结构。本发明在此描述了其方法和用途。所要求带有硼酸的LIPHAGANE化合物作为PI3K-α 保护的马库什结构为:[式1]。Y可以是O、NH、NR、和/或β的抑制剂 S;代表性的化合物是:[化合物A、B、C、D]转让专利
申请号 : CN201380026291.5
文献号 : CN104395325B
文献日 : 2016-12-07
发明人 : R·A·维施瓦卡玛 , S·D·萨万特 , P·P·辛格 , A·H·达尔 , P·R·夏尔马 , A·K·萨克斯纳 , A·纳戈特拉 , A·A·K·科尔卢勒 , R·马杜杜德拉 , A·K·卡齐 , A·赫塞恩 , N·查纳尤里亚
申请人 : 科学与工业研究委员会
摘要 :
权利要求 :
1.通式1的化合物,及其药学上可接受的盐,其中,
a)Y=O、S或NR,其中R=甲基;
b)其中n=0或1;
c)其中R1选自H、CH3、CF3、F、Cl;R2和R3独立地选自OH、OR、NRR'、F、Cl、CF3和R,其中,R和R'独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基;
d)其中R4=H或CH3;
e)其中R5是CH3;和
f)其中R6和R7独立地是甲基。
2.权利要求1所述的化合物,其中通式1的化合物由式A、C、D、E、F、S、T、V、X和Y的化合物表示:
3.通式1的化合物及其药学上可接受的盐的制备方法其中
a)Y=O、S或NR,其中R=甲基;
b)其中n=0或1;
c)其中R1选自H、CH3、CF3、F、Cl;R2和R3独立地选自OH、OR、NRR'、F、Cl、CF3和R,其中,R和R'独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基;
d)其中R4=H或CH3;
e)其中R5是CH3;和
f)其中R6和R7独立地是甲基;
其中所述方法包括以下步骤:
i)化合物9在醚溶剂中在碱的存在下与正丁基锂或叔丁醇钾反应;
其中
a)Y=O、S或NR,其中R=甲基;
b)其中n=0或1;
c)其中R1选自H、CH3、CF3、F、Cl;R2和R3独立地是OR,其中R选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基;
d)其中R4=H;和
e)其中R5是CH3;
ii)向在步骤(i)中得到的上述混合物添加硼酸三乙酯或硼酸三甲酯并搅拌;
iii)用饱和氯化铵溶液淬灭步骤(ii)的反应,然后用与水不混溶的溶剂萃取以得到通式10的化合物其中
a)Y=O、S或NR,其中R=甲基;
b)其中n=0或1;
c)其中R1选自H、CH3、CF3、F、Cl;R2和R3独立地是OR,其中R选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基;
d)其中R4=H;和
e)其中R5是CH3;
iv)化合物10与BI3或DMS或AlCl3/硫脲在醚溶剂中以摩尔计1:1至3:4范围内的比例反应;
v)通过添加硫代硫酸钾淬灭步骤(iv)的反应,然后用与水不混溶的溶剂萃取以得到通式1的化合物。
4.权利要求3所述的方法,其中用于步骤(i)和(iv)的所述醚溶剂选自四氢呋喃、二乙醚、二异丙醚和异丙醚。
5.权利要求3所述的方法,其中步骤(i)的所述碱选自四甲基乙二胺、三乙胺、三甲胺、和二异丙基乙胺。
6.权利要求3所述的方法,其中步骤(i)中的反应在-78℃至35℃范围的温度下进行5至
10min之间的时间。
7.权利要求3所述的方法,其中步骤(ii)中的反应在0-5℃范围的温度下进行1至2h之间的时间。
8.权利要求3所述的方法,其中步骤(iii)和(v)中的所述与水不混溶的溶剂选自乙酸乙酯、二氯甲烷、醚或氯仿。
9.权利要求3所述的方法,其中步骤(iv)中的反应在-78℃至35℃之间的温度下进行1至3h之间的时间。
10.权利要求3所述的方法,其中将步骤(v)中得到的通式1的化合物转变成药学上可接受的盐。
11.权利要求10所述的方法,其中通式1的化合物通过下述方法转变成药学上可接受盐,所述方法包括以下步骤:通式1的化合物与碱以比率1:1的比例混合,其中所述碱选自氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铵的水溶液,搅拌所述反应混合物1-2h,然后干燥以得到通式1的化合物的药学上可接受的盐。
12.药物组合物,其包含式1的化合物,任选与药学上可接受的载体、盐、赋形剂或稀释剂一起,其中
a)Y=O、S或NR,其中R=甲基;
b)其中n=0或1;
c)其中R1选自H、CH3、CF3、F、Cl;R2和R3独立地选自OH、OR、NRR'、F、Cl、CF3和R,其中,R和R'独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基d)其中R4=H或CH3;
e)其中R5是CH3;和
f)其中R6和R7独立地是甲基。
13.权利要求12所述的药物组合物,其中所述药学上可接受的载体选自水、缓冲盐水、二醇、甘油类、橄榄油和脂质体。
14.通式1的化合物在制备用于通过特异性抑制人类癌细胞系中的PI3K-α或β同工型来治疗癌症的药物中的用途,其中,
a)Y=O、S或NR,其中R=甲基;
b)其中n=0或1;
c)其中R1选自H、CH3、CF3、F、Cl;R2和R3独立地选自OH、OR、NRR'、F、Cl、CF3和R,其中,R和R'独立地选自甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基和异丁基;
d)其中R4=H或CH3;
e)其中R5是CH3;和
f)其中R6和R7独立地是甲基;
其中所述人类癌细胞系选自肺细胞系、白血病细胞系、前列腺细胞系和结肠细胞系。
15.权利要求14所述的用途,其中所述肺细胞系是A549,所述白血病细胞系是THP1,所述前列腺细胞系是PC-3,以及所述结肠细胞系选自caco-2、colo205和HCT-115。
16.权利要求14或15所述的用途,其中通式1的化合物的剂量在20mg/kg至100mg/kg的范围内。
17.权利要求14或15所述的用途,其中式A的代表性化合物当用于抗结肠和乳腺癌细胞系的体外活性时,GI50浓度在2.4μM–2.6μM范围内。
18.权利要求14或15所述的用途,其中式A的代表性化合物在人类癌细胞系中在10μM浓度下表现出>74%的最佳生长抑制。
19.权利要求14或15所述的用途,其中式E的代表性化合物当用于抗结肠癌细胞系的体外活性时,增加了sub-G1/G0群,并在结肠癌细胞系中显示出浓度依赖性的G1/G0群生长抑制和晚期凋亡。
说明书 :
带有硼酸的LIPHAGANE化合物作为PI3K-α和/或β的抑制剂
技术领域
提供了它们通过抑制PI3K通道的抗癌活性生物学评价结果。这项工作的发明领域涉及和覆
盖了开发抗癌活性的基于杂萜类liphagane骨架的新PI3K-α/β抑制剂。
背景技术
基因一起,涉及癌瘤在卡路里限制中对胰岛素和IGF1的不敏感性。3-激酶(PI3K)信号通路
是新鉴定的用于发现和开发某些治疗剂的策略。在各种PI3K亚型当中,IA类PI3K-α由于它
在各种人类癌症中频繁的突变和扩增,而作为有希望的治疗癌症的药物靶标已经日益获得
