一种胺基取代Bouchardatine衍生物及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种胺基取代Bouchardatine衍生物及其制备方法和应用，所述衍生物结构式如式(I)所示： 其中：R为-(CH2)nR1，n＝0、1、2、3或4；R1为取代苯基、杂环基、取代氨基、C1-6的脂肪烷基、C3-6环烷基或羟基；本发明提供的胺基取代Bouchardatine衍生物能够显著阻断前脂肪细胞3T3-L1的分化成脂过程，减少3T3-L1脂肪细胞内的脂质及HepG-2细胞内胆固醇含量，具有抗肥胖症及减轻脂肪肝生成效果。

权利要求

1.一种胺基取代Bouchardatine衍生物，其特征在于，结构式如式(I)所示：其中：R为-(CH2)nR1，n＝0、1、2、3或4；

R1独立地选自：

(1)被1个或多个R2取代的取代苯基；

(2)五元或六元含氮或含氮氧杂环基；

(3)被1个或多个R3取代的取代氨基；

(4)C1-6脂肪烷基或C3-6环烷基；

(5)羟基；

(6)氢；

R2独立地选自：

(1)被1个或多个R4取代的取代氨基；

(2)卤基；

(3)C1-3脂肪烷基；

(4)氢；

R3为C1-4脂肪烷基；

R4为C1-3直链烷基。

2.如权利要求1所述的衍生物，其特征在于，所述R1独立地选自：(1)被1个或多个R2取代的取代苯基；

(2)五元或六元含氮或含氮氧杂环基；

(3)被1个或多个R3取代的取代氨基；

(4)C1-6脂肪烷基或C3-6环烷基；

(5)羟基；

(6)氢；

R2独立地选自：

(1)被1个或多个R4取代的取代氨基；

(2)氯基；

(3)C1-3脂肪烷基；

(4)氢；

R3为C1-4脂肪烷基；

R4为C1-3直链烷基。

3.如权利要求1或2所述的衍生物，其特征在于，所述R1独立地选自：(1)被1个R2取代的取代苯基；

(2)吗啡啉基，吡咯基，甲基哌嗪基，哌啶基；

(3)N,N-二甲基氨基,N,N-二乙基氨基；

(4)C1-4脂肪烷基或环戊基；

(5)羟基；

(6)氢；

R2独立地选自：

(1)N,N-二甲基氨基或N,N-二乙基氨基；

(2)氯基；

(3)C1-3脂肪烷基；

(4)氢。

4.如权利要求1、2或3所述的衍生物的制备方法，其特征在于，所述合成步骤如下：S1：邻氨基苯甲酰胺与原丙酸三乙酯反应得到化合物1S2：化合物1经溴化后得到化合物2S3：化合物2再与苯肼经取代、消除反应生成亚胺，然后再与一分子苯肼反应生成化合物3S4：化合物3经PPA催化的Fischer反应得到含有吲哚环结构特征的化合物4S5:化合物4再与DMSO-H2O及乙酸铵反应，并在吲哚的3-位引入甲酰基得到化合物5S6:将化合物5与不同的胺反应生成希夫碱，得到所述胺基取代Bouchardatine衍生物。

5.如权利要求4所述的衍生物的制备方法，其特征在于，所述S3步骤中化合物2与苯肼反应的摩尔比为1:3～5。

6.如权利要求4所述的衍生物的制备方法，其特征在于，所述S5步骤中反应采用氮气保护进行。

7.如权利要求4所述的衍生物的制备方法，其特征在于，所述S5步骤中乙酸铵与化合物

4反应的摩尔比为2～6：1，所述DMSO-H2O溶液中DMSO与H2O的体积比为10～20:1。

8.如权利要求1至3任意一项权利要求所述的衍生物在制备抗肥胖症和减轻脂肪肝生成的药物中的应用。

9.如权利要求8所述的应用，其特征在于，所述药物还包括药学上可接受的盐或载体。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述药物为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。

说明书

一种胺基取代Bouchardatine衍生物及其制备方法和应用

技术领域

[0001] 本发明涉及Bouchardatine技术领域，更具体地，涉及一种胺基取代Bouchardatine衍生物及其制备方法和应用。

背景技术

[0002] 肥胖症，一类与多种代谢类型疾病的密切相关的新型疾病。肥胖症的发生是由于机体能量代谢失衡而介导机体代谢紊乱的过程。当机体摄入的能量多余机体消耗的能量，富余的能量则以脂肪的形式储存于体内，促进肥胖症的发生。目前，世界卫生组织对肥胖的判定均是基于身体质量指数(Body Mass Index，BMI)，即BMI≥30kg/m2时则定义为肥胖。随着物质生活水平的提高，肥胖症发生率的增多，肥胖症的发病机制研究以及肥胖症的治疗药物研究，受到科学研究者们广泛重视。

[0003] 目前，全球肥胖人口正处于急剧增加的阶段，其中以青少年为主(18岁以下)。据世界卫生健康组织统计，2011年青少年肥胖人口数目达12亿，约占10％；2012年青少年肥胖人口数则增至15亿；2013年，该项数值则升至17亿。而在中国，近几年来我国肥胖人口的增长速率等同于欧美等国家过去30年的增长速率，主要以青少年为主(<18岁)。在全球肥胖症广泛存在的情形下，针对肥胖症的有效治疗药物研发则相对滞后。曾获准用于治疗肥胖症的药物西布曲明和奥利司他均存在严重的副作用，前者已遭退市，后者市场前景堪忧。而目前世界范围内可供选择的抗肥胖症药物很少。临床上采用药物的主要有中枢神经类药物如盐酸劳卡色林，去甲肾上腺素再摄取抑制剂如盐酸芬特明/盐酸芬特明-托吡酯复方胶囊剂等。上述药物临床使用表明，抗肥胖效果有限，药物副作用明显，限制了抗肥胖药物的使用。因此，研究开发药效更好，安全性更高的抗肥胖药物已成为目前研究热点之一。

[0004] 研究表明，肥胖症的形成主要是由于机体内代谢紊乱导致脂肪过度形成，并抑制脂肪动员氧化分解能力。脂肪的形成主要是两方面因素共同作用的结果：1)糖脂代谢平衡破坏，合成代谢增强，分解代谢减弱；2)分化调控因子诱导多潜能/单能干细胞定向分化形成脂肪细胞，如表皮成纤维细胞；因此，抑制脂肪细胞分化或促进糖脂分解代谢，从而减少脂质累积，是发展抗肥胖症药物的主要基本策略。

