阿法替尼及其异构体的检测方法

摘要

本发明涉及阿法替尼及其对映异构体的液相分离检测方法，属于分离检测技术领域。所述方法包括：采用CHIRALPAK OZ-H250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱为分离色谱柱，以正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液为流动相，在一定条件下进行等度洗脱，所述方法可以有效的分离检测阿法替尼及其对映异构体杂质，色谱峰峰型良好。

权利要求

1.一种阿法替尼及其异构体的检测方法，包括：在高效液相色谱仪上进行等度检测，色谱柱为CHIRALPAK OZ-H，250mm×4.6mm,5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550-650:350-250:100:0.1；

流速为0.5mL/min-1.0mL/min；柱温为15℃-35℃。

2.根据权利要求1所述的方法，检测器为紫外检测器，检测波长为256nm。

3.根据权利要求1所述的方法，检测的样品的进样量为0.1μL-20μL。

4.根据权利要求1所述的方法，所述流动相的流速为0.7mL/min。

5.根据权利要求1所述的方法，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为

600:300:100:0.1。

6.根据权利要求1-5任一所述的方法，在高效液相色谱仪上进行等度检测，色谱柱是CHIRALPAK OZ-H，250mm×4.6mm，5μm；检测器是紫外检测器，检测波长为256nm；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为

600:300:100:0.1；流速为0.7mL/min；进样量为2μL-10μL；柱温为30℃；运行时间为

20min。

说明书

阿法替尼及其异构体的检测方法

技术领域

[0001] 本发明涉及阿法替尼及其异构体杂质的一种HPLC分离检测方法，属于制药技术领域。

背景技术

[0002] 阿 法 替 尼 (Afatinib)，化 学 名 为 (2E)-4-[(3- 氯 -4- 氟 苯 基 ) 氨基]-6-{[4-(N,N-二甲基氨基)-1-氧代-2-丁烯-1-基]氨基}-7-((3S)-四氢呋喃-3-基氧基)-喹唑啉；是表皮生长因子受体(EGFR)和人表皮生长因子受体2(HER2)酪氨酸激酶的不可逆抑制剂，其二马来酸盐已经被批准用于治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)等疾病，阿法替尼结构如式(1)所示：

[0003]

[0004] 阿法替尼结构中存在一个手性碳，具有一个对映异构体杂质，在检测阿法替尼过程中，阿法替尼与其对映异构体杂质难以分离、检测。

发明内容

[0005] 发明概述

[0006] 本发明提供了一种简便、有效的HPLC分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法。

[0007] 本发明人通过多次试验尝试，通过筛选色谱柱和相适应的流动相、流速、柱温等检测条件，得到一种适用于阿法替尼、其对映异构体杂质的分离检测方法，所述方法采用CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm，手性色谱柱，为分离色谱柱；以正已烷、乙醇、甲醇、二乙胺混合溶液为流动相；可以将阿法替尼及其对映异构体杂质进行有效分离检测。

[0008] 术语定义

[0009] 术语“分离度”是指HPLC检测中，相邻色谱峰保留时间之差与两色谱峰峰宽均值之比。

[0010] 发明详述

[0011] 发明人通过研究，开发了一种分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法，方法包括：在高效液相色谱仪上进行，色谱柱为CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且混合溶剂中，甲醇和二乙胺体积比为100:0.1，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550-650:350-250:100:0.1；柱温为15℃-35℃；流速为0.5mL/min-1.0mL/min。

[0012] 发 明 人 曾 尝 试 使 用CHIRALPAK AS-H，4.6mmX250mm,5μm手 性 色 谱 柱；IC，4.6mmX250mm,5μm，手性色谱柱； OD-H，4.6mmX250mm,5μm
手性色谱柱； OJ-H，4.6mmX250mm,5μm手性色谱柱等为分析色谱柱；使用相同流动相对供试品进行分析检测，结果显示上述色谱柱对供试品中的依鲁替尼及其对应异构体的分离效果较差，分离度低，在调节流动相比例亦不能很好的改善分离度和灵敏度；而CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱的分离效果较好。

[0013] 在检测过程中，可以使用流动相或乙醇为稀释溶剂。

[0014] 所述检测方法中，可以使用的检测器有紫外检测器。

[0015] 所述检测方法中，检测的样品的进样量为0.1μL-20μL。在一些实施方式中，检测的样品的进样量为2μL-10μL。在一些实施方式中，检测的样品的进样量为5μL。

[0016] 所述检测方法中，检测运行时间可以是15min-20min。

[0017] 在一些实施方式中，流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为550:350:100:0.1。在一实施例中，流动相中，正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为600:300:100:0.1。