关注。与不区分正常增殖细胞和肿瘤细胞的细胞毒素剂相比,靶向疗法主要在癌细胞中发
挥它们的作用。肿瘤的启动和维持是由于特定基因座中的遗传改变所致。鉴定发生这些改
变的基因已经为癌症治疗展现了新的机会。PI3K(磷酸肌醇3-激酶)通路经常在人类癌症中
过度活跃并且已经发现引起这种情况的各种遗传改变。在所有情况中,PI3K抑制被认为是
癌症治疗最有希望的靶向疗法之一。
本身。然而,因为I类PI3K对一系列正常生理过程也是必要的,所以广谱PI3K抑制可能耐受
差。
酶家族的工作仍然是挑战。
内囊泡转运。PI3K表示所述脂质激酶家族可以根据结构和底物特异性分类为三个亚族,即I
类、II类和III类。I类PI3K是脂类激酶当中研究最广泛的,是异二聚体蛋白质;每个包含较
小的调节域和和较大的110kDa催化域,所述催化域存在四种同工型,以p110α、p110β、p110
γ和p110δ区分。虽然,在文献中报告了存在抑制所述PI3-激酶的基于天然产物的小分子,
IC50值在纳克范围内(即,从渥曼青霉菌(Penicillium wortmanni)分离的渥曼青霉素,黄酮
类槲皮素的合成类似物LY294002,等等),但这些分子因为效力低、同工型或激酶选择性差、
稳定性有限以及不可接受的药理学和药代动力学性质而没有上市。然而,具有同工型选择
性和有希望的药物样性质的PI3激酶抑制剂现在已经开始出现,它们展现了治疗癌症和其
他疾病指征的希望。在癌症中,有证据提示抑制1A类PI3激酶p110α和p110β看起来最适合于
目标。最近,考虑到来自海洋资源的天然产物已经成为分子多样性的丰富仓库并且保持着
相当有希望在药物发现中作为先导结构的丰富来源,Andersen等在筛选对抗人类PI3K-α的
海洋无脊椎动物的合作项目下,在2006年报告了来自海绵Aka coralliphaga的潜在同工型
选择性PI3K-α抑制剂。liphagal(Joshua J.Day,Ryan M.McFadden;The catalytic
enantioselective total synthesis of(+)-liphagal;Angew.Chem.Int.Ed.2011,50,
6814-6818;Enrique Alvarez-Manzaneda,RachidChahboun;Enantioselectivetotal
synthesis of the selective PI3-kinase inhibitor liphagal;Org.Lett.,2010,12
(20),4450-4453页;Jonathan H .George,Jack E .Baldwin;
Enantiospecificbiosynthetically inspired formal total synthesis of(+)-
liphagal,Org.Lett.,2010,12(10),2394-2397页;Alban R.Pereira,Wendy K.Strangman,Synthesis of phosphatidyl inositol 3-kinase(PI3K)inhibitory analogues of the
sponge meroterpenoid liphagal;J.Med.Chem.,2010,53(24),8523–8533页;Dima
A.Sabbah,Jonathan L.Vennerstrom;Docking studies on isoform-specific
inhibition of phosphoinositide-3-kinases;J.Chem.Inf.Model.,2010,50(10),1887–
1898页;Ram Vishwakarma and Sanjay Kumar;Efficient Synthesis of key
intermediate toward liphagal synthesis;Synthetic Communications;2010,41(2),
177-183页;Frederic Marion,David E.Williams,liphagal,a selective inhibitor of
PI3 kinase-α isolated from the sponge Aka coralliphaga:Structure elucidation
and biomimetic synthesis;Org.Lett.,2006,8(2),321–324页;Goverdhan Mehta,
Nachiket S.Likhite,C.S.Ananda Kumar A concise synthesis of the bioactive
meroterpenoid natural product(±)-liphagal,a potent PI3K inhibitor.,Tet.Lett,
2009,vol.50,no.37,321-324页)对PI3K-α的效力是对PI3K-γ的~10倍。我们已经通过按
照多样性定向合成方式对liphagal进行合理的修饰来合成这种分子的含硼类似物,以发现
先导分子。
发明内容
族环,所述取代具有不同取代和链长可变的可变链长环脂 族环,
族环,所述取代具有不同取代和链长可变的可变链长环脂族环,
自氢氧化钠、氢氧化钾和氢氧化铵的水溶液,搅拌所述反应混合物1-2h,然后干燥以得到通
式1的化合物的药学上可接受盐。
族环,所述取代具有不同取代和链长可变的可变链长环脂族环,
类癌细胞系,和特异性抑制所述人类癌细胞系中的PI3K-α或β同工型。
和晚期凋亡。
24hr的细胞,显示pAKT抑制。核用DAPI染成蓝色
具体实施方式
取代的烷基包括苄型或它的高级同系物,苄型或它的高级同系物可以包括不饱和烷基例如
肉桂基、巴豆基和异戊二烯基取代基。
烷基包括苄型或它的高级同系物,所述苄型或它的高级同系物可以包括不饱和烷基例如肉
桂基、巴豆基和异戊二烯基取代基。
中进行。所有分子的2D结构在maestro窗口中构建。所有分子然后利用Ligprep和Confgen模
块转变成它们各自的3D结构,具有各种构象异构体、互变异构体和电离态。所述分子然后利
用OPLS_2005力场最小化。在蛋白质数据库(PDB)中报告的PI3Kα的3D晶体结构用作对接研
究(PDB ID:3HHM)的受体。所述蛋白质从PDB下载并准备利用蛋白质准备向导进行对接。向
所述蛋白质加氢并构建缺失的环。还进行键长和键级校正来准备用于对接研究的蛋白质。
利用受体网格生成(receptor grid generation)模块,基于已经共结晶的受体配位体产生
活性位点网格。所述配位体利用滑动(Glide)模块通过该网格对接到所述受体上,并且对于
所有构象异构体进行灵活的对接以找出这些配位体的结合模式。滑动模块超精确(XP)打分
函数用于进行这些研究。
合力比liphagal更好。相互作用研究显示,硼酸(OH)与Val851和Gln859涉及强H键相互作
用,而liphagal只与Gln859在一个位置涉及H键相互作用。此外,基于硼酸的化合物的对接
分数为约-10,而liphagal的分数为约-8.5,这显示硼酸类似物对PI3Kα的亲合力更强。