[0005] 天然产物Bouchardatine作为一类β-吲哚喹唑啉酮生物碱，是从植物Bouchardatia neurococca分离得到，其结构为喹唑啉酮的2-位与吲哚的2-位相连构成。现代研究表明，Bouchardatine具有广泛的生理活性，如抗癌、抗病毒、抗结核等。

[0006] 发明人研究发现，Bouchardatine在一定浓度下能抑制脂肪酸合成如10μM浓度下脂质含量约降低23％。因此，我们基于Bouchardatine碱结构进行吲哚结构的3位修饰，期望合成得到抗肥胖效果更好、毒性更小的先导化合物。

发明内容

[0007] 发明人发现，天然产物Bouchardatine具有一定的抑制脂肪细胞分化和脂质蓄积的活性，是一个具有潜在发展前景的抗肥胖症药物先导结构。发明人在Bouchardatine结构基础上进行了修饰和优化研究。主要是将8号位的醛基与链状结构特点的胺或者芳香胺反应得到希夫碱，目的是提高目标化合物与作用靶点的相互作用能力和对相关通路的化学干预效果，改善化合物的水溶性和生物利用度等成药性质。

[0008] 本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种胺基取代Bouchardatine衍生物。

[0009] 本发明还提供上述衍生物的制备方法以及应用。

[0010] 本发明通过以下的技术方案实现上述技术目的：

[0011] 本发明提供了一种胺基取代Bouchardatine衍生物，结构式如式(I)所示：

[0012]

[0013] 其中：R为-(CH2)nR1，n＝0、1、2、3或4；

[0014] R1独立地选自：

[0015] (1)被1个或多个R2取代的取代苯基；

[0016] (2)五元或六元含氮或含氮氧杂环基；

[0017] (3)被1个或多个R3取代的取代氨基；

[0018] (4)C1-6脂肪烷基或C3-6环烷基；

[0019] (5)羟基；

[0020] (6)氢；

[0021] R2独立地选自：

[0022] (1)被1个或多个R4取代的取代氨基；

[0023] (2)卤基；

[0024] (3)C1-3脂肪烷基；

[0025] (4)氢；

[0026] R3为C1-4脂肪烷基；

[0027] R4为C1-3直链烷基。

[0028] 优选地，所述R1独立地选自：

[0029] (1)被1个或多个R2取代的取代苯基；

[0030] (2)五元或六元含氮或含氮氧杂环基；

[0031] (3)被1个或多个R3取代的取代氨基；

[0032] (4)C1-6脂肪烷基或C3-6环烷基；

[0033] (5)羟基；

[0034] (6)氢；

[0035] R2独立地选自：

[0036] (1)被1个或多个R4取代的取代氨基；

[0037] (2)氯基；

[0038] (3)C1-3脂肪烷基；

[0039] (4)氢；

[0040] R3为C1-4脂肪烷基；

[0041] R4为C1-3直链烷基。

[0042] 更优选地，所述R1独立地选自：

[0043] (1)被1个R2取代的取代苯基；

[0044] (2)吗啡啉基，吡咯基，甲基哌嗪基，哌啶基；

[0045] (3)N,N-二甲基氨基,N,N-二乙基氨基；

[0046] (4)C1-4脂肪烷基或环戊基；

[0047] (5)羟基；

[0048] (6)氢；

[0049] R2独立地选自：

[0050] (1)N,N-二甲基氨基或N,N-二乙基氨基；

[0051] (2)氯基；

[0052] (3)C1-3脂肪烷基；

[0053] (4)氢。

[0054] 所述R1为N,N-二甲基氨基、N,N-二乙基氨基、吗啡啉基、吡咯基、环戊基、哌啶基、甲基哌嗪基、不含N的脂肪末端烃或芳香苯基。

[0055] 本发明所述衍生物合成过程如下：

[0056]

[0057] 具体合成步骤如下：

[0058] S1：邻氨基苯甲酰胺与原丙酸三乙酯反应得到化合物1

[0059] S2：化合物1经溴化后得到化合物2

[0060] S3：化合物2再与苯肼经取代、消除反应生成亚胺，然后再与一分子苯肼反应生成化合物3

[0061] S4：化合物3经PPA催化的Fischer反应得到含有吲哚环结构特征的化合物4[0062] S5:化合物4再与DMSO-H2O及乙酸铵反应，并在吲哚的3-位引入甲酰基得到化合物5

[0063] S6:将化合物5与不同的胺反应生成希夫碱，得到所述胺基取代Bouchardatine衍生物。

[0064] 优选地，所述S3步骤中化合物2与苯肼反应的摩尔比为1:3～5。

[0065] 优选地，所述S5步骤中反应采用氮气保护进行。

[0066] 优选地，所述S5步骤中乙酸铵与化合物4反应的摩尔比为2～6：1，所述DMSO-H2O溶液中DMSO与H2O的体积比为10～20:1。

[0067] 本发明还提供所述Bouchardatine衍生物在制备抗肥胖症和减轻脂肪肝生成的药物中的应用。

[0068] 进一步地，本发明所述药物还包括和其药学上可接受的盐或载体。

[0069] 更进一步地，所述药物为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂。

[0070] 本发明还提供了上述胺基取代Bouchardatine衍生物的抑制脂肪生成和积累以及减轻脂肪肝生成能力的活性的研究结果：

[0071] 细胞实验结果表明，本发明提供的胺基取代Bouchardatine不仅能够显著性地减少3T3-L1小鼠脂肪细胞内甘油三酯含量，特别地，通过对比Bouchardatine天然产物与SYS-S2降脂活性，发现化合物SYS-S2降脂活性提高了约11倍。并且还能够减少HepG-2细胞内胆固醇含量以及油酸钠诱导的人肝癌细胞株HepG-2细胞内甘油三酯累积，例如抑制人肝癌细胞株HepG-2细胞内甘油三酯累积的EC50＝18.7±0.74μM，这显示了本发明所提供的Bouchardatine衍生物的抗肥胖症与减轻脂肪肝生成作用可能是通过两种途径：1)抑制细胞内脂肪生成而减少脂肪积累，2)抑制外源性脂肪酸摄取而促进内源性脂肪动员来减少脂质与胆固醇累积，达到治疗肥胖症和减轻脂肪肝生成的效果。

