一种酚类化合物及其用途

摘要

本发明提供一种酚类化合物或其类似物或药物的组合物，所述的酚类化合物为(3Z,5E)?4?羟基?6?(3?甲氧基?4?甲苯基)己?3,5?二烯?2?酮，将其应用于制备治疗对产生雌激素产生应答的疾病的药物；或对产生抗雌激素产生应答的疾病的药物；或对人乳腺癌细胞MCF?7细胞增值产生应答的疾病的药物；或对人乳腺癌MDA?MB?231(ER?)细胞增值产生应答的疾病的药物；或对人乳腺癌细胞MCF?7细胞的抑制产生应答的疾病的药物；或对产生雌激素和抗雌激素的双向作用的应答的疾病的药物；或调节内分泌、促进人或动物的发育上的药物；所述的疾病为妇女进入绝经期后，因体内雌激素水平下降，而引起的引发更年期综合征、骨质疏松、老年痴呆症和心血管疾病。

权利要求

1.式I酚类化合物在制备治疗对产生雌激素产生应答的疾病的药物中的应用，所述的式I酚类化合物为：。

2.式I酚类化合物在制备治疗对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增值产生应答的疾病的药物中的应用，所述的式I酚类化合物为：

3.式I酚类化合物在制备治疗对产生雌激素和抗雌激素的双向作用的应答的疾病的药物中的应用，所述的式I酚类化合物为：

4.式I酚类化合物在制备治疗调节内分泌、促进人或动物的发育上的药物的应用，所述的式I酚类化合物为：

5.根据权利要求1-4任意一项所述的应用，其疾病为妇女进入绝经期后，因体内雌激素水平下降，而引起的引发更年期综合征、骨质疏松、老年痴呆症和心血管疾病。

说明书

一种酚类化合物及其用途

技术领域

[0001] 本发明涉及一种酚类化合物的雌激素调节活性，可作为雌激素替代药物，治疗骨质疏松、围绝经期综合征等疾病的治疗。

背景技术

[0002] 雌激素受体体(Estrogen receptor,ER)作为重要的核转录因子之一，包括α和β两种亚型，在哺乳动物生殖系统、骨组织、心血管和中枢神经系统中发挥着重要的生理作用，是治疗骨质疏松和乳腺癌的重要药物。当妇女进入绝经期后,体内雌激素水平下降，由此引发更年期综合征、骨质疏松、老年痴呆症和心血管系统等疾病。针对绝经后雌激素水平下降，采取雌激素替代疗法(Estrogen replacement therapy,ERT)，能够显著降低绝经后骨质疏松性骨折和冠心病的发生率。但是长期使用ERT可能诱发乳腺癌和子宫内膜癌。为克服雌激素致癌变的不良反应，采用选择性雌激素受体调节剂(Selective estrogen receptor modulators,SERMs)对不同组织细胞中雌激素受体发挥不同调节作用，可有效治疗绝经后妇女的骨质疏松和乳腺癌等疾病。目前涉及到酚类化合物在雌激素相关疾病治疗方面应用的研究较多，例如雷洛昔芬苯并噻吩环上的羟基与内源性雌激素雌二醇A环上的羟基作用相似，均可与ER的Glu353、Arg394和一个结晶水形成三个氢键，而雌二醇D环上的羟基和雷洛昔芬苯环上的羟基也可与ER的His524形成一个氢键，因此雷洛昔芬作为选择性雌激素受体调节剂广泛用于防治妇女绝经后骨质疏松，并可降低冠心病的发生率。

发明内容

[0003] 一种酚类化合物，所述的酚类化合物为(3Z,5E)-4-羟基-6-(3-甲氧基-4-甲苯基)己-3,5-二烯-2-酮，其结构式为：

[0004]

[0005] 酚类化合物的制备

[0006] 1、实验材料

[0007] 1.1、实验试剂

[0008] 三氧化硼(分析纯，上海晶纯实业有限公司)、硼酸三丁酯(分析纯，上海晶纯实业有限公司)、香草醛(分析纯，天津市光复精细化工研究所)、正丁胺(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、三溴化硼(分析纯，上海晶纯实业有限公司)、石油醚(沸程60-90℃，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、三氯甲烷(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、无水硫酸钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)、盐酸(35％，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、氯化钠(分析纯，天津市恒兴化学试剂制造有限公司)、乙酸乙酯(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)、薄层预制板(青岛高达化工有限公司)。

