一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法转让专利
申请号 : CN201410726096.X
文献号 : CN104502470B
文献日 : 2016-03-23
发明人 : 潘仙华 , 张瑞敏 , 于一文 , 徐斯尧 , 陈思羽 , 刘烽 , 徐娜
申请人 : 上海应用技术学院
摘要 :
本发明公开一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，即首先将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯，然后利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.6-1mL/min，进样量为5μL，检测波长为220-280nm，色谱柱柱温为20-35℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离。该分离方法得到的色谱峰峰型和对称性更好、分离度更高，可有效、快速且灵敏地检测和拆分R/S-3-奎宁环醇酯。
权利要求 :
1.一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，其特征在于具体包括如下步骤：首先，将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯结构式如下：其中R为COC6H5，SO2C6H4CH3，COC10H7或COC6H4OCH3；
所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，二甲基甲酰胺作催化剂进行酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯；
上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂二甲基甲酰胺的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：催化剂二甲基甲酰胺为1:1:0.1；
其中所述的芳香酸为苯甲酸、对甲基苯磺酸、1-萘甲酸或对甲氧基苯甲酸；
然后，利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液中，按体积比计算，即正己烷：醇：碱性添加剂为59.6-89.6%：10-40%：0.1-0.4%；将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.6-1mL/min，进样量为
5μL，检测波长为220-280nm，色谱柱柱温为20-35℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离；
所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为乙醇或异丙醇；所述的碱性添加剂为二乙胺或乙醇胺。
2.如权利要求1所述的一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，其特征在于所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱。
3.如权利要求1或2所述的一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，其特征在于所用的高效液相色谱仪为：Agilent LC1260，G1311C-1260 Quat Pump VL，G1329B-ALS SL，G1316A-TCC，G1315D-DAD。
说明书 :
一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇
的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，即将R/S-3-奎宁环醇柱前衍生得到具有紫外吸收的衍生物，再对衍生物进行手性色谱柱和紫外检测器拆分检测。
背景技术
[0002] R-3-奎宁环醇的化学名是1-氮杂环-[2,2,2]-辛-R-3-醇，是研究人类血红球乙酰胆碱酯酶，合成几种蕈毒碱受体拮抗剂类药物如索利那新、瑞伐托酯、他沙利定等的重要中间体。同时也是手性液体催化剂的前体，被广泛应用于手性催化。目前，大多数药物以外消旋体给药为主，而以光学纯的对映体给药是大多数手性药物的发展趋势。因此，对R/S-3-奎宁环醇手性分离方法研究有着重要的医学研究价值和工业价值。
[0003] 目前，对R/S-3-奎宁环醇的手性拆分方法研究并不多，主要有化学拆分法和色谱拆分法。经文献检索，主要是化学拆分法。这是因为R/S-3-奎宁环醇没有紫外吸收，不适用于常规的液相分析法检测；而且由于其手性中心缺乏能与手性色谱柱填料产生氢键、偶极-偶极作用、π-π作用或空间作用的基团，难以进行手性色谱法分离。
[0004] 李书彬等较早的报道了用化学拆分法R/S-3-奎宁环醇，主要是用R/S-3-奎宁环醇与D-(+)-二苯甲酰酒石酸在醇和酮的混合溶剂中拆分，最后水解得到R-3-奎宁环醇。该方法操作繁琐、周期长、收率低，导致工业化难度大、成本高。王东武等发明了用AD-H手性色谱柱测定R/S-3-奎宁环醇的光学纯度的方法，但是其分离度不高，且色谱峰峰型对称性不高，严重拖尾。
发明内容
[0005] 本发明的目的为了解决上述的操作繁琐、周期长、成本高、灵敏度低、色谱峰分离度和对称性低等技术问题而提供一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，该方法可以克服现有分析方法的缺陷和不足，使得操作简单便捷、检测快速灵敏、色谱峰峰型和对称性好、分离度高，可更为有效地检测和拆分 R/S-3-奎宁环醇。
