一种甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂及其制备方法和应用转让专利
申请号 : CN201410654587.8
文献号 : CN104396950B
文献日 : 2016-03-02
发明人 : 唐满仓 , 马玉明 , 叶龙江 , 米哲
申请人 : 陕西恒田化工有限公司
摘要 :
本发明涉及一种可有效防治农作物病毒病的甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂，以及所述水分散粒剂的制备方法和应用。所述水分散粒剂包含如下组分：甲基营养型芽孢杆菌母药1-40％、分散剂1-10％、润湿剂0.5-5％、崩解剂1-15％、粘结剂1-4％、载体加至100％；所述润湿剂为SUPRAGLLWP，所述分散剂为SUPRAGLL MNS/90，所述％为重量百分比。本发明配方中采用SUPRAGLL MNS/90作为分散剂、采用SUPRAGLLWP作为润湿剂，由于采用所述特定的分散剂和润湿剂，所制得的水分散粒剂质量性能指标检验其分散性、润湿性、悬浮率、摩擦损耗指标均有较大改善。
权利要求 :
1.一种甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂，其特征在于，所述水分散粒剂包含如下组分：甲基营养型芽孢杆菌母药1-40％、分散剂6％、润湿剂2.5％、崩解剂1-15％、粘结剂
1-4％、载体加至100％；所述润湿剂为SUPRAGILWP，所述分散剂为SUPRAGIL MNS/90，所述％为重量百分比。
2.根据权利要求1所述的水分散粒剂，其特征在于，所述崩解剂为硫酸铵、硫酸钠，碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铵、氯化铵、磷酸氢二铵中的一种或多种。
3.根据权利要求1所述的水分散粒剂，其特征在于，所述粘结剂为淀粉、聚乙二醇、吡咯烷酮、聚乙烯醇、尿素中的一种或多种。
4.根据权利要求1所述的水分散粒剂，其特征在于，所述载体为高岭土，活性白土，硅藻土，泥煤，轻质碳酸钙，白碳黑，叶腊石，滑石粉，方解石中的一种或多种。
5.根据权利要求1至4任一所述的水分散粒剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将按照用量将甲基营养型芽孢杆菌母药、分散剂、润湿剂、崩解剂和载体投入混合机中，混合均匀后粉碎，将粉碎后的物料与粘结剂的水溶液捏合；捏合后的物料经造粒机造粒；去除大于5mm和小于0.5mm的颗粒，烘干即可。
6.根据权利要求1至4任一所述的水分散粒剂用作杀细菌剂的应用。
说明书 :
一种甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂及其制备方法和应
用
技术领域
[0001] 本发明涉及农药领域，特别是杀菌剂领域，具体地涉及一种可有效防治农作物病毒病的甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂，以及所述水分散粒剂的制备方法和应用。技术背景
[0002] 甲基营养型芽孢杆菌(Bacillus methylotrophicus)是芽孢杆菌属中的一个种。革兰氏阳性，葡萄糖、阿拉伯糖、接触酶、脂肪酶、脲酶及氧化酶均呈阳性、好氧，杆状，具备运动能力。
[0003] 研究发现芽孢杆菌菌株中不存在常见的毒素基因(HBL、BcET、NHE、entFM)、鞘磷脂酶(Sph)、磷脂酶(PI-PLC)；也不与NHE、HBL抗体反应。认为分离自传统发酵食品芽孢杆菌菌株在安全性上是有保证的。
[0004] 在我国农业快速发展过程中，病虫危害是制约我国农业持续稳定发展的重要因素。近年来，我国农作物病害年平均发生面积超过1亿公顷，每年粮食的病虫危害损失约为3000多万吨，致使我国经济损失高达300多亿。据统计，我国被农药污染的农田达933万hm2以上，每年死于农药污染食品的为0.83万人，每年因农药污染造成的直接经济损失就高达160多亿元人民币。利用无公害农药防治植物病害，减少化学农药使用量和减轻农药污染，保证食品安全和发展有机农业已成为本世纪我国发展现代农业和有机农业当务之急。
[0005] 另一方面，近年来，随着作物品种、种植条件的改变，原有的一些并未引起太多重视的细菌性病害逐渐成为重要病害。例如，烟草青枯病、水稻白叶枯病、大白菜软腐病等细菌性病害危害越来越严重。