CH3OH、CH3CN、DMF、吡啶、Et3N利用标准方法新鲜干燥。NMR测量(1H和13C)在配备脉冲-场梯度探测器的400或500MHz分光计(Bruker)上记录,并且三甲基硅烷(TMS)或残余的氘化溶剂共
振用作内标。化学位移以(δ)百万分率表示,耦合常数J以赫兹表示。质谱在ESI MS或MALDI-
TOF/TOF MS/MS-MS分光光度计上在含0.01%TFA的乙腈:水中利用2,5-二羟基苯甲酸/α-氰
基-4-羟基苯甲酸/芥子酸(Sigma-Aldrich)作为基质记录。旋光性在数字PerkinElmer-241
旋光计上测量。分析型TLC在Merck60F254板上进行,并且化合物通过用磷钼酸或含20%H2SO4
的MeOH作为显影试剂喷洒和烘烤来显现。制备型TLC在购自Merck的预涂层硅胶60F254板
(20x20cm)上进行。硅胶柱层析用购自Merck的硅胶(100-200目)或快速硅胶(230-400目)进
行。
后,所生成的深色混合物在0℃下搅拌10hr。然后添加H2O(100mL)并将混合物搅拌10min,通
过CH2Cl2萃取水相。有机相通过Na2SO4干燥,并在减压下蒸发。所生成的残余物通过硅胶
(CH2Cl2)纯化,提供2-羟基4,5二甲氧基苯甲醛A1(4.3g),收率为87%的分离的黄色固体:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ11.33(s, 1H),9.63(s,1H),6.83(s,1H),6.40(s,1H),3.87(s,3H),+
3.81(s,3H)ppm。质量:ESI[M+Na]:225.06;C9H10O4的元素分析计算值;C:59.34,H:5.53,O:
35.13;实测值C:59.14,H:5.13,O:34.90。
拌10min,添加溴丙酮(2.24g,16.47mmol)并在90℃回流4hr。反应完成之后,蒸馏掉丁烷-2-
酮和添加水并通过乙酸乙酯萃取两次。EtOAc相通过Na2SO4干燥,残余物在硅胶(3:7EtOAc/
己烷)上的色谱提供了收率为70%的所述酮A2,浅黄色固体: 1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.29
(s,1H),7.04(s,1H),6.98(s,1H),3.94(s,3H),3.90(s,3H),2.30(s,3H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:243.07;C12H12O4的元素分析计算值;C:65.45,H:5.49。实测值C:65.20,H:5.25。
甲苯溶液添加tBuOK(0.51g,4.545mmol),然后在相同的温度下搅拌15min,向该反应混合物
逐滴添加香叶基溴。所生成的悬液在相同的温度下搅拌2hr。向所述反应混合物添加50ml水
并且层分离。水层用乙酸乙酯萃取。合并的有机萃取液用盐水洗涤并通过Na2SO4干燥,减压
下蒸发。残余物在硅胶(5%EtOAc/己烷)上的色谱提供了70%收率的酮A3(1.69g),浅黄色
液体:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ7.425(s,1H),7.365(s,1H),7.06(s,1H),5.12-5.16(m,1H),
5.08-5.04(m,1H),3.96(s,3H),3.93(s,3H),2.97-2.89(t,2H),2.50-2.40(m,2H),2.17-+
2.00(m,4H),1.66(s,3H),1.63(s,3H),1.64(s,3H),1.58(s,3H),ppm。质量:ESI[M+Na]:
379.2;C22H28O4的元素分析计算值;C:74.13,H:7.92;实测值C:74.0,H:5.25。
吸收,向其添加无水THF(6mL),向所生成的混合物逐滴添加nBuLi(2.5mol,在己烷中,
3.370,8.4mmol中),直到反应混合物转变成黄色悬液。向所述反应混合物逐滴添加酮(1g,
2.8mmol)的THF溶液。所生成的悬液搅拌2hr。反应完成之后,添加10%氯化铵溶液30ml并通
过EtOAc萃取。残余物在硅胶(3%EtOAc/己烷)上的色谱提供了80%收率的化合物A4,无色
液体:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ6.95(s,1H),6.63(s,1H),5.86(s,1H),5.31-5.30(d,1H),
5.20-5.18(d,2H),5.11-5.08(t,1H),3.90(s,3H),3.90(s,3H),2.46-2.43(t,2H),2.32-
2.28(q,2H),2.08-2.04(q,2H),2.01-1.98(t,2H),1.68(s,3H),1.59(s,3H),1.56(s,3H),ppm。质量:ESI[M+Na]+:377.22;C23H30O3的元素分析计算值;C:77.93,H:8.53;实测值C:
77.55,H:8.35。
振荡0.5hr。反应完成之后(通过TLC监测),过滤反应混合物并完全蒸发甲醇。残余物在硅胶
(3%EtOAc/己烷)上的色谱提供了90%收率的化合物A5,无色液体:1H NMR(500MHz,CDCl3)δ
7.04(s,1H),6.98(s,1H),6.294(s,1H),5.15-5.12(m,4H),3.940(s,6H),2.94-2.91(m,
1H),2.10-1.98(m,4H),1.87-1.82(m,2H),1.74(s,3H),1.634(s,3H),1.59(s,3H),1.34-
1.32(d,3H),ppm。质量:ESI[M+Na]+:356.24;C23H32O3的元素分析计算值;C:77.49,H:9.05;
实测值C:77.49,H:9.05。
添加NaHCO3的水溶液并用EtOAc萃取水相。EtOAc相通过Na2SO4干燥,过滤并在减压下蒸发。
残余物在硅胶(3%EtOAc/己烷)上的色谱提供了50%收率的化合物A6(0.3g),具有消旋混
合物的无色液体:1H NMR(CDCl3,500MHz)δ7.13(s,1H),6.85(s,1H),3.89(s,3H),3.88(s,
3H),2.56(br d,J=14.1Hz,1H),2.15(m,1H),1.82(m,1H),1.71(qt,J=13.7,3.5Hz,1H),
1.69(m,1H),1.64-1.41(m,8H),1.40(d,J=7.2Hz,3H),1.36(s,3H),1.25(ddd,J=13.3,
13.3,3.5Hz,1H),0.99(s,3H),0.95(s,3H)。质量:ESI[M+Na]+:356.24;C23H32O3的元素分析计算值;C:77.49,H:9.05;实测值C:77.49,H:9.05。
NH4Cl水溶液并用EtOAc萃取水相,通过Na2SO4干燥,并在减压下蒸发。残余物在硅胶(8%
EtOAc/己烷)上的色谱提供了50%的化合物A7(0.05g),白色固体消旋混合物: 1H NMR
(500MHz,CDCl3)δ6.83(s,1H),3.94(s,3H),3.92(s,3H),2.56-2.49(m,1H),1.56-1.52(m,