[0072] 通过对化合物SYS-S2降脂机制研究发现，化合物SYS-S2可显著性的下调脂肪分化相关调控因子的表达(如PPARγ,C/EBPγ,SREBP-1c)以及脂肪生成的关键调节酶(ACC,FAS，SCD-1)。其次，我们还发现化合物SYS-S2能够激活AMPK通路以及抑制未折叠蛋白响应通路(unfolded protein response,UPR)。这些结果与其抗肥胖症的治疗作用效果相一致。

[0073] 动物实验结果表明，化合物SYS-S2急毒毒性的IC50大于100mg/kg，远远高于有效剂量窗口。且化合物SYS-S2在不影响小鼠摄食条件下，可有效的减少白色脂肪组织重量，并可显著性的降低血浆中甘油三酯，游离脂肪酸及低密度脂蛋白含量，这一实验结果与细胞水平的研究结果相符合。其次，化合物SYS-S2药学性质稳定，膜通透性好，生物利用率较高，表明SYS-S2具有良好的成药性。

[0074] 本发明还提供了一种抗肥胖药物，该类药物具有减少脂肪积累、减轻肥胖、缓解脂肪肝等功效，可用于治疗肥胖症以及肥胖引起的糖尿病、心血管疾病等相关疾病。该类药物含有上述的胺基(链)取代Bouchardatine衍生物以及药学上可接受的辅助剂。该药物可以制成注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、悬浮剂或乳剂的形式使用。其给药途径可为口服，经皮，静脉或肌肉注射。

[0075] 药理学和动物实验证明，本发明所涉及的胺基取代Bouchardatine衍生物，比天然的Bouchardatine具有更好的抗肥胖症和减轻脂肪肝生成能力，成药性也得到显著改善，具有进一步开发成为抗肥胖症新药的前景。

[0076] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0077] 本发明提供的胺基取代Bouchardatine衍生物能够显著阻断前脂肪细胞3T3-L1的分化成脂过程，减少3T3-L1脂肪细胞内的脂质及HepG-2细胞内胆固醇含量，并且能够减少游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞内脂质的积累，并且安全性高，成药性好。

附图说明

[0078] 图1：本发明提供的Bouchardatine衍生物对3T3-L1脂肪细胞脂肪累积的影响(化合物浓度均为1μM)

[0079] 图2：Bouchardatine天然产物与衍生物SYS-S2以浓度梯度依赖性的方式减少3T3-L1细胞的脂质累积对照图。

[0080] 图3：本发明提供的Bouchardatine衍生物对3T3-L1细胞分化与基础对照组BM，DMSO分化对照组的细胞形态对比图(所述细胞形态均为3T3-L1细胞分化第6天，显微镜40倍视野下)

[0081] 图4：本发明提供的Bouchardatine衍生物对人肝癌细胞HepG-2胆固醇含量的影响(化合物浓度均为1μM)。

[0082] 图5：化合物浓度均为1μM对油酸钠诱导人肝癌细胞HepG-2脂质累积的影响(化合物浓度均为10μM)。

具体实施方式

[0083] 下面结合具体实施例进一步详细说明本发明。除非特别说明，本发明采用的试剂、设备和方法为本技术领域常规市购的试剂、设备和常规使用的方法。

[0084] 实施例1：化合物1的合成

[0085] 50mL单口瓶中投入邻氨基苯甲酰胺(1.36g，10mmol)，加入原丙酸三乙酯10mL，将温度调至155℃反应19h，点板显示反应完全，有两个点。将反应液冷却至室温，析出少量白色固体，再放置冰箱析出大量固体，过滤，乙醇洗涤，将母液旋干后，再用乙醇溶解其中杂质，再过滤，合并滤饼，烘干共得到1.51g白色针状固体1。

[0086] 产率89.5％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ11.39(s,1H),8.31(d,J＝7.9Hz,1H),7.83–7.67(m,2H),7.48(t,J＝7.4Hz,1H),2.85(q,J＝7.5Hz,2H),1.46(t,J＝7.6Hz,3H)；ESI-MS m/z:175.2[M+H]+.

[0087] 实施例2：化合物2的合成

[0088] 将化合物1(1.5g，8.6mmol)加入到90mL乙酸中，再加入乙酸钠(705mg，8.6mmol)，加热到60℃，搅拌一会，直至反应液澄清。取0.5mL溴素(8.6mmol)溶解到10mL乙酸中，用用恒压滴液漏斗滴入到反应液中，反应液由棕色变为白色浑浊，反应10个小时左右，将反应液倒入水中，析出大量白色固体，抽滤，大量水洗。红外灯下烘干，得1.93g白色固体2。

[0089] 产率88.7％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.49(s,1H),8.12(d,J＝8.0Hz,1H),7.86(t,J＝7.8Hz,1H),7.70(t,J＝8Hz,1H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),5.10(m,1H),2.01(d,J＝8.0Hz,3H)；ESI-MS m/z:255.0[M+H]+，253.0[M-H]-.

[0090] 实施例3：化合物3的合成

[0091] 将化合物2(14.87g，58.7mmol)加入到450mL乙醇中，再加入苯肼(20.2mL，0.21mol)，加热到86℃回流，反应过夜，第二天发现有大量淡黄色固体悬浊。停止反应，冷却静置，过滤，用少量乙醇洗涤，再用乙醇重结晶，烘干得到12.4g淡黄色棉状轻薄的固体3。

[0092] 产率76％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.50(s,1H),9.88(s,1H),8.13(d,J＝7.9Hz,1H),7.81(t,J＝7.6Hz,1H),7.68(d,J＝8.1Hz,1H),7.60(d,J＝7.8Hz,2H),7.49(t,J＝
7.5Hz,1H),7.28(t,J＝7.9Hz,2H),6.89(t,J＝7.3Hz,1H),2.35(s,3H)；ESI-MS m/z:279.2[M+H]+，277.2[M-H]-.