[0006] 芽孢杆菌因其安全性和能产生多种抗菌物质及酶的特性而受到生物防治工作者的偏爱。而且经培养发酵可加工成生物菌剂，开发应用潜力大。目前已有一些优良的芽孢杆菌菌株应用于生产实践。
[0007] 甲基营养型芽孢杆菌是芽孢杆菌的一种，具有高杀细菌活性、杀菌谱广及具有促生作用的环境友好型生物菌株。
发明内容
[0008] 本发明为解决上述技术背景中的不足，提供了一种有效防治烟草青枯病、水稻白叶枯病、大白菜软腐病等细菌性病害的水分散粒剂及其制备方法。
[0009] 为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案实现的。
[0010] 一种甲基营养型芽孢杆菌的水分散粒剂，其特征在于，所述水分散粒剂包含如下组分：甲基营养型芽孢杆菌母药1-40％、分散剂1-10％、润湿剂0.5-5％、崩解剂1-15％、粘结剂1-4％、载体加至100％；所述润湿剂为SUPRAGLLWP，所述分散剂为SUPRAGLL MNS/90，所述％为重量百分比。
[0011] 所述甲基营养型芽孢杆菌母药的制备和提取方法是按照中国专利201210579899、发明名称为“一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用”中所记载的方法来制得的。所述润湿剂SUPRAGLLWP和聚羧酸盐类分散剂SUPRAGLL MNS/90均可购自Rhodia公司。
[0012] 所述崩解剂为硫酸铵、硫酸钠，碳酸钠、碳酸氢钠、碳酸铵、氯化铵、磷酸氢二铵中的一种或多种；
[0013] 所述粘结剂为淀粉、聚乙二醇、吡咯烷酮、聚乙烯醇、尿素中的一种或多种；
[0014] 所述载体为高岭土，活性白土，硅藻土，泥煤，轻质碳酸钙，白碳黑，叶腊石，滑石粉，方解石中的一种或多种。
[0015] 优选地，所述润湿剂的用量为1—3％，更优选为2.5％；
[0016] 优选地，所述分散剂的用量为1—8％，更优选为6.0％；
[0017] 进一步地，本发明还涉及所述甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括将按照用量将甲基营养型芽孢杆菌母药、分散剂、润湿剂、崩解剂和载体投入混合机中，混合均匀后粉碎，将粉碎后的物料与粘结剂的水溶液(2％的水溶液)捏合；捏合后的物料经造粒机造粒；去除大于5mm和小于0.5mm的颗粒，烘干即可。不合适的颗粒经重新捏合后再造粒。
[0018] 进一步地，本发明还涉及所述甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂用作杀细菌剂的应用。
[0019] 与现有技术相比，本发明具有的优点和效果如下：
[0020] 1.本发明之水分散粒剂农药，无粉尘污染，环境友好，高杀植物细菌活性，无毒的优点。
[0021] 2.本发明配方中采用SUPRAGLL MNS/90作为分散剂、采用SUPRAGLLWP作为润湿剂，由于采用所述特定的分散剂和润湿剂，所制得的水分散粒剂质量性能指标检验其分散性、润湿性、悬浮率、摩擦损耗指标均有较大改善。
具体实施方式
[0022] 为使本发明的技术方案便于理解，以下结合具体试验例对甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂制备及其应用作以具体说明。
[0023] 实施例1.制备10％甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂杀菌药物(1000公斤)[0024] 甲基营养型芽孢杆菌制备：
[0025] 实施例所采用的润湿剂SUPRAGLLWP和聚羧酸盐类分散剂SUPRAGLL MNS/90均购自Rhodia公司；
[0026] 甲基营养型芽孢杆菌按照中国专利201210579899、发明名称为“一种甲基营养型芽孢杆菌的生物菌剂及其制备方法和应用”中所记载的方法来制得的。
[0027] 1-1常规配方(对比1)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为1％，即10公斤。并含有下述各种助剂，分散剂T36为5％、即50公斤，分散剂27003％，即30公斤；润湿剂十二烷基硫酸钠3％，即30公斤；崩解剂磷酸氢二铵3％,即30公斤；粘结剂聚乙二醇3％,即30公斤；载体白炭黑为140公斤，载体高岭土余量为680公斤。
[0028] 1-2新配方(本发明配方)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为1％，即10公斤。并含有下述各种助剂，分散剂SUPRAGLL MNS/90为8％、即80公斤；润湿剂SUPRAGLLWP为3.0％,即30公斤；崩解剂磷酸氢二铵3％,即30公斤；粘结剂聚乙二醇3％,即30公斤；载体白炭黑为140公斤，载体高岭土余量为680公斤。
