含辅酶Q10的营养组合物及其制备方法与应用

摘要

含辅酶Q10的营养组合物及其制备方法与应用，涉及辅酶Q10。所述含辅酶Q10的营养组合物的成分包括：辅酶Q10、天然维生素E、油溶性辅料、水溶性辅料；按质量比辅酶Q10∶天然维生素E∶油溶性辅料∶水溶性辅料＝1∶(0.8～1.8)∶(6.2～10.82)∶(0.007～0.08)。按比例称取辅酶Q10、天然维生素E、油溶性辅料、水溶性辅料，混合均匀，脱去气泡，形成均一的混悬剂。所述含辅酶Q10的营养组合物可在制备增强免疫力、缓解体力疲劳的含辅酶Q10的营养保健制剂中应用。

权利要求

1.含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于其成分为：辅酶Q10、天然维生素E、油溶性辅料、水溶性辅料；按质量比辅酶Q10∶天然维生素E∶油溶性辅料∶水溶性辅料＝1∶(0.8～1.8)∶(6.2～10.82)∶(0.007～0.08)；所述水溶性辅料采用微囊形式包裹。

2.如权利要求1所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于按质量比辅酶Q10∶天然维生素E∶油溶性辅料∶水溶性辅料＝1∶(1.0～1.6)∶(6.5～10)∶(0.01～0.06)。

3.如权利要求2所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于按质量比辅酶Q10∶天然维生素E∶油溶性辅料∶水溶性辅料＝1∶(1.2～1.4)∶(7～8)∶(0.02～0.04)。

4.如权利要求1或2或3所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述辅酶Q10选自氧化型辅酶Q10、还原型辅酶Q10中的至少一种，且为微生物发酵法制备而得的天然产品，所述微生物采用类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)；

所述油溶性辅料选自维生素A、维生素K、β-胡萝卜素、卵磷脂、大豆磷脂、蜂蜡、植物油中的至少一种；所述植物油选自大豆油、玉米油、花生油、芝麻油、菜籽油、橄榄油、红花油、葵花籽油中的至少一种；

所述微囊的芯材选自柠檬酸锌、亚硒酸钠、维生素B1、维生素B2、维生素B6、叶酸中的至少一种，微囊的壁材包括但不限于甲基纤维素、乙基纤维素、明胶、阿拉伯胶、聚丙烯酸、山梨糖醇中的至少一种与润滑剂的混合物，所述润滑剂选自硬脂酸镁、二氧化硅、聚乙二醇中的至少一种。

5.如权利要求4所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述油溶性辅料为β-胡萝卜素。

6.如权利要求1所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述油溶性辅料包括：维生素A的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.05％～0.5％；

β-胡萝卜素的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1.0％～2.5％；

卵磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1％～10％；

大豆磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1％～10％；

蜂蜡的添加量按质量百分比为辅酶Q10的100％～380％；

维生素K的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.25％～2.5％。

7.如权利要求6所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述油溶性辅料包括：维生素A的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.08％～0.45％；

β-胡萝卜素的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1.0％～2.0％；

卵磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的2％～8％；

大豆磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的2％～8％；

蜂蜡的添加量按质量百分比为辅酶Q10的100％～320％；

维生素K的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.25％～2.0％。

8.如权利要求7所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述油溶性辅料包括：维生素A的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.08％～0.35％；

β-胡萝卜素的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1.0％～1.75％；

卵磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的4％～6％；

大豆磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的4％～6％；

蜂蜡的添加量按质量百分比为辅酶Q10的100％～280％；

维生素K的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.3％～2.0％。

9.如权利要求1所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述水溶性辅料中各成分的添加量为：柠檬酸锌的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.2％～2.0％；

亚硒酸钠的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.01％～0.05％；

维生素B1的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.8％；

维生素B2的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.5％；

维生素B6的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.8％；

叶酸的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.02％～0.08％。

10.如权利要求9所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述水溶性辅料中各成分的添加量为：柠檬酸锌的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.2％～1.5％；

亚硒酸钠的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.01％～0.045％；

维生素B1的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.5％；

维生素B2的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～0.8％；

维生素B6的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.5％；

叶酸的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.02％～0.06％。

11.如权利要求10所述含辅酶Q10的营养组合物，其特征在于所述水溶性辅料中各成分的添加量为：柠檬酸锌的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.2％～1.0％；

亚硒酸钠的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.01％～0.04％；

维生素B1的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.2％～1.0％；

维生素B2的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～0.6％；

维生素B6的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.0％；

叶酸的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.02％～0.05％。

12.如权利要求1所述含辅酶Q10的营养组合物的制备方法，其特征在于其具体步骤如下：按比例称取辅酶Q10、天然维生素E、油溶性辅料、水溶性辅料，混合均匀，脱去气泡，形成均一的混悬剂。

13.如权利要求12所述含辅酶Q10的营养组合物的制备方法，其特征在于所述混合采用常规搅拌、剪切乳化、高压均质中的至少一种方法；所述混合是在抽真空或惰性气体环境下进行；混合后进一步包括过滤的步骤。

14.如权利要求12所述含辅酶Q10的营养组合物的制备方法，其特征在于所述水溶性辅料的制备方法为：

1)将如权利要求9所述水溶性辅料混合均匀，进行超微粉碎，得超微细粉；超微细粉的粒径为1～25μm；

2)取1份壁材同1.5～2.5份溶剂于55～70℃混合溶解，溶剂是乙醇、纯化水或其混合溶液，并加入0.01～0.1份润滑剂，制成壁材溶液，保温备用；所述壁材为甲基纤维素、乙基纤维素、明胶、阿拉伯胶、聚丙烯酸、山梨糖醇中的至少一种；

3)取5～10份超微细粉悬浮于流化床上，控制流化床的进风温度为10～40℃，将壁材溶液通过雾化喷头，均匀喷洒在循环流动的超微细粉上，喷洒完成后再继续流化0.5～5h；调节流化床进风温度升温1～3h，直至进风温度为60～85℃，继续流化0.5～5h，得到包埋率为