[0006] 本发明的技术方案
[0007] 一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，具体包括如下步骤：
[0008] （1）、将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环 醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0009]
[0010] 其中R为COC6H5，SO2C6H4CH3，COC10H7或COC6H4OCH3；
[0011] 所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，二甲基甲酰胺（以下简称DMF）作催化剂，进行酯化反应，得到R/S-3-奎宁环醇酯；
[0012] 上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：DMF为1:1:0.1；
[0013] 其中所述的芳香酸为苯甲酸、对甲基苯磺酸、1-萘甲酸或对甲氧基苯甲酸；
[0014] （2）、利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.6-1mL/min，进样量为5μL，检测波长为220-280nm，色谱柱柱温为20-35℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离；
[0015] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为乙醇或异丙醇；所述的碱性添加剂为二乙胺或乙醇胺；
[0016] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液中，按体积比计算，即正己烷：醇：碱性添加剂为59.6-89.6%：10-40%：0.1-0.4%;
[0017] 所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱。
[0018] 本发明的有益效果
[0019] 本发明的一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，由于R/S-3-奎宁环醇与芳香酸进行衍生反应获得的衍生物具有紫外吸收，可以使用紫外检测器检测，适用性更广。
[0020] 进一步，本发明的一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，由于使用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为流动相使得分离度均大于10，达到完全的基线分离；采用的碱性添加剂二乙胺或乙醇胺能有效的改善峰型，达到更好的分离度效果。
[0021] 综上所述，本发明的一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法克服以往技术中存在的缺陷和不足，具有操作简单便捷、检测快速灵敏、色谱峰峰型和对称性好，分离度高等的技术效果，在医药合成分析领域具有实际推广的前景。
附图说明
[0022] 图1、实施例1中所得的R/S-3-苯甲酸奎宁环醇酯的色谱分离图；
[0023] 图2、实施例2中所得的R/S-3-萘甲酸奎宁环醇酯在最佳液相条件，即色谱柱：Chiralpak IA(250mm*4.6mm)；正己烷与醇组成的正相流动相为正己烷：乙醇：乙醇胺=69.6:30:0.4 (v/v/v)；流速为0.8mL/min；检测波长为230nm；柱温为25℃；进样体积为
5μL下的色谱分离图；
5μL下的色谱分离图；
[0024] 图3、实施例3中R/S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯在液相条件，即色谱柱：Chiralpak IA(250mm*4.6mm)；正己烷与醇组成的正相流动相为正己烷：乙醇:乙醇胺=59.6:40:0.4 (v/v/v)；流速为1mL/min；检测波长为255nm；柱温为25℃；进样体积为5μL下所得到的色谱分离图；
[0025] 图4、实施例4中R/S-3-对甲基苯磺酸奎宁环醇酯在最佳液相条件，即色谱柱：Chiralpak IA(250mm*4.6mm)；正己烷与醇组成的正相流动相为正己烷：异丙醇：乙醇胺=69.6:30:0.4 (v/v/v)；流速为0.9mL/min；检测波长为230nm；柱温为30℃；进样体积为
5μL下的色谱分离图；
5μL下的色谱分离图；
[0026] 图5、实施例5中 R/S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯在最佳液相条件，即色谱柱：Chiralpak IA(250mm*4.6mm)；正己烷与醇组成的正相流动相为正己烷：乙醇：乙醇胺=79.6:20:0.4(v/v/v)；流速为1mL/min；检测波长为255nm；柱温为25℃；进样体积为5μL下的色谱分离图。
具体实施方式
[0027] 下面通过具体的实施例并结合附图对本发明做详细的阐述，但本发明并不限于下述的实施例。
[0028] 本发明的各实施例中所用的高效液相色谱仪为：Agilent LC1260，G1311C-1260 Quat Pump VL，G1329B-ALS SL，G1316A-TCC，G1315D-DAD。
[0029] 实施例1
