一种具有抗炎作用的裸花紫珠组分中药组合物

摘要

本发明属于中药领域，具体涉及一种具有抗炎作用的中药组合物，该组合物的成分均来自中药裸花紫珠，其具体由重量百分比为20～80％的裸花紫珠总黄酮和20～80％的裸花紫珠总苯丙素苷组成。所述的中药组合物的重量百分比优选为30～50％的裸花紫珠总黄酮和50～70％的裸花紫珠总苯丙素苷。该组合物具有疗效明确，协同作用明显等优点。

权利要求

1.一种具有抗炎作用的中药组合物，其特征在于，该组合物的成分均来自中药裸花紫珠，其具体由重量百分比为30～50%的裸花紫珠总黄酮和50～70%的裸花紫珠总苯丙素苷组成。

2.一种包含权利要求1所述中药组合物的药物制剂，其特征在于，所述中药组合物和药学上可接受的辅料制备成药物制剂。

3.根据权利要求2所述的药物制剂，其特征在于，所述药物制剂为口服制剂。

4.根据权利要求3所述的药物制剂，其特征在于，所述口服制剂所选用的辅料选自淀粉、预胶化淀粉、淀粉浆、β-环糊精、卡波姆、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、甘露醇、十二烷基硫酸钠、交联羧甲基纤维素钠、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、阿斯巴甜、甜橙香精、碳酸氢钠、碳酸钠、肠溶包衣粉中的一种或几种。

说明书

一种具有抗炎作用的裸花紫珠组分中药组合物

技术领域

[0001] 本发明属于中药领域，具体涉及一种裸花紫珠组分的中药组合物。

背景技术

[0002] 炎症是宿主生理防御的一个重要组成部分。为对各种刺激(例如感染或组织损伤)应答，免疫系统会向受影响的区域释放白细胞。然后这些白细胞通过各种机制攻击侵入的病原体，所述机制包括吞噬、释放毒性中间体(例如过氧基团)和特异性细胞介导的杀灭。

[0003] 炎症是对损伤、毒素、瘤形成或微生物侵入的局部化响应，其特征在于包括发红、发热、肿胀和疼痛在内的症状。炎症包括细胞、滲出和分子组分。细胞组分涉及从血管运动到发炎的组织中的白细胞。滲出组分涉及包含蛋白质例如纤维蛋白、细胞因子和抗体的流体的移动。分子组分包括多个系列的分子，包括细胞因子、前列腺素、一氧化氮、免疫球蛋白和细胞粘附分子。分子水平的炎症症状包括：1)细胞组分和代谢物的变化，包括离子通道、细胞因子、趋化因子、受体、细胞粘附分子、固有的结合分子、转录因子和包括ー氧化氮在内的信号转导分子；和2)循环中炎症性标记物的水平升高，包括：白细胞、红细胞沉降率、C反应蛋白、类风湿因子、免疫球蛋白E和包括肿瘤坏死因子α和白细胞介素6在内的细胞因子。

[0004] 过度的炎症或长的炎性过程可以引起相关器官的炎症性紊乱和功能异常。炎症性紊乱包括多种疾病：糖尿病、肥胖症、动脉粥样硬化、病毒病、白内障、再灌注损伤、癌症和肉状瘤病；感染后的脑膜炎和风湿热；风湿病，包括系统性红斑狼疮、骨关节炎、类风湿性关节炎；皮肤炎症性病症，包括各种形式的痤疮和红斑痤疮；和肠炎症性病症，包括肠易激综合征和克罗恩氏病。在这些各种疾病过程中的炎症性响应的向心性使得其调节是预防、控制或医治人类疾病中的主要因素。

[0005] 数十年来，治疗炎症疾病已经是全球制药工业的一个主要目标，并且已经开发出了众多类型的有用的治疗。例子包括皮质类固醇(范围包括天然、半合成和合成的药物，设计用于模拟皮质醇的作用，包括泼尼松龙、甲泼尼龙、地塞米松、倍他米松、氟替卡松等)、环氧合酶抑制剂(非选择性的或COX-1选择性的，例如吲哚美辛、柳氮磺吡啶和阿司匹林，近来则是COX-2选择性的，例如塞来考昔)、白三烯阻断剂(例如孟鲁司特)和抗-TNFs(例如TM TM改性的单克隆中和抗体，包括英夫利昔单抗(Remicade )和阿达木单抗(Humira )，TNF受TM
体融合蛋白例如依那西普(Enbrel )，以及小分子TNF-α合成抑制剂例如沙利度胺)。