98％～99％、水分小于5％的水溶性辅料。

15.如权利要求14所述含辅酶Q10的营养组合物的制备方法，其特征在于在步骤1)中，所述超微细粉的粒径为2～20μm；

在步骤3)中，所述控制流化床的进风温度为15～25℃，喷洒完成后再继续流化1～3h。

16.如权利要求15所述含辅酶Q10的营养组合物的制备方法，其特征在于所述超微细粉的粒径为5～15μm。

17.如权利要求1所述含辅酶Q10的营养组合物在制备增强免疫力、缓解体力疲劳的含辅酶Q10的营养保健制剂中应用。

18.如权利要求17所述应用，其特征在于所述含辅酶Q10的营养保健制剂是把所述含辅酶Q10的营养组合物制成各种剂型，所述剂型采用软胶囊、硬胶囊、微胶囊、丸剂、颗粒剂、片剂、乳剂中的一种；

所述软胶囊由内容物和胶皮组成，内容物采用所述含辅酶Q10的营养组合物，胶皮采用明胶、甘油、纯化水和附加剂制成，附加剂由二氧化钛、辣椒红、焦糖色、胭脂红、柠檬黄、姜黄素中的至少一种组成；胶皮的组成按质量比为：明胶∶甘油∶纯化水∶附加剂＝(4.2～7.8)∶(2.5～4.5)∶(5.0～8.7)∶(0.3～0.6)。

19.如权利要求18所述应用，其特征在于所述软胶囊的制备方法为：将甘油和纯化水投入溶胶罐内，搅拌加热至50℃，投入明胶继续搅拌加热至55～85℃使其溶解，再将已经溶解混匀并过滤后的附加剂投入溶胶罐内，搅拌25～35min后抽真空脱尽气泡，制得胶皮溶液，

45～70℃保温，备用；将已制备好的软胶囊内容物与胶皮溶液经过压丸、定型、干燥、拣丸和包装，制备得到辅酶Q10软胶囊制剂。

20.如权利要求18所述应用，其特征在于所述剂型采用软胶囊。

说明书

含辅酶Q10的营养组合物及其制备方法与应用

技术领域

[0001] 本发明涉及辅酶Q10，尤其是涉及一种含辅酶Q10的营养组合物及其制备方法与应用。

背景技术

[0002] 辅酶Q10(Coenzyme Q10，CoQ10，ubiquinone或ubidecarenoe)是生物体内广泛存在的脂溶性醌类化合物，是人体细胞中重要的生化辅酶之一，有抗脂质过氧化作用，能预防心肌再灌注损伤，具有清除自由基、维持细胞膜的通透性、提高免疫功能等多种药理作用。因此，作为一种具有重大医学价值的生化药物或作为保健食品的良好材料，辅酶Q10的医学价值及保健功能在不断受到重视和开发。

[0003] 近年来，辅酶Q10的应用从药品扩展到化妆品以及功能性食品，目前已成为应用最广泛的营养补充剂之一。在保健食品市场，辅酶Q10对缓解疲劳、延缓衰老、提高机体免疫力等有着特殊的意义。辅酶Q10在人体中分布广泛，但人体内辅酶Q10含量随着年龄的增长而下降，因此人体需要适量补充辅酶Q10，以满足人体正常生理功能需要。但传统的片剂在小肠中的生物利用度较低，因此如何安全有效地提高辅酶Q10在体内的生物利用度已成为国内外近年来研究的热点。

[0004] 中国专利CN101897440公开了一种由囊壳和囊内容物组成的辅酶Q10复合软胶囊及其制备方法，囊内容物由辅酶Q10、乳酸锌、亚硒酸钠、维生素E和玉米油按一定比例组成，软胶囊壳的成分为明胶、甘油和纯水。该专利按配方量取乳酸锌与亚硒酸钠等量递增混匀，再与辅酶Q10混合均匀，超微粉碎；天然维生素E与玉米油搅拌后得混合油料，加入混合细粉，搅拌均匀，使用自动旋转轧囊机制得辅酶Q10复合软胶囊。但是其中的乳酸锌和亚硒酸钠为水溶性，不能很好地分散在油溶性成分中，影响产品的稳定性以及吸收的利用度，也会对产品的口感产生影响。

[0005] 中国专利CN102656133A公开一种还原型辅酶Q10的制造方法、稳定化方法以及含有还原型辅酶Q10的组合物，不仅具有对氧化型辅酶Q10的还原能力、使还原型辅酶Q10稳定化的能力，而且还兼具营养素、美味、通用性等的成分及其利用方法。还原型辅酶Q10的制造方法，该方法包括：使用在侧链具有包含氮原子和/或氧原子的官能团的氨基酸类，将氧化型辅酶Q10还原。

发明内容

[0006] 本发明的目的在于针对上述问题，提供可有效保留各种营养素含量，提高产品稳定性和生物利用度，并改善产品口感的一种含辅酶Q10的营养组合物及其制备方法与应用。

[0007] 所述含辅酶Q10的营养组合物的成分包括：辅酶Q10、天然维生素E、油溶性辅料、水溶性辅料；按质量比辅酶Q10∶天然维生素E∶油溶性辅料∶水溶性辅料＝1∶(0.8～1.8)∶(6.2～10.82)∶(0.007～0.08)，优选1∶(1.0～1.6)∶(6.5～10)∶(0.01～0.06)，最好为1∶(1.2～1.4)∶(7～8)∶(0.02～0.04)。

[0008] 所述辅酶Q10可选自氧化型辅酶Q10、还原型辅酶Q10等中的至少一种，优选微生物发酵法制备而得的天然产品，所述微生物优选类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)。

[0009] 所述油溶性辅料可选自维生素A、维生素K、β-胡萝卜素、卵磷脂、大豆磷脂、蜂蜡、植物油等中的至少一种，优选β-胡萝卜素；所述植物油可选自大豆油、玉米油、花生油、芝麻油、菜籽油、橄榄油、红花油、葵花籽油等中的至少一种。

