锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法及测量装置

摘要

【课题】提供一种藉由简便比色计或紫外-可见分光光度计立刻对生物试料或环境试料等水溶液中之锂进行定量测量，且使目视判定成为可能之用于锂浓度定量的锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法及测量装置。【解决方式】F28四苯基卟啉作为螯合剂，于其中与水混合而成之有机溶剂、pH 值调节剂、锂试剂组成物之稳定剂，以及使用其之锂离子测量方法以及测量装置。

权利要求

1.一种锂试剂组成物，其特征在于，形成水溶液，包含：

以将与四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之结构式

所表示之化合物、选自二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺

(Dimethylformamide，DMF)、二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)的与水混合而成之有机溶剂、pH值调节为pH值5至pH值12的范围的pH值调节剂。

2.根据权利要求1所述的锂试剂组成物，其特征在于，其中上述pH值调节剂包含盐酸(hydrochloric acid)、硝酸(nitric acid)、氢氧化钠(sodium hydroxide)、氢氧化钾(Potassium hydroxide)、氨(ammonia)之碱性试剂(alkaline reagents)；包含醋酸(acetic acid)、磷酸(phosphoric acid)、盐酸(hydrochloric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、乙二酸(ethane diacid)，盐酸(hydrochloric acid)之酸性试剂(acidulant)以及该些之盐类。

3.根据权利要求1所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述pH值调节剂是pH值缓冲剂。

4.根据权利要求3所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述pH值缓冲剂作为柠檬酸(citric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、磷酸(phosphoric acid)、琥珀酸(succinic acid)、苯二甲酸(orthobenzene dicarboxylic acid)、氯化氨(ammonia Chloride)、氢氧化钠(sodium hydroxide)、氢氧化钾(Potassium hydroxide)的良好之缓冲剂(buffer)，所述pH值缓冲剂选自脂肪酸甲酯磺酸盐、双-三异丙基乙磺醯(Bis-Tris)、己二酸、哌嗪-1，4-二乙磺酸、ACES、3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸、2-(二乙醇胺基)乙磺酸(2-(bis(2-hydroxyethyl)amino)-ethanesulfonicacid，BES)、3-(N-吗啡啉)丙磺酸(3-(N-Morpholino)propa，MOPS)、N-三(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸(2-[Tris(hydroxymethyl)methylamino]-1-ethanesulfonic acid，TES)、N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙基磺酸(4-(2-Hydroxyethyl)piperazine-1-ethanesulfonic acid，HEPES)、3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基丙磺酸、3-三羟甲基甲胺-2-羟基丙磺酸、哌嗪-1，4-二羟基丙磺酸、

4-(2-羟乙基)哌嗪-1-2-羟基丙磺酸、EPPS、Tricine、N-二(羟乙基)甘氨酸、TAPS、N-2-环己胺基乙磺酸、3-(环己胺)-2-羟基-1-丙磺酸、CAPS、以及该些之盐类。

5.根据权利要求1～4中任一项所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述锂试剂组成物对于pH值5至pH值12之范围之锂可发色。

6.根据权利要求1所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述锂试剂组成物包含稳定剂。

7.根据权利要求6所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述稳定剂是非离子性界面活性剂和/或阴离子性界面活性剂。

8.根据权利要求7所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述非离子性界面活性剂选自山梨糖醇酐脂肪酸酯(sorbitan fatty acid ester)、五红蘚醇脂肪酸部分酯(pentaerythritol partial fatty acid ester)、丙二醇单丁基醚脂肪酸酯(propylene glycol mono butyl ether fatty acid ester)、甘油脂肪酸单酯(glycerine fatty acid monoester)、聚氧乙烯烷基醚(polyoxyethylene alkyl ether)、聚氧乙烯烷基苯醚(polyoxyethylene alkyl phenyl ether)、聚氧乙烯聚丙二醇(polyoxyethylene polyoxypropylene glycol)、聚氧乙烯脂肪酸部分酯(polyoxyethylene partial fatty acid ester)、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸部分酯(polyoxyethylene sorbitan partial fatty acid ester)、聚氧乙烯脂肪酸酯(poly oxyethylene fatty acid ester)、脂肪酸二乙醇醯胺(fatty acid diethanol Amide)、脂肪酸单乙醇醯胺(fatty acid monoethanol Amide)、聚氧乙烯脂肪酸醯胺(polyoxyethylene fatty acid amide)、聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octyl phenyl ether)、p-壬基苯氧基聚缩水甘油醚(p-nonyl phenoxy polyglycidyl ether)以及该些之盐类。

9.根据权利要求7所记载之锂试剂组成物，其特征在于，其中阴离子性界面活性剂是选自包含十二烷基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)的烷基硫酸酯盐(alkyl sulfate)、聚氧乙烯烷基醚硫酸酯盐(polyoxyethylene alkyl ether sulfuric ester)、包含十二烷基苯磺酸酸钠(sodium dodecyl benzene sulfonate)的聚氧乙烯苯醚硫酸酯盐(polyoxyethylene phenylene oxide sulfuric ester)、包含聚氧乙烯烷基苯醚硫酸酯钠(Polyoxyethylene alkyl biphenylene oxidesodium sulfovinate)的烷基苯磺酸盐(alkyl benzene sulfonate)、烷烃磺酸盐(alkane sulfonate)。

10.根据权利要求1所述之锂试剂组成物，其中上述锂试剂组成物包含掩蔽剂(masking agent)。

11.根据权利要求10所述之锂试剂组成物，其特征在于，其中上述掩蔽剂选自三乙醇胺(Triethanolamine)、乙二胺(Ethylenediamine)、N，N，N′，N′-四(2-吡啶基甲基)乙二胺(N，N，N′，N′-tetrakis-(2-Pyridylmethyl)ethylenediamine，TPEN)、吡啶(pyridine)、2，2-联吡啶(2，2-Bipyridyl)、丙烯二胺(Diallylamine)、二乙烯三胺(triethylene diamine)、二乙烯三胺-N，N，N′，N″，N″-五醋酸(Diethylene triamine penlaacetic acid，DTPA)、三乙烯四胺(triethylene tetramine)、三乙烯乙基四胺-N，N，N′，N″，N″′，N″′-六醋酸、1，10-菲绕啉(1，10-phenanthroline)、乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)、O，O′-双(2-氨基苯基)乙烯二醇-N，N，N′，N′-四醋酸(O，O′-bis(2-aminophenoxy)-ethane-N，N，N′N′-tetraacetic acid，BAPTA)、N，N-双(2-羟基乙基)甘氨酸(N，N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine，Bicine)、反式-1，2-二氨基环己烷-N，N，N′，N′-四醋酸(trans-1，

2-Diaminocyclohexane-N，N，N′，N′-tetraacetic acid，CyDTA)、O，O′-双(2-氨基乙基)乙烯二醇-N，N，N′，N′-四醋酸(Ethylenebis(oxyethylenenitrilo)tetraacetic acid，EGTA)、N-(2-羟丙基)亚胺基二醋酸(Hepatobiliary Iminodiacetic Acid，HIDA)、亚胺基二醋酸(iminodiacetic acid，IDA)、氮川基三醋酸(nitrilotriacetic acid，NTA)、氮川基三甲基磷酸(Nitrilotris(methylenephosphonic acid，NTPO)以及该些之盐类。