[0006] 但是，不可避免的是，这些药物平衡了对病理学炎症的有益效果与对宿主防御的不希望有的免疫抑制作用之间的关系。一般而言，药物的抗炎效果越强，非故意的免疫抑制副作用 就越大。例如，皮质类固醇一般显示比其他药物例如环氧合酶抑制剂更大的抗炎效力，是很多严重的炎性疾病(例如，哮喘、牛皮癣、湿疹、肠易激综合征和其他很多疾病)的第一线治疗药。必须慎重衡量这种优良的抗炎效力与较大的副作用负担之间的利害关系，必须小心监测治疗的持续时间，以对患者实现净效益。鉴于西药抗炎会带来的明显副作用，提供副作用小的抗炎药物为大众所需。

[0007] 裸花紫珠(Callicarpa nudiflora Hook.et Arn.)为马鞭草科(Verbenaceae)紫珠属植物，主产于我国海南，是一种海南地道药材，我国广东、广西也有分布。目前有研究表明裸花紫珠药材的主要成分为黄酮类、鞣质、萜类、挥发油类等，其中萜类和黄酮能增加血小板的数量，缩短出血和凝血时间，对纤溶系统具有显著的抑制作用，收缩血管、止血效果显著，对炎症早期的渗出、肿胀有明显的抑制作用，加快创面渗出的吸收，促进伤口的愈合，对金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、肺炎双球菌、绿脓杆菌等均有较强的抑菌作用；而鞣质能使创面的微血管收缩，具有局部止血作用。临床上常用于治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，消化道出血等疾病。

[0008] 国内外对紫珠属植物包括裸花紫珠化学成分研究的报道较少，其化学成分主要有黄酮类、萜类、鞣质和挥发油类等。目前技术是将裸花紫珠叶采用水煎煮提取的方法得到浸膏后加入辅料制成片剂或者胶囊等口服制剂，用于治疗细菌感染引起的炎症，急性传染性肝炎，呼吸道及消化道等腔道出血等症，疗效确切。但存在服用剂量大，有效成分不明确、质量标准可控性差等缺点，难于满足药物“安全、有效、可控、稳定”的要求。目前，尽管有多种剂型方便了患者的使用，但仅是简单的剂型转换，在技术上未有实质上的创新之处，尚不能用科学的方法揭示其药效物质基础与作用机理，难于被国际市场所接受。

发明内容

[0009] 为解决该成药存在的上述缺陷，本发明对裸花紫珠叶中的有效部位进行了提取。并分别对不同组分的化学成分进行了分析，并进行了活性试验。根据各个组分活性试验的结果，对裸花紫珠提取物中的各个组分含量进行了优化，从而得到一种疗效明确，协同作用明显的源自裸花紫珠提取物的中药组合物。

[0010] 本发明的一个目的是提供一种具有抗炎作用的中药组合物，该组合物的成分均来自中药裸花紫珠，其具体由重量百分比为20～80％的裸花紫珠总黄酮和20～80％的裸花紫珠总苯丙素苷组成。

[0011] 在本发明进一步地实施方案中，所述的中药组合物的重量百分比优选为30～50％的裸花紫珠总黄酮和50～70％的裸花紫珠总苯丙素苷。

[0012] 本发明的中药有效部位提取物可用现有技术获得，也可本发明列出的方法进行制备。

[0013] 裸花紫珠总黄酮的制备：取5kg裸花紫珠药材，加稀酮100kg，浸泡40分钟，加热煮沸60分钟，取出煎液，药渣再煎2次，每次加水50kg，煮沸60分钟，合并三次煎液，过滤，2
滤液通过比表面积为350～450m/g、骨架密度为1～1.2g/ml，平均孔径为35～65nm，空隙率为60～68％的AB-8型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1∶10，弃去流出液，用6倍柱体积的水洗涤柱体，弃去洗涤液，用90％乙醇洗脱至洗脱液中无黄酮检出。
收集洗脱液，回收乙醇后减压浓缩至相对密度为1.08，冷冻干燥，检验分装即得裸花紫珠总黄酮。