[0029] 1-3对照配方(对比2)：除润湿剂为十二烷基硫酸钠外，其余与上述本发明配方相同；
[0030] 1-4对照配方(对比3)：除分散剂为T36外，其余与上述本发明配方相同；
[0031] 配制工艺为：将以上配方中计量好的物料投入混合机中，搅拌均匀，经气流粉碎机粉碎。将粉碎后的物料与粘结剂聚乙二醇的水溶液捏合，捏合成膏状后经造粒机造粒；用筛子将大于5mm和小于0.5mm的颗粒去除；合适的颗粒经干燥，检测合格后包装。不合适的颗粒经捏合机重新捏合后再造粒。
[0032] 上述4个配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验项目及指标见附表1从表 1可知，采用新的分散剂SUPRAGLL MNS/90和润湿剂SUPRAGLLWP制得的产品其分散性、润湿时间、悬浮剂和摩擦损耗性能指标均优于常规助剂所制得的产品。同时从作为对比的1-3对照配方或1-4对照配方可以看出，单独采用上述润湿剂或分散剂所制备的水分散粒剂，其各方面性能也远低于本发明的效果。
[0033] 表1 甲基营养型芽孢杆菌不同助剂配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验对照
[0034]质量指标 配方1-1 配方1-2 配方1-3 配方1-4 备注
分散性/％≥ 80 90 80 82 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 60 30 55 62 CIPACMT185
悬浮率/％≥ 90 96 92 91 CIPACMT184
摩擦损耗/g≤ 1.0 0.2 0.9 1.0 ASTM标准筛
分散性/％≥ 80 90 80 82 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 60 30 55 62 CIPACMT185
悬浮率/％≥ 90 96 92 91 CIPACMT184
摩擦损耗/g≤ 1.0 0.2 0.9 1.0 ASTM标准筛
[0035] 实施例2.制备40％甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂杀菌药物(1000公斤)[0036] 2-1常规配方(对比1)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为40％，即400公斤。并含有下述各种助剂，分散剂T50为8％、即80公斤；润湿剂十二烷基硫酸钠3％，即30公斤；崩解剂磷酸氢二铵3％,即30公斤；粘结剂聚乙二醇3％,即30公斤；载体白炭黑为140公斤，载体高岭土余量为290公斤。
[0037] 2-2新配方(本发明配方)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为40％，即400公斤。并含有下述各种助剂，分散剂SUPRAGLL MNS/90为10％、即100公斤；润湿剂SUPRAGLLWP为0.5％,即5公斤；崩解剂氯化铵10％,即100公斤；粘结剂尿素4％,即40公斤；载体滑石粉余量为355公斤。
[0038] 2-3对照配方(对比2)：除润湿剂为十二烷基硫酸钠外，其余与上述本发明配方相同；
[0039] 2-4对照配方(对比3)：除分散剂为T50外，其余与上述本发明配方相同；
[0040] 配制工艺同实施例1
[0041] 采用此配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验项目及指标见附表2从表2可知，采用分散剂SUPRAGLL MNS/90和SUPRAGLLWP制得的产品其分散性、润湿时间和悬浮剂性能指标均明显优于常规助剂所制得的产品。
[0042] 表2 甲基营养型芽孢杆菌不同助剂配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验对照
[0043]质量指标 配方2-1 配方2-2 配方2-3 配方2-4 备注
分散性/％≥ 85 95 70 85 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 60 40 50 50 GB/T5451
悬浮率/％≥ 80 98 85 85 GB/T14825-2006
