一种板蓝根药材的检测方法

摘要

本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种板蓝根的质量检测方法。该方法包括对板蓝根所含的尿苷、鸟苷、腺苷和总酸含量的测定以及对板蓝根农药残留量的测定。本发明解决了传统理化特性的鉴别方法的操作复杂和局限性以及质量难以调控的技术问题，以提供了一种准确度高，操作简便快速，成本低廉的检测方法，具有良好的应用前景和经济效益。

权利要求

1.一种板蓝根药材的检测方法，其特征在于，该方法包括如下有效成分含量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中，A：尿苷、鸟苷、腺苷含量的测定包括如下步骤：

(1)分别精密称取鸟苷对照品3.56mg、尿苷对照品4.60mg和腺苷对照品4.49mg，加甲醇制成每1mL分别含22.78μg、29.40μg和含28.74μg的混合对照品溶液；

(2)精密称取板蓝根药材粉末0.5g，精密加入水25mL，超声40分钟；取上清液，经

0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液的制备；

(3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以乙腈为流动相A、以水为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：0-20min，A：B为2％：98％→40％：60％；控制柱温为30℃，流量为0.6mL/分钟进行检测，检测波长分别为：0min，254nm；7min，262nm；

8min，246nm；10min，259nm；12min，254nm；

分别取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；

B：所述总酸含量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取待测板蓝根药材5g，加70％乙醇置水浴上加热回流提取3次，每次50ml且每次回流1.5小时，滤过，60℃时，滤液浓缩至相对密度1.05，浓盐酸调pH至2～3，用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯至干，加70％乙醇溶解定容至25ml，得到供试品溶液；

(2)总有机酸以水杨酸计，采用直接滴定法测定其总有机酸的含量；

C：所述农药残留量的测定包括如下步骤：

(1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；

分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至

100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；

另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml混匀，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂；

(2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；

随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；

向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μl，加乙腈定容至1ml，作为供试品溶液；

所述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3 200-400目，净化柱为2.5mm×40cm，具体洗脱参数为：净化去杂900s，目标物收集1200s，柱子清洗

300s；

(3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其中，所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3ml/分钟，进样量1μl，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；

所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度

250℃；

所述农药对照品包括敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、三唑酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、三唑醇A、三唑醇B、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。

2.根据权利要求1所述的板蓝根药材的检测方法，其特征在于，所述总酸含量的测定，具体步骤为：取供试品溶液5ml置三角瓶中，加入酚酞指示剂2滴，用标定好的0.1mol/L氢氧化钠滴定液滴定，滴定至溶液显粉红色时为终点，每1ml氢氧化钠滴定液相当于14.088mg的水杨酸。

3.根据权利要求2所述的板蓝根药材的检测方法，其特征在于，所述毛蕊异黄酮、芒柄花素、板蓝根皂苷Ⅱ、板蓝根皂苷Ⅲ含量的测定中，所述待测药材的粒径为180-2000μm。

4.根据权利要求1-3任一项所述的板蓝根药材的检测方法，其特征在于，所述农药残留量的测定中，所述待测药材的粒径为180-2000μm。

说明书

一种板蓝根药材的检测方法

技术领域

[0001] 本发明属于中药材质量检测领域，具体涉及一种板蓝根药材的质量检测方法。

背景技术

[0002] 板蓝根，常用别名靛青根、蓝靛根或大青根，是一种中药药材。中国各地均产。板蓝根分为北板蓝根和南板蓝根，北板蓝根来源为十字花科植物菘蓝和草大青的根；南板蓝根为爵床科植物马蓝的根茎及根。具有清热解毒、凉血消肿、利咽之功效。板蓝根是一种用量极大且长期销售不衰的药材，纵观板蓝根的历史，我们可以看到其销量在飞速增长。板蓝根含多种化学成分，主要含有尿苷、鸟苷、腺苷、总酸等。现代研究表明板蓝根含有的成分具有广泛的生理活性作用，其含量与板蓝根的清热解毒等功效密切相关，因此其含量的多少常作为板蓝根药材质量控制的重要指标。

[0003] 近几年板蓝根的市场需求量持续增加，野生资源逐年减少，人工栽培发展缓慢，使得板蓝根资源蕴藏量和产量都在大幅下降。导致市场上出现了很多伪品，其中不少伪品的农药残留量超标爆表，给板蓝根药材的质量、用药的安全性及有效性带来了很大的冲击，已成为制约板蓝根系列药材开发的瓶颈。