[0009] 1.2、实验仪器

[0010] 2XZ-4型旋片式真空泵(临海市谭氏真空设备有限公司)、DZF-6020型真空干燥箱(上海新苗医疗器械制造有限公司)、SHB-IIIA循环水式多用途真空泵(上海豫康科教仪器设备有限公司)、CL-4型平板磁力搅拌器(郑州长城科工贸有限公司)、EYELA SB-1100旋转蒸)发仪(上海爱郎仪器有限公司)、FA2104B分析天平(上海越平科技仪器有限公司)、XRC-1型微熔点测定仪(四川大学科仪厂)、DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂)、GZX-9240MBE数显鼓风干燥箱(上海博迅实业有限公司医疗设备厂)、ZF-6型三用紫外分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)、Ultrashied 400MHz Plus核磁共振仪(瑞士Bruker公司)、AmozonSL+1200液相色谱-双重漏斗传输离子阱质谱仪(德国布鲁克道尔顿公司)、TDZ4-WS低速离心机(长沙平凡仪器仪表有限公司)、DK-8A型电热恒温水槽(上海精宏实验设备有限公司)、TGL-16C高速离心机(上海安亭科学仪器厂)。

[0011] 2、实验方法与结果

[0012] 2.1、酚类化合物的制备过程

[0013] 合成路线设计：以香草醛为原料，在氧化硼催化下与乙酰丙酮的缩合反应，制备该酚类化合物(系统命名为(3Z,5E)-4-hydroxy-6-(3-methoxy-4-methylphenyl)hexa-3,5-dien-2-one，中文名(3Z,5E)-4-羟基-6-(3-甲氧基-4-甲苯基)己-3,5-二烯-2-酮[0014]

[0015] 其中，所述类似物为以酚类化合物为母体，进行侧链添加、删减或片段补充而获得的，且

[0016] 所述类似物的作用效果不低于式I化合物的作用效果。

[0017] 称取37.6g三氧化二硼和75.8g乙酰丙酮混合在一起，放在500mL的三颈瓶中在150℃的条件下搅拌30小时，用TLC检测反应过程，待原料反应完全时去掉油浴自然冷却到0℃。然后把230g硼酸三丁酯溶解在500mL干燥的乙酸乙酯中，并加入到上述反应液中。在0℃条件下，首先把37.6g香草醛溶解在300mL干燥的乙酸乙酯中，5.0mL正丁胺溶解在30mL乙酸乙酯中，然后再把配制的溶液滴加到上述的反应液中。溶液的加入过程要缓慢滴加防止反应过快使产率降低。搅拌直至原料消耗完全，然后再加0.4mol/L的60℃盐酸(500mL)，用分液漏斗分液得到乙酸乙酯层。将得到的有机层依次经过500mL饱和碳酸氢钠溶液、500mL水洗各洗涤一次，再将分液得到的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤除去干燥剂，减压蒸馏除去溶剂，得到的混合物经200-300目硅胶柱层析分离纯化(洗脱剂是V石油醚:V乙酸乙酯＝4:1)，洗脱出酚类化合物30g，产率52％。

[0018] 2.2、酚类化合物的结构鉴定

[0019] 精确称取10mg酚类化合物，在核磁管中用0.5mL氘代氯仿溶解，通过核磁共振仪测试其化学结构。氢谱图如图1所示，碳谱图如图2所示。核磁数据如下：

[0020] 1H NMR(400MHz,CDCl3)δ(ppm):15.4(brs,1H,OH),7.53(d,J＝15.6Hz,1H),7.08(dd,J＝8.4,2.0Hz,1H),7.01(d,J＝1.6Hz,1H),6.92(d,J＝8.4Hz),6.32(d,J＝15.6Hz,1H),5.91(brs,1H,OH),5.63(s,1H),3.93(s,3H),2.15(s,3H).13C NMR(100MHz,CDCl3)δ(ppm):196.9,177.9,147.6,146.7,140.0,127.6,122.6,120.2,114.7,109.4,100.6,55.9,
26.8。