摩擦损耗/g≤ 1.5 0.1 0.5 1.0 ASTM标准筛
分散性/％≥ 85 95 70 85 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 60 40 50 50 GB/T5451
悬浮率/％≥ 80 98 85 85 GB/T14825-2006
摩擦损耗/g≤ 1.5 0.1 0.5 1.0 ASTM标准筛
[0044] 实施例3.制备12％甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂杀菌药物(1000公斤)[0045] 3-1常规配方(对比1)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为12％，即120公斤。并含有下述各种助剂，分散剂T318％、即80公斤；润湿剂十二烷基硫酸钠5％,即50公斤；崩解剂硫酸钠15％,即150公斤；粘结剂吡咯烷酮1％,即10公斤；载体白炭黑为5％,即50公斤，载体轻质碳酸钙余量为540公斤。
[0046] 3-2新配方(本发明配方)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为12％，即120公斤。并含有下述各种助剂，分散剂SUPRAGLL MNS/90为10％、即100公斤；润湿剂SUPRAGLLWP为0.5％,即5公斤；崩解剂氯化铵10％,即100公斤；粘结剂尿素4％,即40公斤；载体滑石粉余量为635公斤。
[0047] 3-3对照配方(对比2)：除润湿剂为十二烷基硫酸钠外，其余与上述本发明配方相同；
[0048] 3-4对照配方(对比3)：除分散剂为T31外，其余与上述本发明配方相同；
[0049] 配制工艺同实施例1
[0050] 采用此配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验项目及指标见附表3从表3可知，采用分散剂SUPRAGLL MNS/90和润湿剂SUPRAGLLWP制得的产品其分散性、润湿时间和悬浮剂性能指标均明显优于常规助剂所制得的产品。
[0051] 表3 甲基营养型芽孢杆菌不同助剂配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验对照
[0052]质量指标 配方3-1 配方3-2 配方3-3 配方3-4 备注
分散性/％≥ 85 95 80 80 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 50 30 50 55 GB/T5451
分散性/％≥ 85 95 80 80 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 50 30 50 55 GB/T5451
[0053]悬浮率/％≥ 85 98 85 85 GB/T14825-2006
摩擦损耗/g≤ 1.3 0.1 0.6 1.0 ASTM标准筛
摩擦损耗/g≤ 1.3 0.1 0.6 1.0 ASTM标准筛
[0054] 实施例4.制备30％甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂杀菌药物(1000公斤)[0055] 4-1常规配方(对比1)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为30％，即300公斤。并含有下述各种助剂，分散剂27002％、即20公斤，分散剂NNO 6％，即60公斤；润湿剂LWET/F2％,即20公斤；崩解剂硫酸胺9％,即90公斤；粘结剂淀粉3％,即30公斤；载体硅藻土余量为480公斤。
[0056] 4-2新配方(本发明配方)：主成分甲基营养型芽孢杆菌为30％，即300公斤。并含有下述各种助剂，分散剂SUPRAGLL MNS/90为10％、即100公斤；润湿剂SUPRAGLLWP为0.5％,即5公斤；崩解剂氯化铵10％,即100公斤；粘结剂尿素4％,即40公斤；载体滑石粉余量为455公斤。
[0057] 4-3对照配方(对比2)：除润湿剂为LWET/F外，其余与上述本发明配方相同；
[0058] 4-4对照配方(对比3)：除分散剂为2700外，其余与上述本发明配方相同；
[0059] 配制工艺同实施例1