[0014] 裸花紫珠总苯丙素苷的制备：裸花紫珠药材切段，取5kg，投入微波提取罐，加40kg水微波提取30分钟，提取两次，合并提取液滤过用截留分子量2000的中空纤维素膜超滤，收集透过液加入截留分子量为300的中空纤维素膜系统浓缩。浓缩液加入活性炭柱(装300g颗粒活性炭)，吸附结束后，取4BV50％的乙醇溶液洗脱杂质，再用5BV90％乙醇洗脱目标成分，收集目标成分，减压浓缩，真空干燥得总苯丙素苷。

[0015] 本发明的另一个目的是提供一种含有所述中药组合物的药物制剂，本发明中药组合物可以根据需要和药学上可接受的辅料制备成合适的药物制剂用于炎症的治疗，如口服制剂、注射制剂等。

[0016] 所述药物制剂优选为口服制剂，所述口服制剂选自片剂、胶囊、缓释片剂、丸剂、颗粒剂、分散片、散剂。所述口服制剂所选用的辅料选自淀粉、预胶化淀粉、淀粉浆、β-环糊精、卡波姆、微晶纤维素、羟丙基甲基纤维素、低取代羟丙基纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙二醇(PEG)、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、乙基纤维素、甘露醇、十二烷基硫酸钠、交联羧甲基纤维素钠、乳糖、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、交联聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁、滑石粉、微粉硅胶、阿斯巴甜、甜橙香精、碳酸氢钠、碳酸钠、肠溶包衣粉中的一种或几种。上述制剂的所用辅料及制备方法均可采用其常规的辅料和制备方法制得。

[0017] 本发明还提供所述中药有效部位组合物的用途，即该中药有效部位组合物在制备治疗消炎止血药物中的应用。所述的医药用途中，根据动物病情以及用药部位可以将上述药物组合物制备成合适的药物制剂以方便用药，这在本领域技术人员掌握的技术范围之内。例如，将对小鼠痛经的治疗方案应用于人身上，所有药物对人的有效剂量可以通过该药物对小鼠的有效剂量进行换算，这对于本领域的普通技术人员来说是显而易见的。

[0018] 一般来讲，目前现有技术中均采用裸花紫珠单一有效部位作为药物应用于临床；而本发明发现采用单一有效部位在活性试验及临床的疗效上有时不如药材的水提物；这是因为单一有效部位虽然通过现代分离手段富集了中药中结构类似的相关化合物，但是忽略了药材中不 同类型物质可能发生的协同作用，本发明通过大量的活性试验研究，对裸花紫珠不同有效部位的重量比进行适当调整，从而使最后获得的药物组合物在抗炎方面达到最佳的协同作用，从而获得更高的疗效。采用上述技术方案后，本发明的中药组合物具有有效物质明确、疗效确切，副作用小、服用方便等优点。

具体实施方式

[0019] 下面将进一步通过举例的详细说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

[0020] 实施例1裸花紫珠各有效部位的制备

[0021] 裸花紫珠总黄酮的制备：取5kg裸花紫珠药材，加稀酮100kg，浸泡40分钟，加热煮沸60分钟，取出煎液，药渣再煎2次，每次加水50kg，煮沸60分钟，合并三次煎液，过滤，2
滤液通过比表面积为350～450m/g、骨架密度为1～1.2g/ml，平均孔径为35～65nm，空隙率为60～68％的AB-8型聚苯乙烯类大孔吸附树脂柱，树脂柱的径高比为1∶10，弃去流出液，用6倍柱体积的水洗涤柱体，弃去洗涤液，用90％乙醇洗脱至洗脱液中无黄酮检出。
收集洗脱液，回收乙醇后减压浓缩至相对密度为1.08，冷冻干燥，检验分装即得裸花紫珠总黄酮159g。

[0022] 裸花紫珠总苯丙素苷的制备：裸花紫珠药材切段，取5kg，投入微波提取罐，加40kg水微波提取30分钟，提取两次，合并提取液滤过用截留分子量2000的中空纤维素膜超滤，收集透过液加入截留分子量为300的中空纤维素膜系统浓缩。浓缩液加入活性炭柱(装300g颗粒活性炭)，吸附结束后，取4BV50％的乙醇溶液洗脱杂质，再用5BV90％乙醇洗脱目标成分，收集目标成分，减压浓缩，真空干燥得总苯丙素苷101g。

[0023] 实施例2-7中药组合物的制备

[0024] 将实施例1制备的各有效部位按下表比例混匀即可。

[0025](％) 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5 实施例6 实施例7
裸花紫珠总黄酮 10 20 30 40 80 90
裸花紫珠总苯丙素苷 90 80 70 60 20 10