[0004] 目前，正品板蓝根的有效检测方法是传统的形态特征和理化特性的鉴别方法，具有一定的局限性，不足以从整体上控制板蓝根的质量，作为一味临床常用中药，其真伪优劣受其理化指标、农药残留量多等诸多因素的影响，因此有必要建立一种科学的质量检测方法对板蓝根的质量进行评价。

发明内容

[0005] 为此，本发明所要解决的技术问题在于现有技术中板蓝根药材检测方法复杂，质量难以调控的问题，进而提供一种准确度高，简单、快速的检测板蓝根药材的方法。

[0006] 为解决上述技术问题，本发明是通过如下技术方案实现的：

[0007] 本发明提供了一种板蓝根药材的检测方法，该方法包括如下有效成分含量的测定步骤以及农药残留量的测定步骤，其中：

[0008] A：尿苷、鸟苷、腺苷含量的测定包括如下步骤：

[0009] (1)分别精密称取鸟苷对照品3.56mg、尿苷对照品4.60mg和腺苷对照品4.49mg，加甲醇制成每1mL分别含22.78μg、29.40μg和含28.74μg的混合对照品溶液；

[0010] (2)精密称取板蓝根药材粉末0.5g，精密加入水25mL，超声40分钟；取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，得供试品溶液的制备；

[0011] (3)照高效液相色谱法试验，以十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，以乙腈为流动相A、以水为流动相B按照如下程序进行梯度洗脱：2-20min，A：B为2％：98％→40％：60％；控制柱温为30℃，流量为0.6mL/分钟进行检测，检测波长分别为：0min，254nm；7min，262nm；8min，246nm；10min，259nm；12min，254nm；

[0012] 分别取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定；

[0013] B：所述总酸含量的测定包括如下步骤：

[0014] (1)精密称取待测板蓝根药材5g，加70％乙醇置水浴上加热回流提取3次，每次50ml且每次回流1.5小时，滤过，60℃时，滤液浓缩至相对密度1.05，浓盐酸调pH至2～3，用乙酸乙酯萃取，减压回收乙酸乙酯至干，加70％乙醇溶解定容至25ml，得到供试品溶液；

[0015] (2)总有机酸以水杨酸计，采用直接滴定法测定其总有机酸的含量；

[0016] C：所述农药残留量的测定包括如下步骤：

[0017] (1)精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg三苯基磷酸酯的溶液，作为内标贮备液；

[0018] 分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及所述内标贮备液1ml，加丙酮定容至100ml，作为混合对照品贮备溶液；分别精密量取适量，加乙腈定容制成20-1000ng/ml的不同浓度的溶液，作为混合对照品溶液；

[0019] 另取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解制成每1ml含20mg核糖酸内酯的溶液，另取山梨醇适量，加水溶解制成每1ml含山梨醇10mg的溶液；分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml混匀，加乙腈定容至10ml，作为分析保护剂；

[0020] (2)精密称取待测药材细粉10g，并加入氯化钠1g混匀，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟；随后精密量取上述溶液60ml减压浓缩至近干，并加入体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液溶解样品并定容至10ml，过滤后取滤液经GPC凝胶渗透色谱净化，以体积比为1：1的环已烷-乙酸乙酯溶液为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干；

[0021] 向上述样品中加入体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液5ml溶解，并转移至石墨碳-氨基混合固相萃取小柱上，以体积比为1：1的乙酸乙酯-丙酮混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，随后加入所述内标贮备液5μl，加乙腈定容至1ml，作为供试品溶液；

[0022] (3)精密量取上述各浓度混合对照品溶液及供试品溶液各400μL，并分别加入所述分析保护剂100μL混匀，随后分别精密吸取1μL，进行气相色谱-质谱联用仪测定；其中，

[0023] 所述气相色谱分析条件为：取规格为30m×0.25mm×0.25um的弹性石英毛细管柱DB17ms，以高纯氦气为载气，柱流速1.3ml/分钟，进样量1μl，采用高压不分流进样，设置进样口温度为230℃，升温程序具体为：初始温度60℃，以30℃/分钟升至120℃、以10℃/分钟升至200℃、以2℃/分钟升至230℃、以30℃/分钟升至300℃，并保持7分钟；

[0024] 所述EI源质谱测定的条件为：设置电子能量70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。

