一种甘海胃康制剂的制备方法

摘要

本发明公开了一种甘海胃康制剂的制备方法，该方法将甘草、沙棘等六味，经拣选、净制后提取，提取后的稠膏采用真空干燥，粉碎成细粉，加入海螵蛸与绞股蓝总苷的细粉和淀粉适量，制成颗粒，60℃以下干燥，混匀，胶囊填充，制成1000粒，铝塑包装，即得。经主要有效成分含量测定及药效评价，证实通过上述方法制备的甘海胃康胶囊，可以提高有效成分含量，降低产品服用量，同时提升产品疗效。

权利要求

1.一种甘海胃康制剂的制备方法，所述甘海胃康制剂由以下组分制成：甘草57质量份，海螵蛸31.6质量份，沙棘25.2质量份，枳实57质量份，白术75.8质量份，黄柏19质量份，延胡索20质量份，绞股蓝总苷0.94质量份，其特征在于，方法包括：(1)取炮制后的海螵蛸，于80±5℃进行干燥后，粉碎，过100目筛，与绞股蓝总苷混匀；

(2)其余六位药材，用65％乙醇回流提取二次，第一次加药材质量8倍量乙醇，第二次加药材质量6倍量乙醇，每次提取时间为2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至清膏相对密度为：60℃时，1.05，放至室温，加入原药材质量的0.5倍量水，搅匀，静置24h，滤过，沉淀减压干燥成细粉；

(3)合并步骤(1)与(2)所得粉料，与淀粉适量混匀，用3％HPMC(m/v)适量制粒，60℃干燥，混匀，装入胶囊，制成1000粒即得。

说明书

一种甘海胃康制剂的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于中成药的制备，涉及一种中成药的制备工艺，特别涉及一种对现有的药物甘海胃康胶囊(国药准字Z20025708)采用有机溶剂提取制备的方法。

背景技术

[0002] 现代生活节奏的加快，人们饮食规律不能保证，胃病发生率越来越高，每个人的一生中几乎都会不同程度地发生急性或慢性胃病。胃肠道疾病也是是临床上常见疾病，也是消化系统疾病的主要病症之一。我国部分地区的调查资料表明其发病率为15.6％，目前有近3000万的消化道溃疡疾病患者,而急性消化道溃疡以及胃炎患者每年更是达到1亿。

[0003] 甘海胃康胶囊(国药准字Z20025708)组分为甘草，海螵蛸，沙棘，枳实，白术，黄柏，延胡索，绞股蓝总苷；针对反流性食道炎、老胃病，久治不愈，反复发作的根本原因，以修复胃粘膜为核心点,采用健脾益气、止酸敛疮、调整胃肠功、活血祛湿法为组方原则，通过整体调节来实现对局部病理改变的修复,最大程度地调动机体抗病祛邪、化腐生肌的能力,不仅能有效调节消化道功能的失衡,抑制胃和十二指肠反向蠕动作用，续恢复括约肌的收缩功能。而且能修复食道胃粘膜，从而提高反流性食道炎、溃疡的愈合质量。甘海胃康胶囊治疗反流性食道炎、消化性溃疡、慢性胃炎有显著疗效，副作用少。在临床应用中，服用甘海胃康胶囊的患者治愈率较高，且复发率低。

[0004] 但该药物在标准中规定中采用简单、传统的提取方法。经研究发现，该方法不能保证有效成分的充分提取，转移率较低，从而导致药材用量的增加，也不利于资源的合理利用，因此，需对甘海胃康胶囊组方中各药材进行充分研究，根据药材有效成分的各个性质探索一种新的制备方法。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于，提供一种新的甘海胃康胶囊的制备方法，并考察其对有效成分含量及药效的影响。