[0010] 所述水溶性辅料可采用微囊形式包裹，所述微囊的芯材可选自柠檬酸锌、亚硒酸钠、维生素B1、维生素B2、维生素B6、叶酸等中的至少一种，微囊的壁材包括但不限于甲基纤维素、乙基纤维素、明胶、阿拉伯胶、聚丙烯酸、山梨糖醇等中的至少一种与润滑剂的混合物，所述润滑剂可选自硬脂酸镁、二氧化硅、聚乙二醇等中的至少一种。

[0011] 所述油溶性辅料中各成分的添加量可为：

[0012] 维生素A的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.05％～0.5％，优选为0.08％～0.45％，最好为0.08％～0.35％。

[0013] β-胡萝卜素的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1.0％～2.5％，优选为1.0％～2.0％，最好为1.0％～1.75％。

[0014] 卵磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1％～10％，优选为2％～8％，最好为4％～6％。

[0015] 大豆磷脂的添加量按质量百分比为辅酶Q10的1％～10％，优选为2％～8％，最好为4％～6％。

[0016] 蜂蜡的添加量按质量百分比为辅酶Q10的100％～380％，优选为100％～320％，最好为100％～280％。

[0017] 维生素K的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.25％～2.5％，优选为0.25％～2.0％，最好为0.3％～2.0％。

[0018] 植物油的质量可根据要制备的辅酶Q10的浓度进行适当调节添加。

[0019] 所述水溶性辅料中各成分的添加量可为：

[0020] 柠檬酸锌的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.2％～2.0％，优选为0.2％～1.5％，最好为0.2％～1.0％。

[0021] 亚硒酸钠的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.01％～0.05％，优选为0.01％～0.045％，最好为0.01％～0.04％。

[0022] 维生素B1的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.8％，优选为0.15％～1.5％，最好为0.2％～1.0％。

[0023] 维生素B2的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.5％，优选为0.15％～0.8％，最好为0.15％～0.6％。

[0024] 维生素B6的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.15％～1.8％，优选为0.15％～1.5％，最好为0.15％～1.0％。

[0025] 叶酸的添加量按质量百分比为辅酶Q10的0.02％～0.08％，优选为0.02％～0.06％，最好为0.02％～0.05％。

[0026] 所述含辅酶Q10的营养组合物的制备方法如下：

[0027] 按比例称取辅酶Q10、天然维生素E、油溶性辅料、水溶性辅料，混合均匀，脱去气泡，形成均一的混悬剂。

[0028] 所述混合可采用常规搅拌、剪切乳化、高压均质等中的至少一种方法；所述混合优选在抽真空或惰性气体环境下进行；混合后还可进一步包括过滤的步骤。

[0029] 所述水溶性辅料的制备方法可为：

[0030] 1)将各种芯材按比例混合均匀，进行超微粉碎，得超微细粉；超微细粉的粒径可为1～25μm，优选2～20μm，最好5～15μm；

[0031] 2)取1份壁材同1.5～2.5份溶剂于55～70℃混合溶解，溶剂可以是乙醇、纯化水或其混合溶液，并加入0.01～0.1份润滑剂，制成壁材溶液，保温备用；

[0032] 3)取5～10份超微细粉悬浮于流化床上，控制流化床的进风温度为10～40℃，优选15～25℃，将壁材溶液通过雾化喷头，均匀喷洒在循环流动的超微细粉上，喷洒完成后再继续流化0.5～5h，优选1～3h；调节流化床进风温度升温1～3h，直至进风温度为60～85℃，继续流化0.5～5h，优选1～3h，得到包埋率为98％～99％、水分小于5％的水溶性辅料。

[0033] 所述含辅酶Q10的营养组合物可在制备增强免疫力、缓解体力疲劳的含辅酶Q10的营养保健制剂中应用。

[0034] 所述含辅酶Q10的营养保健制剂是把所述含辅酶Q10的营养组合物制成各种剂型，所述剂型可采用软胶囊、硬胶囊、微胶囊、丸剂、颗粒剂、冲剂、片剂、乳剂等中的一种，优选为软胶囊；

[0035] 所述软胶囊由内容物和胶皮组成，内容物采用所述含辅酶Q10的营养组合物，胶皮可采用明胶、甘油、纯化水和附加剂制成，附加剂可由二氧化钛、辣椒红、焦糖色、胭脂红、柠檬黄、姜黄素等中的至少一种组成；胶皮的组成按质量比可为：明胶∶甘油∶纯化水∶附加剂＝(4.2～7.8)∶(2.5～4.5)∶(5.0～8.7)∶(0.3～0.6)。

[0036] 所述软胶囊的制备方法可为：将甘油和纯化水投入溶胶罐内，搅拌加热至50℃，投入明胶继续搅拌加热至55～85℃使其溶解，再将已经溶解混匀并过滤后的附加剂投入溶胶罐内，搅拌25～35min后抽真空脱尽气泡，制得胶皮溶液，45～70℃保温，备用；将已制备好的软胶囊内容物与胶皮溶液经过压丸、定型、干燥、拣丸和包装等步骤，制备得到辅酶Q10软胶囊制剂。

[0037] 本发明的有益效果是：

[0038] 1)营养组合物中的主要成分辅酶Q10和天然维生素E均为纯天然产品，生物活性强，且食用安全性高，适用于广大人群，满足现代人对于健康饮食的要求；维生素E是公认的运动疲劳恢复剂，具有清除自由基，降低脂质过氧化水平的作用，天然维生素E的生理活性约是合成维生素E的3～8倍，辅酶Q10能使维生素E的抗氧化能力增强，二者配伍具有协同增效作用，且无不良反应、安全性高、稳定性好。

[0039] 2)通过引入微囊包衣技术，将水溶性营养成分包埋起来，有利于掩饰不良气味，改善口感；有利于隔离水溶性营养成分与油溶性成分中易发生反应的活性物质，避免发生反应，保留各种营养成分，提高产品的利用度；