4H),1.48(s,3H),1.37(s,3H),0.99(s,3H),0.96(d,3H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:400.24;
C23H33BO5的元素分析计算值;C:69.01,H:8.31,B:2.70;实测值C:69.10,H:8.20,B:2.50。
通过TLC监测。所述反应混合物利用硫代硫酸钾溶液中和并用DCM溶液萃取和分离有机层,
通过硫酸钠干燥,真空浓缩。粗制品通过柱层析利用己烷/EtOAc作为洗脱液纯化。1H NMR
(500MHz,CDCl3)δ6.83(s,1H),2.56-2.49(m,1H),1.56-1.52(m,4H),1.48(s,3H),1.37(s,
3H),0.99(s,3H),0.96(d,3H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:372.211;C21H29BO5的元素分析计算值;
C:67.75,H:7.85,B:2.90;实测值C:67.65,H:7.61,B:2.30。
6H),ppm。质量:ESI[M+Na] :531.186;C23H27BF6O7的元素分析计算值;C:54,35,H:5.31,B:
2.10,F:22.44;实测值C:54.33,H:5.34,B:2.11,F:22.41。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]:499.215;C23H27BF6O3的元素分析计算值;C:58.01,H:5.31,F:
23.97,B:2.27;实测值C:58.06,H:5.34,F:23.99,B:2.25。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]:391.215;C23H33BO3的元素分析计算值;C:75.1,H:9.03,.B:2.94;
实测值C:75.16,H:9.06,B:2.89。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:423.25;C23H33BO5的元素分析计算值;C:69.01,H:8.32,B:2.74;
实测值C:69.05,H:8.33,B:2.77。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:419.29;C25H37BO3的元素分析计算值;C:75.75,H:9.42,B:2.65;
实测值C:75.72,H:9.44, B:2.66。
3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:407.21;C22H29BO5的元素分析计算值;C:68.76,H:
7.63,B:2.85;实测值C:68.77,H:7.65,B:2.84。
3H),1.38(m,2H),1.34(d,3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:463.28,C25H37BN2O4的元素分析计算值;C:68.16,H:8.43,B:2.44,N:6.46;实测值C:68.16,H:8.44,B:2.41。
3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:463.28,C21H31BN2O3的元素分析计算值;C:68.14,H:
8.44,B:2.94,N:7.56;实测值C:68.14,H:8.42,N:7.55.
2H),1.34(d,3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:477.28,C25H35BN2O5的元素分析计算值;C:66.04,H:7.74,B:2.38,N:6.17;实测值C:66.02,H:7.74,B:2.36,N:6.16。
2H),1.34(d,3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+: 421.27,C23H35BN2O3的元素分析计算值;C:69.50,H:8.83,B:2.75,N:7.05;实测值C:69.51,H:8.82,B:2.77,N:7.04。
2H),1.34(d,3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:403.23,C22H29BN2O3的元素分析计算值;C:69.47,H:7.66,B:2.83,N:7.35;实测值C:69.47,H:7.65,B:2.82,N:7.33。
3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:553.16,C21H31BN2O9S2的元素分析计算值;C:47.55,H:5.88,B:2.05,N:5.24,S:12.09;实测值C:47.54,H:5.89,B:2.04,N:5.24,S:12.08。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:555.12,C21H29BO11S2的元素分析计算值;C:47.45,H:5.46,B:
2.05,S:12.09;实测值C:47.44,H:5.45,B:2.06,S:12.1。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:658.96,C21H27BCl6O5Si2的元素分析计算值;C:39.45,H:4.25,B:
1.66,Si:8.79,C1:33.29;实测值C:39.44,H:4.25,B:1.68,Si:8.78,Cl:33.30。
3H),1.37(t,2H),1.34(d,3H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:475.27;C27H37BO5的元素分析计算值;C:71.69,H:8.29,B:2.34;实测值C:71.68,H:8.28,B:2.33。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:453.19;C21H27BN2O7的元素分析计算值;C:58.69,H:6.31,N:
6.55.B:2.57;实测值C:58.69,H:6.33,N:6.54,B:2.56。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:313.21;C23H27BN2O3的元素分析计算值;C:70.78H:6.92,N:
7.18.B:2.77;实测值C:70.77,H:6.92,N:7.16,B:2.78。
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:399.21;C21H27BF2O3的元素分析计算值;C:67.64H:7.23,F:
10.12.B:2.83;实测值C:67.65,H:7.22,F:10.12,B:2.84。.