[0006] 为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案：

[0007] 一种甘海胃康制剂的制备方法，所述甘海胃康制剂的组分包括：甘草、海螵蛸、沙棘、枳实、白术、黄柏、延胡索和绞股蓝总苷，其特征在于，方法包括：

[0008] (1)甘草、沙棘、枳实、白术、黄柏和延胡索六种组分用乙醇浸提回收提取液，提取液干燥后得粉末；

[0009] (2)将粉末与海螵蛸粉末和绞股蓝总苷粉料混匀。

[0010] 进一步，方法还包括：在步骤(2)混匀后的物料中添加淀粉、制粒、装入胶囊。

[0011] 可选的，所述乙醇的浓度为65％，提取次数为两次。

[0012] 所述甘海胃康胶囊的组方为：甘草50-65质量份，海螵蛸28-36质量份，沙棘20-30质量份，枳实50-65质量份，白术70-85质量份，黄柏15-25质量份，延胡索215-25质量份，绞股蓝总苷0.5-1.5质量份。

[0013] 进一步，上述制备方法包括下列步骤：

[0014] (1)取炮制后的海螵蛸，于80±5℃进行干燥后，粉碎，过100目筛，与绞股蓝总苷混匀；

[0015] (2)其余六位药材，用65％乙醇回流提取二次，第一次加药材质量8倍量乙醇，第二次加药材质量6倍量乙醇，每次提取时间为2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇至清膏相对密度为：60℃时，1.05，放至室温，加入原药材质量的0.5倍量水，搅匀，静置24h，滤过，沉淀减压干燥成细粉；

[0016] (3)合并步骤(1)与(2)所得粉料，与淀粉适量混匀，用用3％HPMC(m/v)适量制粒，60℃干燥，混匀，装入胶囊，制成1000粒即得。申请人通过药理学实验证明，采用本发明的分组提取工艺制备的甘海胃康胶囊，可以提高有效成分含量，降低产品服用量，同时提升产品疗效。

附图说明

[0017] 图1是本发明的工艺流程图；

[0018] 以下结合附图以及实验对本发明作进一步的详细说明。

具体实施方式

[0019] 甘海胃康胶囊的现行工艺如下：海螵蛸粉碎成细粉与绞股蓝总苷混合均匀，备用。其余沙棘、甘草、枳实、白术、黄柏、延胡索等六味加水煎煮三次，第一次2小时，第二次1.5小时，第三次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.38(60℃)的稠膏，加入上述细粉，混匀，干燥，粉碎成细粉，制成颗粒，干燥，过筛，装入胶囊，即得。

[0020] 即甘海胃康胶囊现行工艺是在中医药理论指导下，以中药材为原料，按照规定的处方、生产工艺和质量标准生产的制剂，是一个传统的中成药胶囊制剂工艺。通过查阅大量文献，对药材的药物成分进行分析研究发现，水煎煮并不能完全提取出药材中的有效成分，尤其是其中的脂溶性成分，且提取出了很多蛋白质、淀粉、叶绿素等无效成分。因此，我们考虑保持现行工艺中的绞股蓝总苷、海螵蛸两种组分不变，仍为打粉添加；通过多次试验，发现将现行工艺中六味药材使用的传统水煎煮的提取方法改为新型的醇提水沉法，即先以适宜浓度的乙醇提取药材成分，提取液回收乙醇后，加适量水搅匀，静置冷藏一定时间，沉淀完全后滤除的方法。这样既可提取出生物碱及其盐、甙类、挥发油及有机酸类等有效成分，同时可避免淀粉、蛋白质、黏液质等成分的浸出。也就是在增加药物疗效的同时，降低药物的服用量。

[0021] 按照本发明的技术方案，申请人对甘海胃康胶囊采用分组提取工艺制备甘海胃康胶囊，如图1所示，具体包括下列步骤：

[0022] 1)组方：甘草570g，海螵蛸316g，沙棘252g，枳实570g，白术758g，黄柏190g，延胡索200g，绞股蓝总苷9.4g；

[0023] 2)将组方中甘草、沙棘等八味药材净选、净制后，分成两组进行。

[0024] ①取炮制后的海螵蛸，于80±5℃进行干燥后，粉碎，过100目筛，与绞股蓝总苷混匀，置洁净容器内备用；

[0025] ②其余六位药材，用65％乙醇回流提取二次，第一次加8倍量乙醇，第二次加6倍量乙醇，每次各2小时，合并提取液，滤过，滤液减压(-0.04Mpa，70℃)回收乙醇至相对密度1.05(60℃)左右，放至室温，加入原药材重量的0.5倍量水，搅匀，静置24h，滤过，沉淀减压(-0.04Mpa，70℃)干燥成细粉；