[0025] 其中，所述农药残留量的测定中，所述GPC凝胶渗透色谱净化步骤的条件具体为：填料为Bio-Beads S-X3 200-400目，净化柱为2.5mm×40cm，具体洗脱参数为：净化去杂
900s，目标物收集1200s，柱子清洗300s。

[0026] 更进一步的，所述农药残留量的测定中，所述农药对照品包括敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、三唑酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、三唑醇A、三唑醇B、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯。

[0027] 其中，步骤B中，所述总酸含量的测定，具体步骤为：

[0028] 取供试品溶液5ml置三角瓶中，加入酚酞指示剂2滴，用标定好的0.1mol/L氢氧化钠滴定液滴定，滴定至溶液显粉红色时为终点，每1ml氢氧化钠滴定液相当于14.088mg的水杨酸。

[0029] 其中，步骤A中，所述板蓝根甲苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、板蓝根皂苷Ⅱ、板蓝根皂苷Ⅲ含量的测定中，所述待测药材的粒径为180-2000μm。

[0030] 步骤C中，所述农药残留量的测定中，所述待测药材的粒径为180-2000μm。

[0031] 本发明所述方法通过对板蓝根药材所含的板蓝根有效成分含量的测定以及对板蓝根药材农药残留量的检测，进行板蓝根药材真伪优劣的判定标准。并通过高效液相色谱法测定板蓝根有效成分的含量，所述方法不仅准确且简单易行。本发明所述方法通过气相色谱-质谱联用的方式检测药材的残留农药量，不仅检测的准确度高，方法简单、快速，而且通过对检测条件的特定筛选，可一次性将板蓝根药材中常见的农药种类进行一次性的有效检测，所述 方法准确率及实用效果均较好。

附图说明

[0032] 为了使本发明的内容更容易被清楚的理解，下面根据本发明的具体实验例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中：

[0033] 图1是本发明实施例1对照品的HPLC图谱(1-鸟苷，2-尿苷，3-腺苷)；

[0034] 图2是本发明实施例1样品的HPLC图谱(1-鸟苷，2-尿苷，3-腺苷)；

[0035] 图3是本发明实施例3中农药标准品的全扫描气相色谱图；

[0036] 图4是本发明实施例3中农药标准品的0-10分钟扫描气相色谱图；

[0037] 图5是本发明实施例3中农药标准品的10-20分钟扫描气相色谱图；

[0038] 图6是本发明实施例3中农药标准品的20-40分钟扫描气相色谱图。

具体实施方式

[0039] 实施例1 板蓝根药材中板蓝根甲苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、板蓝根皂苷Ⅱ、板蓝根皂苷Ⅲ含量的测定

[0040] 1.仪器与试药

[0041] 1.1仪器

[0042] waters2695-2998高效液相色谱仪，超声清洗器(250W，40kHz)。

[0043] 1.2试药

[0044] 鸟苷对照品(A0778，纯度98.4％，天津马克生物有限公司)，尿苷对照品(887-200001，中国药品生物制品检定所)，腺苷对照品(110879-200202，中国食品药品检定研究院)。

[0045] 甲醇、乙腈为色谱纯、水为纯净水，乙醇为分析纯。

[0046] 1.3药材样品

[0047] 收集了各地板蓝根样品，供试药材产地批次分别选自：陇西首阳2批次，分别标注为1-2、甘肃陇西首阳董家堡、甘肃陇西首阳菜子坪、甘肃渭源会川、 甘肃临洮、甘肃渭源2批次，分别标注为1-2、渭源莲峰绽坡村3批次，分别标注为1-3、甘肃商品。

[0048] 2.方法

[0049] 2.1对照品溶液的制备

[0050] 分别精密称取鸟苷对照品3.56mg、尿苷对照品4.60mg和腺苷对照品4.49mg，加甲醇制成每1mL分别含22.78μg、29.40μg和含28.74μg混合对照品溶液，即得对照品溶液。

[0051] 2.2供试品溶液的制备

[0052] 取板蓝根药材粉碎(过四号筛)约0.5g，精密称定，精密加入水25mL，超声40min。取上清液，经0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

[0053] 2.3色谱条件

[0054] 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈(A)-水(B)为流动相按下表进行梯度洗脱(见表1)；检测波长采用多波长检测(见表2)；柱温为30℃；流量0.6mL/min。