[0021] 核磁共振谱结果分析：化学位移在2.15、3.92处有两个甲基的质子工振吸收峰，其中一个峰的化学位移在3.92ppm的低场，说明该甲基可能和吸电子基团相连，可能是氧甲基。在δ＝7.08处，1H,四重峰，J＝2.0Hz，8.2Hz；δ＝7.01处，1H,二重峰，J＝1.6Hz；δ＝6.91处，1H,二重峰，J＝8Hz。因此可推出是苯环上的三个位置的质子。δ＝6.32处，1H,二重峰，J＝15.6Hz；δ＝7.53处，1H，二重峰，J＝15.6Hz。由此可推出是中间的两个烯基氢，一个在低场受氧原子的共轭作用周围电子密度低。该质子是靠近苯环的氢。δ＝15.47处，1H,单峰，可能是酚羟基上的质子。δ＝5.91处，1H,单峰，δ＝5.63处,1H，单峰，这两个峰可能是烯醇结构上的质子，一个是羟基氢，一个是烯基氢。综上所述，该化合物的结构合理。

[0022] 本发明还包括组合物，其含有对产生雌激素或抗雌激素有效量的式酚类化合物或其类似物和药学上适用的载体。

[0023] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对产生雌激素产生应答的疾病的药物中的应用。

[0024] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对产生抗雌激素产生应答的疾病的药物中的应用。

[0025] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增值产生应答的疾病的药物中的应用。

[0026] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对人乳腺癌MDA-MB-231(ER-)细胞增值产生应答的疾病的药物中的应用。

[0027] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制产生应答的疾病的药物中的应用。

[0028] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对产生雌激素和抗雌激素的双向作用的应答的疾病的药物中的应用。

[0029] 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗调节内分泌、促进人或动物的发育上的药物的应用。

[0030] 以上所述疾病为妇女进入绝经期后，因体内雌激素水平下降，而引起的引发更年期综合征、骨质疏松、老年痴呆症和心血管疾病。

附图说明

[0031] 图1甲基hispolon与雌激素α受体的分子对接结果。

[0032] 图2甲基hispolon与雌激素受体的分子对接结果。

具体实施方式

[0033] 实施例1

[0034] 所述的式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗妇女进入绝经期后，因体内雌激素水平下降，而引起的引发更年期综合征、骨质疏松、老年痴呆症和心血管疾病的药物。即，式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对产生雌激素或抗雌激素产生应答的疾病的药物中的应用。

[0035] 1 实验材料

[0036] 1.1 药物

[0037] 酚类化合物(以下简称甲基hispolon，由天然产物研究与利用湖北省重点实验室(三峡大学)提供)、17-β雌二醇(E2)，购自苏州尤利特生物医药科技有限公司；。

[0038] 1.2 主要试剂及仪器

[0039] 无酚红RPMI1640干粉，Invitrogen Corporation；

[0040] 胎牛血清，杭州四季青生物工程材料有限公司；

[0041] 噻唑蓝(MTT)，飞羿科技；

[0042] 青霉素、链霉素，华北制药股份有限公司；

[0043] 胰蛋白酶，华美生物工程公司；

[0044] MDA-MB-231(ATTC)、MCF-7，武汉中国典藏物培养中心。

[0045] CO2培养箱(SHELLJB)；各种量程的移液枪；

[0046] 酶联免疫检测仪Stat Fax-2100(AWARENESS TECHNOLOGY INC)。

[0047] 1.3 培养基及药品的配制

[0048] 无酚红RPMI1640培养液的配置：每10.4g干粉型无酚红RPMI1640溶入1000mL超纯水，加入碳酸氢钠(NaHCO3)2.0g，搅拌，待其充分溶解，0.22μm无菌正压过滤器过滤，加入10％胎牛血清，0.5％青霉素、链霉素(100U/mL、100μg/mL)，分装；

[0049] L-15培养基的配制方法同上；

[0050] 胎牛血清：-4℃过夜，56℃30min灭活，分装，-4℃保存备用；

[0051] 噻唑蓝(MTT)：称取MTT 250mg，避光，溶解于50mL的PBS，使终浓度为5mg/mL，过滤除菌分装，-20℃保存备用；

[0052] 17β-雌二醇(E2)：取2.7mg 17β-雌二醇溶于100uL DMSO(10-1M)，吸取10μL加到90μL DMSO(10-2M)，如此重复6次，即为10-7M(第6次使用10％的DMSO，控制DMSO在细胞中的终浓度低于1‰)，加药时用培养基稀释至为10-9M；

[0053] 甲基hispolon：精密称取4.68mg，溶于100uL 10％的DMSO中，吸取20ul加入到180uL无菌水中，如此重复操作，配成10-1M，10-2M，10-3M，10-5M。

[0054] 2、实验方法与结果

[0055] 2.1 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对人乳腺癌细胞MCF-7细胞增值产生应答的疾病的药物中的应用。