[0026] 3)合并上述细粉，与淀粉适量混匀，用用3％HPMC(m/v)适量制粒，干燥(60℃)，混匀，装入胶囊，制成1000粒，即得。

[0027] 根据甘海胃康胶囊处方中药物有效成分的性质进行提取，并在各组药物中选择指标成分采用高效液相色谱法进行含量测定，以保证临床疗效，同时，通过药理实验对该工艺制备的甘海胃康胶囊进行药效评价。

[0028] 一、甘海胃康胶囊提取工艺研究

[0029] 1.药物成分

[0030] 甘草：主含甘草酸钾、钙盐，是甘草的甜味成分。另含甘草内酯、甘草次酸甲酯。还含甘草皂苷、甘草苷、新甘草苷、黄酮醇、甘草香豆素、甘草西定、异甘草醇、异黄酮、甘草新木脂素、芒柄花黄素，甘草多糖等成分。

[0031] 海螵蛸：含碳酸钙80～85％，壳角质6～7％，粘液质10～15％，并含少量氯化钠、磷酸钙、镁盐等。

[0032] 沙棘：含黄酮类成分，如异鼠李素，异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷，异鼠李素-3-O-β-芸香糖苷，芸香苷，紫云英苷以及槲皮素和山柰酚为苷元的低糖苷。还含维生素A、B1、B2、C、E，去氢抗坏血酸，叶酸，胡萝卜素，类胡萝卜素，儿茶精，花色素，氨基酸，蛋白质等。

[0033] 枳实：含有黄酮苷类成分，如橙皮苷、新橙皮苷、柚皮苷、辛弗林等；还含有挥发油，如α-蒎烯、β-蒎烯、月桂烯、柠檬烯、樟烯、γ-松油烯、对聚伞花素及丁香烯等。

[0034] 白术：含挥发油，如苍术酮、苍术醇、α-及β-葎草烯、β-榄香醇、α-姜黄烯、3β-乙酰氧基苍术酮、桉叶醇、棕榈酸、β-芹子烯等；还含倍半萜内酯类成分，如苍术内酯-Ⅰ、-Ⅱ、-Ⅲ及8β-乙氧基苍术内酯-Ⅱ；又含多炔类化合物：14-乙酰基-12-千里光酰基-8-顺式白术三醇，14-乙酰基各里光酰基-8-反式白术三醇，12-千里光光酰基-8-顺式白术三醇，12-千里光酰基-8-反式白术三醇，12α-甲基丁酰基-14-乙酰基-8-顺式白术三醇，12α-甲基丁酰基-14-乙酰基-8-反式白术三醇，14α-甲基丁酰基-8-顺式白术三醇，14α-甲基丁酰基-8-反式白术三醇；另含东莨菪素，果糖，菊糖，氨基酸等。

[0035] 黄柏：含小檗碱、黄柏碱、木兰花碱、药根碱、掌叶防己碱、N-甲基大麦芽碱、蝙蝠葛碱等多种生物碱。此外，还含黄柏内酯、黄柏酮、黄柏酮酸以及7-脱氢豆甾醇、β-谷甾醇、菜油甾醇、青萤光酸、白鲜交酯、黏液质等。

[0036] 延胡索：主含延胡索甲素(延胡索碱)、延胡索乙素(dl-四氢掌叶防己碱)、延胡索丙素(原阿片碱)、延胡索丁素(l-四氢黄连碱)、延胡索戊素(dl-四氢黄连碱)、延胡索己素(l-四氢古伦胺碱)、延胡索庚素(延胡索球碱)、延胡索辛素、延胡索壬素、延胡索癸素、延胡索子素、延胡索丑素、延胡索寅素(α-别隐品碱)、黄连碱、去氢延胡索甲素(去氢延胡索碱)、延胡索胺碱、去氢延胡索胺碱、狮足草碱、二氢血根碱、去氢南天竹啡碱等生物碱成分。另含淀粉、粘液质、树脂和微量元素等成分。其活血、行气、止痛的主要有效成分为生物碱。