[0093] 实施例4：化合物4的合成

[0094] 500mL的三颈瓶中加入200mL的PPA，油浴加热到180℃，开启机械搅拌。将化合物3(12.4g，44.5mmol)加入到PPA中。反应2h，反应液逐渐变成红褐色。停止反应，冷却静置，倒入大量冰水中，用KOH调pH至中性，析出大量黄绿色固体，过滤，红外灯下烘干，得9.5g黄绿色固体4。

[0095] 产率82.1％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ11.71(s,1H),8.13(d,J＝7.8Hz,1H),7.80(t,J＝7.5Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.63(d,J＝7.9Hz,1H),7.58(s,1H),7.53(d,J＝8.2Hz,1H),7.45(t,J＝7.5Hz,1H),7.21(t,J＝7.6Hz,1H),7.05(t,J＝7.5Hz,1H)；ESI-MS m/z:262.1[M+H]+，260.1[M-H]-.

[0096] 实施例5：化合物5的合成

[0097] 于三颈瓶中加入化合物4(1.8g，6.89mmol)、醋酸铵(2.1g，27.56mmol),用混合溶剂DMSO-H2O(50mL/2.7mL)溶解，N2保护，于150℃反应24小时。将反应液倒入大量冰水中，不断搅拌，析出大量固体，将析出的黄棕色固体过滤，红外灯下烘干，DCM过柱纯化，得1.2g淡黄色固体5。

[0098] 产率61％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.62(s,1H),13.11(s,1H),10.49(s,1H),8.28(d,J＝8.0Hz,1H),8.22(d,J＝7.1Hz,1H),7.92(dd,J＝11.1,4.1Hz,1H),7.86(d,J＝7.8Hz,1H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.61(t,J＝6.9Hz,1H),7.43(t,J＝7.1Hz,1H),7.36(t,J＝7.1Hz,1H)；ESI-MS m/z:290.1[M+H]+，288.0[M-H]-.

[0099] 实施例6：化合物SYS-S1的合成

[0100] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及氨乙基吗啡啉(0.08mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡黄色固体。

[0101] 产率49％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.62(s,1H),9.12(s,1H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),8.08(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(dd,J＝14.0,7.5Hz,2H),7.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.53(t,J＝7.1Hz,1H),7.38(t,J＝7.1Hz,1H),7.27(t,J＝7.4Hz,1H),3.98(s,2H),3.57(s,4H),
2.88(s,2H),1.23(s,4H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.0,155.6,149.2,146.4,135.0,
134.2,131.4,129.0,127.2,126.6,126.4,125.6,122.6,122.0,118.8,112.8,112.2,67.0,
58.8,53.8,29.7.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H23N5O2,[M+H]+402.1925,found 402.1912.[0102] 实施例7：化合物SYS-S2的合成

[0103] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及氨乙基吡咯(0.08mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0104] 产率54％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.86(s,1H),8.28(d,J＝7.9Hz,2H),7.79(d,J＝7.9Hz,1H),7.72(s,2H),7.50(d,J＝8.2Hz,1H),7.43(t,J＝4.1Hz,1H),7.36(t,J＝4.2Hz,1H),7.23(t,J＝7.9Hz,1H),4.12(t,J＝6.0Hz,2H),3.31(t,J＝5.7Hz,2H),2.88(s,
4H),1.87(s,4H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,156.0,149.2,146.3,135.0,134.2,
131.3,129.0,127.2,126.5,126.3,125.6,122.5,122.0,118.8,112.7,112.1,56.2,54.5,
29.7,23.5.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H16N4O,[M+H]+386.1975,found 386.1960.[0105] 实施例8：化合物SYS-S3的合成

[0106] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及苯胺(0.05mL,0.6mmol)，反应体系颜色逐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝30：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡黄色固体。

[0107] 产率53％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ10.39(s,1H),9.20(s,1H),8.35(d,J＝7.9Hz,1H),7.97(d,J＝8.0Hz,1H),7.77(d,J＝4.8Hz,2H),7.72(d,J＝7.7Hz,2H),7.57(d,J＝
8.1Hz,1H),7.53(s,1H),7.49(t,J＝87Hz,2H),7.43(dd,J＝13.7,5.8Hz,2H),7.34(dd,J＝
13.4,6.4Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ162.0,153.0,149.0,147.5,146.5,135.9,134.5,
131.7,129.4,129.0,127.2,126.9,126.5,125.9,125.2,124.0,121.5,119.8,113.1,+
112.4,104.95.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H16N4O,[M+H]365.1397,found 365.1386.[0108] 实施例9：化合物SYS-S4的合成

[0109] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及正丁胺(0.05mL,0.6mmol)，反应体系颜色逐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝25：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡黄色固体。

[0110] 产率56％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.63(s,1H),8.22(d,J＝7.8Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.58(s,2H),7.31(d,J＝7.9Hz,3H),7.23(t,J＝7.9Hz,1H),7.14(dd,J＝14.8,7.2Hz,2H),3.72(t,J＝6.8Hz,2H),1.87-1.80(m,2H),1.47-1.38(m,2H),0.92(t,J＝
7.3Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)13C NMR(101MHz,CDCl3)δ162.3,153.4,148.3,145.6,
134.0,133.0,130.2,127.9,126.0,125.6,125.2,124.4,121.6,120.7,117.9,117.7,
111.7,111.0,59.1,31.9,19.5,12.8.HRMS(ESI)m/z:calcd for C21H20N4O,[M+H]+
345.1710,found 345.1694.