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:431.143;C21H27BCl2O3的元素分析计算值;C:61.64H:6.56,Cl:
17.33.B:2.65;实测值C:61.66, H:6.56,Cl:17.32,B:2.64。
2H),1.34(d,3H)1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:394.226;C21H30BNO4的元素分析计算值;
C:67.95,H:8.14,N:3.77,B:2.91;实测值C:67.98,H:8.15,N:3.76,B:2.91。
3H)1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:401.188;C21H29BO4S的元素分析计算值;C:64.95,H:
7.65,S:8.24,B:2.73;实测值C:64.96,H:7.66,S:8.23,B:2.72。
3H)1.17(d,3H)1.12(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:393.236;C22H31BO4的元素分析计算值;C:
71.36,H:8.44,B:2.92;实测值C:71.36,H:8.43,B:2.93。
2H),1.34(d,3H)1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:408.242;C22H32BNO4的元素分析计算值;
C:68.59,H:8.34,N:3.65,B:2.81;实测值C:68.58,H:8.35,N:3.65,B:2.83。
6H),1.01(d,6H)ppm。质量:ESI[M+Na] :423.242;C23H33BO5的元素分析计算值;C:69.24,H:
8.31,B:2.70;实测值C:69.26,H:8.35,B:2.72。
3H)1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]:479.236;C25H33BO7的元素分析计算值;C:65.76H:
7.29,B:2.37;实测值C:65.77,H:7.30,B:2.38。
9.16。
ESI[M+Na]+:395.201;C20H25BO6的元素分析计算值;C:64.55,H:6.83,B:2.91;实测值C:
64.54,H:6.84,B:2.92.
6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:465.51;C21H26BF3O6的元素分析计算值;C:57.05,H:5.91,B:
2.39,F:12.89;实测值C:57.06,H:5.92,B:2.40,F:12.88。
量:ESI[M+Na] :449.184;C21H26BF3O5的元素分析计算值;C:59.18,H:6.15,B:2.59,F:
13.35;实测值C:59.16,H:6.16,B:2.58,F:13.35。
2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na] :396.206;C20H28BNO5的元素分析计算值;C:64.36H:
7.56,B:2.9.N:3.75;实测值C:64.34,H:7.54,B:2.89,N:3.77。
2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:397.20;C20H27BO6的元素分析计算值;C:64.26H:
7.26,B:2.89;实测值C:64.25,H:7.24,B:2.88。
2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:439.210;C22H29BO7的元素分析计算值;C:63.26H:
7.02,B:2.62;实测值C:63.26,H:7.04,B:2.63。
3H),1.38(m,2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:438.214;C22H30BNO6的元素分析计算值;C:63.64H:7.28,O:23.26,B:2.60,N:3.35;实测值C:63.65,H:7.30,N:3.34。
3H),1.38(m,2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:410.21;C21H30BNO5的元素分析计算值;
C:65.15H:7.84,B:2.76,N:3.96;实测值C:65.14,H:7.85,B:2.76,N:3.95。
3H),1.38(m,2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:424.235;C22H32BNO5的元素分析计算值;C:65.85H:8.05,B:2.68,N:3.49;实测值C:65.82,H:8.02,B:2.67,N:3.51。
3H),1.38(m,2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:464.235;C25H36BNO5的元素分析计算值;C:68.05H:8.25,B:2.48,N:3.19;实测值C:68.10,H:8.22,B:2.47,N:3.21。
3H),1.38(m,2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:466.35;C24H34BNO6的元素分析计算值;
C:65.08H:7.69,B:2.24,N:3.17;实测值C:65.09H:7.71,B:2.25,N:3.18。
2H),1.11(s,6H),1.05(t,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:452.28;C24H36BNO5的元素分析计算值;
C:67.18H:8.49,B:2.51,N:3.28;实测值C:67.19,H:8.47,B:2.53,N:3.27。
2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:409.34;C21H27BO6的元素分析计算值;C:65.37,H:
7.08,B:2.91;实测值C:65.36,H:7.09,B:2.92。
6H),0.59(m,1H),0.34(m,4H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:409.34;C21H27BO6的元素分析计算值;
C:65.37,H:7.08,B:2.91;实测值C;65.34,H:7.09,B:2.92。
C:70.81,H:6.72,B:2.31,N 3.04;实测值C:70.84,H:6.73,B:2.32,N:3.06。