[0037] 绞股蓝总苷：绞股蓝含有多种皂苷、三萜类、黄酮、甾醇、氨基酸、有机酸、无机盐、糖类、微量元素等化学成分。目前认为，绞股蓝中起最大作用的生物活性物质是绞股蓝总苷现已分离鉴定出80多种成分。其中有几种与人参皂苷Rb1、Rb2、Rb3、Rd、F2完全相同。

[0038] 2.前期研究

[0039] 甘草：以甘草酸为考察指标发现，50-75％乙醇的提取转移率较高。其中75％乙醇提取的甘草酸转移率最高，收膏率22.7％。

[0040] 沙棘：以异鼠李素和总黄酮为考察指标发现，50-80％乙醇的提取转移率较高。其中50％乙醇提取的总黄酮转移率最高，收膏率29％；70％乙醇提取的异鼠李素转移率最高，收膏率12％。

[0041] 枳实：以辛弗林和总黄酮为考察指标发现，50-80％乙醇和水煎的提取转移率较高。其中50％乙醇提取的总黄酮转移率最高，收膏率17％；70％乙醇提取的辛弗林转移率最高，收膏率6％。

[0042] 黄柏：以小檗碱为考察指标发现，50-90％乙醇的提取转移率较高。其中70％乙醇提取的小檗碱转移率最高，收膏率15.5％。

[0043] 延胡索：以延胡索乙素为考察指标发现，60-80％乙醇的提取转移率较高。其中75％乙醇提取的延胡索乙素转移率最高，收膏率17.5％。

[0044] 通过上述对单味药材的提取研究发现，选用乙醇为提取溶媒可有效地提取指标成分，并降低收膏率，可以实现降低服用量的目标。

[0045] 3、根据甘海胃康胶囊中药物有效成分及药理作用确定提取工艺的研究

[0046] 3.1.甘海胃康药材正交实验

[0047] 根据工艺初步研究结果表明，甘草等其余六味药材中的有效成分主要溶解于乙醇中，因此，按1/20处方量称取甘草14.25g、沙棘6.30g、枳实14.25g、白术18.95g、黄柏4.75g延胡索5.00g，采用正交实验设计进行乙醇的回流提取。选用正交表L9(34)安排实验，因素与水平表、验证结果分析表及方

[0048] 差分析表1、2、3。

[0049] 表1 因素水平表

[0050]

[0051] 表2 正交实验设计及结果分析

[0052]

[0053]

[0054] 表3 甘草等其余六味药材醇提取优化工艺方差分析表

[0055]

[0056] F0.05(2,18)＝3.55F0.01(2,18)＝6.01

[0057] 实验结果显示:最佳工艺为65％乙醇回流提取2次，加醇量分别为：8、

[0058] 6倍，回流时间分别为：2、2小时。

[0059] 3.2甘海胃康药材提取验证实验

[0060] 通过实验进行验证甘海胃康药材正交优选参数的合理性、可行性与稳定性。按0.2个处方量称取甘草57.0g、沙棘25.2g、枳实57.0g、白术75.8g、黄柏19.0g、延胡索20.0g，各6份，随机编为1～3个处方，每组药材总重254g，按正交试验优选的参数安排实验,乙醇提取，合并提取液，滤过，收集滤液，分别测其收得量(体积)，干膏含量、辛弗林、小檗碱、延胡索乙素、甘草酸成分的含量，统计结果。主要通过重复进行3批甘海胃康药材的醇提取实验，按照正交实验得出的最佳工艺提取。实验结果如表4。

[0061] 表4 实验结果

[0062]