[0056] 取对数生长期MCF-7细胞(人乳腺癌细胞，对雌激素敏感)，用RPMI1640培养基(含10％小牛血清，0.5％青霉素、链霉素(100U/mL、100μg/mL))培养，当细胞贴壁80％后用
0.25％的胰酶消化，稀释细胞浓度至1×104个/mL，接种于96孔板，培养24h使其贴壁。贴壁后将培养基换成无酚红的培养基，然后加入不同浓度药物，阳性对照药用E2(17β–雌二醇)，每个药设5个浓度，设6个复孔。在37℃、5％CO2培养箱中培养48h后，用MTT法测定细胞增殖，每孔加入10μL 5mg/mL MTT，培养4h后加入150μL DMSO，在492nm测定OD值。所有的数据都用平均值±标准差表示，用方差分析进行统计学处理。

[0057] 表1.甲基hispolon对MCF-7细胞增值的影响

[0058]

[0059]

[0060] *表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

[0061] 2.2 式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对人乳腺癌MDA-MB-231(ER-)细胞增值产生应答的疾病的药物中的应用。

[0062] 人乳腺癌MDA-MB-231(ER-)细胞采用封闭式单层贴壁培养，MDA-MB-231细胞的培养基为L-15培养基(小牛血清10％，青霉素100U/mL,100μg/mL)，恒温37℃，相对饱和湿度。细胞的培养和传代同MCF-7细胞。

[0063] MDA-MB-231细胞的检测，除了培养基为L-15及加药前不需要更换培养基外，其它处理方法同上。

[0064] 表2.甲基hispolon对MDA-MB-231细胞增值的影响

[0065]

[0066] *表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

[0067] 结果显示：甲基hispolon具有雌激素作用，当雌激素缺乏时，对雌激素敏感细胞株具有同雌激素一样的促进细胞增殖作用。对缺乏雌激素受体的乳腺癌细胞没有促进细胞生长作用，表明其雌激素作用主要是通过雌激素受体发挥作用。

[0068] 2.3、式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对人乳腺癌细胞MCF-7细胞的抑制产生应答的疾病的药物中的应用。

[0069] 样品的抗雌激素样作用：MCF-7细胞的培养方法同上，在将培养基换成无酚红培养基时，同时向体系中加入2.5ul 10-7mol/L 17β-雌二醇，以及各种浓度受试药物，在同等条件下进行培养。

[0070] MDA-MB-231细胞的抗雌激素样作用检测方法除了培养基为L-15及加药前不需要更换培养基外，其它处理方法同上。

[0071] 2.3.1 实验材料

[0072] 甲基hispolon

[0073] 2.3.2 实验方法与结果

[0074] 样品的抗雌激素样作用：MCF-7细胞的培养方法同上，在将培养基换成无酚红培养基时，同时向体系中加入2.5ul 10-9mol/L 17β-雌二醇，每个药设5个浓度，以他莫西芬作用对照。在同等条件下进行培养。

[0075] 表3.甲基hispolon对MCF-7细胞增值的影响

[0076]

[0077] *表式与阳性对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

[0078] 表4 他莫昔芬对MCF-7细胞增值的影响

[0079]

[0080] *表式与对照组比较差异有显著性p﹤0.05(*),p﹤0.01(**)

[0081] 他莫昔芬能抑制MCF-7细胞增殖，表明该细胞对选择性雌激素受体调节剂敏感。甲基hispolon具有抗雌激素作用，当雌激素过多时，对雌激素敏感细胞株具有抗雌激素作用，抑制细胞增殖。

[0082] 实验表明：甲基hispolon具有雌激素双向调节功能。当内源性雌激素缺乏时，显示雌激素活性；当雌激素过多时，又具有抗雌激素作用。

[0083] 2.4、计算甲基hispolon与雌激素受体的结合能力

[0084] 2.4.1 分子对接法计算：基于几何互补、电性互补的原则，采用分子对接法计算不同化合物与雌激素受体的结合能力，预测雌激素调节作用以及不同化合物与雌激素受体间的相互作用模式。雌激素α、β受体三维结构坐标从Protein Data Bank下载(PDB Code:3ERD、1U3R)。化合物分子结构构建后采用量子化学半经验算法PM3进行能量最小化。分子对接采用薛定谔软件中半柔性对接模块Glide，设置结合位点盒子大小为 以
打分值Gscore判断化合物与雌激素受体间相互作用强弱，Gscore值越负，表示化合物活性越好。