[0040] 3)水溶性营养成分经过超微粉碎后进行包裹，能与油溶性营养成分均匀混合，产品稳定性好；

[0041] 4)配方中添加了人体所需的多种营养素，各组分配比均衡，协同增效，能够发挥良好的增强免疫力、缓解体力疲劳的功能。

具体实施方式

[0042] 以下结合实施例对本发明作进一步的说明。

[0043] 实施例中所用原辅料均为市场购得，主要原料的规格如表1。

[0044] 表1 主要原料规格

[0045]原料名称 规格
辅酶Q10 食品级，氧化型辅酶Q10含量≥99％
天然维生素E油 食品级，有效物质含量为50％
维生素A 食品级，含量为100万IU/g
β-胡萝卜素 食品级，含量为99％
大豆磷脂 食品级，有效物质含量为60％
卵磷脂 食品级，有效物质含量为98％
蜂蜡 食品级
维生素K 食品级，含量为99％
柠檬酸锌 食品级，含量为99％
亚硒酸钠 食品级，含量为80％
维生素B1 食品级，含量为99％
维生素B2 食品级，含量为99％
维生素B6 食品级，含量为99％
叶酸 食品级，含量为99％

[0046] 实施例1：制备水溶性辅料微囊

[0047] 取水溶性辅料芯材配方：(以下各种物质的质量均用原料折纯后的质量表示)[0048] 柠檬酸锌20g 亚硒酸钠0.5g

[0049] 维生素B112g 维生素B612g

[0050] 将配方量的经检验合格的柠檬酸锌、亚硒酸钠、维生素B1、维生素B6混合均匀，低温超微粉碎机进行超微粉碎，控制出料粒径在25μm内；另用6g乙基纤维素与10g乙醇溶液于55℃混合溶解，并加入0.2g硬脂酸镁，形成壁材溶液，保温备用；取超微细粉悬浮于多功能流化床上，控制流化床的进风温度为10℃，将壁材溶液通过雾化喷头，均匀喷洒在循环流动的超微细粉上，喷洒完成后再继续流化1h；然后调节流化床进风温度，缓慢升温1h，直至进风温度为60℃，继续流化1h，得到包埋率为99％、水分为1％的微囊。

[0051] 实施例2：制备水溶性辅料微囊

[0052] 水溶性辅料芯材配方：(以下各种物质的质量均用原料折纯后的质量表示)[0053] 柠檬酸锌15g 维生素B19g

[0054] 维生素B29g 维生素B69g 叶酸0.6g

[0055] 将配方量的经检验合格的柠檬酸锌、维生素B1、维生素B2、维生素B6、叶酸混合均匀，低温超微粉碎机进行超微粉碎，控制出料粒径在15μm内；另用3g明胶与4g阿拉伯胶用14g纯化水于70℃混合溶解，并加入0.08g二氧化硅，形成壁材溶液，保温备用；取超微细粉悬浮于多功能流化床上，控制流化床的进风温度为15℃，将壁材溶液通过雾化喷头，均匀喷洒在循环流动的超微细粉上，喷洒完成后再继续流化3h；然后调节流化床进风温度，缓慢升温2h，直至进风温度为85℃，继续流化3h，得到包埋率为99％、水分为3.5％的微囊。

[0056] 实施例3：制备水溶性辅料微囊

[0057] 水溶性辅料芯材配方：(以下各种物质的质量均用原料折纯后的质量表示)[0058] 柠檬酸锌9g 亚硒酸钠0.5g、

[0059] 维生素B112g 维生素B610g 叶酸0.8g

[0060] 将配方量的经检验合格的柠檬酸锌、亚硒酸钠、维生素B1、维生素B6、叶酸混合均匀，低温超微粉碎机进行超微粉碎，控制出料粒径在5μm内；另用3g明胶与3g甲基纤维素用14g纯化水于65℃混合溶解，并加入0.1g硬脂酸镁，形成壁材溶液；取超微细粉浮于多功能流化床上，控制流化床的进风温度为30℃，将壁材溶液通过雾化喷头，均匀喷洒在循环流动的超微细粉上，喷洒完成后再继续流化5h；然后调节流化床进风温度，缓慢升温3h，直至进风温度为75℃，继续流化5h，得到包埋率为98％、水分为3％的微囊。

[0061] 实施例4：制备辅酶Q10营养组合物

[0062] 组合物配方：

[0063] 辅酶Q10 30.3g天然维生素E 102g

[0064] 油溶性辅料267g(β-胡萝卜素0.36g，卵磷脂1.84g，蜂蜡60g，维生素A0.26g，大豆磷脂2.5g，玉米油202.04g)

[0065] 实施例1制备得到的水溶性辅料0.27g

[0066] 按比例称取上述物质于溶油锅中，抽真空、充氮气，重复三次，开启溶油锅的搅拌，搅拌1h，然后送入高压均质机中，在30Mpa的压力下均质3次，抽真空脱尽气泡，形成均一的混悬剂，即得辅酶Q10含量为7.5％的营养组合物，可用于进一步制备成各种营养保健制剂。

[0067] 实施例5：制备辅酶Q10软胶囊

[0068] 软胶囊内容物配方：

[0069] 辅酶Q1044.4g天然维生素E134g

[0070] 油溶性辅料286g(β-胡萝卜素0.55g，卵磷脂2.24g，蜂蜡45g，维生素K 0.136g，大豆油238.074g)

[0071] 实施例2制备得到的水溶性辅料3g

[0072] 按比例称取上述物质于溶油锅中，抽真空、充氮气，重复三次，开启溶油锅的搅拌，搅拌1h，然后送入高压均质机中，在40Mpa的压力下均质3次，抽真空脱尽气泡，得到辅酶Q10质量百分含量为9.4％的软胶囊内容物。

[0073] 胶皮配方：

[0074] 明胶270g 甘油115g 纯化水250g

[0075] 焦糖色15g 姜黄素2g 二氧化钛2g

[0076] 先将配方量的经检验合格的甘油和纯化水投入溶胶罐内，搅拌加热至50℃，投入明胶继续加热至70℃使其溶解，再将已经溶解混匀并过滤后的附加剂投入溶胶罐内，搅拌30min后抽真空脱尽气泡，制得胶皮溶液，65℃保温，备用；