[0018] 在一些实施方式中，检测波长为256nm。

[0019] 在一些实施例中，所述流动相的流速为0.7mL/min。

[0020] 在一些实施例中，所述柱温为30℃。

[0021] 在一些实施例中，一种分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法包括：在高效液相色谱仪上进行，检测器是紫外检测器，检测波长为256nm；色谱柱是CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为600:300:100:0.1；流速为0.6mL/min-0.8mL/min；柱温为25℃-35℃。

[0022] 在一些实施例中，一种分离检测阿法替尼、其对映异构体杂质的方法包括：在高效液相色谱仪上进行，检测器是紫外检测器，检测波长为256nm；色谱柱是CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm,5μm手性色谱柱；流动相为正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺混合溶液，且正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的体积比为600:300:100:0.1；流速为0.7mL/min；进样量为5μL；
柱温为30℃；运行时间为20min。

[0023] 本发明所述的检测方法，能够将阿法替尼及其对映异构体杂质进行有效分离，分离度达到3.8，从而可以有效控制阿法替尼的质量。本发明的方法能够简单、快捷、准确地分离检测出阿法替尼及其对映异构体杂质，可以用于生产中的质量控制。

附图说明

[0024] 图1示实施例1中空白溶液的检测结果；

[0025] 图2示实施例1中阿法替尼样品的检测结果；

[0026] 图3示实施例2中阿法替尼样品的检测结果；

[0027] 图4示实施例3中阿法替尼样品的检测结果；

[0028] 各图中，横坐标为时间，纵坐标为信号强度，图中标示了各色谱峰的保留时间(Retention Time)和面积百分比(Area Percent)。

具体实施方式

[0029] 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技术方案，下面进一步披露一些非限制实施例对本发明作进一步的详细说明。

[0030] 本发明所使用的试剂均可以从市场上购得或者可以通过本发明所描述的方法制备而得。

[0031] 本发明中，g表示克，mL表示毫升，nm表示纳米，μm表示微米，mm表示毫米，min表示分钟。

[0032] 实施例1

[0033] 检测条件：

[0034] 仪器：Agilent高效液相色谱仪，Agilent DAD紫外检测器，检测波长：256nm；

[0035] 色谱柱：CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm手性色谱柱；

[0036] 稀释剂：正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的混合溶液，体积比为600:300:100:0.1；

[0037] 流动相：正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的混合溶液，体积比为600:300:100:0.1；

[0038] 流速：0.7mL/min；

[0039] 柱温：30℃；

[0040] 进样量：5μL；

[0041] 检测步骤：

[0042] 取阿法替尼粗品约15mg，精密称定至10mL棕色量瓶，用稀释剂溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

[0043] 分别取空白溶液和供试品溶液，按上述条件进行检测分析，记录色谱图，结果见图1、图2。图2中保留时间9.49分钟的色谱峰为阿法替尼的色谱峰；11.48分钟的色谱峰为阿法替尼的对映体杂质。分离度为3.8。

[0044] 实施例2

[0045] 检测条件：

[0046] 仪器：Agilent高效液相色谱仪，Agilent DAD紫外检测器，检测波长：256nm；

[0047] 色谱柱：CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm手性色谱柱；

[0048] 稀释剂：正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的混合溶液，体积比为600:300:100:0.1；

[0049] 流动相：正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的混合溶液，体积比为600:300:100:0.1；

[0050] 流速：0.7mL/min；

[0051] 柱温：25℃；

[0052] 进样量：5μL；

[0053] 检测步骤：

[0054] 取阿法替尼约10mg，精密称定至10mL棕色容量瓶中，用稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

[0055] 取供试品溶液，按照检测条件进行高效液相色谱分析，记录色谱图，结果见图3。

[0056] 图3证明，阿法替尼的光学纯度达到原料药要求，本法可以用于阿法替尼的质量监测。

[0057] 实施例3

[0058] 检测条件：

[0059] 仪器：Agilent高效液相色谱仪，Agilent DAD紫外检测器，检测波长：256nm；

[0060] 色谱柱：CHIRALPAK OZ-H，250mmX4.6mm，5μm手性色谱柱；

[0061] 稀释剂：乙醇；

[0062] 流动相：正已烷、乙醇、甲醇和二乙胺的混合溶液，体积比为600:300:100:0.1；

[0063] 流速：0.7mL/min；

[0064] 柱温：30℃；

[0065] 进样量：5μL；

[0066] 检测步骤：

[0067] 取阿法替尼片适量，约相当于阿法替尼10mg，置10ml棕色容量瓶中，加稀释剂超声溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，滤液作为供试品溶液。取供试品溶液，按照检测条件进行高效液相色谱分析，结果见图4。

[0068] 本发明的方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明内。