12.一种锂试剂套组，其特征在于，根据权利要求1所记载之锂试剂组成物之组成之中，第一试剂包含稳定剂与上述pH值调节剂，第二试剂包含以将上述四苯基卟啉

(tetraphenylporphyrin)之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之结构式

所表示之化合物、上述与水混合而成之有机溶剂、上述稳定剂及上述pH值调节剂，将该些两种试剂保存于分隔板(demarcation strip)，测量前立即将两种试剂进行混合用作根据权利要求1所记载之锂试剂组成物。

13.一种锂离子测量方法，其特征在于，其测量血清试验试料中之锂离子，其中将血清以及血浆试验试料，与形成水溶液且包含以将与四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之结构式所表示之化合物、选自二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺

(Dimethylformamide，DMF)、二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)的与水混合而成之有机溶剂、pH值调节为pH值5至pH值12的范围的pH值调节剂之锂试剂组成物接触，测量上述水溶液中的锂络合物之发色以及其光谱，算出锂之定量值。

14.根据权利要求13所述之锂离子测量方法，其特征在于，其中于上述锂络合物之发色以及其光谱中，将波长550nm，或者其附近之波长自530nm至560nm之波长带作为测量波长，测量其感度。

15.根据权利要求13所述之锂离子测量方法，其特征在于，其中于上述锂络合物之发色以及其光谱中，将波长570nm，或者其附近之波长自565nm至650nm之波长带作为测量波长，测量其感度。

16.一种锂离子测量装置，其特征在于，其测量血清以及血浆试验试料中之锂离子，具有接触装置，将血清以及血浆试验试料，与形成水溶液且包含以将与四苯基卟啉

(tetraphenylporphyrin)之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之结构式

所表示之化合物、选自二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺

(Dimethylformamide，DMF)、二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)的与水混合而成之有机溶剂、pH值调节为pH值5至pH值12的范围的pH值调节剂之锂试剂组成物接触，用测量装置，测量上述水溶液中的锂络合物之发色以及其光谱，其光谱中，将波长550nm，或者其附近之波长自530nm至560nm之波长带作为测量波长，测量其感度，或者，对波长570nm，或者其附近之波长自565nm至650nm之波长带之感度进行测量，用算出装置计算锂之定量值。

说明书

锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法及测量装置

【技术领域】

[0001] 本发明关于一种用于定量测量生物试料或环境试料等之水溶液中之锂的锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法及测量装置。【背景技术】

[0002] 先前由于含有锂之情绪稳定药、抗忧郁药效果好，故被经常使用，但是必须控制好投药时血清中之锂浓度到合适范围。

[0003] 作为用于液体中之锂之定量测量的锂试剂组成物，一般而言，与双极性障害(躁忧郁病)之治疗药，或者抗忧郁药一起作为情绪稳定药，而广泛将碳酸锂锭(经口投药)作为处理方法。碳酸锂(Li2CO3)具有若非锂中毒之血中浓度附近处理方法，则无法显现投药效果之特征，治疗域与中毒域非常近，药物血中浓度监测指定为必要项目(TDM)。

[0004] 进而详细而言，经常投药患者之试料血浆内之锂浓度必须调节为0.6～1.2mEq/L，但是若血清中之锂浓度为0.6mEq/L以下并且过少，则没有抗忧郁效果，相反，一般而言若血浆浓度超过1.5mEq/L，过剩投药，则浓度变大，有时会引起锂中毒过量服用会引起致命性伤害，出现包括发抖、咬合障害、眼球震颤、肾障害、痉挛之中毒症状。若看见潜在的危险预兆时，中止治疗，必须再测量血浆浓度，进行缓解锂之中毒之措置。

[0005] 如此，即使锂盐之抗忧郁药对治疗忧郁病患者等有效果，亦由于过剩投药之情形时会產生重大障害，故投药含有锂之抗忧郁药之情形时，必修将血清中之锂浓度经常监控在0.6～1.2mEq/L。

[0006] 因此，先前必须定量测量血清中之锂，并且可对锂之比色进行测量的临床检查用之液状试剂组成物之开发得到了推进。

[0007] 作为该先行技术，专利文献1中揭示有使用原色体穴状配体离子载体(cryptandionophore)之测量生物学的分析物中之锂浓度的试剂组成物。

[0008] 此外，专利文献2中，具有吡咯环(pyrrole ring)之大环状(big ring form)化合物，于吡咯环之β位(β site of pyrrole ring)结合有8个之溴(Br)原子，与锂离子反应之分析试剂。

[0009] 此外，作为非专利文献1，揭示有一种与四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之化合物，可对锂离子进行检测与分离。

[0010] [先行技术文献]

[0011] [专利文献]

[0012] [专利文献1]日本专利特开平7-113807号公报

[0013] [专利文献2]欧州专利1283986号公报(B1)

[0014] [非专利文献1]分析化学Vol.51,No.9,PP.803-807(2002)[F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之合成锂离子之分离与检测之应用]小柳健治与田端正明。【发明内容】

[0015] 已知有几种先前之锂试剂组成物，但是其组成有毒物质(toxic matter)，原药供给不稳定且高价，几乎所有之原药不溶于水，或者一旦溶解于水则失活不发色，且发色反应慢。

[0016] 克服该些的专利文献2中所揭示之技术可采用发色法，但是由于发色感度过大，则必须进行分析物之稀释处理，试剂组成物之样品pH值为11以上，故藉由空气中之CO2易变质或，测量数据不稳定，进而，若pH值为11以上，则由于已经使用氢氧化钠或氢氧化钾之强硷性氢氧化物溶液(strong alkali solution of the hydroxide)，故不能将pH值维持于固定值，此外，由于该些有害物质，故对于使用者而言规避之物，使用麻烦或实际之保存不能用通用容器而应用专用容器，为了弥补该些之欠陥，机械的设备必须为大型且专用的机器，因而缺乏通用性的问题。因此，存在难以适用即时监测(online moniter)，POCT(Point Of Care Testing)的问题。

[0017] 因此，前述之专利文献1之将锂之定量作为目的之试剂组成物，虽使用与本发明完全不同之化合物，但只能于pH值为12之情形下使用，如前所述，若pH值为11以上，则存在如下问题，即已经只能使用氢氧化钠或氢氧化钾之强硷性氢氧化物溶液(strong alkali solution of the hydroxide)，该些有害物质(harmful matter)，故对于使用者而言使用麻烦，为了弥补该些，必须使用大型之专用机器，因而缺乏通用性。

[0018] 此外，非专利文献1中小柳等人之论文揭示了使用F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)可对锂离子进行分离与检测，若不适用油性且有毒物质(toxic matter)氯仿(trichloromethane)进行溶剂抽出，则不能进行锂之检测与分离。存在如下问题，即首先，若不对水溶液中之锂进行繁杂之前处理，则不能进行直接定量，尤其是，不能对血清中之锂离子进行 迅速且定量的测量。如此 ，使用F28四苯基卟啉(F28tetraphenylporphyrin)难以检测出水溶液中之锂离子，定量地测量浓度比较困难，至今未实现。

[0019] 本发明解决上述问题而成者，提供一种可测量生物试料或环境试料等水溶液中之锂浓度(定量)之锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法及测量装置，还提供一种藉由简便之比色计立刻测量锂浓度，且，藉由目视即可筛选判定(screening and judge)之锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法及测量装置。

[0020] 为了解决上述问题，本发明提供一种锂试剂组成物，其特征在于，包含：以将与四苯基卟啉之碳原子(carbon atom of tetraphenylporphyrin)结合之氢原子全部取代为氟原子之结构式