[0085] 2.4.2 实验结果

[0086] 通过分子对接计算得，如图1所示的甲基hispolon与雌激素α受体的分子对接结果，甲基hispolon与雌激素α受体Glu353,Arg394,His524之间有氢键作用，结合自由能为-7.29kcal/mol；与雌激素β受体Glu305之间存在氢键作用，结合自由能为-6.68kcal/mol(图
2所示的甲基hispolon与雌激素受体的分子对接结果)。

[0087] 2.5、式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗对产生雌激素和抗雌激素的双向作用的应答的疾病的药物中的应用。

[0088] 2.5.1.1 药物

[0089] 甲基hispolon(自制)。

[0090] 2.5.1.2 试剂及仪器

[0091] 重组人雌激素受体基因片段(hER)及共激活因子GRIP1的双杂交酵母(Y191)，由日本富山大学馈赠；

[0092] 邻硝基苯β-D-吡喃半乳糖苷(ONPG)，购自sigma公司；

[0093] 17β-雌二醇(E2)，购自苏州尤利特生物医药科技有限公司；

[0094] 二甲基亚砜(DMSO)，购自天津市天力化学试剂有限公司；

[0095] 无氨基酵母氮源(Difco)，购自北京明日百傲生物科技发展研究所；

[0096] 琼脂，购自上海肯强仪器有限公司；

[0097] 异亮氨酸，缬氨酸，硫酸腺嘌呤，盐酸精氨酸，盐酸组胺一水化合物，盐酸赖氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，苏氨酸，酪氨酸，尿嘧啶，购自sigma公司。

[0098] SD培养基的配置：双杂交酵母培养基为缺乏亮氨酸和色氨酸的SD培养基。SD固体培养基及琼脂培养基的配置：1.5g琼脂加100mLSD培养基，121℃高压灭菌20min，冷至50-60℃取出，超净工作台转入4个培养皿中，固化后接种。培养基均保存在4℃下。

[0099] 酶联免疫检测仪Stat Fax-2100，(AWARENESS TECHNOLOGY INC)；

[0100] 恒温摇床，HDL APPARATUS公司；

[0101] 微型台式高速离心机(5415D)，德国eppendof公司；

[0102] 超净工作台,HDL APPARATUS公司。

[0103] 2.5.2 方法与结果

[0104] 采用重组人雌激素受体基因片段(hER)及共激活因子GRIP1的双杂交酵母(Y191)(日本富山大学馈赠)实测化合物与雌激素受体的结合能力。

[0105] 转雌激素受体酵母细胞加10ml的选择性培养基(缺少色氨酸和亮氨酸)于摇床30℃过夜(200r/min培养16～24h)。取每50μl培养液加入200μl新培养基加入药物2.5μl继续培养4h。取150μl放入96孔板，于600nm测OD值作为酵母细胞密度。余下部分用于测定β-半乳糖苷酶的活性。

[0106] β-半乳糖苷酶的活性测定：

[0107] 1、离心：12000rpm，离心5min。小心吸去上清液，收集酵母细胞。

[0108] 2、破壁：酵母细胞加入200μl Z缓冲液中(0.1M磷酸钠[Ph 7.0]，10mM KCl,1mM MgSO4)，用前加入zymolyaseg致终浓度1mg/ml，振匀，37℃温育15min。

[0109] 3、酶反应：加入40μl 4mg/ml浓度的2-硝基苯β-D-半乳糖苷开始酶促反应。30min。

[0110] 4、酶活性测定：加入100μl 1M Na2CO3停止反应。取150μl加入96孔板中测定OD值，按下列公式计算酶活性。

[0111] U＝1000×(OD420-1.75×OD55)/(t×v×OD600)

[0112] 注：T反应时间(min)，v用于测定的培养液体积(ml)，OD600细胞测定时的密度，OD420 2-硝基苯反应完后的吸光度，OD550反应完后的吸光度。结果见表5。

[0113] 表5.甲基hispolon对双杂交酵母系统中β-半乳糖苷酶的活性的影响

[0114]

[0115] *表式与空白组比较差异有显著性p﹤0.01(**)

[0116] 结果表明：甲基hispolon与α、β受体均有较强的结合能力，并呈现剂量依赖性。甲基hispolon与β受体的结合能力高于α受体。通过与雌激素受体结合而产生雌激素和抗雌激素双向调节作用，是一种作用较强的天然雌激素调节剂。