[0055] 表1 含量测定洗脱梯度

[0056]

[0057] 表2 含量测定检测波长

[0058]

[0059] 2.4对照品线性关系考察

[0060] 精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20和25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，以各对照品进样质量数(x)为横坐标，峰面积为纵坐标(y)，进行线性回归，对照品溶液的HPLC色谱图见图1。

[0061] 鸟苷:y＝7E-06x-0.0033，r＝0.9995，线性范围为45.56～569.5μg；

[0062] 尿苷:y＝1E-06x+0.0326，r＝0.9999，线性范围为58.8～735μg；

[0063] 腺苷:y＝5E-07x+0.0221，r＝0.9999，线性范围为57.5～713.4μg。

[0064] 2.5精密度考察

[0065] 按2.2项下方法制备板蓝根3号样品供试溶液，连续进样5次，结果各次进样的鸟苷、尿苷和腺苷峰面积的RSD分别为0.8％、0.5％和0.3％，样品的HPLC色谱图见图2。

[0066] 2.6重现性考察

[0067] 按2.2项下方法制备板蓝根3号样品供试溶液5份，分别进样，结果5份样品的鸟苷、尿苷和腺苷峰峰面积的RSD分别为2.9％、3.6％和2.3％。

[0068] 2.7稳定性考察

[0069] 按2.2项下方法制备板蓝根号供试品溶液，分别在0、2、4、6、8、10、12、16h测定鸟苷、尿苷和腺苷的峰面积，结果鸟苷、尿苷和腺苷的峰面积的RSD分别为2.6％、2.8％和3.8％。

[0070] 2.8加样回收率试验

[0071] 取已知含量的同批样品0.25g(鸟苷含0.1065％，尿苷含0.0821％，腺苷含0.0502％)5份，精密称量，分别精密加入对照品储备溶液，鸟苷1mL(0.2561mg/mL)、尿苷
2mL(0.1146mg/mL)，腺苷1mL(0.1365mg/mL)，按供试品溶液的制备方法制备，进行测定，计算平均回收率。分别为102.37％、103.06％和102.46％，RSD分别为0.59％、2.33％和
2.24％。

[0072] 2.9测定法

[0073] 分别吸取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，即得。

[0074] 3.含量限度的拟定

[0075] 3.1建立的同时测定鸟苷、尿苷及腺苷方法，方法学考察表明，该法准确、灵敏、简便、快速，可用于板蓝根药材、饮片及其制剂的质量控制。

[0076] 3.2限度的拟定所测定14批样品中鸟苷、尿苷和腺苷总量在0.086％～0.465％，平均在0.211％，拟定鸟苷、尿苷及腺苷含量总和不得低于0.15％，有2批不合格。

[0077] 4.鉴定结果见表3如下。

[0078] 表3 板蓝根样品来源、规格及含量测定(％)

[0079]

[0080] 实施例2 板蓝根药材总酸含量测定

[0081] 收集了各地板蓝根样品，供试药材产地批次分别选自：陇西首阳2批次，分别标注为1-2、甘肃陇西首阳董家堡、甘肃陇西首阳菜子坪、甘肃渭源会川、甘肃临洮、甘肃渭源2批次，分别标注为1-2、渭源莲峰绽坡村3批次，分别标注为1-3、甘肃商品。

[0082] 精密称取板蓝根5g，置三角瓶中，加70％乙醇置水浴上加热回流提取3次，每次50ml且每次回流1.5小时，滤过，滤液浓缩至约相对密度1.05(60℃)，浓盐酸调pH至2～
3，用乙酸乙酯萃取3次，减压回收乙酸乙酯至干，加70％乙醇溶解定容于25ml容量瓶中，即得。

[0083] 总有机酸以水杨酸计，采用直接滴定法测定其总有机酸的含量。取供试品溶液5ml于三角瓶中，在供试品溶液中加入酚酞指示剂2滴，用已标定的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定，滴定至溶液显粉红色时为终点，每1ml氢氧化钠滴定液相当于14.088mg的水杨酸，测定结果见表4。

[0084] 表4 板蓝根样品来源、规格及含量测定(％)

[0085]

[0086]