C27H34BNO5的元素分析计算值;C:70.01,H:7.43,B:2.32,N 3.04;实测值C:70.06,H:7.44,B:
2.35,N:3.06。
3H),1.41(m,2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]:393.17;C21H27BO5的元素分析计算值C:
68.17,H:7.38,B:2.91;实测值C:68.16,H:7.35,B:2.94。
6H),0.59(m,1H),0.34(m,4H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:437.02;C23H31BO4S的元素分析计算值;
C:66.57,H:7.58,B:2.61,S:7.78;实测值C:66.55,H:7.59,B:2.62,S:7.77。
2H),1.11(s,6H)ppm。质量:ESI[M+Na]+:448.194;C21H27BF3O4N的元素分析计算值;C:59.38,H:6.45,B:2.59,F:13.40,N:3.29;实测值C:59.34,H:6.43,B:2.58,F:13.41,N:3.28。
8523)
混合物在室温搅拌9h。加入水(100mL)并搅拌所述混合物10min,通过CH2Cl2萃取水相。有机
相通过Na2SO4干燥,并在减压下蒸发。所生成的残余物通过硅胶柱色谱利用纯二氯甲烷作为
洗脱液纯化,提供分离的2-羟基-4,5-二甲氧基苯甲醛13(4.3g,87%),为黄色固体分离。Mp
105-107℃;1H NMR(CDCl3,400MHz):δ11.40(br.s,1H),9.70(s,1H),6.91(s, 1H),6.48(s,
1H),3.94(s,3H),3.88(s,3H)ppm。13C NMR(CDCl3,125MHz):194.0,159.3,157.3,142.9,
113.3,112.9,100.1,56.4,56.3.HRMS(ESI)m/z:C9H10O4+H+的[M+H]+计算值183.0657;实测值183.0653。
应完成之后,添加水,用二氯甲烷萃取。有机萃取液用盐水洗涤,通过无水Na2SO4干燥并在减
1
压下蒸发,所生成的产物14(2.15g,98%)为无色液体,不用纯化就用于进一步的反应。H
NMR(CDCl3,400MHz):δ10.34(s,1H),7.30(s,1H),6.77(s,1H),5.26(s,2H),3.95(s,3H),
3.88(s,3H),3.54(s,3H)ppm。13C NMR(CDCl3,125MHz):188.0,156.4,155.5,144.4,118.1,
108.2,99.9,95.4,56.4,56.2,56.1.HRMS(ESI)m/z:C11H14O5+H+的[M+H]+计算值227.0919;
实测值227.0897。
压浓缩以除去MeOH,添加水并用乙酸乙酯萃取,用盐水洗涤,通过无水Na2SO4干燥并减压蒸
发,提供无色液体15(0.99g,98%),所生成的产物不用纯化就用于进一步的反应。1H NMR
(200MHz,CDCl3):δ6.86(s,1H),6.75(s,1H),5.16(s,2H),4.65-4.62(d,J=5.29Hz,2H),
3.87(s,3H),3.86(s,3H),3.52(s,3H)ppm。13C NMR(CDCl3,100MHz):149.15,149.0,144.1,
122.1,112.56,101.3,96.0,60.7,56.3,56.1,55.9.HRMS(ESI)m/z:C11H16O5+Na+的[M+Na]+计算值251.0896;实测值251.0874。
流约2h。反应完成之后,减压除去反应溶剂并用醚洗涤,产生化合物16(1.69g,90%),为白
色无定形固体。Mp 240-242℃;1H NMR(CDCl3,400MHz):δ8.62(br.s,1H,),7.75-7.71(m,
3H),7.60-7.52(m,12H),7.03(s,1H),6.44-6.43(d,J=12.8Hz,1H),4.48-4.45(d,J=
12Hz,2H),3.69(s,3H),3.48(s,3H)ppm。13CNMR(CDCl3,125MHz):134.7,134.7,134.3,
130.0,129.9,113.9,113.90,101.9,101.9,56.3,55.9,25.3,24.8.HRMS(ESI)m/z:calcd +
for C27H26O3P的[M]计算值429.1620(-HBr);实测值429.1615(-HBr)。
液然后在冰浴中冷却并向所述溶液添加17g(106.25mmol)溴,搅拌1h之后,将含4.5g
(23.19mmol)二氢-β-紫罗兰酮17的10ml二噁烷滴入所述溶液,在室温下继续搅拌4h。过量
的次溴酸盐用10%亚硫酸氢钠中和并用二乙醚萃取溶液以除去残留的杂质。在通常条件下
用浓盐酸酸化所述碱性溶液并进行后处理,产生作为无色液体的18(4.1g,90.1%)。1H NMR
(CDCl3,400MHz):δ2.44-2.39(m,2H),2.37-2.31(m,2H),1.93-1.89(t,J=8Hz,2H),1.61(s,3H),1.58-1.54(s,2H),1.44-1.41(m,2H),1.00(s,6H)。13CNMR(CDCl3,100MHz):180.3,
135.4,128.5,39.7,34.9,34.7(多重融合峰),28.4,23.5,19.6,19.4。HRMS(ESI)m/z:
C12H20O2+H+的[M+H]+计算值197.1541;实测值197.1530。
在干燥条件下在圆底烧瓶中引入无水DCM中,并冷却到0℃。向其添加DCC(2.87g,
13.953mmol)和DMAP(0.56g,4.651mmol)并在室温下搅拌18h。减压蒸发DCM,粗制的反应混
合物溶解在THF中,向它添加三乙胺并回流3h。减压蒸发THF 并通过柱色谱5%乙酸乙酯:己
烷纯化,提供作为无色油的19(1.42g,93%)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ6.93(s,1H),6.85(s,
1H),6.20(d,J=0.6Hz,1H),3.81(d,6H),2.70-2.66(m,2H),2.34-2.30(m,2H),1.87-1.85
13
(t,J=6.1Hz,2H),1.58(s,3H),1.54-1.44(m,2H),1.51-1.49(m,2H),0.96(s,6H)。CNMR(CDCl3,100MHz):158.8,149.1,146.9,146.1,136.2,128.1,102.7,101.0,95.3,56.4,
56.2,39.7(多重融合峰),35.0,32.7,29.3,28.5,27.2,19.8,19.4(融合峰)。HRMS(ESI)m/z:C21H28O3+H+的[M+H]+计算值329.2117;实测值329.2099。