[0063] 实验结果显示：最佳工艺为65％乙醇回流提取2次，加醇量分别为：8、6倍，回流时间分别为：2、2小时。

[0064] 3.3甘海胃康水沉除杂实验

[0065] 为了去除醇提取物中的水溶性大分子无效物质，并使有效成分小檗碱、甘草酸、橙皮苷等进一步富集，对甘草等六味药材醇提取液采用水沉除杂的方法进行实验研究，以确定水沉时的加水量。将上述“六味药材提取验证实验”的提取液各2000ml混匀，再取混匀后提取液9组，每组400ml，随机编号为1-1，1-2，1-3，2-1，2-2，2-3，3-1，3-2，3-3，回收乙醇并浓缩至相对密度为1.05-1.10(25℃)间的浸膏(无醇味)。分别加水原药材0.5倍量(1-1，1-2，1-3)、1倍量(2-1，2-2，2-3)、1.5倍量(3-1，3-2，3-3)，搅匀，室温静置24h，滤过，收集沉淀，分别测定其干膏含量、小檗碱、甘草酸、橙皮苷成分的含量，统计结果。以收膏量，小檗碱、甘草酸、橙皮苷的转移率为考核指标。甘草酸、小檗碱、橙皮苷转移率见表5-1,5-2,5-3。

[0066] 表5-1 甘草酸转移率

[0067]

[0068] 表5-2 小檗碱转移率

[0069]

[0070] 表5-3 橙皮苷转移率

[0071]

[0072] 实验结果显示：1.5倍量水收干膏率最低，但有效成分损失大；0.5倍量水既有较好的转移率又有比较好的杂质去除效果，因此水沉的最佳水量为0.5倍量。即水沉工艺确定为：六味药材的醇提取液回收乙醇至相对密度为1.05(25℃)的浸膏(无醇味)，加入原药材重量的0.5倍量水，搅匀，静置24小时，滤过，沉淀减压(-0.04Mpa，70℃)干燥成细粉，备用。

[0073] 4、新旧工艺甘海胃康胶囊含量对比研究

[0074] 4.1甘海胃康胶囊含量测定方法

[0075] 照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定。

[0076] 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈一0.1mol/L醋酸铵溶液一冰醋酸(28:72:0.3)为流动相；检测波长为250mn；理论板数按甘草酸峰计算应不低于2000。

[0077] 对照品溶液的制备精密称取甘草酸单铵盐对照品适量，加稀乙醇制成每lml中含0.1mg的溶液，即得。(折合甘草酸为0.09795mg)。

[0078] 供试品溶液的制备取本品装量差异项下内容物，研细，混匀，取0.6g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加稀乙醇20ml，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，离心，滤过，取续滤液，即得。

[0079] 测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。

[0080] 4.2甘海胃康胶囊含量测定

[0081] 分别对三批新旧工艺甘海胃康胶囊进行含量测定，结果见表6。

[0082] 表6 新旧工艺甘海胃康胶囊结果

[0083]

[0084] 实验结果显示：新工艺甘海胃康胶囊的含测指标甘草酸的含量明显高于旧工艺甘海胃康胶囊，达到了提高含量，降低服用量的目的。

[0085] 二、甘海胃康胶囊药效试验研究

[0086] (一)胃炎药效实验研究

[0087] 1材料与方法

[0088] 1.1材料

[0089] 1.1.1动物

[0090] 清洁级Wister成年大鼠80只，一级质量标准，雌雄各半体重230±20g。

[0091] 1.1.2药物与试剂

[0092] 药物：甘海胃康胶囊胶由延胡索，海螵蛸，沙棘，甘草等6味中药组成，由杨凌东科麦迪森提供。

[0093] 试剂：NOS测定试剂盒；AchE测定试剂盒；考马斯亮兰蛋白测定试剂盒。

[0094] 1.1.3实验仪器

[0095] 自动生化分析仪；病理切片机；BX60型显微镜；电热恒温水浴箱；低温高速离心机。

[0096] 1.2实验方法

[0097] 1.2.1动物造模及分组与给药

[0098] 80只大鼠,随机抽取10只(雌雄各半)做为正常对照(正常)组,每日以蒸馏水灌胃,2ml/只；余70只大鼠以5％水杨酸钠溶液灌胃,2ml/(只.d),灌胃前后禁食，禁水1h,连续8周,其中,前4周普通饲料喂养,不限量,自由进水；后4周,单日禁食,双日足量喂食。造模过程中死亡雌鼠4只,造模结束前在剩余66只大鼠中随机抽取10只进行胃黏膜病理组织学检查,确认模型成功后在剩余56只大鼠中随机选取25只雄鼠和25只雌鼠按照雌雄各半的原则进行分组。