[0087] 5.总酸限度的拟定本项目建立的高效毛细管电泳法同时测定肉桂酸、水杨酸、丁香酸、苯甲酸和咖啡酸6种成分含量的方法，由于含量属于微量，无法定量分析，采用总有机酸类成分含量进行限度控制。所测定的18批样品中有机酸总量在2.09％～48.6％，平均在11.28％，在10.0％以上的有只有5批，拟定含量不得低于3.0％，有2批不合格。

[0088] 实施例3 板蓝根药材农药残留量测定

[0089] 1仪器与试药

[0090] 1.1仪器

[0091] Clarus600气相色谱-质谱联用仪(美国PE公司)，HS10260D超声提取器(昆山市超声仪器有限公司)，RE-52A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)。

[0092] 1.2试药

[0093] 敌敌畏、甲胺磷、乙酰甲胺磷、四氯硝基苯、六氯苯、α-六六六、β-六六六、γ-六六六、δ-六六六、氧化乐果、二嗪磷、五氯硝基苯、久效磷、地虫硫磷、磷胺I、乐果、七氯、五氯苯胺、百菌清、甲基毒死蜱、艾氏剂、克菌丹、磷胺II、甲基对硫磷、甲基嘧啶磷、甲基五氯苯基硫醚、甲霜灵、三唑酮、毒死蜱、马拉硫磷、杀螟硫磷、对硫磷、二甲戊灵、顺式环氧七氯、反式环氧七氯、三唑醇A、三唑醇B、反式氯丹、顺式硫丹、顺式氯丹、反式硫丹、pp'-DDE、PP'-DDD、OP'-DDT、PP'-DDT、狄氏剂、杀扑磷、异狄氏剂、乙硫磷、三苯基磷酸酯、联苯菊酯、硫丹硫酸酯、异菌脲、甲氰菊酯、三氯杀螨醇、氯氟氰菊酯、甲氧DDT、三氯杀螨砜、伏杀硫磷、氯菊酯1、氯菊酯2、氯氰菊酯、氰戊菊酯、溴氰菊酯等64种农药对照品贮备溶液由中国食品药品 检定研究院提供。

[0094] 三苯基磷酸酯、丙酮、乙腈、环已烷、乙酸乙酯为进口农残级；核糖酸内酯、山梨醇、氯化钠、无水硫酸钠为优级纯。

[0095] 1.3样品

[0096] 板蓝根等道地批样品购买于产地、或购于兰州黄河药材市场，均为原药材，以下按不同批次予以编号检测。

[0097] 2方法与结果

[0098] 2.1内标贮备液及分析保护剂的配制

[0099] 精密称取三苯基磷酸酯适量，加丙酮制成每1ml含100μg的溶液，即得。

[0100] 分析保护剂的配制：取核糖酸内酯适量，加乙腈溶解并制成每1ml含20mg的溶液；另取山梨醇适量，加水溶解并制成每1ml含10mg的溶液。分别精密量取上述核糖酸内酯、山梨醇溶液各1ml，至同一10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，即得。

[0101] 2.2混合对照品溶液的制备

[0102] 分别精密量取各农药对照品贮备溶液1ml及内标贮备液1ml，置100ml量瓶中，用丙酮稀释至刻度，摇匀，作为混合对照品贮备溶液(1μg/ml)。分别精密量取适量，加乙腈制成20-1000ng/ml不同浓度系列的混合对照品溶液，即得。

[0103] 2.3供试品溶液的制备

[0104] 精密称取各批次供试品细粉10g，置100ml锥形瓶中，加入1g氯化钠，精密加入丙酮100ml，冰浴超声处理30分钟，离心，将上清液迅速移入装有1g无水硫酸钠的具塞锥形瓶中，放置30分钟。精密量取60ml减压浓缩至近干，加入少量的环已烷：乙酸乙酯(1：1)溶液溶解样品并定量稀释至10ml，混匀，滤过，滤液经凝胶渗透色谱(GPC)净化，进样5ml，(GPC主要参数：填料Bio-Beads S-X3 200--400目，净化柱2.5mm×40cm，洗脱参数：pre run 900s,main run 1200s,tail run 300s)，以环已烷：乙酸乙酯(1：1)为流动相洗脱，收集洗脱液，移入KD瓶中，减压浓缩至近干。

[0105] 2.4供试品溶液的净化

[0106] 加乙酸乙酯-丙酮(1:1)混合溶液5ml溶解并定量转移至石墨碳(500mg)-氨基(500mg)混合固相萃取小柱上,以乙酸乙酯-丙酮(1:1)混合溶液15ml洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，残渣加乙腈溶解，并加内标贮备液5μl，乙腈定容至1ml，即得。