[0030] 一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，具体包括如下步骤：
[0031] （1）、将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环 醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0032]
[0033] 其中R为COC6H5；
[0034] 所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，DMF作催化剂进行酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯；
[0035] 上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：DMF为1:1:0.1；
[0036] 其中所述的芳香酸为苯甲酸；
[0037] 上述的柱前衍生酯化反应，具体包括如下步骤：
[0038] 在带有温度计和干燥管的50mL的三口瓶中依次加入苯甲酸(0.96 g,7.862mmol)、15mL的乙酸乙酯和0.06g的DMF作为催化剂，搅拌混合均匀后，将反应体系的温度加热到25℃左右，通过恒压滴液漏斗向反应体系中滴加氯化亚砜(1.12g,9.42mmol)，再继续保温搅拌0.5h左右，将反应体系的温度降到20℃左右，从反应体系中，减压蒸出溶剂约10mL；
[0039] 向上述反应体系中加入R/S-3-奎宁环醇(1g,7.862mmol)的10mL乙酸乙酯溶液，继续保持反应体系的温度在25℃下，通过恒压滴液漏斗滴加三乙胺(1.11g,0.71mol)，并在25℃左右保温搅拌反应3h后，向反应体系中加入由5g氯化钠、20mL水和2g的三乙胺混合组成的溶液，在25℃保温搅洗反应0.5h后，静置分层；
[0040] 取水层用20mL乙酸乙酯反萃一次，合并有机层，加入2mol/L盐酸20mL，搅拌10min后，取水相，再用10mL乙酸乙酯萃取水相，取水相，加入25mL二氯甲烷，搅拌20min后，静置、分层，取有机相、干燥、旋干，得到白色半固体1.4g，收率92%，液相检测纯度大于
98%；
98%；
[0041] 上述所得的白色固体经Bruker-500/VANCE Ⅲ核磁共振仪进行检测，其氢谱及核磁共振图谱数据如下所示：
[0042] 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.10 – 8.03 (m, 2H), 7.57 (t, J = 7.4 Hz,1H), 7.46 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 5.11 – 4.98 (m, 1H), 3.36 (ddd, J = 14.6, 8.3,
1.7 Hz, 1H), 3.03 – 2.76 (m, 5H), 2.16 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 2.05 – 1.94 (m,
1H), 1.75 (qd, J = 9.5, 4.4 Hz, 1H), 1.67 – 1.59 (m, 1H), 1.53 – 1.41 (m, +
1H)。MS-ESI：m/z(%)=232.1(100) [M+H]。
1.7 Hz, 1H), 3.03 – 2.76 (m, 5H), 2.16 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 2.05 – 1.94 (m,
1H), 1.75 (qd, J = 9.5, 4.4 Hz, 1H), 1.67 – 1.59 (m, 1H), 1.53 – 1.41 (m, +
1H)。MS-ESI：m/z(%)=232.1(100) [M+H]。
[0043] 从上述的数据结果可以看出，上述所得的白色固体即为所得的R/S-3-苯甲酸奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0044]
[0045] （2）、利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.8mL/min，进样量为5μL，检测波长为230nm，色谱柱柱温为25℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离，所得的分离图谱如图1所示；
[0046] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为乙醇；所述的碱性添加剂为二乙胺；
[0047] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，按体积百分比计算，即正己烷：乙醇：二乙胺为79.9：20：0.1（v/v/v）；
[0048] 所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱。
[0049] 从图1中可以看出，保留时间8.139为S-3-苯甲酸奎宁环醇酯，保留时间12.550为R-3-苯甲酸奎宁环醇酯，两者的分离度为11.55，由此表明了该方法的分离度更高、色谱峰峰型和对称性更好、出峰时间合适，可以快速灵敏的检测R/S-3-苯甲酸奎宁环醇酯。
[0050] 实施例2
[0051] 一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，具体包括如下步骤：