后用NaHCO3淬灭并通过乙酸乙酯萃取。有机层通过Na2SO4干燥并减压蒸发和通过柱色谱利
用5%乙酸乙酯:己烷纯化,提供作为无色油的20(0.9g,90%收率)。1H NMR(400MHz,CDCl3):
δ7.00(s,1H),6.97(s,1H),3.91(s,3H),3.89(s,3H),2.79-2.74(m,1H),2.72-2.65(m,1H),
2.42(d,J=13.0Hz,1H),2.06-1.91(m,2H),1.87-1.76(m,2H),1.50-1.63(m,2H),1.45-
1.39(m,2H),1.31(s,3H),0.97(s,3H),0.95(s,3H)。13CNMR(CDCl3,125MHz):151.2,149.2,
146.4,145.4,124.3,118.8,102.4,95.5,56.6,56.2,52.6,41.8,37.6,35.9,33.5,33.1,
24.9,21.8,21.3(融合峰),18.8。HRMS(ESI)m/z:C21H28O3+H+的[M+H]+计算值329.2117;实测值329.2105,C21H28O3+Na+的[M+Na]+计算值351.1936;实测值351.1931。
20分钟,向它添加硼酸三乙酯(0.45g,3.048mmol)并在室温下继续再搅拌1h。用氯化铵溶液
淬灭并通过乙酸乙酯萃取。减压浓缩并通过柱色谱利用6%乙酸乙酯:己烷纯化,提供作为
无色液体的21(1.043g,92%)。1H NMR(400MHz, CDCl3)δ7.18(s,1H),6.83(s,2H),3.96(s,
3H),3.93(s,3H),2.80-2.73(m,2H),2.42(d,J=12.0Hz,1H),2.03(m,2H,融合信号),1.89-
1.76(m,2H),1.73-1.66(m,2H),1.45-1.40(m,2H),1.32(s,3H),0.99(s,3H),0.96(s,3H)。
13
C NMR(CDCl3,100MHz)153.0,152.9,151.0,148.4,124.3,122.4,107.1,61.9,56.7,52.7,
41.8,36.1,33.5,33.2(融合峰),25.1,21.9,21.4,18.9,18.8。HRMS(ESI)m/z:C21H29BO5+H+的[M+H]+计算值372.2217;实测值372.2231。
然后用5分钟时间向其添加溶解在二氯甲烷中的化合物21(0.1g,0.268mmol)并在室温下搅
拌2h。过量的AlCl3通过用冰淬灭和通过二氯甲烷萃取而除去,然后通过柱色谱利用15%乙
酸乙酯:己烷纯化,提供作为无色液体的22(0.077g,85%收率)。1H NMR(500MHz,CDCl3):δ
7.10(s,1H),6.74(s,1H),6.48(br.s,1H),3.94(s,2H),2.80-2.71(m,2H),2.39(d,J=
10Hz,1H),2.20-2.03(m,2H),1.80-1.70(m,2H),1.54-1.51(m,2H),1.44-1.37(m,2H),1.30(s,3H),0.98(s,3H),0.95(s,3H)。13C NMR(CDCl3,125MHz):153.4,151.1,147.9,142.9,
124.3,118.1,114.1,105.1,52.6,41.8,37.7,36.0,33.5,29.5,25.0,21.9,21.4,18.9,
18.8;HRMS(ESI)m/z:C19H25BO5的[M+]计算值344.1795;实测值344.1761。
target of rapamycin suppression.Cancer Res 67:11300-8(2007))可用于测量范围广
泛的化合物对正常或癌细胞系体外生长 的作用。所述分析设立在96-孔平底聚苯乙烯微量
滴定板中。每孔在适当的生长培养基中悬浮3-5000个细胞,并且所述细胞添加到两个相同
孔(三个相同是优选的)。优选所述细胞在添加药物或试验剂之前添加到所述板中要求数量
的孔中。细胞添加到板中之后,将它放置在培养器上温育过夜,同时制备待测药剂。温育过
夜之后,向每组的两个相同孔添加规定浓度的药物或试验化合物并在CO2培养器中温育
48hr。这些化合物大多数溶解在二甲基亚砜(DMSO)中供最终添加。温育48hr之后,用等体积
的组织培养基稀释MTT储液(2.5μg/ml)并用多通道移液管直接向每孔添加20μl的这种溶
液。如同贴壁细胞方法那样,所述板返回所述培养器达至少4h的时间。温育4hr之后,所述板
在环境温度下以1000g离心10min,然后倒转所述板并吸去多余的培养基。添加150μl工作
DMSO以溶解所述MTT甲 产物。使用在可见光谱内具有可调节波长的标准微型读板器。在
570nm下得到的与特定浓度的试验试剂相对应的每三个相同的组的OD值转移到数据表程序
中。
合物E以指定浓度(0.01,0.1,1,10μM)对MCF-7、caco-2和HCT-115处理48h。在本研究中,化合物A和化合物E产生浓度依赖性的细胞增殖抑制。从细胞增殖的基于MTT的抑制中,观察到
化合物A的基于计算的细胞IC50值在乳腺(MCF-7)和结肠(caco-2)细胞系中为2.6μM和2.4μ
M,并算得化合物E在结肠(caco-2,HCT-115)和乳腺(MCF-7)中为5.6、3.7和3.1μM。这些结果
描述了化合物A和化合物E二者通过相对IC50值显示出抗结肠细胞增殖的更有效性,因此总
体对于结肠癌更有效。
Mammalian Target of Rapamycin Suppression.Cancer Res 67:(23).(2007))通过PI3激
酶活性/抑制剂检测试剂盒进行, 其中PI3激酶反应设置在用于抑制剂反应的谷胱甘肽涂
层条/板中。激酶和抑制剂在添加PIP2底物之前预温育10分钟。每孔添加5μL的5X激酶反应
缓冲液,然后再添加5μL/孔的PIP2底物。然后每孔添加蒸馏H2O,使得补足最终容积25μL/
孔。在室温进行1小时温育,然后用200μL的1XTBST/孔洗涤孔3次,然后用200μL的1XTBS/孔
洗涤2次。然后每孔添加100μL的底物TMB,然后在黑暗中保持显色5-20分钟。然而,监测显现
的蓝色以避免过度显色。每孔100μL终止溶液用于终止反应。记录450nm处的读数。
和估算,以便缩减用于进一步试验性目的的候选药物。用于本研究的liphagal、化合物A和
化合物E分别在变化的浓度下,即20、40、80、160、320和640nM,以剂量依赖性模式抑制PI3Kα酶活性。此外,观察到liphagal、化合物A和化合物E对PI3Kα的IC50为108、140和102nM,还测得化合物A对PI3Kβ的IC50为100nm(图4和5)。这种方式不仅将提高源特异性癌症药物发现过
程,而且还将节省交付的时间和资源。
(2003))通过荧光标记悬液中细胞的核、然后分析所述群中每个细胞的荧光性质来完成。所