[0111] 实施例10：化合物SYS-S5的合成

[0112] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及丙胺(0.05mL,0.6mmol)，反应体系颜色逐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝25：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡棕色固体。

[0113] 产率62％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.82(t,1H),8.33(d,J＝7.9Hz,1H),7.88(d,J＝8.0Hz,1H),7.74(s,2H),7.53(d,J＝7.9Hz,1H),7.44(t,J＝8.2Hz,1H),7.39(t,J＝8.0Hz,1H)7.29(d,J＝7.5Hz,1H),3.83(t,J＝6.7Hz,2H),2.04-1.95(m,2H),1.09(t,J＝
7.3Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,154.4,149.2,146.6,135.0,134.1,131.3,
129.0,127.1,126.7,126.3,125.5,121.9,118.81,112.8,112.1,100.0,62.2,24.1,
11.9.HRMS(ESI)m/z:calcd for C20H18N4O,[M+H]+331.1553,found 331.1540.[0114] 实施例11：化合物SYS-S6的合成

[0115] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及N,N-二乙基对苯二胺(0.12g,0.6mmol)，反应体系颜色逐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝35：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡红色固体。

[0116] 产率64％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.60(s,1H),9.38(s,1H),8.31(d,J＝8.0Hz,1H),8.20(d,J＝7.8Hz,1H),7.90-7.83(m,4H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.55(t,J＝7.3Hz,
1H),7.39(t,J＝7.5Hz,1H),7.27(t,J＝7.3Hz,1H),6.80(d,J＝8.9Hz,2H),3.43(dd,J＝
13.7,6.7Hz,4H),1.15(t,J＝6.9Hz,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,147.5,146.7,
143.9,135.2,133.9,130.5,129.1,127.0,126.5,126.0,125.4,122.7,122.4,121.6,
118.9,114.3,112.1,112.0,77.3,77.0,76.7,44.6,12.7.HRMS(ESI)m/z:calcd for +
C27H25N5O,[M+H]436.2132,found 436.2127.

[0117] 实施例12：化合物SYS-S7的合成

[0118] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及氨丙基甲基哌嗪(0.08mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝15：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0119] 产率51％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.73(s,1H),8.26(d,J＝7.8Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.0Hz,1H),7.69(d,J＝3.6Hz,2H),7.48(d,J＝8.0Hz,1H),7.39(dd,J＝7.9,4.1Hz,1H),7.35(t,J＝7.8Hz,1H),7.24(t,J＝6.3Hz,1H),3.85(t,J＝6.3Hz,2H),2.71(d,J＝6.8Hz,4H),2.61(s,4H),2.34(s,3H),2.21-2.12(m,2H),0.92-0.78(m,
2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.0,155.1,149.1,146.4,135.1,134.1,131.2,129.0,
127.1,126.6,126.3,125.5,122.4,121.9,118.7,112.6,112.2,58.1,55.8,54.36,52.4,
45.5,29.7.HRMS(ESI)m/z:calcd for C25H28N6O,[M+H]+429.2397,found 429.2380.[0120] 实施例13：化合物SYS-S8的合成

[0121] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及氨丙基吡咯(0.12mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0122] 产率54％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.07(s,1H),8.14(d,J＝7.7Hz,1H),8.05(d,J＝8.0Hz,1H),7.80(dd,J＝15.6,7.5Hz,2H),7.66(d,J＝8.1Hz,1H),7.49(t,J＝7.1Hz,1H),7.33(t,J＝7.5Hz,1H),7.22(t,J＝7.4Hz,1H),3.85(t,J＝6.3Hz,2H),2.63(t,J＝
7.8Hz,2H),2.47(s,4H),2.00(m,2H),1.66(s,4H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.0,154.8,
149.1,146.5,135.1,134.0,131.3,129.0,127.1,126.1,126.2,125.4,122.5,121.8,
118.7,112.7,112.1,58.2,54.1,54.0,29.7,23.5..HRMS(ESI)m/z:calcd for C24H25N5O,[M+H]+400.2132,found 400.2120.

[0123] 实施例14：化合物SYS-S9的合成

[0124] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及N，N-二乙基-1，4-丁二胺(0.09mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡红色固体。

[0125] 产率48％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),817(d,J＝8.2Hz,1H),8.09(d,J＝8.2Hz,1H),7.88–7.80(m,2H),7.69(d,J＝8.2Hz,1H),7.52(t,J＝7.6Hz,1H),7.36(t,J＝
7.4Hz,1H),7.25(t,J＝7.4Hz,1H),3.85(t,J＝7.4Hz,,2H),2.51(dt,J＝3.5,1.7Hz,2H),
2.43(m,4H),1.88–1.80(m,2H),1.59–1.52(m,2H),0.91(t,J＝7.1Hz,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ162.1153.6,148.1,145.5,134.1,133.1,130.3,128.7,128.0,126.11,125.6,
125.3,124.5,121.6,120.9,117.8,111.1,59.3,51.6,45.8,27.9,23.8,10.4.HRMS(ESI)m/z:calcd for C25H29N5O,[M+H]+416.2445,found 416.2446.

[0126] 实施例15：化合物SYS-S10的合成

[0127] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及N，N-二甲基-1，4-丁二胺(0.09mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡红色固体。

[0128] 产率54％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.76(s,1H),8.29(d,J＝7.8Hz,1H),7.82(d,J＝7.6Hz,1H),7.71(s,2H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.43–7.33(m,2H),7.25(t,J＝7.6Hz,1H),3.84(t,J＝4.1Hz,2H),2.44(t,J＝7.8Hz,2H),2.28(s,6H),2.01-1.91(m,2H),1.77-
1.66(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,154.6,149.1,146.5,135.1,134.0,131.2,
128.9,127.1,126.5,126.2,125.4,122.5,121.8,118.7,112.7,112.1,60.1,59.3,45.3,
28.7,25.3.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H25N5O,[M+H]+388.2132,found 388.2117.[0129] 实施例16：化合物SYS-S11的合成

[0130] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及氨乙基甲基哌嗪(0.09mL,0.6mmol)，反应体系颜色瞬间变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝15：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0131] 产率57％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.80(s,1H),8.30(d,J＝7.8Hz,1H),7.83(d,J＝8.0Hz,1H),7.72(s,2H),7.51(d,J＝7.8Hz,1H),7.43(t,J＝4.1Hz,1H),7.37(t,J＝7.8Hz,1H),7.26(t,J＝8.0Hz,1H),3.99(t,J＝6.5Hz,2H),3.00(t,J＝6.6Hz,2H),2.66(s,
4H),2.46(s,4H),2.26(s,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,155.5,149.1,146.5,135.0,
134.1,131.4,129.0,127.1,126.6,126.3,125.5,122.6,121.9,118.8,112.8,112.1,58.3,
57.5,55.1,53.3,46.0.HRMS(ESI)m/z:calcd for C24H26N6O,[M+H]+415.2241,found 
415.2225.