[0099] 50只大鼠再次随机分为5组:水杨酸钠(模型)组、甘海胃康胶囊大，中，小剂量治疗(大、中、小剂量)组、雷尼替丁组。大、中、小剂量组分别给予甘海胃康胶囊28，14，7g/(kg.d)(相当于成人剂量剂量20，10，5倍),雷尼替丁组给予雷尼替丁0.06g/(kg.d)(相当于成人剂量10倍),以上药均灌服前临时配制。连续给药7d,进行各项指标检测。

[0100] 1.2.2检测指标及方法

[0101] 取大鼠新鲜幽门部胃组织0.5g，加9倍0.9％氯化钠4.5ml，手动匀浆，制成10％的组织匀浆液，继以3000r/min离心10min后，取3ml组织匀浆液放入-80℃冰箱中，待测以下指标：

[0102] ①幽门括约肌NOS活力的测定：样本及试剂从冰箱取出，37℃水浴3min，进行下列操作，空白管双蒸水a＊(50μl)；总NOS测定管样本量a＊(50μl),2管试剂一底物缓冲液，200μl,试剂二促进剂,10μl,试剂三显色剂，100μl,混匀,37℃水浴准确反应15min,试剂四透明剂100μl,试剂五终止剂2000μl,混匀，530nm处,1cm光径,蒸馏水调零,测吸光度值。

[0103] 总NOS活力(U/mg prot)＝总NOS测定管OD值－空白管OD值/呈物色纳摩尔消光系数×反应液总体积/取样量×1/(比色光径×反应时间)/蛋白含量(mg prot/L)。根据以上公式得出总NOS活力＝总NOS测定管OD值－空白管OD值/(3.83×10-6)×(2.41+a＊)/a＊x1/(1×15)/蛋白含量(mg prot/L)。

[0104] ②组织AchE活力的测定：取上清液25ul测定AchE活力，操作步骤见表7。

[0105] 表7 组织活力AchE活力测定操作步骤

[0106]

[0107] 计算公式：组织匀浆中AchE活力(U/ml)＝测定管OD值－对照管OD值/标准管OD值－空白管OD值×标准管浓度×样本测试前稀释倍数。

[0108] 1.3统计学处理方法

[0109] 采用SPSS 11.5for Windows统计软件对其进行分析，计量资料以 表示，采用t检验。

[0110] 2.结果

[0111] 各组大鼠幽门括约肌NOS,AchE活性的比较。

[0112] 表8 各组大鼠幽门括约肌NOS,AchE活性的比较U/mg prot，

[0113]

[0114] 1)与正常组比较；2)与模型组比较；3)与雷尼替丁组比较，均P＜0.01

[0115] 3.讨论

[0116] 在治疗CSG中NO在炎症过程中具有双重作用.一方面,内皮源性NO具有抑制炎症过程的作用；另一方面，炎症过程后期合成大量NO又可参与炎症反应,具有细胞毒作用，可以导致胃黏膜损伤NO的这种细胞毒作用被认为是内毒素所致胃肠道损伤的机制之一。

[0117] 胃肠蠕动和括约肌收缩主要依靠兴奋性神经递质如Ach胃动素和P物质等。其中Ach起主要作用，而胃中Ach水平能反应迷走神经活性，为胃肠动力兴奋性递质，具有刺激胃肠肌收缩和促进胃－肠蠕动的作用，还与胃肠腺分泌有关，幽门括约肌是调节和控制胃－十二指肠的消化运动生理功能的关口，有较丰富的内源性神经支配系统ENS直接支配Koch等，研究发现迷走神经张力丧失和交感神经活性增加引起胃节律紊乱，这可能是CSG导致胃黏膜损伤的机制之一。