[0060] 采用此配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验项目及指标见附表4从表4可知，采用SUPRAGLL MNS/90和润湿剂SUPRAGLLWP制得的产品其分散性、润湿时间和悬浮剂性能指标均明显优于常规助剂所制得的产品。
[0061] 表4 甲基营养型芽孢杆菌不同助剂配方制得的水分散粒剂质量性能指标检验对照
[0062]质量指标 配方4-1 配方4-2 配方4-3 配方4-4 备注
分散性/％≥ 85 90 80 85 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 60 30 55 55 GB/T5451
悬浮率/％≥ 85 98 85 90 GB/T14825-2006
摩擦损耗/g≤ 2.0 0.5 1.0 1.5 ASTM标准筛
分散性/％≥ 85 90 80 85 雾状拖尾效果
润湿时间/s≤ 60 30 55 55 GB/T5451
悬浮率/％≥ 85 98 85 90 GB/T14825-2006
摩擦损耗/g≤ 2.0 0.5 1.0 1.5 ASTM标准筛
[0063] 甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对植物细菌病害的活性研究：
[0064] 1.室内生测试验：
[0065] 通过室内生测试验研究甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对烟草青枯病有很好的防治作用。
[0066] 1.1供试药剂：甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂(恒田公司制备)
[0067] 对照药剂：72％农用硫酸链霉素可湿性粉剂。(市购)
[0068] 1.2试验用土：
[0069] 灭菌的混配营养土V(土壤):V(营养土)＝1：l。
[0070] 1.2.1供试病原菌：烟草青枯病菌Ralstonia solanacearum，在TTC培养基上培养，制成1×106cfu/ml菌悬液，待用。
[0071] 1.3供试植物：在灭菌土培育烟苗至4～5叶期，将幼苗取出接种烟草青枯菌。接种量为5ml/株。
[0072] 1.4处理方法：
[0073] A.空白对照，用清水。
[0074] B.浸种：将甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂稀释200倍，在播种前把种子浸泡1天。
[0075] C.灌根：在烟草生长中后期，将甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂稀释200倍，72％农用硫酸链霉素可湿性粉剂2000倍液直接将药剂喷淋在植物茎基部。
[0076] 每处理设3次重复，每重复10株烟苗，处理移栽至装有灭菌土的苗钵中，处理放置于温室28～36℃条件下，15天后调查烟草植株发病情况，统计发病率和病情指数。计算防效。
[0077] 1.5试验结果及分析：
[0078] 通过浸种法可知甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂可有效地防治烟草青枯病菌种子传播病害。平均防效在93％以上。详见附表1
[0079] 通过灌根法可知甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂可以有效地防治烟草生长期青枯病害。平均防效在90％以上。详见附表2
[0080] 表1 甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂浸种防治烟草青枯病效果
[0081]
[0082]
[0083] 表2 甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂灌根防治烟草青枯病效果
[0084]
[0085] 2.甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂大田药效试验：
[0086] 2.1供试作物：
[0087] 烟草、水稻、大白菜。
[0088] 防治对象：烟草青枯病、水稻白叶枯病、大白菜软腐病。
[0089] 2.2病害分级及计算方法：
[0090] 分级方法：
[0091] 0级：全株无病
[0092] 1级：茎部偶有褪绿病斑或在条斑一侧有少数叶片凋萎
[0093] 3级：茎部黑色病斑。但未达到顶部，或病侧5％叶片凋萎
[0094] 5级：茎部黑色病斑达植株顶部。或病侧2/3叶片凋萎
[0095] 7级：病株茎部枯死