[0132] 实施例17：化合物SYS-S12的合成

[0133] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及N,N-二甲基对苯二胺盐酸盐(0.10g,0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝30：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0134] 产率54％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.83(s,1H),8.20(d,J＝7.8Hz,1H),7.71(d,J＝7.9Hz,1H),7.57(d,J＝8.5Hz,4H),7.33-7.28(m,2H),7.19(t,J＝7.6Hz,1H),7.10(t,J＝7.4Hz,1H),6.65(d,J＝8.7Hz,2H),2.90(s,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,150.1,146.6,144.7,135.17,133.9,130.7,129.1,127.0,126.5,126.1,125.5,122.4,121.7,
118.9,114.2,112.8,112.1,40.4.HRMS(ESI)m/z:calcd for C25H21N5O,[M+H]+408.1819,found 408.1801.

[0135] 实施例18：化合物SYS-S13的合成

[0136] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及异丁胺(0.06mL,0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝25：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0137] 产率49％；1H NMR(400MHz,MeOD)δ8.87(s,1H),8.18(d,J＝7.8Hz,1H),7.91(d,J＝7.7Hz,1H),7.78(s,2H),7.58(d,J＝8.1Hz,1H),7.46(t,J＝7.4Hz,1H),7.33(t,J＝7.8Hz,1H),7.23(t,J＝7.4Hz,1H),3.68(d,J＝6.4Hz,2H),2.26-2.19(m,1H),1.08(d,J＝
13
6.6Hz,6H). C NMR(101MHz,CDCl3)δ162.0,153.6,148.0,145.6,134.1,133.0,130.2,
127.9,126.0,125.5,125.2,124.4,121.5,120.7,117.7,111.6,111.1,67.5,28.6,
19.7.HRMS(ESI)m/z:calcd for C21H20N4O,[M+H]+345.1710,found 345.1696.[0138] 实施例19：化合物SYS-S14的合成

[0139] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及叔丁胺(0.06mL,0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝25：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0140] 产率54％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.63(s,1H),8.97(s,1H),8.17(dd,J＝7.0,3.6Hz,2H),7.88-7.81(m,3H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(t,J＝8.0Hz,2H),7.37(t,J＝
13
7.8Hz,1H),7.26(t,J＝8.2Hz,1H),1.52(s,9H). C NMR(101MHz,DMSO)δ162.6,150.7,
135.8,134.3,127.5,127.1,126.1,125.9,124.9,123.1,122.1,121.4,120.3,119.3,
113.2,113.0,112.3,29.3,27.1.HRMS(ESI)m/z:calcd for C21H20N4O,[M+H]+345.1710,found 345.1697.

[0141] 实施例20：化合物SYS-S15的合成

[0142] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及对甲苯胺(0.04g，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝30：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡黄色固体。

[0143] 产率49％；1H NMR(500MHz,DMSO)δ12.76(s,1H),9.46(s,1H),8.31(d,J＝8.1Hz,1H),8.19(d,J＝7.9Hz,1H),7.88(t,J＝7.6Hz,1H),7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.79(d,J＝
8.2Hz,2H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.54(t,J＝7.3Hz,1H),7.38(t,J＝7.6Hz,1H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),2.37(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ162.0,151.8,
149.0,146.6,144.9,136.7,136.0,134.5,131.6,129.9,129.1,127.2,126.5,126.0,
125.2,121.8,121.7,121.4,119.8,114.0,113.1,20.7.HRMS(ESI)m/z:calcd for C24H18N4O,[M+H]+379.1553,found379.1537.

[0144] 实施例21：化合物SYS-S16的合成

[0145] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及间氯苯胺(0.06mL，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝30：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得淡黄色固体。

[0146] 产率57％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ9.08(s,1H),8.31(d,J＝8.4Hz,1H),7.92(d,J＝8.1Hz,1H),7.76-7.71(m,2H),7.61(s,1H),7.59(d,J＝1.9Hz,1H),7.52(d,J＝8.2Hz,1H),7.48-7.43(m,1H),7.42-7.39(m,1H),7.38(d,J＝4.5Hz,1H),7.33-7.28(m,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ162.6,151.6,148.5,145.8,135.2,135.1,134.2,131.6,130.6,
129.3,127.4,126.9,126.7,126.6,126.0,122.6,122.3,120.9,120.3,118.7,114.2,
112.9,112.4.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H15ClN4O,[M+H]+399.1007,found 399.0990.[0147] 实施例22：化合物SYS-S17的合成

[0148] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及N，N-二甲基乙二胺(0.06mL，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝15：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0149] 产率51％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.65(s,1H),8.18(d,J＝7.5Hz,1H),7.67-7.54(m,3H),7.33(d,J＝8.3Hz,2H),7.21(d,J＝7.7Hz,1H),7.11(t,J＝8.3Hz,1H),3.86(s,2H),2.90(s,2H),2.32(s,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,155.4,149.1,146.4,135.0,
134.0,131.3,128.9,127.1,126.5,126.2,125.4,122.5,121.8,118.7,112.7,112.1,59.7,
58.1,45.8.HRMS(ESI)m/z:calcd for C21H21N5O,[M+H]+360.1819,found 360.1803.[0150] 实施例23：化合物SYS-S18的合成

[0151] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及β-苯乙二胺(0.08mL，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝25：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0152] 产率50％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.61(s,1H),8.35(d,J＝7.8Hz,1H),7.76-7.70(m,3H),7.45(dd,J＝10.0,6.7Hz,2H),7.35(t,,J＝7.8Hz,1H),7.30(t,J＝6.3Hz,3H),7.25(d,J＝5.0Hz,1H),7.21(d,J＝7.5Hz,1H),7.17(t,J＝7.1Hz,1H),4.10(t,J＝7.1Hz,
2H),3.32(t,J＝7.2Hz,2H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,155.0,149.2,146.5,144.3,
139.5,135.0,134.1,131.3,129.0,128.5,127.1,126.7,126.3,126.3,125.5,122.7,+
121.9,118.8,112.6,112.0,61.7,37.1.HRMS(ESI)m/z:calcd for C25H20N4O,[M+H]
393.1710,found 393.1692.