[0118] 本实验结果表明，实验性CSG大鼠幽门括约肌组织i NOS表达显著高于正常组，各治疗组i NOS表达明显低于模型组，其中甘海胃康胶囊中剂量组基本接近正常组。这可能是由于：①慢性炎症刺激i NOS诱导合成，进而合成大量NO参与胃黏膜局部损伤与炎症反应；②甘海胃康胶囊有直接抑制i NOS生成的作用，或可能通过多种途径减轻胃黏膜的损伤与炎症，减少了介导促进i NOS生成的细胞因子，间接抑制了i NOS的合成。同时，有资料显示：
NOS有拮抗Ach的作用，但不影响Ach的释放。本实验研究结果提示实验性CSG大鼠既存在NOS水平升高，也存在AchE活性的增高；Ach释放减少引起胃蠕动减慢、排空低下，而NOS水平升高不仅使神经营养障碍和合成Ach减少，而且能引起胃排空紊乱。这可能是甘海胃康胶囊治疗CSG的机制之一。

[0119] (二)胃溃疡药效实验研究

[0120] 1材料与方法

[0121] 1.1材料

[0122] 1.1.1动物

[0123] 动物KM种小鼠，雄性，18-22g；Wistar大鼠，雄性，200士20g。

[0124] 1.1.2药物与试剂

[0125] 西米替丁(CIM)片；利血平注射液；甘海胃康胶囊；甲醛溶液。

[0126] 2实验方法

[0127] 2.1对动物溃疡模型的影响

[0128] 2.1.1对小鼠应激性急性胃溃疡的影响

[0129] 取KM种小鼠随机分为6组，各组动物实验前禁食24h，实验时按表1一次性口服给药，禁食24h后再给药1次，仰位将四肢固定于带孔铁板上，浸于水槽中，水温(20±1)℃，水深至小鼠剑突处，浸24h解下，处死取胃，沿胃大弯剖开，缓慢冲净胃内容物，放于载玻片上展平，在解剖镜下观察测量。观察记数腺胃部出现的溃疡点数。结果表明，甘海胃康胶囊高、低剂量(600,300mg/kg)组胃溃疡点数较NS组明显减少(P<0.01)。见表1

[0130] 2.1.2对小鼠利血平性急性胃溃疡的影响

[0131] 取KM种小鼠随机分为6组，按表1一次灌服给药，药后1h皮下注射利血平10mg/kg,6h后处死动物，于解剖显微镜下观察腺胃部溃疡点数，结果表明，甘海胃康胶囊高、低剂量(600,300mg/kg)组胃溃疡点数较NS组明显减少(P<0.O1)。见表9。

[0132] 2.1.3对大鼠乙酸性慢性胃溃疡的影响

[0133] 取Wistar大鼠，于腺胃浆膜下(0.5mm)注人20％冰乙酸20ul。术后将动物随机分为6组，术后次日按表2灌服给药，每日1次，连续12d，末次药后24h开始禁食24h.[0134] 方法：先将1％的甲醛0.5mL注入胃中，15min后，取胃，沿胃大弯剖开，缓慢冲净胃内容物，放于载玻片上展平，在解剖镜下观察测量：腺胃部溃疡指数(以溃疡面长度与宽度的乘积为指数)。结果表明，甘海胃康胶囊高、低剂量(600,300mg/kg)组动物的胃溃疡指数较NS组明显减少(P<0.O1)。见表10。

[0135] 表9 甘海胃康胶囊对小鼠应激性溃疡(SU)和利血平性溃疡(RU)的影响(n＝10)[0136]

[0137] 与NS组相比*p<0.01

[0138] 表10 甘海胃康胶囊对大鼠乙酸性慢性胃溃疡(RU)的影响(n＝10)

[0139]-1 2
  剂量(m/mg.kg ) 溃疡指数(s/mm) 抑制率(％)
NS   17.36±3.39 -
CIM 300 3.55±1.44* 79.2
甘海胃康胶囊 600 4.88±1.79* 71.5
甘海胃康胶囊 300 7.55±1.34* 56.3