[0077] 将上述已制备好的软胶囊内容物与胶皮溶液经过压丸、定型、干燥、拣丸和包装步骤，制备得到每粒400mg的辅酶Q10复合软胶囊制剂。

[0078] 软胶囊中辅酶Q10的测定按《中华人民共和国药典》(2010年版)二部中“辅酶Q10软胶囊”【含量测定】项下规定的方法测定(HPLC法)。

[0079] 实施例6：制备辅酶Q10软胶囊

[0080] 软胶囊内容物配方：

[0081] 辅酶Q10 49.5g 天然维生素E 109g

[0082] 内容物辅料343g(β-胡萝卜素0.67g，蜂蜡55g，维生素A0.129g，大豆磷脂4.9g，花生油282.301g)

[0083] 实施例3制备得到的水溶性辅料1.47g

[0084] 按比例称取上述物质于溶油锅中，开启溶油锅的搅拌，搅拌0.5h，然后送入高速剪切机中，剪切15min，抽真空脱尽气泡，得到辅酶Q10质量百分含量为9.7％的软胶囊内容物。

[0085] 胶皮配方：

[0086] 明胶330g 甘油145g 纯化水300g

[0087] 焦糖色16g 辣椒红3.5g 二氧化钛2.5g

[0088] 先将配方量的经检验合格的甘油和纯化水投入溶胶罐内，搅拌加热至50℃，投入明胶继续加热至80℃使其溶解，再将已经溶解混匀并过滤后的附加剂投入溶胶罐内，28min后抽真空脱尽气泡，制得胶囊皮溶液，60℃保温，备用；

[0089] 将上述已制备好的软胶囊内容物与胶皮溶液经过压丸、定型、干燥、拣丸和包装步骤，制备得到每粒450mg的辅酶Q10复合软胶囊制剂。

[0090] 软胶囊中辅酶Q10的测定按《中华人民共和国药典》(2010年版)二部中“辅酶Q10软胶囊”【含量测定】项下规定的方法测定(HPLC法)。

[0091] 实施例7：稳定性测试

[0092] 取上述实施例5制备得到的辅酶Q10复合软胶囊制剂(采用60粒/瓶规格的药用塑料包装瓶)，分别置于光强为4500Lx的条件下照射、60℃(恒温箱)放置不同时间，用HPLC法测定辅酶Q10含量，考察光照和温度条件对辅酶Q10标示含量(％)的影响。结果如表2所示：

[0093] 表2 光照和温度对辅酶Q10软胶囊稳定性的影响

[0094]

[0095] 结果表明，光照和高温环境对本发明的辅酶Q10复合软胶囊的影响不大，采用避光性能的壁材和微囊包埋技术，提高了产品稳定性，降低了温度和光照对其性质的影响，延长了产品保存期。

[0096] 实施例8：增强免疫力功能测试

[0097] 1材料和方法

[0098] 1.1样品：实施例5制备的辅酶Q10复合软胶囊。

[0099] 1.2实验动物与分组：由长沙市开福区东创实验动物科技服务部(实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2009-0012)提供的SPF级昆明种雌性小鼠200只，体重18～22g。饲料由同一厂家提供。每40只小鼠为一大组，共五大组。免疫Ⅰ组进行碳廓清实验；免疫Ⅱ组，进行脏/体比值测定、半数溶血值(HC50)的测定和抗体生成细胞数测定；免疫Ⅲ组，进行ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验、NK细胞的活性测定；免疫Ⅳ组，进行迟发型变态反应实验；免疫Ⅴ组，进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验。每大组40只小鼠按体重随机分为4组，即对照组和低、中、高剂量组。每组10只小鼠。

[0100] 1.3实验条件：为屏蔽环境，实验期间环境温度23℃～24℃，湿度50％～56％，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2010-0010。

[0101] 1.4剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量(每日0.45g，以每人60kg体重计算，折合剂量0.0075g/kg.bw)，设本发明的辅酶Q10复合软胶囊低、中、高剂量分别为0.038g/kg.bw、0.075g/kg.bw、0.225g/kg.bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。试验时，分别取本发明软胶囊0.75g、1.50g、4.50g加植物油至200ml，按0.1ml/10g.bw体积给小鼠灌胃，每天一次，连续灌胃至少30天。对照组灌胃予以等体积的溶剂。

[0102] 1.5实验方法

[0103] 1.5.1脏器/体重比值测定：称重后处死小鼠，取出脾脏和胸腺，在电子分析天平上称重，计算脏/体比值。

[0104] 1.5.2迟发型变态反应(DTH)(足跖增厚法)

[0105] 小鼠腹腔注射2％(v/v)SRBC(0.2ml/每鼠)致敏后4天，测量左后足跖部厚度，然后在测量部位皮下注射20％(v/v)SRBC(20μl/每鼠)，于注射后24h测量左后足跖部厚度，同一部位测量三次，取平均值。以攻击前后足跖部厚度差值(足跖肿胀度)来表示DTH的程度。

[0106] 1.5.3 ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化实验(MTT法)

[0107] 无菌取脾，置于盛有适量无菌Hank’s液的小平皿中，制成细胞悬液，经200目筛网过滤。用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。然后将细胞悬浮于1ml完全培养液中，计数活细胞数，用RPMI1640培养液调整细胞浓度为3×106个/ml。再将细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1ml，在其中一孔加75μl ConA液(相当于7.5μg/ml)，另一孔作为对照，置5％二氧化碳，37℃培养72h。培养结束前4h，每孔径轻吸去上清液0.7ml，加入0.7ml不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/ml)50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1ml酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板中，每个孔作3个平行孔，用酶标仪，以570nm波长测定光密度值。淋巴细胞的增值能力用加ConA孔的光密度值减去不加ConA孔的光密度值表示。

[0108] 1.5.4抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法)