[0117] 2.6、式I酚类化合物或其类似物或所述的组合物在制备治疗调节内分泌、促进人或动物的发育上的药物的应用。

[0118] 子宫增重试验，是最早建立的检测雌激素活性的经典方法，目前仍被广泛应用。子宫含有丰富的ERs，当外来化合物与ERs结合后，可使子宫的雌激素诱导蛋白(IPs)含量增加，刺激子宫生长。因此，测定动物子宫重量或计算其脏器系数，可评价受试物的雌激素活性及其强度。

[0119] 2.6.1 实脸材料

[0120] 2.6.1.1 实脸药物

[0121] 甲基hispolon

[0122] 2.6.1.2 实脸动物

[0123] 昆明雌性小鼠，9～12g，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，生产许可证：XR(鄂)2009-0007。

[0124] 2.6.2 实验方法与结果

[0125] 取雌性小鼠32只，随机分为5组，分别为空白组、阳性组(17β-雌二醇)、甲基hispolon高、中、低剂量组，每组8只。饲喂无大豆的特殊饲料，小鼠适应性饲养一周后称取体重。末次给药前一天禁食不禁水12h。

[0126] 2)体重系数的计算

[0127] 末次给药后半小时，称取体重，计算体重系数[(用药后体重-用药前体重)/用药前体重×100]；

[0128] 3)子宫系数的计算

[0129] 立即分离子宫，用电子天平称湿质量，计算子宫指数(mg/g)。子宫指数＝子宫湿重(mg)/体重(g)；

[0130] 4)小鼠E2、P测定方法

[0131] 眼眶取血于EP管内，1400r·min-1离心10min，小心吸取血清置另外EP管内，再次离心，吸取血清，于-20℃保存备用；将-20℃保存的血清放至室温，按小鼠E2酶联免疫试剂盒说明书测定OD值。

[0132] 5)统计学处理

[0133] 采用SPSS10.0统计软件对数据处理。先进行数据的正态分布检验，方差齐性检验，组间比较采用方差分析。计量数据用均数±标准差 表示，组间差异用单因素方差分析，多个样本均数间每两个均数的比较采用Q检验。P<0.05说明有差异，P<0.01为有显著性差异。

[0134] 表6.甲基hispolon对幼鼠子宫系数的影响

[0135]

[0136] *表式与空白组比较差异有显著性p﹤0.01(**)，p﹤0.05(*)

[0137] 结果表明：甲基hispolon低浓度和高浓度都能够控制小鼠体重的增加，且高浓度的药物作用效果更明显，与空白组相比，差异有显著性。17β-雌二醇能增加小鼠的子宫系数，甲基hispolon对子宫也有减轻作用，但是与空白组相比，差异不明显。

[0138] 表7.甲基hispolon对雌性幼鼠体内雌二醇和孕酮的影响

[0139]

[0140] 结果表明：甲基hispolon能调节内分泌，增加内源性雌二醇和孕酮的含量，促进幼鼠发育。

[0141] 2.7、甲基hispolon对去势大鼠血清激素水平的影响

[0142] 7.1 实验材料

[0143] 7.1.1 实验药物

[0144] 甲基hispolon

[0145] 雌二醇放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研究所

[0146] 碘[125I]孕酮放射免疫分析药盒，北京北方生物技术研究所。

[0147] 7.1.2 实脸动物

[0148] 清洁级SD雌性大鼠，体重为210±10g，华中科技大学同济医学院实验动物学部提供，生产许可证：XR(鄂)2009-0007。

[0149] 7.2 实验方法与结果

[0150] 取雌性大鼠，适应性喂养3天，禁食，做卵巢摘除手术，其中8只做假手术。注射青霉素，每天1次，连续3d，防止术后感染。分组给药，去大豆饲料喂养。每天记录大鼠状态。持续8周，禁食24小时候后，处死前动物禁食不禁水，处死前股动脉采血，取血，分离血清。按酶免试剂盒说明书测定血清雌二醇(E2)、孕酮(P)含量，计算子宫系数。

[0151] 表8.甲基hispolon对去势大鼠血清激素水平的影响

[0152]

[0153] *表式与空白组比较差异有显著性p﹤0.01(**)，p﹤0.05(*)

[0154] 结果表明：甲基hispolon在体内具有雌激素样作用，当内源性雌激素缺乏时，具有促进内源性雌激素分泌作用，同时具有雌激素样作用，能促进大鼠子宫增殖。表明其作用对雌激素缺乏更有效。