[0140] 与NS组相比*p<0.01

[0141] 2.2对大鼠胃酸分泌和胃蛋白酶活性的影响

[0142] 取wistar大鼠，随机分为6组，按表3一次灌服给药后禁食24h，自由饮水，用乙醚将动物麻醉，打开腹腔，结扎幽门，5h后处死，结扎贲门，取胃液进行胃酸分泌量和蛋白酶活性测定。结果表明，甘海胃康胶囊高、低剂量(600,300mg/kg)组胃液分泌量与NS无显著差别(P>0.05)，而游离酸和总酸度均较NS明显降低(P<0.05)，而甘海胃康胶囊高剂量组胃液pH较NS组明显增高，说明本品可中和胃酸、减少胃酸分泌。实验组胃酸活性均较NS组明显降低(P<0.05)。见表11。

[0143]

[0144] 3讨论

[0145] 实验结果表明，甘海胃康胶囊能抑制应激性和乙酸性急慢性胃溃疡的形成，也能抑制利血平性急性胃溃疡的发生。能够抑制胃酸分泌，降低胃酶活性。

[0146] 消化性溃疡中医属胃肮痛、嘈杂、吞酸范畴，多由脾胃虚弱、气滞血疲、胃络损伤引起，常用益胃健脾、活血化淤、理气止痛法治疗。

[0147] 甘海胃康胶囊中能中和胃酸，减轻对溃疡的刺激。甘草浸膏对多种动物溃疡模型均有较好的防治作用。本品疗效优于西米替丁，并且不良反应及毒性明显少和轻于西米替丁。该制剂用于溃疡病治疗符合标本兼治的原则。

[0148] (三)镇痛药效实验研究

[0149] 1实验材料

[0150] 1药物及试剂

[0151] 甘海胃康胶囊，健胃愈疡片，阿司匹林。

[0152] 冰醋酸为国产分析纯。

[0153] 1.2实验仪器

[0154] BS210S型电子天平、721分光光度计，GJ-4O2型热板测痛仪。

[0155] 1.3实验动物

[0156] ICR种小鼠，雌雄各半，体重18～22g。

[0157] 2实验方法与结果

[0158] 2.1对小鼠醋酸扭体反应的影响

[0159] ICR小鼠雌雄各半，随机分成6组，分别灌胃相应药物及蒸馏水，见表12。各组连续灌胃15天，末次灌胃给药1小时后，腹腔注射0.6％冰醋酸(HAC)0.2ml/20g，记录15分钟内动物扭体次数。统计学处理采用SPSS8.0for Windows软件包进行方差分析(下同)。结果见表12。

[0160] 2.2对小鼠热板痛阈的影响

[0161] 分组及给药同2.1，各组动物连续灌胃给药15天，在末次给药前及给药后15、30、60分钟分别将动物放在(55±0.5)℃的热板上，测定小鼠痛阈值。如60秒钟小鼠仍无反应，其痛阈以60秒计算，结果见表12。

[0162]

[0163] 3讨论

[0164] 胃脘痛是指剑突以下，脐以上发生的经常性疼痛或突变性疼痛的胃脘部疾患。甘海胃康胶囊主要由甘草，海螵鞘，沙棘，枳实，白术，黄柏，延胡索，绞股蓝总苷等8味中药组成，具有止痛消痞、调气和中作用，主治由脾虚气滞所致的胃脘疼痛、痞胀不舒，嗳气恶心，食欲不振等，海螵鞘收敛止血，制酸止痛；延胡索的多种制剂均有明显镇痛作用，尤以醇制浸膏、粉剂及醋制流浸膏的作用明显。

[0165] 本研究表明甘海胃康胶囊可明显抑制醋酸引起的小鼠扭体反应，提高小鼠对热的痛阚值；醋酸扭体实验中，与模型组比较，甘海胃康胶囊的高、中、低剂量组小鼠的扭体次数明显减少，而且高、中、低剂量组均具有显著的抑制作用(P<0.01)。

[0166] 结果表明，甘海胃康胶囊具有明显的镇痛作用。