[0109] 取羊血，用生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，将积压SRBC用生理盐水配成2％(v/v)的细胞悬液，每鼠腹腔注射0.2ml。4天后处死小鼠，取脾，轻轻磨碎，用Hank’s液制成细胞悬液，200目筛网过筛，洗涤、离心2次，最后将细胞悬浮在8ml Hank’s液6
中，计数细胞，并将细胞浓度调整为5×10 个/ml。将表层培养基加热溶解后与等量的PH7.4、2倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5ml，再向管内加入用SA液配制的10％SRBC 50μl(v/v)、20μl脾细胞悬液(5×106个/ml)，迅速混匀后倾倒于已刷薄层琼脂糖的玻片上，待琼脂糖凝固后将玻片水平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA液稀释的补体(1∶8)加入到玻片凹槽内，继续温育1.5h后计数溶血空斑数。

[0110] 1.5.5半数溶血值(HC50)的测定

[0111] 取羊血，用生理盐水洗涤3次，每只鼠经腹腔注射2％(v/v，用生理盐水配制)SRBC 0.2ml进行免疫。4天后，摘除眼球取血于离心管内，放置约1h，将凝固血与管壁剥离，使血清充分析出，2000rpm离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释为200倍，取1ml置试管内，依次加入10％(v/v，用SA缓冲液配制)SRBC 0.5ml，补体1ml(用SA缓冲液按1:8稀释)。另设不加血清的对照管(用SA缓冲液代替)。置37℃恒温水浴中保温30min后，冰浴终止反应。
2000rpm离心10min，取上清1ml，加都氏试剂3ml。同时取10％(v/v，用SA缓冲液配制)SRBC0.25ml，加都氏试剂4ml于另一试管中，充分混匀，放置10min后，于540nm处以对照管作空白，分别测定各管光密度值。溶血素的量以半数溶血值(HC50)表示，按下式计算：

[0112] 半数溶血值(HC50)＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数[0113] 1.5.6小鼠碳廓清实验

[0114] 小鼠尾静脉注射以生理盐水稀释4倍的印度墨汁，每10g体重注射0.1ml，墨汁注入后立即计时，于注入墨汁后第2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，加入到2ml 0.1％Na2CO3溶液中，摇匀。以0.1％Na2CO3溶液作空白对照，用722型分光光度计在600nm波长处比色测光密度值(OD)。将小鼠处死，取肝、脾，称重，计算吞噬指数a。

[0115] 1.5.7小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)

[0116] 小鼠腹腔注射20％(v/v，用生理盐水配制)的鸡红细胞2(000rpm,10min)悬液lml，间隔30min，颈椎脱臼处死，仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，取腹腔巨噬细胞洗液lmL，滴于载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗以除去未贴片细胞。晾干，以甲醇∶丙酮(1∶
1)固定，4％(v/v)Giemsa-磷酸缓冲液染色，用蒸馏水漂洗晾干。油镜下每片计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：

[0117] 吞噬率％＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

[0118] 吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

[0119] 1.5.8 NK细胞活性的测定(乳酸脱氢酶测定法)

[0120] 受试小鼠颈椎脱臼处死，无菌取牌，制成脾细胞悬液，用Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000rpm/min)，弃上清将细胞浆弹起，加入0.5ml灭菌水20s，裂解红细胞后再加入
0.5ml2倍Hank’s液及8ml Hank’s液，1000rpm离心10min，用1ml含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数，用台酚兰染色计数活细胞数(活细胞数应在
95％以上)，调整细胞浓度为2×107个/ml，此为效应细胞，取传代后24h生长良好的YAC-1细
5
胞用RPMI1640完全培养液调整细胞浓度为4×10 个/ml，此为靶细胞；取靶细胞和效应细胞各100μl(效靶比50∶1)，加入U型96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μl，靶细胞最大释放孔加靶细胞和2.5％Triton各100μl；上述各项均设3个平行孔，于37℃，
5％二氧化碳培养箱中培养4h，然后将96孔培养板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μl置于96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μl，根据室温反应3-10min，每孔加入1mol/L的HCl30μl，在酶标仪490nm处测定光密度(OD)。

[0121] NK细胞活性＝[(反应孔OD-自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)]×100％

[0122] 1.6实验数据统计

[0123] 用Excel2003、Spss11.0软件进行数据转化和统计分析。用Spssl 1.0软件分析时，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐，则改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane'sT2检验进行两两比较。

[0124] 2结果

[0125] 2.1样品对小鼠体重的影响

[0126] 各剂量组实验初期、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，如表3～7所示。

[0127] 表3 免疫Ⅰ组小鼠体重(x±S,g)

[0128]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.89±1.26 27.77±1.20 33.94±3.11 14.05±2.78
低剂量 10 19.89±1.20 27.78±1.83 34.10±2.83 14.21±2.74
中剂量 10 19.92±1.10 27.77±2.27 33.03±3.14 13.11±3.34
高剂量 10 19.99±1.15 27.61±1.55 33.66±2.58 13.67±3.00

[0129] 表4 免疫Ⅱ组小鼠体重(x±S,g)

[0130]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.71±1.19 27.45±2.03 33.23±3.10 13.52±3.43
低剂量 10 19.76±1.14 27.08±1.66 32.84±2.22 13.08±2.85
中剂量 10 19.79±1.01 27.84±1.46 34.04±2.80 14.25±2.95
高剂量 10 19.84±1.16 27.32±1.36 33.29±2.45 13.45±3.13

[0131] 表5 免疫Ⅲ组小鼠 重(x±S,g)

[0132]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.98±1.18 27.25±1.50 32.79±2.51 12.81±3.28
低剂量 10 20.00±1.12 27.86±1.81 34.14±2.88 14.14±3.07
中剂量 10 19.99±0.98 27.78±1.94 33.63±3.22 13.64±3.51
高剂量 10 20.07±1.07 27.20±2.05 33.03±3.47 12.96±3.26

[0133] —

[0134] 表6 免疫Ⅳ组小鼠体重(x±S,g)

[0135]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.83±1.33 26.84±1.87 33.10±2.89 13.27±2.66
低剂量 10 19.86±1.29 28.11±2.06 34.46±3.02 14.14±3.07
中剂量 10 19.87±1.17 27.56±1.73 33.80±2.92 13.93±3.23
高剂量 10 19.90±1.25 27.95±1.19 34.34±2.32 14.44±3.25