[0021] [化1]

[0022]

[0023] 所表示之化合物，与水混合而成之有机溶剂，pH值调节剂。

[0024] 生物试料或环境试料等的水溶液中之锂与上述锂试剂组成物，尤其是四苯基卟啉之与碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之化合物成为螯合剂(发色剂)进行反应，从而发色。

[0025] 本发明亦发现F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)化合物与锂离子之发色反应之自黄色至红色之呈色变化难以获得，但是由于血清之锂浓度于0.6mg/dL～2.0mg/dL(0.9mM～3mM)之范围内可准确获得定量值，因此本发明之实施例中，于上述锂浓度范围中，若将F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之化合物之浓度设为0.1～1.0g/L，较佳的是0.5g/L，则可正确地进行测量。

[0026] 关于本发明之pH值调节剂，pH值未满5.0之酸性侧时，本发明之发色剂(螯合剂(chelate))之F28四苯基卟啉化合物(F28 tetraphenylporphyrin compound)未与锂离子结合，故不起呈色变化，难以进行锂之定量。此外，pH值为5～7之间时，上述发色剂与锂离子进行特异性反应，但是发色速度缓慢。另一方面，pH值为8～11时，上述发色剂与锂离子迅速反应，且可获得稳定之发色错合物。pH值超过11之硷性侧时，上述螯合剂(chelate)、所生成之发色错合物之色调之经时的稳定性较差。其原因吸收空气中之二氧化碳导致pH值容易变动。因此，作为锂试剂组成物之pH值调节剂，必须有pH值为自7至12之范围之pH值调节剂，或者作为pH值调节剂之pH值缓衝剂，有必要使用较佳的是pH值为8～11之pH值调节剂、pH值缓衝剂。

[0027] 上述pH值调节剂选自包含氢氧化钠(sodium hydroxide)、氢氧化钾(Potassium hydroxide)、氨(ammonia)之硷性试剂(alkaline reagents)；包含醋酸(acetic acid)、磷酸(phosphoric acid)、盐酸(hydrochloric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、乙二酸(ethane diacid)、盐酸(hydrochloric acid)、硝酸(nitric acid)之酸剂(acidulant)、以及该些之盐类，上述pH值调节剂既可为pH值缓衝剂，作为柠檬酸(citric acid)、碳酸(carbonic acid)、重碳酸(bicarbonic acid)、磷酸(phosphoric acid)、琥珀酸(succinic acid)、苯二甲酸(orthobenzene dicarboxylic acid)、氯化氨(ammonia Chloride)、氢氧化钠(sodium hydroxide)、氢氧化钾(Potassium hydroxide)、良好之缓衝剂(buffer)，使用选自脂肪酸甲酯磺酸盐(MES)、双-三异丙基乙磺醯(Bis-Tris)、己二酸(ADA)、呱嗪-1,4-二乙磺酸(PIPES)、ACES、3-(N-吗啉基)-2-羥基丙磺酸(MOPSO)、BES、MOPS、TES、HEPES、3-[N-N-双(2-羥乙基)氨基]-2-羥基丙磺酸(DIPSO)、3-三羥甲基甲胺-2-羥基丙磺酸(TAPSO)、呱嗪-1,4-二羥基丙磺酸(POPSO)、4-(2-羥乙基)呱嗪-1-2-羥基丙磺酸(HEPPSO)、EPPS、Tricine、N-二(羥乙基)甘氨酸Bicine、TAPS、N-2-环已胺基乙磺酸(CHES)、3-(环己胺)-2-羥基-1-丙磺酸(CAPSO)、CAPS、以及该些之盐类。

[0028] 藉由该些之含有，上述锂试剂组成物于pH值5之pH值12之范围内锂可进行特异性发色反应。

[0029] 本发明之溶剂(solvent)(极性溶剂(polar solvent))必须是与水混合而成之有机溶剂，但若能与被分析物之血清、血浆、溶出液等之水溶液均匀混合，则即使是将有机溶剂作为主要之溶液，或者添加有有机溶剂之水溶液。其于藉由通用型之自动分析装置、紫外可见分光光度测量定分析物中之锂浓度之情形时，其被分析物水溶液，故其试剂组成物亦可同样为水溶液。

[0030] 上述有机溶剂选自二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)、二甲基甲醯胺(dimethylfomamide，DMF)、二甲基乙醯胺(dimethylacetamide，DMA)。

[0031] 本发明之试剂组成物中，实际之產品中混入有稳定剂，但是本发明中使用界面活性剂作为稳定剂。该界面活性剂提高F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之分散性，进而有可防止发色反应时之由于试料导致之悬浊，为了获得该些之作用，有必要混入稳定剂。

[0032] 该些之稳定剂非离子性界面活性剂或者阴离子性界面活性剂，非离子性界面活性剂选自山梨糖醇酐脂肪酸酯(sorbitan fatty acid ester)、五红蘚醇脂肪酸部分酯(pentaerythritol partial fatty acid ester)、丙二醇单丁基醚脂肪酸酯(propylene glycol mono butyl ether fatty acid ester)、甘油脂肪酸单酯(glycerine fatty acidmonoester)、聚氧乙烯烷基醚(polyoxyethylene alkyl ether)、聚氧乙烯烷基苯醚(polyoxyethylene alkyl phenyl ether)、聚氧乙烯聚丙二醇(polyoxyethylene polyoxypropylene glycol)、聚氧乙烯脂肪酸部分酯(polyoxyethylene partial fatty acid ester)、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸部分酯(polyoxyethylene sorbitan partial fatty acid ester)、聚氧乙烯脂肪酸酯(poly oxyethylene fatty acid ester)、脂肪酸二乙醇醯胺(fatty acid diethanol Amide)、脂肪酸单乙醇醯胺(fatty acid monoethanol Amide)、聚氧乙烯脂肪酸醯胺(polyoxyethylene fatty acid amide)、聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octyl phenyl ether)(登录商标：TritonX-100)、p-壬基苯氧基聚缩水甘油醚(p-nonyl phenoxy polyglycidyl ether)以及该些之盐类。作为较佳的非离子性界面活性剂，聚氧乙烯辛基苯基醚(polyoxyethylene octyl phenyl ether)(Triton X-100(注册商标)等)、p-壬基苯氧基聚缩水甘油醚(p-nonyl phenoxy polyglycidyl ether)等。

[0033] 此外，作为稳定剂之阴离子性界面活性剂存在有烷基硫酸酯盐(alkyl sulfate)，聚氧乙烯烷基醚硫酸酯盐(polyoxyethylene alkyl ether sulfuric ester)，聚氧乙烯苯醚硫酸酯盐(polyoxyethylene phenylene oxide sulfuric ester)，烷基苯磺酸盐(alkyl benzene sulfonate)，烷烃磺酸盐(alkane sulfonate)等。作为代表性者，可使用选自十二烷基硫酸钠(Sodium dodecyl sulfate)，十二烷基苯磺酸钠(sodium dodecyl benzene sulfonate)，聚氧乙烯烷基苯醚硫酸酯钠(Polyoxyethylene alkyl biphenylene oxidesodium sulfovinate)以及该些之盐类。

[0034] 本发明之锂试剂组成物藉由于试料中共存之锂以外之离子回避妨碍锂浓度之测量，或者抑制试剂组成物之氧化，为了赋予其保存稳定性，亦可含有1种或者多数种掩蔽剂(masking agent)。然而，若锂以外之离子较少，则无必须包含之必要。