[0153] 实施例24：化合物SYS-S19的合成

[0154] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及β-苯乙二胺(0.07mL，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0155] 产率48％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.07(s,1H),8.16(d,J＝7.6Hz,1H),8.06(d,J＝7.1Hz,1H),7.82(s,2H),7.68(d,J＝7.2Hz,1H),7.51(t,J＝7.8Hz,1H),7.35(t,J＝4.5Hz,1H),7.23(t,J＝6.5Hz,1H),1.94-1.82(m,4H),1.81–1.65(m,4H),1.46–1.34(m,
2H),1.31–1.23(m,1H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ162.3,154.1,149.1,147.0,135.8,134.3,
131.4,128.6,127.1,126.2,125.9,124.9,122.0,121.4,119.1,113.0,112.2,66.9,33.8,
25.1,24.1.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H22N4O,[M+H]+371.1866,found 371.1850.[0156] 实施例25：化合物SYS-S20的合成

[0157] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及乙醇胺(0.04mL，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝15：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0158] 产率50％；1H NMR(500MHz,DMSO)δ9.07(s,1H),8.17(d,J＝7.7Hz,1H),8.07(d,J＝7.6Hz,1H),7.89-7.83(m,2H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.53(t,J＝7.3Hz,1H),7.37(t,J＝7.3Hz,1H),7.25(t,J＝7.3Hz,1H),3.91(s,4H).13C NMR(126MHz,DMSO)δ162.7,157.4,149.2,147.0,135.8,134.4,131.8,128.6,127.2,126.3,126.0,125.0,121.8,121.6,
119.1,113.1,112.1,61.0,60.6.HRMS(ESI)m/z:calcd for C19H16N4O2,[M+H]+333.1346,found 333.1332.

[0159] 实施例26：化合物SYS-S21的合成

[0160] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及乙胺(0.03mL，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝20：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0161] 产率63％；1H NMR(400MHz,DMSO)δ9.11(s,1H),8.17(d,J＝7.7Hz,1H),8.08(d,J＝7.8Hz,1H),7.85(m,J＝7.8Hz,2H),7.69(d,J＝8.0Hz,1H),7.52(t,J＝8.0Hz,1H),7.37(t,J＝8.0Hz,1H),7.25(t,,J＝8.0Hz,1H),3.87(q,J＝11.9Hz,2H),1.46(t,J＝7.1Hz,3H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.2,153.9,149.2,146.6,135.0,134.1,131.3,129.0.,
127.1,126.6,126.2,125.5,122.6,121.8,118.8,112.8,112.1,54.6,16.2.HRMS(ESI)m/z:
calcd for C19H16N4O,[M+H]+317.1397,found 317.1385.

[0162] 实施例27：化合物SYS-S22的合成

[0163] 将化合物5(0.15g，0.52mmol)加入到10mL的氯仿中，加入无水MgSO4(60mg,0.49mmol)，FeCl3(32mg,0.2mmol)，以及4-甲基戊胺氢溴酸盐(0.11g，0.6mmol)，反应体系颜色渐渐变深，室温反应6h。后处理：将反应液中不溶物过滤掉，再用饱和食盐水洗三次，合并有机相，减压浓缩，再用氯仿：甲醇＝15：1作洗脱剂过中性Al2O3柱纯化得浅棕色固体。

[0164] 产率58％；1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.79(s,1H),8.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.87(d,J＝7.8Hz,1H),7.73(s,1H),7.51(d,J＝7.8Hz,1H),7.43(s,1H),7.40–7.35(m,1H),7.28(d,J＝6.2Hz,1H),3.83(t,J＝6.8Hz,1H),2.00-1.92(m,2H),1.68-1.60(m,1H),1.34(q,J＝11.9Hz,1H),0.93(d,J＝5.6Hz,6H).13C NMR(101MHz,CDCl3)δ163.1,154.3,149.1,146.6,
135.0,134.1,131.3,129.0,127.1,126.7,126.3,125.5,122.7,121.8,118.8,112.8,
112.1,60.8,36.6,28.7,27.8,22.6.HRMS(ESI)m/z:calcd for C23H24N4O,[M+H]+373.2023,found 373.2008.

[0165] 表1实施例1～27制备得到的化合物及结构式

[0166]

[0167]

[0168]

[0169]

[0170] 实施例28：应用小鼠前脂肪细胞3T3-L1细胞分化模型，采用油红O染色并结合显微镜拍照，评价本发明提供的Bouchardatine衍生物对脂肪细胞内甘油三酯含量影响。

[0171] 实验步骤

[0172] 对数生长期的3T3-L1前脂肪细胞，5.0*104细胞/孔，均匀接种至48孔板，细胞培养箱静置培养，每两天更换一次培养液。待细胞生长接近至80％融合，更换培养液，继续培养2天至细胞完全融合(Day 0),更换含有分化诱导液Ⅰ的DMEM完全培养液(含10％FBS及1％双抗的DMEM培养液)，37℃5％CO2静置培养3天(Day 3)。3天后，更换含有分化诱导液Ⅱ的DMEM完全培养液继续培养3天(Day 6)。对于药物干预组，以含分化诱导液的DMEM完全培养液为稀释液，稀释药物溶液至一定浓度，在Day 0与Day 3时，一同加入。空白对照组与分化对照组，分别加入等体积的DMSO溶液。在Day 6时，进行油红O染色拍照以及甘油三酯含量分析。

[0173] (1)分化诱导液配制

[0174] 分化诱导液Ⅰ：含500μM 3-异丁基-1-甲基-黄嘌呤，100ng/mL地塞米松，2μg/mL胰岛素的DMEM完全培养液

[0175] 分化诱导液Ⅱ：含2μg/mL胰岛素的DMEM完全培养液

[0176] (2)油红O染色

[0177] 细胞诱导分化至Day 6时，细胞经预冷PBS润洗1次，4％冰冻多聚甲醛固定液室温固定60min。0.3％油红O染色工作液室温染色30min。室温的去离子水漂洗2-3次，倒置显微镜拍照(40×)。

[0178] 每孔分别加入300uL异丙醇溶液，摇床平缓摇动室温萃取油红O染料30mins，分别移取100μL染液进行510nm吸光度检测。

[0179] (3)甘油三酯含量分析

[0180] 细胞分化结束后，预冷PBS润洗2次，去尽PBS，加入含0.2％Triton X-100的去离子溶液，室温静置1h，收集细胞悬液，超声破碎10min，使细胞充分裂解，离心收集上清液，按照甘油三酯检测试剂盒说明书测定甘油三酯含量。

