m),2.38(3H,s),1.99(2H,br.m)。
没有从盐形式分离得到的情况下,本领域的普通技术人员能够预期执行所需的反应以制备
和分离得到该化合物的游离碱形式。
形式没有从盐形式分离得到的情况下,本领域的普通技术人员能够预期执行所需的反应以
制备和分离得到该化合物的游离碱形式。
定的范围内的、现在已知的或以后开发的本说明书的这类变化都被认为落入本说明书和下
文要求保护的范围内。这些实施例对本文所述的某些化合物进行的活体外和/或活体内检
测作出说明以及证实了所述化合物通过增强转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的纳入
而用于治疗SMA的有用性。式(I)的化合物增强了转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的
纳入并增强了产自SMN2基因的Smn蛋白质的水平,因此可被用来治疗有这类需要的人类对
象体内的SMA。
进行扩增:
原pcDNA3.1/Hygro载体的衍生物。
中。此外,用BamHI和NotI限制性位点将缺乏起始密码子的萤火虫荧光素酶基因克隆入该载体中。
显子6到8和间插内含子的SMN2-选择性剪接报告基因构建体,之后生成萤光素酶报告基因。
此构建体的显着特征是在荧光素酶基因中缺少起始密码子,通过在外显子7的核苷酸48之
后插入核苷酸以及在紧挨外显子6上游之处添加起始密码子(ATG)使终止密码子(在开放阅
读框架中,其编码SMN蛋白)失活。将单个腺嘌呤(SMN2-A)插入外显子7的核酸残基48之后。
除去时,萤光素酶报告基因在紧挨外显子6的上游具有ATG起始密码子的框架之外。此外,当不存在外显子7时,开始于紧挨外显子6的上游的ATG起始密码子的开放阅读框在SMN外显子
8的片段中包含终止密码子。因此,当不存在增加转录自SMN2基因的mRNA对SMN2外显子7的
纳入的化合物时,产生更多含外显子7和多官能报告基因的转录物。本说明书的示意图可见图1。
100%DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍,以生成7点浓度曲线。向每个含细胞的孔中添
加测试化合物的溶液(1μL,在DMSO中200倍)并在细胞培养孵育箱(37℃,5%CO2,100%相对湿度)中将该板孵育24小时。为每个测试化 合物浓度制备两个拷贝。然后在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
(SEQ ID NO.2)与萤火虫萤光素酶的编码序列中的核苷酸序列杂交,SMN探针A(SEQ ID
NO.3)与外显子7中的核苷酸序列(核苷酸50至核苷酸54)和外显子8中的核苷酸序列(核苷
酸1到核苷酸21)杂交。这三种低聚核苷酸的组合只检测SMN1和SMN2小基因(RT-qPCR)而并
不会检测内源性SMN1或SMN2基因。
10倍稀释细胞裂解物、0.06μL的100μM SMN正向引物、0.06μL的100μM SMN反向引物和0.225μL的100μM SMN探针制备的。
情况。根据SMN2小基因FL和GAPDH的扩增曲线的斜率单独计算扩增效率(E)。然后将SMN2小
基因FL和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct,其中Ct是每个扩增子的阈值。将SMN2小基因FL的丰度归一化为GAPDH丰度。然后用来自测试化合物处理的样本的归一化的SMN2小基因FL丰度
除以来自溶媒处理的细胞的归一化的SMN2小基因FL丰度,以测定SMN2FL mRNA相对于溶媒
对照的水平。
纳入。
SMN2mRNA生产的EC1.5x由一个星号(*)表示,>1μm和≤3μm之间的EC1.5x由两个星号(**)表示,>0.3μm和≤1μm之间的EC1.5x由三个星号(***)表示,>0.1μm和≤0.3μm之间的EC1.5x由四个星号(****)表示以及≤0.1μm的EC1.5x由五个星号(*****)表示。
胞。允许细胞附着至少4-6hrs。在100%DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍,以生成7点浓度曲线。 向每个测试孔中添加测试化合物的溶液(1μL,在DMSO中200倍)并向每个对照孔中添加1μL DMSO。在细胞培养孵育箱(37℃,5%CO2,100%相对湿度)中将该板孵育24hrs。在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
苷酸序列(核苷酸1到核苷酸4)杂交,引物SMNΔ7正向B(SEQ ID NO.8)与外显子6中的核苷