[0035] 作为该些锂试剂组成物中所添加至掩蔽剂(masking agent)，可使用选自三乙醇胺(Triethanolamine)(titanium triethanolaminato)、乙二胺(Ethylenediamine)、N,N,N',N'-四(2-吡啶基甲基)乙二胺(N,N,N′,N′-tetrakis-(2-Pyridylmethyl)ethylenediamine,TPEN)、吡啶(pyridine)、2,2-联吡啶(2,2-Bipyridyl)、丙烯二胺(Diallylamine)、二乙烯三胺(triethylene diamine)、二乙烯三胺-N,N,N',N",N"-五醋酸(Diethylene triamine penlaacetic acid，DTPA)、三乙烯四胺(triethylene tetramine)、三乙烯乙基四胺-N,N,N',N",N"',N"'-六醋酸(Triethylene tetraminehexaacetic acid，TTHA)、1,10-菲绕啉(1,10-phenanthroline)、乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)、O,O'-双(2-氨基苯基)乙烯二醇-N,N,N',N'-四醋酸(O,O'-bis(2-aminophenoxy)-ethane-N,N,N'N'-tetraacetic acid，BAPTA)、N,N-双(2-羥基乙基)甘氨酸(N,N-Bis(2-hydroxyethyl)glycine，Bicine)、反式-1,2-二氨基环己烷-N,N,N',N'-四醋酸(trans-1,2-Diaminocyclohexane-N,N,N',N'-tetraacetic acid，CyDTA)、O,O'-双(2-氨基乙基)乙烯二醇-N,N,N',N'-四醋酸(Ethylenebis(oxyethylenenitrilo)tetraacetic acid，EGTA)、N-(2-羥丙基)亚胺基二醋酸(Hepatobiliary Iminodiacetic Acid，HIDA)、亚胺基二醋酸(iminodiacetic acid，IDA)、氮川基三醋酸(nitrilotriacetic acid，NTA)、氮川基三甲基磷酸(Nitrilotris(methylenephosphonic acid，NTPO)以及该些之盐类者。较佳的是三乙醇胺(Triethanolamine)。

[0036] 本发明之锂试剂组成物为了防止由于微生物导致之劣化，可以包含防腐剂。防腐剂无特殊限定，例如可使用叠氮化钠(Sodium azide)、Procline(注册商标)等。防腐剂之浓度亦无特别限定，于使用叠氮化钠(Sodium azide)之情形时，一般而言作为防腐剂而使用之浓度，例如对于反应溶液0.1质量％左右亦可。然而，作为以长期保存为目的之產品之情形时，通常使用防腐剂作为处理方法。

[0037] 此外，为了使锂试剂组成物之功能可长期保存，本发明之锂试剂组成物之组成中，将包含稳定剂、pH值调节剂以及pH值缓衝剂之第一试剂，与将包含四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之化合物(compound)、与水混合而成之有机溶剂、稳定剂、pH值调节剂以及pH值缓衝剂之第二试剂保存于分隔板(demarcation strip)，并于测量前立即将两试剂混合，可作为用作如请求项1所记载之锂试剂组成物之锂测量试剂套组。

[0038] 本发明之锂试剂组成物，其特征在于，于使用其时，与如前所述之血清以及血浆试验试料之锂试剂组成物接解，测量锂错合物之发色、吸光度以及其光谱(spectrum)，同样地将浓度既知之锂标准试料作为基准浓度算出未知试料之定量值。

[0039] 较佳的是，锂错合物之发色以及其光谱中，将自波长550nm或者其附近之波长530nm至560nm之波长带作为测量波长测量其感度，或者，测量将波长570nm，或者其附近之波长自565nm之650nm之波长带之感度来算出锂浓度。所谓该情形下之感度，与紫外可见分光光度计中之吸光度或吸光度差不同。

[0040] 较佳的是，作为测量装置，与前述血清以及血浆试验试料之锂试剂组成物接解，测量锂错合物之发色以及其吸光度或者其光谱，将其光谱中波长为550nm，或者其附近之波长自530nm至560nm之波长带作为测量波长测量其感度，或者，测量波长570nm或者其附近之波长自565nm至650nm之波长带之感度算出锂之定量值。

[0041] 【发明之效果】

[0042] 根据本发明之锂试剂组成物、使用其之锂离子测量方法以及测量装置，可测量生物试料或环境试料等之水溶液中之锂浓度，由如请求项1至13之锂试剂组成物而成之校正曲线于锂浓度0.6～1.2mEq/L之实用区域中为直线，可使用比色计或紫外可见分光光度计之数值藉由简单演算求得浓度。为此，可藉由普及型之分光光度计迅速定量测量生物试料之血清分析物之锂浓度，其情报例如亦可作为TDM治疗之管理指标。此外，亦可用于临床化学自动分析装置对多分析物短时间内进行定量分析。

[0043] 此外，藉由将锂试剂组成物之pH值调节至pH5至pH12之范围内，可进行分光测量，但是pH值未满5之酸性侧，本发明之螯合剂(chelate)(F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))不与锂离子结合，不会產生依存于其锂浓度的呈色变化。于超过pH值12之硷性侧，上述螯合剂(chelate)、所生成之发色错合物之色调之稳定性较差。此外，因吸收空气中之二氧化碳而导致pH值易于变动，此亦对色调之稳定性產生较差影响。pH值为5～7之间上述螯合剂与锂离子结合，作为锂错合物可特异性地发色，但发色速度缓慢，pH值为8～11时，上述螯合剂与锂离子迅速结合，特异性地且稳定地发色。因此，较佳的是pH值为8～11。

[0044] 进而，四苯基卟啉金属错合物(tetraphenylporphyrin metel complex)具有于可获得称为索雷谱带(Soret band)最大感度之自380nm至460nm附近之典型的光谱区域，亦可将此作为测光波长，但是对于具有临床意义的血清分析物中之锂浓度范围，感度过大，因此必须进行试料之稀释操作，伴随而来的操作会繁杂化，由于增设稀释装置等导致测量装置之大型化。

[0045] 另一方面，本发明可藉由将低于上述索雷谱带(Soret band)波长数倍之感度之波长550nm，或者其附近之自530nm之560nm之波长带作为测光波长，对分析物中所含之浓度获得最适感度，藉此，无须稀释操作，或者稀释装置等之繁杂操作，以及随之而来的附带设备。进而，由于本发明之该波长带比将索雷谱带(Soret band)作为测光波长之情形时校正曲线之直线性更好，因此由简单比色计、紫外可见分光光度计获得之测量值易于进行浓度之演算，亦由于色调自黄色变为红色变为鲜艳顏色，目视即可对浓度水平进行判定。

[0046] 此外，于将索雷谱带(Soret band)作为测光波长之情形时，其波长带之色调与混合在一起之其他有机物或著色成分，例如硝酸根离子(nitrate)，肌酸酐(creatinine)，胆红素(bilirubin)，胆绿素(biliverdin)，溶血之血色素(Hemoglobin)等起因之锂定量值之影响未知，将本发明中之波长带作为测光波长之情形时，其影响较小，可更加正确地求得锂浓度。

[0047] 因此，先前之锂浓度之测量必须大型之专用机器，但藉由本发明之携带型比色计可对锂浓度进行测量，并且亦可构成POCT套组。【附图说明】

[0048] 图1表示本发明之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之适量浓度之参考计算表的图。