[0096]
[0097]
[0098]
[0099] 2.3甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂大田药效试验实施：
[0100] (1)、烟草药效试验：
[0101] 试验地：选在陕西宝鸡，供试地面积1.36亩，土质为轻壤土，有机质含量为1.01％，pH值7.7，所有试验小区栽培条件及管理措施一致。
[0102] 药剂处理：实验设甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂200倍液、72％农用硫酸链霉素可湿性粉剂和不施药清水共3个处理，每个处理4个重复，共12个小区，各小区随机排列，每个小区40m2小区间及试验地周围设置0.6m宽的隔离带。
[0103] 供试烟草种植：2013年4月5日进行播种，平均株距8cm。
[0104] 施药方法：播种后分别于2013年5月5日、15日和25日根灌一次，亩用药液500kg，喷药器械为工农——16型喷雾器，将喷头取下喷灌。
[0105] 当地气象条件：
[0106] 第一次施药(5月5日)晴，风力3级，气温15-25℃，相对湿度为80％。第二次施药(5月15日)阴，风力3级，气温15-23℃，相对湿度为80％。第三次施药(5月25日)多云，风力5级，最高气温14-25℃，相对湿度为80％。
[0107] 试验结果调查方法：最后一次施药后7天进行调查，每小区采用4点取样法，每点查20株，记录总株数和各级病株数。
[0108] 结果及分析：如下表3所示。
[0109] 表3 甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对烟草青枯病田间试验防治情况[0110]
[0111]
[0112] 田间药效试验结果表明，甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对烟草青枯病的平均防效达90％以上。试验过程中未发现供试药剂甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对烟草作物生长有任何不良影响。
[0113] (2)、水稻药效试验：
[0114] 试验地：
[0115] 选在陕西洋县，试验用地800m2(1.21亩)，土质为轻壤土，有机质含量为1.2％，pH值7.5，所有试验小区栽培条件及管理措施一致；
[0116] 药剂处理：本实验设甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂200倍液、咪鲜胺500倍液和不施药清水共3个处理，每个处理4个重复，共12个小区，各小区随机排列，每个小区60m2小区间及试验地周围设置0.5m宽的隔离带。
[0117] 水稻种植情况：2010年3月进行播种，平均株距7cm。
[0118] 施药方法：播种出苗后分别于2010年4月15日、5月5日和25日分别根灌一次，亩用药液500kg，喷药器械为工农——16型喷雾器，将喷头取下喷灌。
[0119] 当地气象条件：
[0120] 第一次施药(4月15日)当日少云，风力3级，最高气温14℃，最低气温1℃，相对湿度为30％。第二次施药(5月15日)当日阴，风力3级，最高气温19℃，最低气温3℃，相对湿度为30％。第三次施药(5月25日)当日少云，风力5级，最高气温23℃，最低气温10℃，相对湿度为20％。
[0121] 试验结果调查：最后一次施药后7天进行调查，每小区采用4点取样法，每点查20株，记录总株数和各级病株数。
[0122] 结果及分析：
[0123] 如下表4所示，其中，所有取样点都没有药害发生，经过田间小区试验表明，甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对水稻白叶枯病的平均防效达92.3％，高于咪鲜胺乳油的防效。
[0124] 表4 甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂对水稻白叶枯病田间试验防治情况[0125]
[0126]
[0127] (3)、白菜药效试验：
[0128] 试验地：
[0129] 选在陕西杨凌，试验用地800m2(1.21亩)，土质为轻壤土，有机质含量为1.07％，pH值7.2，所有试验小区栽培条件及管理措施一致。
[0130] 药剂处理：本实验设甲基营养型芽孢杆菌水分散粒剂200倍液、农用链霉素4000倍液和不施药清水共3个处理，每个处理4个重复，共12个小区，各小区随机排列，每个小