[0107] 2.5气-质联用分析

[0108] 气相色谱分析条件弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25um)DB17ms，载气为高纯氦气，柱流速1.3ml/min；进样口温度为230℃，进样量1μl，高压不分流进样。

[0109] 具体升温程序：初始温度60℃，以30℃/min升至120℃，以10℃/min升至200℃，以2℃/min升至230℃，以30℃/min升至300℃，保持7min。

[0110] 质谱(EI源)测定条件：70eV，离子源温度230℃，接口温度250℃。

[0111] 各待测品SIM条件见表5，各个农药标准品的全扫描气相色谱图及0-10分钟、10-20分钟、20-40分钟扫描气相色谱图分别见图3、4、5、6所示。

[0112] 表5 GC-MS检测指标及SIM测定条件

[0113]

[0114]

[0115]

[0116] 2.6方法学验证

[0117] 2.6.1精密度试验

[0118] 精密吸取稀释后混合标准溶液1μL，重复进样5次，计算RSD值，见表6。

[0119] 表6 64种农药的精密度试验

[0120]

[0121]

[0122] 2.6.2加样回收率试验

[0123] 在样品中分别加入一定的混合标准溶液，形成3种添加水平3份样品，按选定方法提取挣化和检测，扣除本底计算各种农药在样品中的回收率，结果见表7。

[0124] 表7 64种农药的加样回收率试验

[0125]

[0126]

[0127] 2.6.3检出限测定

[0128] 将农药标准品溶液稀释成不同浓度，进行测定组分的最低检出量，结果见表8。

[0129] 表8 64种农药的检出限

[0130]

[0131]

[0132] 2.6.4线性关系

[0133] 将农药标准品溶液稀释成不同浓度，进行测定组分的线性范围，结果见表9。

[0134] 表9 64种农药的线性方程

[0135]

[0136]

[0137] 2.7测定法

[0138] 分别精密量取混合对照品溶液、供试品溶液各400μL，加分析保护剂100μL，混匀，分别精密吸取1μL，注入气相色谱质谱联用仪，测定，计算，即得，结果见表10、11。

[0139] 表10 板蓝根农药残留本底测定(mg/kg)

[0140]

[0141] 表10 板蓝根农药残留本底测定(mg/kg)续表

[0142]

[0143] 表11 板蓝根农药残留检测结果报告(mg/kg)

[0144]

[0145]

[0146] 3、测定结果分析

[0147] 3.1农药残留测定结果在15批样品检出17种不同农药残留，检出率为100％，板蓝根中农药残留现状比较普遍。具体农药残留批次有:磷胺3批、甲霜灵2批、对硫磷6批、三氯杀螨醇2批、甲氰菊酯1批、三氯杀螨砜9批，氯氟氰菊酯2批、百菌清2批、甲基对硫磷2批、二甲戊灵1批、杀螟硫磷1批、狄氏剂1批、六氯苯1批、乙硫磷1批、伏杀硫磷2批。

[0148] 3.2板蓝根药材中农药残留数有差别少数品种为1种农药残留，多数为2～3种农药残留，个别品种达到5种农药残留。受到环境、种植技术、加工和储藏等因素影响，造成中药材农药残留的原因比较复杂。

[0149] 3.3禁止使用的农药板蓝根中检出了甲基对硫磷、对硫磷、杀螟硫磷、伏杀硫磷、磷胺、甲霜灵、滴滴涕和狄氏剂共8种禁用农药。其他检出农药中，属于生产中可以使用的杀虫剂、杀虫剂农药。

[0150] 3.4其他农药超标采用国家标准GB2763-2005食品中农药最大残留限量规定进行分析，超过食品残留标准:对硫磷超标2～5倍，三氯杀螨醇超标11倍，三氯杀螨砜超标1～3倍，甲基对硫磷超标3倍，伏杀硫磷超标12～16倍，磷胺超标5～10倍，滴滴涕超标
6倍。

[0151] 总上分析，板蓝根样品的农药检出率100％，检出禁用农药7种，13批样品中6种农药超标，样品超标率为86.6％。

[0152] 3.5根据本次的测定结果，建议对我国中药材GAP生产中禁止使用的农药，以及生产中允许使用而容易超标的农药进行限量检查。

[0153] 显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。