[0049] 图2藉由本发明实施例1之紫外-可见分光光度计测量之实验结果之图表。

[0050] 图3表示本发明实施例1中不同测光波长之锂浓度校正曲线之图表的图。

[0051] 图4本发明实施例1之F28四苯基卟啉-锂错合物(F28 tetraphenylporphyrin-Li complex)生成之光谱变化(发色反应)之图表。

[0052] 图5本发明实施例1之血清试料测量值与原子吸光法(先前法)测量值之相关试验结果之图表。

[0053] 图6本发明中藉由将管理血清作为试料之自动分析装置而获得之测量值之比较[表1]。

[0054] 图7本发明之藉由目视之锂检测之[表2]。

[0055] 图8表示本发明实施例1之吸光度之光谱图表的图。

[0056] 图9本发明之不同有机溶剂之测量值之比较之[表3]。

[0057] 图10本发明之不同稳定剂之测量值之比较之[表4]。

[0058] 图11表示本发明中不同掩蔽剂(masking agent)之测量值之比较之[表5]的图。【具体实施方式】

[0059] 本案发明者们，对可简单定量测量血清以及血浆中之锂浓度之锂试剂组成物进行精心，著眼于如上所述之非专利文献1中所揭示之制法，使用具有吡咯环之大环状化合物，将与四苯基卟啉之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子使氟原子成为28个之下述结构式(以下称为F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))，从而完成本发明。

[0060] [化1]

[0061]

[0062] 作为利用具有吡咯环之大环状化合物之锂试剂组成物，于如上所述之专利文献2、3中开发有一种具有吡咯环之大环状化合物之吡咯环之β位上结合有8个溴(Br)原子，与锂离子进行反应之分析试剂，但是若pH值不为11以上之硷性，则难以与锂离子进行反应，然而若为F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)，则由于自pH值5至pH值12亦会反应，故本发明将F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)作为螯合剂(chelate)，用于定量测量水溶液类之锂离子，作为锂定量测量试剂，于以下说明本发明之锂试剂组成物之实施例。

[0063] 【实施例1】

[0064] 实施例1(试料1)

[0065] 实施例1中制备作为pH值缓衝液之第1试剂，制备作为发色试液之第2试剂，于测量前立即将两液混合，制备锂试剂组成物。其由于虽亦可先将两液制备好放置备用，但为了避免由于长时间之保存而导致之试剂劣化。

[0066] 此处，说明试剂组成物之制作方法。

[0067] 首先，主要制备作为pH值缓衝液之第1试剂，其组成如下。

[0068] [实施例1]

[0069] (1)第一试剂(作为稳定剂与缓衝液)

[0070] 螯合剂：无

[0071] 有机溶剂：无

[0072] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：

[0073] TritonX-100(注册商标)

[0074] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))   1.0重量％[0075] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0076] 于以上中添加7重量％之氯化氨(Ammonium chloride)，将pH值调节为10并以纯净水制成1L，保管于通用之保存容器。

[0077] 此外，将TritonX-100(注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))作为1.0重量％，但若过少，则测量时偶尔会產生浑浊，若过多，则反应容器内会產生泡，由于两个因素均有可能影响再现性，故较佳的是0.1～5.0重量％之范围，更佳的是1.0重量％。

[0078] 此外，掩蔽剂将三乙醇胺(Triethanolamine)制为10mM，但若过少，则于过剩含有锂离子以外之夹杂离子之试料中其掩蔽效果下降，若过多，则会掩蔽锂离子自身，成为测量误差之原因，因此较佳的是1.0～100mM之范围，更佳的是10mM。

[0079] 接著，主要制备作为发色试液之第2试剂，其组成如下。

[0080] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0081] 螯合剂：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)      0.5g/L[0082] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)         20重量％[0083] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100(注册商标)[0084] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))   1.0重量％[0085] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0086] 于其中添加MOPS(良好缓衝剂)使浓度为0.05M(mol/L)，将pH值调节为7.0，以纯净水制成1L，保管于通用之保存容器中。

[0087] 然而，本实施例1中，获得F28四苯基卟啉化合物(F28 tetraphenylporphyrin compound)之发色反应较难，但是临床检查之血清中之锂定量中，其浓度较广，可于0.6mM～3mM之范围中求得正确度。本发明之实施例中，可发现，上述锂浓度范围中，若将F28四苯基卟啉之化合物(F28 tetraphenylporphyrin compound)之浓度设为0.1～1.0g/L，较佳的是设为0.5g/L，可正确地测量。

[0088] 锂浓度为0.6mM～3mM之范围中，于最终的试剂组成物之浓度为每升0.1～1.0g/L之范围内可测量F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)，较佳的是0.5g/L。若过少，则不会与F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)锂离子充分反应，若过多，则会產生F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)由来之空白之吸光度増加之不良，较佳的是0.5g/L。

[0089] 若对该点进行更详细地说明，则F28四苯基卟啉与锂离子之反应可形成莫耳比为1：1之螯合物错合物之反应。此处，分析物中之锂浓度为含有3mM之分析物，以使用本试剂组成物之实施例1之条件进行反应之情形时，其反应系之锂浓度为约0.02mM。因此，以1:1进行反应之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)浓度(concentration)亦于反应系内不超过0.02mM以上，则分析物中之锂过分不足，不能进行反应。

[0090] 一般地，螯合剂(chelate)与金属离子之错合物形成反应(发色反应)必须对于被反应物质(锂)有等倍～10倍之莫耳浓度(Molar concentration)之螯合剂(chelate)(F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))，如图1之F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)之适量浓度之 参考计算表之图 中所示 ，将反 应时之F2 8四 卟啉( F2 8 tetraphenylporphyrin)之浓度以自等倍至10倍之方式构成试剂组成物，但是现实性试剂组成物之添加量、分析物量之所谓测量反应时之用量之参数，藉由其测光机种或目的之閾值而存在有若干之差，因此其试剂组成物之螯合剂(chelate)浓度与等倍之0.1g/L相比，5倍量之0.5g/L时更能耐受广泛的测量条件。例如，以分析物量之微量化技术较低之机种测量之情形时，可预测相对于实施例1之分析物量增加2倍～5倍左右，因此若预先准备5倍量之试剂组成物制成0.5g/L，则不存在不足之情形。另一方面，即使加入莫耳比10倍以上之螯合剂(chelate)，对于影响发色反应之速度论性方面无意义，试剂空白值之増大之虞，故采用其并无优点。

[0091] 如以上所述，只要螯合剂(chelate)与锂之反应莫耳比之条件可达成，例如，将第二试剂之螯合剂(chelate)(F28四卟啉(F28 tetraphenylporphyrin))之浓度设为1.0g/L之情形时，可将反应时之第二试剂之添加量减半。或者，使其分析物量减半之情形时，可同样地将螯合剂(chelate)浓度减半。

[0092] 如此，本实施例1中，考虑到将F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)设为0.5g/L，但是满足反应莫耳量，且将试剂空白值设为最小限，其结果是0.1～1.0g/L之范围最适。

[0093] 此外，将二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)设为5～30重量％，但若过少，则F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)于溶液中之分散性下降，若过多，则试剂组成物中之有机溶剂之比例増加，故较佳的是20重量％。

[0094] 因此，本实施例之F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)将四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)之碳原子结合之氢原子全部取代为氟原子之下述结构式。

[0095] [化1]

[0096]