[0181] (4)结果分析

[0182] 甘油三酯含量分析以分化对照组为“100％对照”表示，即化合物甘油三酯含量/分化对照组含量*100％。实验结果为三次独立实验的平均值，结果按照“平均值±标准差”进行统计学分析。

[0183] (5)实验结果

[0184] 如图1所示，DM组代表分化对照组，代表正常分化的细胞，有大量的脂质累积。Bouchardatine为天然产物，化合物SYS-S2等均为Bouchardatine衍生物。与DM相比，1μM的SYS-B3、SYS-S22、SYS-S20及SYS-S7均能有效的抑制脂肪生成(*，p<0.05；**，p<0.01)；其中以化合物SYS-S2的抑制效果最明显。

[0185] 图2显示，Bouchardatine及SYS-S2均能够以浓度梯度依赖性的方式减少3T3-L1细胞内脂质含量(*，p<0.05；**，p<0.01；***，p<0.001)，而化合物SYS-S2活性更强。由图可知，经过10μM的Bouchardatine及SYS-S2处理过的细胞，甘油三酯含量分别减少了23％、68％；我们通过计算，得到Bouchardatine及SYS-S2的EC50值分别为22.59μM、2.21μM，化合物SYS-S2降脂活性提高了约11倍。

[0186] 图3中，BM代表基础对照组，代表未分化的细胞，细胞内无脂质累积；DM代表分化对照组，细胞内清晰可见大量的脂质；而化合物处理组细胞内的脂质含量随着化合物浓度的升高而逐渐减少。如化合物SYS-S2在0.1、0.5、1、5、10μM浓度下，甘油三酯含量分别为对照组的73％、56％、47％、62％、80％。

[0187] 实施例29：应用人肝癌细胞株HpeG-2，采用胆固醇分析试剂盒以及BCA蛋白浓度测定试剂盒，体外评价本发明提供的Bouchardatine衍生物对人肝癌细胞株HpeG-2细胞胆固醇含量的影响。

[0188] 实验步骤：

[0189] 该实验设置对照组以及不同浓度的药物干预组。具体操作如下：

[0190] 将人肝癌细胞HepG-2均匀接种至48孔板，静置培养24h。更换含有化合物的DMEM完全培养液(含有10％FBS及1％双抗的DMEM培养液)，37℃5％CO2环境下共孵育24h。而对照组加入等量的DMSO。

[0191] (1)胆固醇含量与蛋白质含量分析

[0192] 经过处理的细胞，PBS润洗2次，去尽PBS，加入RIPA裂解液，反复吹打使细胞充分裂解，离心收集上清液，分别按照胆固醇检测试剂盒说明书与BCA蛋白定量检测试剂盒测定胆固醇含量与蛋白浓度。最后胆固醇含量以“nmol/mg蛋白”形式表示。为了便于与对照组比较，以对照组为“100％”，分别换算(处理组胆固醇含量(nmol/mg蛋白)/对照组胆固醇含量((nmol/mg蛋白)*100％)。实验结果为三次独立实验的平均值，结果按照“平均值±标准差”进行统计学分析。

[0193] (3)实验结果

[0194] 由图4中可知，与control组相比，化合物干预则可有效的减少细胞内胆固醇含量，如10μM时，化合物Bouchardatine及SYS-S22、SYS-S2、SYS-S1组胆固醇含量分别减少了20％、40％、35％、35％，其中，以化合物SYS-S22效果最好。实验结果表明，Bouchardatine经过结构修饰，降胆固醇活性得到了明显提高。

[0195] 实施例30：应用人肝癌细胞株HpeG-2，采用甘油三酯含量分析试剂盒以及BCA蛋白浓度测定试剂盒，体外评价本发明提供的Bouchardatine衍生物对油酸钠诱导的人肝癌细胞株HpeG-2细胞甘油三酯含量的影响。

[0196] 实验步骤：

[0197] 该实验设置空白对照组(不加油酸钠)、油酸钠诱导组(含油酸钠)，以及不同浓度的药物干预组。具体操作如下：

[0198] 将人肝癌细胞HepG-2均匀接种至48孔板，静置培养24h。更换含有0.5mM油酸钠的DMEM完全培养液(含有10％FBS及1％双抗的DMEM培养液)，油酸钠终浓度为1mM。37℃5％CO2环境下共孵育24h。此实验中，化合物干预组是化合物经含有油酸钠的DMEM完全培养液稀释至所需浓度。而空白对照组与油酸钠对照组分别加入等量的DMSO。

[0199] (1)油红O染色及吸光度分析

[0200] 细胞经预冷PBS(PH7.4)润洗2次，4％冰冻多聚甲醛固定液室温固定60min。0.3％油红O染色液室温染色30mins。去离子水漂洗2-3次，倒置显微镜拍照(40×)。

[0201] (2)甘油三酯含量与蛋白含量分析

[0202] 经过处理的细胞，PBS润洗2次，去尽PBS，加入含0.2％Triton X-100的去离子溶液，室温静置1h，反复吹打使细胞充分裂解，收集细胞悬液至离心管，超声破碎10min，离心收集上清液，分别按照甘油三酯检测试剂盒说明书与BCA蛋白定量检测试剂盒测定甘油三酯含量与蛋白浓度。最后甘油三酯含量以“nmol/mg蛋白”形式表示。为了便于与对照组比较，以对照组为“100％”，分别换算(处理组甘油三酯含量(nmol/mg蛋白)/对照组甘油三酯含量((nmol/mg蛋白)*100％)。实验结果为三次独立实验的平均值，结果按照“平均值±标准差”进行统计学分析。

[0203] (3)实验结果

[0204] 由图5中可知，与空白对照Blank组相比，油酸钠诱导组细胞内甘油三酯含量显著升高(#，p<0.01)。而化合物干预则可有效的减少细胞内甘油三酯含量，如10μM时，化合物Bouchardatine及SYS-S2、SYS-S22、SYS-S1组甘油三酯含量分别减少了21％、46％、40％、35％，以化合物SYS-S2降脂效果最好。该实验结果再次说明，经过结构改造，Bouchardatine衍生物的降脂活性得到了明显提高。