述试验利用结肠人类癌细胞系caco-2进行。细胞以3x105细胞/毫升/孔的浓度接种在6孔板
中。板在 CO2培养器中温育过夜。温育过夜之后,以预定浓度添加试样,空出阴性和阳性对
照的孔并温育24hr。温育24hr之后,细胞被胰蛋白酶化并且利用微量移液器从每个孔吸取
试样并分别转移到15ml离心管中。管以3000rpm离心5min。丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在
1ml过滤的PBS中并以2000rpm离心5min。5min之后,丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在70%乙
醇中。细胞在4℃固定至少1小时(细胞在PI染色和流式细胞分析之前可以在-20℃下储存在
70%乙醇中)。细胞再次以2000rpm离心5分钟并通过以2000rpm离心5min在过滤的PBS中洗
涤两次。丢弃上清液,管以倒转位置放在棉纸上,直至所有上清液通过所述纸排走。每个采
集管在黑暗中添加1ml细胞周期试剂(CCR)。在流式细胞仪(BD Biosciences)上获取读数。
是测量细胞的DNA含量和分析作为细胞存活的基本过程的细胞周期。在本研究中,利用结肠
(caco-2)细胞系通过细胞周期阶段分布来评价化合物E对DNA含量的作用。除了测定相对细
胞DNA含量之外,流式细胞术还能够鉴定细胞周期的各阶段期间的细胞分布。暴露于不同浓
度的化合物E的细胞(2x106/毫升/6孔板)用碘化丙啶(PI)染色以测定DNA荧光和细胞周期
阶段分布。发现用1、5、7和9μM化合物E处理24h的sub-G0细胞百分比分别是62.5%、64.3%、
65.6%和70.2%。在相似条件下,liphagal处理的培养物显示出在sub-G0阶段的细胞为
64.9%。此外,细胞周期在G2/M阶段不受影响,表明化合物E处理不产生任何有丝分裂阻断
或引起细胞周期延迟。总的说来,随着浓度增加的每次处理在24h处理之后都引起sub-G0增
加。因此,显然化合物E以浓度依赖性方式引起早期细胞周期停滞(图6)。
Tumor-Promoting Properties in the Setting of Gain-of-Function p53Mutations,
2008Cancer Res;68:(6)(2008))。所述试验利用caco-2结肠人类癌细胞系进行。细胞以
2x105细胞/毫升/孔的浓度接种在6孔板中。板在CO2培养器中温育过夜。温育过夜之后,以预
定浓度添加试样,空出孔用于阴性和阳性对照并温育48hr。温育48hr之后,细胞被胰蛋白酶
化并分别转移到15ml离心管中。管以3000rpm离心5min。丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在
1ml过滤的PBS中并以2000rpm离心5min。5min之后,丢弃上清液并将沉淀团重悬浮在400ml
的1X结合缓冲液中,制成细胞悬液。从该悬液转移出100μl细胞到离心管中,然后添加10μl
碘化丙啶(PI)和5μl膜联蛋白-V抗体并在黑暗中温育30min。在黑暗中温育30min之后,通过
流式细胞仪(BD Biosciences)分析凋亡。
的细胞在晚期凋亡阶段并且相反发现在早期凋亡阶段的细胞群降低,在早期凋亡阶段的为
21.9%、23.4%、21.4%和14.7%。此外,在坏死阶段的细胞群没有这么多,表明化合物E处
理不产生任何早期凋亡和坏死。总的说来,晚期凋亡的细胞群存在浓度依赖性的净增加(图
7)。
24hr。处理之后,细胞在PBS中洗涤,然后在无水甲醇中在-20℃固定5min19。固定的细胞用含
10%山羊血清的PBS在室温下封闭20min以消除第二抗体的非特异性结合。细胞用多克隆兔
pAKT(丝氨酸473)第一抗体(在含0.5%BSA的PBS中1∶100;Santa Cruz Biotechnology)在
保湿室中在25℃下温育1h,然后洗涤并用第二抗体温育。洗涤细胞并在25℃下用德克萨斯
红结合的 山羊抗兔抗体(在含0.5%BSA的PBS中1:500;Santa Cruz Biotechnology)温育
45min。所述盖玻片安装在具有含4,6-二脒基-2-苯基吲哚的ProLong Gold抗褪色封固剂
(Invitrogen)的载玻片上,并通过荧光显微镜(Olympus,IX81)在Olympus 60x油浸物镜下
显现。也使用阴性对照,其中省略用第一抗体温育细胞。
malignancy.Cell signal 14:381-395)。在本研究中,观察到分别用4和3μM的liphagal和
化合物E对CACO-2处理24hr引起pAkt(Ser 473)的抑制。Akt的抑制因此导致凋亡。未处理的
细胞显示出细胞质中的pAKT(图8)。
phosnhatidyl inositol 3-kinase(PI3K)inhibitory analogues of the sponge
meroterpenoid Liphagal;J.Med.Chem.,2010,53(24),8523-8533页)提示,该类似物具有
更高的化学结构稳定性并提供了将这种骨架发展成先导临床前候选物的机会。作为我们正
在进行的开发同工型选择性PI3K抑制剂计划的一部分,我们想到利用由这种分子展现的生
物学活性证据,来制备基于这种修饰结构的化合物,将是有意思的。在这个方向上,我们开
始我们的工作,并计划用硼酸代替醛官能团。此外,为了达到纳摩尔效力,需要在liphagal
的芳环中的14-甲酰基-15,16-二羟基取代型式。还证明了没有C-14甲酰基似乎使
liphagane杂环体系不稳定,使得它更容易受到空气氧化和骨架重排,包括B环收缩。这种证
据提示让收缩的B环成为六元的C-8去甲基类似物必须最终负责活性,这支持了我们的设
想。因此,代替C-14处的甲酰基,我们设计了在这个位置没有甲酰基官能团但具有硼酸的收
缩B环类似物,假定该类似物将为所述结构提供更多的刚性。此外,利用硼酸 代替醛可以避
免缔合缺点。此外,硼具有生物模拟碳的能力并与活性位点的丝氨酸或组氨酸残基形成共
价加合物((a)Adams,J.A.;Behnke,M.;Chen,S.;Cruichshank,A.A.;Dick,L.R.;Grenier,L.;Klunder,J.M.;Ma,Y.T.;Plamondon,L.;Stein,R.L.Bioorg.Med.Chem.Lett.1998,98,
333.(b)Paramore,A.;Frantz,S.Nat.Rev.Drug Discovery2003,2,611)。
与关键氨基酸出色的H键相互作用,所述关键氨基酸在前面还报告为在PI3K-α的p110α活性
位点中参与抑制相互作用并将对接分数-8.08提高到超过1和2.12的关键氨基酸。还检查了
硼酸作为PI3K抑制剂的生物学潜力,显示了化合物之一、即化合物-AZ的PI3K-α同工型选择
性和出色的抑制活性(IC50 23nM)。