酸序列(核苷酸87到核苷酸111)和外显子8中的核苷酸序列(核苷酸1到核苷酸3)杂交,引物
SMN反向B(SEQ ID号9)与外显子8中的核苷酸序列(核苷酸39到核苷酸62)杂交,探针SMN探
针B(SEQ ID号10)与外显子8中的核苷酸序列(核苷酸7到核苷酸36)杂交。这些引物和探针
与人SMN1和SMN2mRNA的常见核苷酸序列杂交。由于实施例3中所用的SMA患者细胞仅包含
SMN2基因,因此RT-qPCR仅可以量化SMN2全长和Δ7mRNA。
Δ7mRNA的减少。根据SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率单独计算扩增效率(E)。然后将SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct,其中Ct是每个扩增子的阈值。将
SMN2FL和SMN2Δ7的丰度归一化为GAPDH丰度。然后用来自测试化合物处理的样本的归一化
的SMN2FL和SMN2Δ7的丰度分别除以来自溶媒处理的细胞的归一化的SMN2FL和SMN2Δ7的
丰度,以测定SMN2FL和SMN2Δ7mRNA相对于溶媒对照的水平。
胞。允许细胞附着至少4-6hrs。在100%DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍,以生成7点浓度曲线。向每个测试孔中添加测试化合物的溶液(1μL,在DMSO中200倍)并向每个对照孔中添加1μL DMSO。在细胞培养孵育箱(37℃,5%CO2,100%相对湿度)中将该板孵育24hrs。在Cells-To-Ct裂解缓冲液中将细胞裂解并将裂解物保存于-80℃。
63)和外显子8中的核苷酸序列(SMN反向C,SEQ ID NO.12)(核苷酸51到核苷酸73)杂交。由
于实施例4中所用的SMA患者细胞仅包含SMN2基因,因此RT-PCR仅可以目测和量化SMN2全长
和SMN2Δ7mRNA。
剂盒的RNeasy旋转柱,其中全部RNA与膜结合。将RNA在无核糖核酸酶的水中洗脱,然后存贮于-20℃,并随后在7900HT热循环仪上利用TaqMan RT-qPCR进行分析。将全部RNA稀释10倍
并将2.5μL的稀释试样加入TaqMan RT-qPCR混合物。
外显子8中的核苷酸序列杂交,引物SMN反向B(SEQ ID号9)与外显子8中的核苷酸序列杂交,探针SMN探针B(SEQ ID号10)与外显子8中的核苷酸序列杂交。这些引物和探针与人SMN1和
SMN2mRNA的常见核苷酸序列杂交。由于实施例5中所用的SMA患者细胞仅包含SMN2基因,因
此RT-qPCR仅可以量化SMN2全长和Δ7mRNA。
Δ7mRNA的减少。根据SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的扩增曲线的斜率单独计算扩增效率(E)。然后将SMN2FL、SMN2Δ7和GAPDH的丰度计算为(1+E)-Ct,其中Ct是每个扩增子的阈值。将
SMN2FL和SMN2Δ7的丰度归一化为GAPDH丰度。然后用来自测试化合物处理的样本的归一化
的SMN2FL和SMN2Δ7的丰度分别除以来自溶媒处理的细胞的归一化的SMN2FL和SMN2Δ7的
丰度,以测定SMN2FL和SMN2Δ7mRNA相对于溶媒对照的水平。
剂盒的RNeasy旋转柱,其中全部RNA与膜结合。将RNA在无核糖核酸酶的水中洗脱,然后存贮于-20℃。
子8中的核苷酸序列(SMN反向C,SEQ ID NO.12)杂交。
浮液以每孔5,000个细胞制成板并孵育3到5个小时。为了提供对照信号,96孔板中的三(3)
个孔不接收细胞并因此作为空白对照孔。在100%DMSO中将测试化合物连续稀释3.16倍,以生成7点浓度曲线。将1μL的测试化合物溶液转移到含有细胞的孔中并在细胞培养孵育箱
(37℃,5%CO2,100%相对湿度)中将细胞孵育48小时。为各个测试化合物浓度设置三份样本。48小时后,将上清液从孔中除去以及将含有蛋白酶抑制剂的25μL RIPA裂解缓冲液加入到孔中并在室温下振荡孵育1小时。加入25μL稀释剂,然后将35μL所得裂解物转移至384孔板中,其中每孔含有5μL的抗体溶液(SMN溶解缓冲液中抗SMN d2和抗SMN kryptate的1:100稀释液)。将该板离心1分钟以将溶液带至孔的底部,然后在室温下孵育过夜。在EnVision多标记平板读数仪(Perkin-Elmer)上测量该板的各孔上665nm和620nm处的荧光。
行了说明。通过从各个样本孔的归一化荧光中减去该空白对照孔的归一化平均荧光,然后