[0136] 表7 免疫Ⅴ组小鼠体重(x±S,g)

[0137]

[0138] 2.2样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响

[0139] 样品各剂量对小鼠脾脏/体重比值和胸腺/体重比值无显著的影响(P>0.05)。

[0140] 表8 样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响(x±S)

[0141]

[0142] 表8给出样品对小鼠免疫器官脏器/体重比值的影响(x±S)。

[0143] 2.3样品对小鼠细胞免疫功能的影响

[0144] 2.3.1样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)影响

[0145] 中、高剂量组小鼠迟发型变态反应能力与对照组比较显著提高(P<0.05)。表9给出样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响(x±S)。

[0146] 表9 样品对小鼠迟发型变态反应(DTH)的 响(x±S)

[0147]组别 动物数(只) 注射后24h足跖肿胀度 P值
对照组 10 0.23±0.10 ----
低剂量 10 0.31±0.09 0.223
中剂量 10 0.35±0.12 0.043
高剂量 10 0.37±0.11 0.020

[0148] 2.3.2样品对小鼠ConA诱导的淋巴细胞转化能力的影响

[0149] 样品各剂量对小鼠淋巴细胞转化能力无显著影响(P>0.05)。表10给出样品对小鼠淋巴细胞转化能力的影响(x±S)。

[0150] 表10 样品对小鼠淋巴细胞转化能力的影响(x±S)

[0151]

[0152] 2.4样品对体液免疫的影响

[0153] 2.4.1样品对小鼠抗体生成细胞数的影响

[0154] 中、高剂量组小鼠抗体生成细胞数与对照组比较显著提高(P<0.05)。表11给出样品对小鼠抗体生成细胞数的影响(x±S)。—

[0155] 表11 样品对小鼠抗体生成细胞数的影响(x±S)

[0156]组别 动物数(只) 溶血空斑数(个/106个脾细胞) P值
对照组 10 108±33 ----
低剂量 10 136±39 0.560
中剂量 10 171±6 0.047
高剂量 10 183±75 0.015

[0157] 2.4.2样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响

[0158] 高剂量组小鼠半数溶血值(HC50)与对照组比较显著提高(P<0.05)。表12给出样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(x±S)。—

[0159] 表12 样品对小鼠半数溶血值(HC50)的影响(x±S)

[0160]组别 动物数(只) 半数溶血值 P值
对照组 10 154.23±24.27 ----
低剂量 10 162.45±22.57 0.721
中剂量 10 172.77±19.07 0.145
高剂量 10 188.50±18.69 0.003

[0161] 2.5样品对小鼠单核-巨噬细胞吞噬功能的影响

[0162] 2.5.1样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响

[0163] 样品各剂量对小鼠碳廓清无显著的影响(P>0.05)。表13给出样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响(x±S)。—

[0164] 表13 样品对小鼠单核-巨噬细胞碳廓清的影响(x±S)

[0165]

[0166] 2.5.2样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响

[0167] 样品各剂量对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力无显著的影响(P>0.05)。表14给出样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响(x±S)。表15给出样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响(x±S)。

[0168] 表14 样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率的影响(x±S)

[0169]

[0170] 表15 样品对小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数的影响(x±S)

[0171]

[0172] 2.6样品对小鼠NK细胞活性的影响

[0173] 中、高剂量组小鼠NK细胞活性与对照组相比显著提高(P<0.05)。表16给出样品对小鼠NK细胞活性的影响(x±S)。

[0174] 表16 样品对小鼠NK细胞活性的影响(x±S)

[0175]

[0176] 在本实验条件下，经口灌胃给予小鼠0.038g/kg.bw、0.075g/kg.bw、0.225g/kg.bw剂量的本发明辅酶Q10复合软胶囊30天，与对照组比较，0.075g/kg.bw、0.225g/kg.bw剂量能显著提高小鼠迟发型变态反应能力、抗体生成细胞数、NK细胞活性(P<0.05)，0.225g/kg.bw剂量能显著提高小鼠半数溶血值(P<0.05)，各剂量对小鼠体重增长、胸腺/体重比值、脾脏/体重比值、淋巴细胞转化能力、碳廓清及巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无显著影响(P>0.05)。提示本发明的辅酶Q10复合软胶囊具有增强免疫力的功能。

[0177] 实施例9：缓解体力疲劳功能评价

[0178] 1材料和方法

[0179] 1.1样品：实施例6制备的辅酶Q10复合软胶囊。

[0180] 1.2实验动物与分组：由长沙市开福区东创实验动物科技服务部(实验动物生产许可证号为SCXK(湘)2009-0012)提供的SPF级昆明种雌性小鼠160只，体重18～22g。饲料由同一厂家提供。每40只小鼠为一大组，共五大组。将实验动物分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4大组，每大组40只小鼠，分别进行负重游泳实验、血清尿素、血乳酸和肝糖原的测定。每大组又随机分成对照组和低、中、高剂量组，每组10只小鼠。

[0181] 1.3实验条件：为屏蔽环境，实验期间环境温度23℃～24℃，湿度50％～56％，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2010-0010。

[0182] 1.4剂量选择及样品处理：据人体口服推荐量(每日0.45g，以每人60kg体重计算，折合剂量0.0075g/kg.bw)，设本发明的辅酶Q10复合软胶囊低、中、高剂量分别为0.038g/kg.bw、0.075g/kg.bw、0.225g/kg.bw(分别相当于人体推荐剂量的5、10、30倍)。试验时，分别取本发明软胶囊0.75g、1.50g、4.50g加植物油至200ml，按0.1ml/10g.bw体积给小鼠灌胃，每天一次，连续灌胃至少30天。对照组灌胃予以等体积的溶剂。

[0183] 1.5实验方法

[0184] 1.5.1负重游泳实验

[0185] 末次给小鼠受试物30min后，置于游泳箱中游泳，水深约30cm，水温25℃±1.0℃，鼠尾根部负荷5％体重的铅皮。记录小鼠自游泳开始至死亡的时间作为负重游泳时间(s)。游泳时间为计量资料，若受试物组游泳时间明显长于对照组游泳时间，且差异有显著性(P<
0.05)，可判定该受试物有延长小鼠负重游泳时间的作用。