[0052] （1）、将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环 醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0053]
[0054] 其中R为COC10H7；
[0055] 所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，DMF作催化剂进行酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯；
[0056] 上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：DMF为1:1:0.1；
[0057] 其中所述的芳香酸为1-萘甲酸；
[0058] 上述的柱前衍生酯化反应，具体包括如下步骤：
[0059] 在带有温度计和干燥管的50mL的三口瓶中依次加入萘甲酸(1.346g,7.862mmol)、15mL的乙酸乙酯和0.06g的DMF作为催化剂，搅拌混合均匀后，将反应体系的温度加热到25℃左右，通过恒压滴液漏斗向反应体系中滴加氯化亚砜(1.12g,9.42mmol)，再继续保温搅拌0.5h左右，将反应体系的温度降到20℃左右，从反应体系中，减压蒸出溶剂约10mL；
[0060] 向上述反应体系中加入R/S-3-奎宁环醇(1g,7.862mmol)的10mL乙酸乙酯溶液，继续保持反应体系的温度在25℃下，通过恒压滴液漏斗滴加三乙胺(1.11g,0.71mol)，并在25℃左右保温搅拌反应3h后，向反应体系中加入由5g氯化钠、20mL水和2g的三乙胺混合组成的溶液，在25℃保温搅洗反应0.5h后，静置分层；
[0061] 取水层用20mL乙酸乙酯反萃一次，合并有机层，加入2mol/L盐酸20mL，搅拌10min后，取水相，再用10mL乙酸乙酯萃取水相，取水相，加入25mL二氯甲烷，搅拌20min后，静置、分层，取有机相、干燥、旋干，得到白色固体1.98g，收率91%，液相检测纯度大于
98%；
98%；
[0062] 上述所得的白色固体经Bruker-500/VANCE Ⅲ核磁共振仪进行检测，其氢谱及核磁共振图谱数据如下所示：
[0063] 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 12.85 (s, 1H), 8.89 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 31.4, 7.6 Hz, 2H), 7.95 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 7.4 Hz, 1H),7.60 (t, J = 7.4 Hz, 1H), 7.55 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 5.45 (s, 1H), 3.84 – 3.76 (m, 1H), 3.51 – 3.27 (m, 5H), 2.71 (s, 1H), 2.38 (s, 1H), 2.17 (d, J = 9.8 Hz, +
1H), 2.04 (s, 1H), 1.96 (d, J = 12.7 Hz, 1H)。MS-ESI：m/z(%)=282.3(100) [M+H]。
1H), 2.04 (s, 1H), 1.96 (d, J = 12.7 Hz, 1H)。MS-ESI：m/z(%)=282.3(100) [M+H]。
[0064] 从上述的数据结果可以看出，上述所得的白色固体即为所得的R/S-3-萘甲酸奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0065]
[0066] （2）、利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为0.8mL/min，进样量为5μL，检测波长为230nm，色谱柱柱温分别为20、25、30、35℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离；
[0067] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为乙醇；所述的碱性添加剂为乙醇胺；
[0068] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，按体积百分比计算，即正己烷：乙醇：乙醇胺为69.6%:30%:0.4%；
[0069] 所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱；
[0070] 上述的色谱分离结果如下表：
[0071]
[0072] 表中t1为S-3-萘甲酸奎宁环醇酯的保留时间，t2为R-3-萘甲酸奎宁环醇酯的保留时间；
[0073] 从上表的结果可以看出，本实施例中不同色谱柱温度对色谱峰分离度有影响。随着色谱柱温度的上升，分离度呈先下降后上升的趋势，故最后选择最优色谱柱温度为25℃；
[0074] 最佳色谱柱温度为25℃时，R/S-3-奎宁环醇酯的拆分结果见附图2，从图2中可以看出，保留时间7.650为R-3-萘甲酸奎宁环醇酯，保留时间11.459为S-3-萘甲酸奎宁环醇酯，两者的分离度为10.62。由此表明了温度对手性分离有一定的影响，而且本发明提供的方法分离度更高、色谱峰峰型和对称性更好、出峰时间合适，可以快速灵敏的检测R/S-3-萘甲酸奎宁环醇酯。
[0075] 实施例3
[0076] 一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，具体包括如下步骤：