[0097] (3)对使用将上述第一试剂与第二试剂进行混合之锂试剂之锂浓度既知试料之校正曲线之作成进行说明。

[0098] 实施例1中，于6μL试料中添加720μL第一试剂(缓衝液)、240μL第二试剂(发色试液)。该情形下，第一试剂于pH值10时具有缓衝能，试验时将第一试剂、第二试剂、试料进行混合时之试验液之pH值大约为10。

[0099] 如此，作为螯合剂(chelate)使用F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)，藉此，于pH值5～10之范围内达成发色反应，构成pH值10以下之具有较强之pH缓衝作用之锂测量试剂，因此可藉由空气中之CO2之吸收减低pH值变动，作为结果，可避免对测量值產生较差影响。此外，藉此可保存于通用之容器中。此外，第一试剂与第二试剂于使用前立即以相同之比例进行混合，并且将混合液同样之容量添加至试料中，该情形下，亦可于6μL试料中添加940μL混合液作为测量对象之试验液。

[0100] 于该混合试剂中添加有试料之pH值10之试验液，于常温下反应10分鐘反应后，使用紫外-可见分光光度计(日立U-3900型)对照试剂空白，测量550nm之吸光度。将其结果表示于图2之Li浓度mg/dL与吸光度之图表，以及，图4中生成F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)-锂错合物之可见部之光谱变化之图表。

[0101] 并非将四苯基卟啉(tetraphenylporphyrin)金属错合物中称为典型的索雷谱带(自380nm至460nm附近)之最大感度之波长，而是将对于血清分析物中锂浓度范围最适感度之波长550nm，或者，其附近之波长自530nm至560nm之波长带作为测光波长，藉此，不需要稀释操作，或者稀释装置等之繁杂操作，伴随而来之附带设备。

[0102] 进而，如图3之Li浓度mg/dL与吸光度之图表(光波长*405nm，×415nm，●550nm)所示，上述波长550nm，或者，其附近之波长530nm560nm之波长带比将索雷谱带(Sauvy band)作为测光波长之情形时，校正曲线之直线性良好，因此简单比色计或分光光度计之浓度之演算容易，色调自黄色至红色为变为鲜艳顏色，藉由目视，亦可能判定浓度水平。因此，先前之锂浓度之测量中必须使用大型之专用机器，然而藉由本发明，可使用携带型比色计或通用紫外可见分光光度计对锂浓度进行测量，亦可构成POCT套组。

[0103] 但是，图3之图表中，波长●550nm实施例1之波长，索雷谱带(Sauvy band)之测光波长*405nm×415nm，与实施例1同样地添加第1试剂、第2试剂，但是由于感度过高，则将试料稀释5倍，实施测量反应，使用405nm与415nm之波长。如自图3之图表可判断，405nm与415nm之波长之校正曲线直线，但本实施例之550nm作为测光波长之情形时，可获得直线性良好之校正曲线。

[0104] 此外，如图4所示之F28四苯基卟啉-锂错合物(F28 tetraphenylporphyrin-Li complex)生成之光谱变化之图表，锂浓度为0.6mg/dL、1.2mg/dL、1.8mg/dL、2.4mg/dL、3.0mg/dL与吸光度为直线性増加已经相当明确。将锂浓度作为比例，卟啉-金属错合物中典型的415nm(索雷谱带)之峰与图中所示之550nm之吸收峰増大，570nm之吸收峰减少，因此作为测光波长，可求得吸光度差，但是如上所述，为了获得直线性良好之校正曲线，较佳的是将550nm作为测光波长。

[0105] 然而，本实施例1中将吸光度设为550nm，但波长自540nm至560nm之波长带亦可作为测光范围。其因为根据测量机器不同，有时会无550nm之测光滤光片之情形，该情形下亦可将其附近產生感度之540nm或者560nm设定为测光波长。如图4之实施例1之锂浓度吸光度之图表所示，570nm之感度之减少对于锂浓度亦定量，故将试剂空白作为对照求得吸光度差(ΔAbs)，故可用作测光波长。

[0106] 进而，偶尔根据患者分析物之试料，于波长550nm產生干涉的夹杂物质，550nm波长中数据会產生误差之情形时，为了回避该现象，亦可自波长570nm，或者其附近之自565nm至650nm之范围选择测光波长，将感度之减少用作吸光度差而算出锂浓度。

[0107] 由以下之实验结果对本发明之实施例1之锂试剂中几乎可正确测量锂浓度进行说明。

[0108] [以紫外-可见分光光度计(日立U-3900型)测量之实验结果]

[0109] 图2之图表紫外-可见分光光度计(日立U-3900型)之测量试验结果。其将横轴X为预先调剂之既知之锂离子浓度(Li浓度mg/dL)，纵轴Y为紫外可见分光光度计550nm之吸光度差，制成曲线、直线回归之结果。

[0110] 自该图2之图表可判断，所获得之吸光度与锂浓度成比例，画出直线性良好之校正曲线。

[0111] [将血清作为试料之情形时之原子吸光法(先前法)与藉由本发明之方法之相关试验结果]

[0112] 图5之图表图2中所说明之实施例1之测量法，将相同血清作为试料之先前之原子吸光法(先前法)之锂浓度测量值之相关试验结果。纵轴Y本发明之锂浓度测量值，横轴X原子吸光法(先前法)之锂浓度测量值，如图2所示之回归线所获得之两测量值表示95％以上之良好相关。因此结果表明，对于相同血清试料，本发明之试剂组成物之紫外-可见吸光光度定量法，亦可对血清试料中之锂正确进行定量。

[0113] [藉由将管理血清作为试料之自动分析之测量值之比较]

[0114] 作为标注有锂浓度之管理血清，将质控血清U(PrecinormU)(洛什制)，血脂病理值质控(PrecipathU)(洛什制)，质控定值H(PathonormH)(SERO AS制)，Auto norm(SERO AS制)作为试料，藉由生化学自动分析装置(日立H-7700形)，将546nm(550nm近波长本机所封装之波长)作为测光波长，藉由1终点法(point end method)法进行测量。

[0115] (装置参数)

[0116] 试剂：0.24mL

[0117] 试料：0.005mL

[0118] 测光波长(主/副)：546nm/700nm

[0119] 测光时间：10分鐘

[0120] 温度：37℃

[0121] 1终点法与増加法

[0122] 将上述设定条件之实验结果表示于图6之[表1]，本发明之实施例之测量值相对于保证值良好且一致，即使以临床检查用自动分析装置，亦可充分测量血清中之锂。

[0123] [藉由目视检测锂之方法」

[0124] 将藉由测量对象之试验液之目视观察之结果表示于图7之[表2]。

[0125] 于8μL试料中添加920μL将第一试剂与第二试剂混合而成之发色试液，于常温反应10分鐘后，藉由目视观测其呈色。试料色调样本所定浓度之锂标准液，使用不同浓度水平之管理血清用进行比较。

[0126] 确认有各浓度域中自黄色至红之呈色变化，管理血清之呈色表明与色调样本一致。可知即使不使用特别装置，亦可用亦迅速且简便地判定血清中之锂浓度。

[0127] 如上所述，可知以本发明之实施例1之锂试剂可测量锂浓度。

[0128] 【实施例2】

[0129] 其次，与实施例1组成相同，调制方法亦基本相同，但是使用于锂试剂组成中，添加MOPS以使第一试剂浓度成为0.1M(mol/L)，将pH值调制至8.0，以纯净水制成1L。即，将试验时之第一试剂、第二试剂、试剂进行混合之试验液之pH值调节为8左右。