将差值除以该空白对照孔归一化平均荧光并将得到的值乘以100来计算每个样本孔的ΔF
值(对Smn蛋白质丰度的百分比值量度)。每个样本孔的ΔF值表示来自测试化合物处理的样
本的Smn蛋白质丰度。每个样本孔的ΔF值除以该溶媒对照孔的ΔF值来计算相对于溶媒对
照的Smn蛋白质丰度的增长倍数。
1.2的最大增加倍数由一个星号(*)表示,>1.2和≤1.35之间的增加倍数由两个星号(**)表
示,>1.35和≤1.5之间的增加倍数由三个星号(***)表示,>1.5和≤1.65之间的增加倍数由四个星号(****)表示以及>1.65的增加倍数由五个星号(*****)表示。
合物,其通过Smn蛋白质形核而形成;以及将gems计数测定法用于评估细胞中的Smn蛋白质
水平。如本文中所述,将gems计数测定法用于量化用检测化合物处理的SMA患者的成纤维细胞中的Smn蛋白质水平。
稀释3.16倍,以生成7点浓度曲线。将10μL的测试化合物溶液加入每个含有细胞的孔中并在细胞培养孵育箱(37℃,5%CO2,100%相对湿度)中孵育48小时。为各个测试化合物浓度设置两个拷贝。将最终浓度为0.5%的含DMSO的细胞用作对照物。
洗三次之后,用10%FBS将其封闭1小时。将封闭缓冲液中1:1000稀释的60μL初级抗体加入并在室温下将该混合物孵育1小时。用PBS将细胞清洗三次并将封闭缓冲液中1:5000稀释的
60μL二级抗体加入,然后在室温下将该混合物孵育1小时。在封固剂的辅助下将盖玻片安装在载片上并允许干燥过夜。将指甲油施加到盖玻片的载片上并将载片避光存储。将带有63x Plan-Apochromat,NA=1.4物镜的Zeiss Axovert 135用于免疫荧光检测和计数。对每≥
150细胞核的gems数量进行计数并通过将DMSO和10nM硼替佐米作为对照计算%活化。对于
每个检测化合物,检查所有波长下的细胞,以识别具有固有荧光的测试化合物。
时。基本上如Makhortova等人,Nature Chemical Biology,2011,7:544中所述,使用Smn免
疫染色和共聚焦荧光显微镜量化细胞核中的Smn蛋白质水平。化合物处理的样本中的Smn蛋
白质水平被归一化为溶媒处理的样本中的所述水平并被绘制成化合物浓度的函数。
中。为了提供对照信号,该板中的三(3)个孔仅含有RIPA裂解缓冲液并因此作为空白对照
孔。将该板离心1分钟以将溶液带至孔的底部,然后在室温下孵育过夜。在EnVision多标记平板读数仪(Perkin-Elmer)上测量该板的各孔上665nm和620nm处的荧光。根据制造商的方
案,使用BCA检测测量组织匀浆中的总蛋白。
进行了说明。通过从各个组织样本孔的归一化荧光中减去该空白对照孔的归一化平均荧
光,然后将差值除以该空白对照孔归一化平均荧光并将得到的值乘以100来计算每个组织
样本孔的ΔF值(对Smn蛋白质丰度的百分比值量度)。对于该组织样本,每个组织样本孔的
ΔF值除以总蛋白质量(使用该BCA检测测定)。每个组织样本相对于溶媒对照的Smn蛋白质
丰度的变化被计算为在测试化合物的存在下该组织样本的ΔF值与溶媒对照信号的平均Δ
F值的差除以该溶媒控制信号的平均ΔF值。
产自SMN2基因和杂种小鼠Smn1-SMN2基因的Smn蛋白质的水平。
照。收集组织以根据实施例10进行蛋白质水平的分析。
Smn蛋白质水平。
质水平的分析。
是IP所用剂量的3.16倍。每天记录用测试化合物或溶媒处理的SMAΔ7小鼠和年龄匹配的杂
合小鼠的体重。
IP所用剂量的3.16倍。将翻正反射时间测量为小鼠从躺倒之后到翻正所花费的时间。为每
个小鼠标测量5次翻正反射时间(允许每次尝试的最长时间为30s),每次测量间隔5分钟。于PND 10、14和18测量用测试化合物或溶媒处理的SMAΔ7纯合敲除小鼠和年龄匹配的杂合小
鼠的翻正反射时间并绘图。
IP所用剂量的3.16倍;以及稍后切 换为含于具有0.1%吐温-80的0.5%HPMC口服剂量QD,
剂量是IP所用剂量的6.32倍。每天记录各组中存活小鼠的数量并绘制为小鼠总数的百分
比。
成SMN1版本的小基因。因此,与该 SMN2-A小基因构建体类似,SMN1小基因构建体具有在外显子7的核酸残基48之后插入的单一腺嘌呤残基。该SMN1小基因构建体被称为SMN1-A。
NO.2)与萤火虫萤光素酶的编码序列中的核苷酸序列杂交。这两种低聚核苷酸的组合只检
测SMN1或SMN2小基因(RT-PCR)而并不会检测内源性SMN1或SMN2基因。由于实施例16中所用
的HEK293H细胞仅用人SMN1小基因转染,因此RT-PCR方法仅可以目测和量化SMN1小基因FL
和SMN1小基因Δ7mRNA。
所描述的权利要求中。