[0077] （1）、将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环 醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0078]
[0079] 其中R为COC6H4OCH3；
[0080] 所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，DMF作催化剂进行酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯；
[0081] 上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：DMF为1:1:0.1；
[0082] 其中所述的芳香酸为对甲氧基苯甲酸；
[0083] 上述的柱前衍生酯化反应，具体包括如下步骤：
[0084] 在带有温度计和干燥管的50mL的三口瓶中依次加入对甲氧基苯甲酸(1.188g,7.862mmol)、15mL的乙酸乙酯和0.06g的DMF作为催化剂，搅拌混合均匀后，将反应体系的温度加热到25℃左右，通过恒压滴液漏斗向反应体系中滴加氯化亚砜(1.12g,9.42mmol)，再继续保温搅拌0.5h左右，将反应体系的温度降到20℃左右，从反应体系中，减压蒸出溶剂约10mL；
[0085] 向上述反应体系中加入R/S-3-奎宁环醇 (1g,7.862mmol)的10mL乙酸乙酯溶液，继续保持反应体系的温度在25℃下，通过恒压滴液漏斗滴加三乙胺(1.11g,0.71mol)，并在25℃左右保温搅拌反应3h后，向反应体系中加入由5g氯化钠、20mL水和2g的三乙胺混合组成的溶液，在25℃保温搅洗反应0.5h后，静置分层；
[0086] 取水层用20mL乙酸乙酯反萃一次，合并有机层，加入2mol/L盐酸20mL，搅拌10min后，取水相，再用10mL乙酸乙酯萃取水相，取水相，加入25mL二氯甲烷，搅拌20min后，静置、分层，取有机相、干燥、旋干，得到黄色液体1.96g，收率90%，液相检测纯度大于
98%；
98%；
[0087] 上述所得的黄色液体经Bruker-500/VANCE Ⅲ核磁共振仪进行检测，其氢谱及核磁共振图谱数据如下所示：
[0088] 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.10 – 8.03 (m, 2H), 7.57 (t, J = 7.4 Hz,1H), 7.46 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 5.11 – 4.98 (m, 1H), 3.36 (ddd, J = 14.6, 8.3,
1.7 Hz, 1H), 3.03 – 2.76 (m, 5H), 2.16 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 2.05 – 1.94 (m,
1H), 1.75 (qd, J = 9.5, 4.4 Hz, 1H), 1.67 – 1.59 (m, 1H), 1.53 – 1.41 (m,
1H)。MS-ESI：m/z(%)=262.3(100) [M+H]+。
1.7 Hz, 1H), 3.03 – 2.76 (m, 5H), 2.16 (d, J = 3.1 Hz, 1H), 2.05 – 1.94 (m,
1H), 1.75 (qd, J = 9.5, 4.4 Hz, 1H), 1.67 – 1.59 (m, 1H), 1.53 – 1.41 (m,
1H)。MS-ESI：m/z(%)=262.3(100) [M+H]+。
[0089] 从上述的数据结果可以看出，上述所得的白色固体即为所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0090]
[0091] （2）、利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为1mL/min，进样量为5μL，检测波长为255nm，色谱柱柱温为25℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离；
[0092] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为乙醇；所述的碱性添加剂为乙醇胺；
[0093] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，按体积百分比计算，即正己烷：乙醇：乙醇胺为59.6%:40%：0.4%，59.7%:40%：0.3%，59.8%:40%：0.2%，59.9%:40%：0.1%；
[0094] 所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱。
[0095] 上述的色谱分离结果如下表：
[0096]
[0097] 表中t1和对称因子1分别为S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的保留时间和色谱峰对称因子，t2和对称因子2分别为R-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的保留时间和色谱峰对称因子；
[0098] 从上表的结果可以看出，本实施例中乙醇胺的添加量对色谱峰分离度和对称因子均有影响。随着乙醇胺添加量的增加，对称因子呈现逐渐增加的趋势。在其添加量为0.4%时，虽然分离度不是最高但考虑到对称因子较高，故最后选择乙醇胺最优添加量为0.4%；