[0130] [实施例2]

[0131] (1)第一试剂(作为稳定剂与缓衝液)

[0132] 螯合剂(chelate)：无

[0133] 有机溶剂：无

[0134] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100(登录商标)[0135] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))   1.0重量％[0136] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0137] 如上所述，以成为0.1M之方式添加MOPS pH值8调节以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0138] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0139] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin) 0.5g/L[0140] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)             20重量％[0141] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100

[0142] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))1.0重量％[0143] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)         10mM[0144] 于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，调节至pH值7.0，以纯净水制成
1L，保管于通用之保存容器中。

[0145] 锂浓度之测量中，与实施例1同样，于6μL试料中添加720μL第一试剂(缓衝液)、240μL第二试剂(发色试液)，常温10分鐘反应后，使用紫外可见分光光度计(日立U-3900型)，将试剂空白作为对照测量波长550nm之吸光度。

[0146] [藉由紫外-可见分光光度计(日立U-3900型)测量之实验结果]

[0147] 图8之图表藉由紫外-可见分光光度计(日立U-3900型)测量之实验结果，横轴X预先调剂既知之锂离子浓度(Li浓度mg/dL)，纵轴Y紫外可见分光光度计之550nm之吸光度差制成曲线进行直线回归之结果。

[0148] 自该图8之图表中可知，以pH值8所构成之试剂组成物，即以pH值8之测量条件获得之吸光度差与锂浓度依赖性成比例，形成了直线性良好之校正曲线。

[0149] 但是，pH值8之测量条件下，反应速度稍迟，定量时10分～20分左右进行稳定化。另一方面，设为pH值10之情形时，10分鐘以内反应完结。因此，若将本发明之锂试剂组成物之缓衝系之pH值设为5～10之范围，则无必要如pH值为11以上之情形时，使用类似氢氧化钠或氢氧化钾之强硷性氢氧化物溶液为主之缓衝系，且操作亦简便。pH值之设定根据使用者之需要而定，若为pH值10，则反应速度亦快，可使用能充分维持缓衝力之良好缓衝剂、氯化氨类、碳酸类。若考虑实用性，则较佳的是以快速且正确反应之实施例1之pH值10之缓衝系进行实施。

[0150] 如此，作为本发明之锂试剂组成物之pH值调节剂，必须有pH值自7至12之范围之pH值调节剂，或者作为pH值调节剂之pH值缓衝剂，更佳的是，使用pH值为8～11之pH值调节剂、pH值缓衝剂，进而更较佳的是使用pH值为10前后之pH值调节剂、pH值缓衝剂。

[0151] 【实施例3】

[0152] 其次，关于与水混合而成之有机溶剂之选择进行说明，本发明之溶剂重要的是与水混合而成之有机溶剂，其由于测量时之反应溶液为血清等通常水溶液，若试剂组成物中之成分作为水溶液而稳定化之液状，亦可为以有机溶剂为主之液体，或者可为添加有机溶剂之水溶液。尤其是，藉由通用型之自动分析装置、紫外可见分光光度计测量分析物中之锂浓度之情形时，较佳的是基本上添加有机溶剂之水溶液。

[0153] 因此，与实施例1、3不同之与水混合而成之有机溶剂于实施例3进行说明。实施例3基本上与实施例1之调制方法相同，如下所述，锂试剂中不同的是第二试剂之有机溶剂不是二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)(20重量％)，而是二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)(20重量％)。

[0154] [实施例3]

[0155] (1)第一试剂(作为缓衝液)

[0156] 螯合剂(chelate)：无

[0157] 有机溶剂：无

[0158] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100

[0159] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))1.0重量％[0160] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)           10mM[0161] 如上所述，添加7重量％之氯化氨，调节至pH值10以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0162] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0163] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)   0.5g/L[0164] 有机溶剂：二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)             20重量％[0165] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂):TritonX-100

[0166] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))   1.0重量％[0167] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)             10mM[0168] 于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整为7.0，以纯净水制成
1L，保管于通用之保存容器。

[0169] 【实施例4】

[0170] 此外，于实施例1之与水混合而成之有机溶剂二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)(20重量％)中，实施例3中为二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)(20重量％)，实施例4中作为与水混合而成之有机溶剂混入二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)(20重量％)之锂试剂组成物，测量锂离子浓度。

[0171] [实施例4]

[0172] (1)第一试剂(作为缓衝液)

[0173] 螯合剂(chelate)：无

[0174] 有机溶剂：无

[0175] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100

[0176] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))1.0重量％[0177] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)           10mM[0178] 于以上中，添加7重量％之氯化氨调整至pH值10并以纯净水制成1L，保管于通用之保存容器。

[0179] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0180] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)    0.5g/L[0181] 有机溶剂：二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)                 20重量％[0182] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100

[0183] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))1.0重量％[0184] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0185] 于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整至7.0，以纯净水制成
1L保管于通用之保存容器。

[0186] 如上所述，于实施例1之锂试剂中，将二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide)于实施例3中变更为二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)，于实施例4中变更为二甲基乙醯胺(Dimethylacetal，DMA)之试剂组成物，其餘以与实施例1同样之手续，如图9所示，对管理血清试料中之锂进行定量，如图9之[表3]所示，对本测量方法与先前之测量方法获得之测量值进行比较。

[0187] 自图9之[本发明之不同有机溶剂之测量值之比较]之[表3]结果可知，本实施例1之与水混合而成之有机溶剂之二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)20重量％组成获得之测量值为0.83mM(mmol/L)，本实施例3之与水混合而成之有机溶剂之二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)20重量％组成获得之测量值为0.81mM，藉由实施例4之二甲基甲醯胺(Dimethylformamide，DMF)20重量％组成获得之测量值为0.82mM，与藉由原子吸光光度法获得之测量值之0.82mM具有95％以上之一致。因此，藉由该些有机溶剂使F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)均匀分散，构成液状试剂组成物，如血清之水溶液试料中之锂可正确地定量。

[0188] 【实施例5】

[0189] 其次，关于锂试剂组成物之稳定剂之选择基于实验结果基进行说明。自实施例5至实施例7中锂试剂组之稳定剂基本上与实施例1调制方法相同，如下所述，对稳定剂分别于仅有非离子性界面活性剂(实施例5)，仅有阴离子性界面活性剂(实施例6)，或者并用两者之情形(实施例7)进行实验。

[0190] 首先，实施例5之仅有非离子性界面活性剂(TritonX-100(注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))之情形时(实施例5、组成自身与实施例1相同)之组成进行说明。

[0191] [实施例5]

[0192] (1)第一试剂(缓衝液)

[0193] 螯合剂(chelate)：无

[0194] 有机溶剂：无

[0195] 稳定剂(分散剂：非离子界面活性剂)：TritonX-100

[0196] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))                                                                   1.0重量％[0197] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)             10mM[0198] 于其中，添加7重量％之氯化氨，将pH值调整为10并以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0199] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0200] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)     0.5g/L[0201] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)              20重量％[0202] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂)：TritonX-100

[0203] (注册商标)(聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))                                                                    1.0重量％[0204] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0205] 于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整为7.0，以纯净水制成
1L保管于通用之保存容器。

[0206] 【实施例6】

[0207] 实施例6仅阴离子性界面活性剂(十二烷基硫酸钠(和光纯药制))之情形时(实施例6)之组成进行说明。

[0208] [实施例6]