[0026] 实施例6药效学实验

[0027] (一)裸花紫珠组合物对LPS诱导的系统性炎症应答中产生的细胞因子的调控[0028] 使用不到致死量的LPS-诱导的内毒素血症分析裸花紫珠组分组合物的体内全面化的抗炎 性质。在该分析中，使用细菌性内毒素(LPS)给予小鼠非特异性促炎症攻击，通过测定中枢促炎症细胞因子TNF-α、IL-1和IL-2的血清水平来确定药物对系统性炎症应答的影响程度，TNF-α、IL-1和IL-2正常情况下在血中是含量较低，但是在对各种各样的炎症刺激子应答时迅速增多。尽管它本身不是任何人炎性疾病的特别贴切的模型，但我们仍然选择了该模型，因为上述细胞因子已知在很多炎症疾病中是非常重要的。因此，抑制TNF-α、IL-1和IL-2产生的药物已经在临床中用于治疗各种各样的这些疾病。因此，在该模型中证明细胞因子抑制活性在临床中在各种各样的疾病中用于抗炎效果是高度可预示的。

[0029] 对小鼠(成年雌性CD-1小鼠，每组6只)进行灌胃给药，给药七天。在LPS攻击前30分钟最后一次给药，然后用腹膜内注射750μg的细菌LPS来攻击小鼠的免疫反应，2小时后处死。通过心脏穿刺从末端出血中制得血清，通过ELISA(R&D Systems)确定TNF-α、IL-1和IL-2的浓度。在各实验中，6只小鼠的一组不接受LPS，作为阴性对照，另一组仅接受LPS(模型组)，各给药组的抑制率按如下公式计算：

[0030] 抑制率＝(模型组细胞因子浓度-给药组细胞因子浓度)/(模型组细胞因子浓度-对照组细胞因子浓度)×100％

[0031] 具体结果如下：

[0032]

[0033]

[0034] 所述的裸花紫珠提取物是通过专利文献CN102205000B所公开的方法获得的，具体参见其说明书中的实施例1。

[0035] 协同作用计算方法：采用金正均q值法进行判定，q值由以下的公式求得：q＝PA+B/(PA+PB-PA×PB)。式中PA、PB和PA+B分别为A药组、B药组和两药联用组治疗率。q＜1说明两药合用后产生拮抗作用；q＞1，说明两药合用后产生协同作用，q＝1说明两药合用后产生相加作用。具体结果如下：

[0036]q值 TNF-α IL-1 IL-2
实施例2 1.01 1.05 1.12
实施例3 1.34 1.33 1.54
实施例4 1.46 1.52 1.87
实施例5 1.49 1.51 1.93
实施例6 1.37 1.32 1.32
实施例7 1.10 1.08 1.06

[0037] (二)药物对小鼠金黄色葡萄球菌肺炎的影响

[0038] C57BL/6J小鼠(雄性，18-22g)经乙醚麻醉后，经鼻给予30μl金葡菌悬液(金葡8
菌8325-4)，小鼠平躺直至苏醒，建立小鼠金葡菌肺炎的模型。致死试验给予4×10CFUs的金葡菌，分别记录小鼠感染金葡菌24h、48h和72h后的死亡率

[0039]

[0040]

[0041] (三)药物对体外炎症细胞因子的抑制活性研究

[0042] 小鼠巨噬细胞RAW264.7培养于含10％热灭活(56℃，30min)胎牛血清(FBS)、100U/mL青霉素钠、100μg/mL链霉素的RPMI1640培养液中，37℃(CO2)＝5％的恒温培养
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箱中孵育生长。用RPMI1640培养液将小鼠巨噬细胞RAW264.7稀释至5×10cells/mL，接种于96孔细胞培养板中，每孔加入200μL细胞悬浮液。CO2培养箱中培养1h后，每孔加入LPS(1μg/mL)和不同浓度的测试药物0.4μL，同时设LPS组(不加入被测试样品)和空白对照组(DMSO)，每个样品设3个平行孔。在37℃CO2恒温培养箱中培养6h后吸取培养液上清，按照ELISA试剂盒 说明书方法进行标准曲线绘制和样品测定。具体结果如下：

[0043] 抑制率＝(模型组细胞因子浓度-给药组细胞因子浓度)/(模型组细胞因子浓度-对照组细胞因子浓度)×100％

[0044]