[0099] 其添加量为0.4%时，R/S-3-奎宁环醇酯的拆分结果见附图3，从图3中可以看出，保留时间6.217为S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯，保留时间8.901为R-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯，两者的分离度为9.09，由此表明了该发明提供的方法可大大提高色谱峰的分离度，达到完全的基线分离。
[0100] 实施例4
[0101] 一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，具体包括如下步骤：
[0102] （1）、将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环 醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0103]
[0104] 其中R为SO2C6H4CH3；
[0105] 所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，DMF作催化剂进行酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯；
[0106] 上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：DMF为1:1:0.1；
[0107] 其中所述的芳香酸为对甲基苯磺酸；
[0108] 上述的柱前衍生酯化反应，具体包括如下步骤：
[0109] 在带有温度计和干燥管的50mL的三口瓶中依次加入对甲基苯磺酸(1.346 g,7.862mmol)、15mL的乙酸乙酯和0.06g的DMF作为催化剂，搅拌混合均匀后，将反应体系的温度加热到25℃左右，通过恒压滴液漏斗向反应体系中滴加氯化亚砜(1.12g,9.42mmol)，再继续保温搅拌0.5h左右，将反应体系的温度降到20℃左右，从反应体系中，减压蒸出溶剂约10mL；
[0110] 向上述反应体系中加入R/S-3-奎宁环醇 (1g,7.862mmol)的10mL乙酸乙酯溶液，继续保持反应体系的温度在25℃下，通过恒压滴液漏斗滴加三乙胺(1.11g,0.71mol)，并在25℃左右保温搅拌反应3h后，向反应体系中加入由5g氯化钠、20mL水和2g的三乙胺混合组成的溶液，在25℃保温搅洗反应0.5h后，静置分层；
[0111] 取水层用20mL乙酸乙酯反萃一次，合并有机层，加入2mol/L盐酸20mL，搅拌10min后，取水相，再用10mL乙酸乙酯萃取水相，取水相，加入25mL二氯甲烷，搅拌20min后，静置、分层，取有机相、干燥、旋干，得到白色半固体2.02g，收率93%，液相检测纯度大于
98%；
98%；
[0112] 上述所得的白色固体经Bruker-500/VANCE Ⅲ核磁共振仪进行检测，其氢谱及核磁共振图谱数据如下所示：
[0113] 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.81 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 4.66 – 4.57 (m, 1H), 3.09 (ddd, J = 15.0, 8.3, 1.9 Hz, 1H), 2.95 – 2.71 (m, 4H), 2.70 – 2.61 (m, 1H), 2.47 (s, 3H), 2.14 (s, 1H), 2.02 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 1.92 – 1.83 (m, 1H), 1.69 (ddd, J = 14.4, 9.5, 4.4 Hz,1H), 1.52 – 1.43 (m, 1H), 1.38 (ddd, J = 14.5, 11.5, 8.0 Hz, 1H)。MS-ESI：m/+
z(%)=282.2(100) [M+H]。
z(%)=282.2(100) [M+H]。
[0114] 从上述的数据结果可以看出，上述所得的白色固体即为所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0115]
[0116] （2）、利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速分别为0.6mL/min、0.7mL/min、0.8mL/min、0.9 mL/min、1 mL/min，进样量为5μL，检测波长为230nm，色谱柱柱温为30℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离；
[0117] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为异丙醇；所述的碱性添加剂为乙醇胺；
[0118] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，按体积百分比计算，即正己烷：异丙醇：乙醇胺为69.6%:30%:0.4%；
[0119] 所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱。
[0120] 上述的色谱分离结果如下表：
[0121]
[0122] 表中t1为S-3-对甲基苯磺酸奎宁环醇酯的保留时间，t2为R-3-对甲基苯磺酸奎宁环醇酯的保留时间；