[0209] (1)第一试剂(作为缓衝液)

[0210] 螯合剂(chelate)：无

[0211] 有机溶剂：无

[0212] 稳定剂(分散剂：仅阴离子界面活性剂)：

[0213] 十二烷基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)(sodiumlaurylsulfate)(和光纯药制)                                                                    1.0重量％[0214] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)           10mM[0215] 于其中，添加7重量％之氯化氨，将pH值调整至10，以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0216] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0217] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)    0.5g/L[0218] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)              20重量％[0219] 稳定剂(分散剂：阴离子性界面活性剂)

[0220] 十二烷基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)(和光纯药制)             1.0重量％[0221] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0222] 于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整至7.0，以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0223] 【实施例7】

[0224] 实施例7对将锂试剂组成物之稳定剂并用非离子性界面活性剂与阴离子性界面活性剂之两者之情形时(实施例7)之组成进行说明。

[0225] [实施例7]

[0226] (1)第一试剂(作为缓衝液)

[0227] 螯合剂(chelate)：无

[0228] 有机溶剂：无

[0229] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂与阴离子性界面活性剂)：

[0230] (a)非离子性界面活性剂：Triton-X100(注册商标)

[0231] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))    1.0重量％[0232] (b)阴离子性界面活性剂：十二烷基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)[0233] (和光纯药制)                                                1.0重量％[0234] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)            10mM[0235] 于其中，添加7重量％之氯化氨，将pH值调整至10，以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0236] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0237] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)   0.5g/L[0238] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)              20重量％[0239] 稳定剂(分散剂：非离子性界面活性剂阴离子性界面活性剂)：

[0240] (a)非离子性界面活性剂：Triton-X100(注册商标)

[0241] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))    1.0重量％[0242] (b)阴离子性界面活性剂：十二烷基硫酸钠(sodiumlaurylsulfate)[0243] (和光纯药制)                                                1.0重量％[0244] 掩蔽剂(masking agent)：三乙醇胺(Triethanolamine)             10mM[0245] 于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整为7.0，以纯净水制成1L，保管于通用之保存容器。

[0246] 使用上述实施例5、实施例6、实施例7，以与实施例1同样之手续，对管理血清试料中之锂浓度进行定量。将其实验结果表示于图10之[本发明中不同稳定剂之测量值之比较]之[表4]进行说明。

[0247] 由图10之[表4]之实验结果可知，仅非离子性界面活性剂之测量值(0.82mM)，仅阴离子性界面活性剂之测量值(0.83mM)，并用两稳定剂之情形时之测量值(0.82mM)为95％以上一致，故于界面活性剂之种类、并用之方法无关，其测量值几乎一致，因此于担忧悬浊之试料之情形时，亦可并用该些之界面活性剂。

[0248] 其次，关于锂试剂组成物之掩蔽剂(masking agent)之选择进行说明。作为锂试剂组成物之掩蔽剂(masking agent)，前述之实施例仅对三乙醇胺(Triethanolamine)之情形进行说明，但亦可使用乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)。

[0249] 作为比较对象，于仅三乙醇胺(Triethanolamine)之情形时，作为实施例5之锂试剂组成物，仅乙二胺四醋酸(Ethylenediaminetetraacetic acid，EDTA)之情形(实施例8)与并用两掩蔽剂(masking agent)之情形(实施例9)之组成进行说明。

[0250] 【实施例8】

[0251] [实施例8]

[0252] 作为掩蔽剂(masking agent)，仅乙二胺四醋酸二钾(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA·2K(钾))之情形时。

[0253] (1)第一试剂(作为缓衝液)

[0254] 螯合剂(chelate)：无

[0255] 有机溶剂：无

[0256] 稳定剂：Triton-X100(注册商标)

[0257] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))    1.0重量％[0258] 掩蔽剂(masking agent)：乙二胺四醋酸二钾

[0259] (Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA·2K同仁化学制)10mM于其中，添加7重量％之氯化氨，将pH值调整至10，以纯净水制成1L，保管于通用之保存容器。

[0260] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0261] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)    0.5g/L[0262] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)              20重量％[0263] 稳定剂：Triton-X100(注册商标)

[0264] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))    1.0重量％[0265] 掩蔽剂(masking agent)：乙二胺四醋酸二钾

[0266] (Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA·2K同仁化学制)10mM于其中，以成为0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整为7.0，以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0267] 【实施例9】

[0268] [实施例9]

[0269] 作为掩蔽剂(masking agent)，并用三乙醇胺(Triethanolamine)乙二胺(Ethylenediamine)与四醋酸二钾(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA·2K(钾)之情形。

[0270] (1)第一试剂(缓衝液)

[0271] 螯合剂(chelate)：无

[0272] 有机溶剂：无

[0273] 稳定剂：Triton-X100(注册商标)

[0274] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))   1.0重量％[0275] 掩蔽剂(masking agent)：

[0276] 三乙醇胺(Triethanolamine)                                  10mM[0277] 乙二胺四醋酸二钾(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA·2K同仁化学制)                                                         0.1mM[0278] 于其中，添加7重量％之氯化氨，将pH值调整至10，以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0279] (2)第二试剂(作为发色试液)

[0280] 螯合剂(chelate)：F28四苯基卟啉(F28 tetraphenylporphyrin)    0.5g/L[0281] 有机溶剂：二甲基亚碸(dimethyl sulfoxide，DMSO)              20重量％[0282] 稳定剂：Triton-X100(注册商标)

[0283] (聚氧乙烯辛基苯基醚(Polyoxyethylene octyl phenyl ether))    1.0重量％[0284] 掩蔽剂(masking agent)：

[0285] 三乙醇胺(Triethanolamine)                                   10mM[0286] 乙二胺四醋酸二钾(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA·2K同仁化学制)                                                         0.1mM[0287] 于其中，0.05M之方式添加MOPS(缓衝剂)，将pH值调整为7.0，以纯净水制成1L保管于通用之保存容器。

[0288] 使用上述实施例8、实施例9，以与实施例1同样之手续，对管理血清试料中之锂浓度进行定量。将其实验结果表示于图11之[本发明不同掩蔽剂(masking agent)之测量值之比较]之[表5]进行说明。

[0289] 由图11之[表5]之实验结果可知，仅三乙醇胺(Triethanolamine)之测量值(0.83mM)、仅乙二胺四醋酸二钾(Ethylenediaminetetraacetic acid dipotassium，EDTA﹒2K同仁化学制)之测量值(0.83mM)、并用两掩蔽剂(masking agent)之情形时之测量值(0.82mM)为95％以上一致，因此，与主要之掩蔽剂(masking agent)之种类或并用之仕方无关，其测量值几乎一致，故于保存试剂中少量混入之微量金属离子为原因而发生之试剂之劣化防止、或试料中之夹杂离子种过剩之情形相对应，亦可适宜使用该些掩蔽剂(masking agent)。

[0290] 如以上所说明，根据本发明之各实施例，生物试料或环境试料等水溶液中之锂之定量，藉由简便比色计立刻测量锂浓度，且藉由目视进行判定。

[0291] 此外，若非损害本发明之特征者，并非限定于上述各实施例。例如，自实施例1至实施例9中，将用于锂浓度测量之试剂组成物作为第一试剂、将第二试剂作为分隔板(demarcation strip)，长期保存，但若短期间进行测量，则自最初混合第一试剂、第二试剂之单一之试剂用事调制使用。