[0186] 1.5.2血清尿素测定

[0187] 末次给小鼠受试物30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后拔眼球取血。于4℃静置3h后2000rpm/min离心15min，取血清用全自动生化分析仪测定血清尿素。

[0188] 所得数据为计量资料，若受试物组血清尿素含量明显低于对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有减少疲劳小鼠尿素产生的作用。

[0189] 1.5.3肝糖原测定：蒽酮法

[0190] 末次给小鼠受试物30min后，处死小鼠，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，称取肝脏100mg，余下操作按试剂盒说明书进行肝糖原的测定。

[0191] 所得数据为计量资料，若受试物组肝糖原含量明显高于对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有促进小鼠肝糖原储备的作用。

[0192] 1.5.4血乳酸的测定

[0193] 末次给小鼠受试物30min后从内眦静脉丛采血20μl，然后不负重在温度为30℃的水中不负重游泳10min后停止，分别于运动后0min和20min同上采血20μl，测定血乳酸，计算血乳酸曲线下面积。

[0194] 血乳酸曲线下面积＝1/2×(游泳前血乳酸值+游泳后0min的血乳酸值)×10+1/2(游泳后0min的血乳酸值+游泳后20min的血乳酸值)×20

[0195] 所得数据为计量资料，若受试物组小鼠血乳酸曲线下面积明显低于对照组，且差异有显著性(P<0.05)，可判定该受试物有降低小鼠血乳酸曲线下面积的作用。

[0196] 1.6实验数据分析

[0197] 用Spss11.0软件进行数据转化和统计分析，先对数据进行方差齐性检验，若方差齐，采用单因素方差分析进行总体比较，发现差异再用Dunnett法进行多个剂量组与一个对照组均数间的两两比较。若方差不齐则对原始数据进行适当的变量转换，满足方差齐性检验后，用转换后的数据进行统计；若变量转换后仍未达到方差齐，则改用秩和检验进行统计，发现总体比较有差异，则采用不要求方差齐性的Tamhane'sT2检验进行两两比较。

[0198] 1.7结果判定

[0199] 负重游泳试验结果为阳性，且血乳酸、血清尿素、肝糖原三项生化指标中任二项指标阳性，可判定该受试物具有缓解体力疲劳功能的作用。

[0200] 2结果

[0201] 2.1复合软胶囊对小鼠体重的影响

[0202] 各剂量组小鼠实验初期、实验中期、实验末小鼠体重及实验期间小鼠体重增长与对照组比较，差异均无显著性(P>0.05)，如表17～20所示。

[0203] 表17 样品对小鼠体重的影响(x±S,g)(Ⅰ组负重游泳)

[0204]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.88±1.23 30.82±1.5 37.25±2.46 17.37±3.20
低剂量 10 19.91±1.21 30.36±2.02 36.78±2.86 16.87±2.95
中剂量 10 19.95±1.07 30.70±1.60 37.52±2.41 17.57±3.17
高剂量 10 20.02±1.18 31.03±1.84 38.12±2.34 18.10±2.72

[0205] 表18 样品对小鼠体重的影响(x±S,g)(Ⅱ组血清尿素测定)

[0206]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.72±1.33 30.44±1.98 37.00±2.43 17.28±2.35
低剂量 10 19.67±1.23 31.10±1.68. 36.66±2.12 16.99±3.07
中剂量 10 19.68±1.15 30.84±1.44 37.26±2.24 17.58±3.06
高剂量 10 19.81±1.31 30.09±1.57 36.73±2.29 16.92±3.12

[0207] 表19 样品对小鼠体重的影响(x±S,g)(Ⅲ组血乳酸测定)

[0208]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 20.22±1.26 30.17±1.64 36.41±2.60 16.19±3.47
低剂量 10 20.22±1.23 30.61±2.00 37.05±2.91 16.83±3.57
中剂量 10 20.22±1.09 30.53±1.84 37.35±2.34 17.13±2.66
高剂量 10 20.29±1.17 30.99±1.80 37.36±2.11 17.07±2.44

[0209] 表20 样品对小鼠体重的影—响(x±S,g)(Ⅳ组肝糖原含量的测定)

[0210]组别 动物数(只) 初始体重 中期体重 末期体重 增重
对照组 10 19.96±1.46 31.28±1.97 37.79±2.51 17.83±2.85
低剂量 10 19.96±1.35 30.02±1.53 36.81±2.11 16.85±1.97
中剂量 10 19.98±1.29 30.80±2.57 37.62±3.06 17.64±2.80
高剂量 10 20.07±1.38 31.23±1.55 37.94±2.21 17.87±2.44

[0211] 2.2对小鼠负重时间的影响

[0212] 高剂量组小鼠负重游泳时间与对照组比延长，差异具有显著性(P<0.05)，参见表21。

[0213] 表21 样品对小鼠负重时间的影响(x±S,g)

[0214]组别 动物数(只) 游泳时间(s) P值
对照组 10 328.5±61.7 ----
低剂量 10 355.7±100.9 0.872
中剂量 10 398.0±104.8 0.284
高剂量 10 444.1±118.7 0.034

[0215] 2.3对小鼠血清尿素的影响

[0216] 高剂量组小鼠血清尿素低于对照组(P<0.05)，表22给出样品对疲劳小鼠血清尿素的影响(x±S,g)。

[0217] 表22 样品对疲劳小鼠血清尿素的影响(x±S,g)

[0218]组别 动物数(只) 血清尿素(mmol/L) P值
对照组 10 8.59±0.88 ----
低剂量 10 8.20±1.32 0.777
中剂量 10 7.81±1.25 0.281
高剂量 10 7.14±0.88 0.016

[0219] 2.4对运动后小鼠血乳酸变化的影响

[0220] 各剂量组小鼠血乳酸曲线下面积与对照组比较，差异无显著性(P>0.05)，参见表