[0123] 从上表的结果可以看出，本实施例中不同的流速对色谱峰分离度有影响。随着流速增加，分离度呈先下降后上升又下降的趋势。流速为0.6-0.7mL/min时，虽然色谱峰分离度比较高，但保留时间较长。综合考虑保留时间和分离度两方面的因素，最后选择最佳流速为0.9mL/min；
[0124] 最佳流速为0.9mL/min时，R/S-3-奎宁环醇酯的拆分结果见附图4，从图4中可以看出，保留时间7.278为S-3-对甲基苯磺酸奎宁环醇酯，保留时间13.275为R-3-对甲基苯磺酸奎宁环醇酯，两者的分离度为15.18，由此表明了本发明提供的方法分离度更高，出峰时间合适，成本低。
[0125] 实施例5
[0126] 一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法，具体包括如下步骤：
[0127] （1）、将R/S-3-奎宁环醇经过柱前衍生酯化反应得到R/S-3-奎宁环 醇酯，所得的R/S-3-奎宁环醇酯，其结构式如下：
[0128]
[0129] 其中R为COC6H4OCH3；
[0130] 所述的柱前衍生酯化反应即将R/S-3-奎宁环醇与芳香酸在乙酸乙酯溶剂中，DMF作催化剂进行酯化反应得到R/S-3-奎宁环醇酯；
[0131] 上述酯化反应所用的芳香酸、R/S-3-奎宁环醇和催化剂的量，按摩尔比计算，即芳香酸：R/S-3-奎宁环醇：DMF为1:1:0.1；
[0132] 其中所述的芳香酸为对甲氧基苯甲酸；
[0133] 上述的柱前衍生酯化反应，同实施例3；
[0134] （2）、利用高效液相色谱仪，以直链淀粉类手性柱为色谱柱，用由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液作为正相流动相，将上述的R/S-3-奎宁环醇酯配成浓度为1.0mg/mL的样品溶液，控制流速为1mL/min，进样量为5μL，检测波长为255nm，色谱柱柱温为25℃，将上述得到的R/S-3-奎宁环醇酯进行手性分离；
[0135] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，其中所述的醇为异丙醇；所述的碱性添加剂为乙醇胺；
[0136] 所述的由正己烷、醇和碱性添加剂组成的混合液，按体积百分比计算，即正己烷：异丙醇：碱性添加剂分别为59.6%：40%：0.4%、69.6%：30%：0.4%、79.6%：20%：0.4%、89.6%：
10%：0.4%；
10%：0.4%；
[0137] 所述的直链淀粉类手性柱是以直链淀粉-三（3，5-二甲基苯基氨基甲酸酯）键合在5μm硅胶表面作为手性固定相的Chiralpak IA 250*4.6mm手性柱。
[0138] 上述的色谱分离结果如下表：
[0139]
[0140] 表中t1为S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的保留时间，t2为R-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的保留时间；
[0141] 从上表的结果可以看出，本实施例中正相流动相比例对色谱峰分离度有影响。随着正己烷含量的增加，待分离物质在色谱柱中保留时间变长，分离度呈现逐渐增大的趋势。综合考虑保留时间和分离度两方面的因素，最后选择最佳正相流动相比例为正己烷：乙醇：乙醇胺=79.6：20：0.4；在最佳正相流动相比例为正己烷：乙醇：乙醇胺=79.6：20:0.4时，R/S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的拆分结果见附图5，从图5中可以看出，保留时间
8.632为S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯，保留时间13.353为R-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯，两者的分离度为11.14，由此表明了本专利提供的方法可以大大提高R/S-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的分离度，出峰时间合适，成本更低，可以快速灵敏的检测R/S-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯。
8.632为S-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯，保留时间13.353为R-3-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯，两者的分离度为11.14，由此表明了本专利提供的方法可以大大提高R/S-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯的分离度，出峰时间合适，成本更低，可以快速灵敏的检测R/S-对甲氧基苯甲酸奎宁环醇酯。
[0142] 综上所述，本发明提供了一种利用柱前衍生高效液相色谱法拆分R/S-3-奎宁环醇的方法。综合考察了色谱柱温度、流动相比例、碱性添加剂的添加量、流速等方面因素对色谱峰之间的分离度、出峰时间、色谱峰峰型和对称性的影响，为4种R/S-奎宁环醇酯提供了可以快速灵敏检测其构型和比例的液相方法，与以往分析方法相比，其分离度更高、色谱峰峰型和对称性更好、出峰时间合适、成本低、操作简便。
[0143] 以上所述仅是本发明的实施方式的举例，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变型，这些改进和变型也应视为本发明的保护范围。