一种从裸花紫珠叶中提取制备毛蕊花糖苷标准品的方法

摘要

本发明涉及一种毛蕊花糖苷的制备方法，特别是一种采用超临界流体萃取技术从裸花紫珠中制备高纯毛蕊花糖苷产品的方法，以及所述制备方法获得的毛蕊花糖苷产品作为标准物质的用途。超临界流体萃取技术采用如下的萃取条件：夹带剂用量原料质量为0.2-0.5倍，浸泡12-24小时后，在35MPa、60-70℃的条件下，静态萃取0.1-0.5小时后再以0.1-1.0L/min动态萃取1.5-2小时。所述夹带剂由水、甲醇、正己烷和氨水组成，四者的体积百分比为55％：15％：25％：5％。

权利要求

1.一种从裸花紫珠叶中制备高纯毛蕊花糖苷的方法，其特征在于，具体步骤如下：（1）将裸花紫珠叶粉碎、过筛；

（2）向步骤（1）处理后的原料中加入料液重量比为1:0.2～0.5的夹带剂，浸泡12-24小时后，搅拌均匀后加入到萃取釜中，釜中压力为35MPa，利用超临界流体萃取技术，在温度

60～70℃下，静态萃取0.1～0.5小时后，再以0.1-1.0 L/min动态萃取1.5～2小时；所述夹带剂由水、甲醇、正己烷和氨水组成，四者的体积百分比为55%：15%：25%：5%；

（3）将毛蕊花糖苷粗品溶于适量甲醇，加入适量乙醚冷藏结晶即得，所述毛蕊花糖苷的纯度>99.5%。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤（2）中所述萃取釜中压力优选为

35Mpa，所述温度优选为65℃，所述静态萃取优选为0.3小时，所述动态萃取的条件为0.7 L/min及2小时。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述毛蕊花糖苷粗品和甲醇的重量体积比为1:3-5，甲醇与乙醚的体积比为1:1。

说明书

一种从裸花紫珠叶中提取制备毛蕊花糖苷标准品的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种毛蕊花糖苷的制备方法，特别是一种采用超临界流体萃取技术从裸花紫珠中制备高纯毛蕊花糖苷产品的方法，以及所述制备方法获得的毛蕊花糖苷产品作为标准物质的用途。

背景技术

[0002] 毛蕊花糖苷又称麦角甾苷，是一种存在于多科属植物中的苯丙素类单体成分。毛蕊花糖苷为白色针晶粉末，易溶于乙醇、甲醇或醋酸乙酯，分子式为C29H36O15，分子量为
624.59，CAS号为61276-17-3，其结构式如下所示：

[0003]

[0004] 根据文献报道，毛蕊花糖苷对神经系统及免疫系统具有明显的作用，特别是针对老年性疾病(老年痴呆)和免疫性疾病(慢性肾炎)具有明显的治疗作用。

[0005] 标准物质通常要求高纯度，其组成与化学式高度一致并且化学稳定。由于对标准物质的这种严格要求，标准物质的制备一般需要在高度受控的条件下制造，以达到这种高纯度，并尽可能避免所含杂质对后续测定的影响。因此，标准物质的制备比常规分析化学试剂往往要复杂得多，经常需要多种高精度的分离纯化操作步骤(如HPLC等)，同时也造成其高的制造成本。

[0006] 现有技术中尽管已经有毛蕊花糖苷标准物质供应，但并未公开这些毛蕊花糖苷标准物质的制备方法。可以想象，与大多数标准物质一样，这些毛蕊花糖苷标准物质也都是通过复杂和高成本的多步骤高精度分离纯化方法而制得的。因此，仍需要一种能够通过简单方法制备的毛蕊花糖苷标准物质。

发明内容

[0007] 本发明的一个目的是提供一种从裸花紫珠叶中制备高纯毛蕊花糖苷的方法。

[0008] 根据本发明的一个方面，本发明提供了所述方法采用的制备纯化工艺：

[0009] 1)采用超临界流体技术制备毛蕊花糖苷粗品：

[0010] 利用超临界流体萃取技术对萃取裸花紫珠叶中毛蕊花糖苷的工艺条件进行研究：实验考察了样品粒度、萃取温度、萃取压力、夹带剂类型、萃取时间、超临界流体流速以及收集方式等因素对毛蕊花糖苷粗品回收率的影响。

[0011] 在一个实施方案中，所述的超临界流体可以是处于超临界状态的二氧化碳；所述的样品可以是非极性或弱极性的脂溶性有效成分，也可以是极性有效成分；在萃取过程中可以添加夹带剂。

[0012] 在一个优选的实施方案中，超临界流体萃取技术采用如下的萃取条件：夹带剂用量原料质量为0.2-0.5倍，浸泡12-24小时后，在35MPa、60-70℃的条件下，静态萃取0.1-0.5小时后再以0.1-1.0L/min动态萃取1.5-2小时。所述夹带剂由水、甲醇、正己烷和氨水组成，四者的体积百分比为55％：15％：25％：5％。

[0013] 2)采用结晶方法制备毛蕊花糖苷纯品。

[0014] 在一个优选的实施方案中，制备本发明所述毛蕊花糖苷包括如下步骤：

[0015] (1)将裸花紫珠叶粉碎、过筛；

[0016] (2)向步骤(1)处理后的原料中加入料液重量比为1:0.2～0.5的夹带剂，浸泡12-24小时后，搅拌均匀后加入到萃取釜中，釜中压力为35MPa，利用超临界流体萃取技术，在温度60～70℃下，静态萃取0.1～0.5小时后，再以0.1-1.0L/min动态萃取1.5～2小时；

[0017] (3)将毛蕊花糖苷粗品溶于适量甲醇，加入适量乙醚冷藏结晶即得，所述毛蕊花糖苷的纯度>99.5％。

[0018] 在一个更优选的实施方案中，步骤(2)中所述料液重量比优选为1:0.3，浸泡时间优选为1.5小时，所述超临界流体为超临界状态的二氧化碳，所述萃取釜中压力优选为35Mpa，所述温度优选为65℃，所述静态萃取优选为0.3小时，所述动态萃取的条件为0.7L/min及2小时。

[0019] 在步骤(3)中，所述毛蕊花糖苷粗品和甲醇的重量体积比为1:3-5，甲醇与乙醚的体积比为1:1。

[0020] 本发明的优势：

[0021] 本发明采用的超临界流体萃取技术具有选择性高、传质系数大、操作温度温和、超临界流体溶解能力强且可调、可循环使用等优点，避免了传统的纯化分离技术中引入的其它组成，过程绿色环保，且在无氧、中温等温和条件下进行，排除了过程中影响产品稳定性的因素。本发明通过大量试验摸索得到了从裸花紫珠叶中提取毛蕊花糖苷的最佳条件，使得毛蕊花糖苷的得率和纯度都得到了极大的提高。

具体实施方式

[0022] 下面将进一步举例说明本发明。需要指出的是，以下说明仅仅是对本发明要求保护的技术方案的举例说明，并非对这些技术方案的任何限制。本发明的保护范围以所附权利要求书记载的内容为准。

[0023] 实施例1.毛蕊花糖苷的制备

[0024] 从裸花紫珠叶中制备纯化毛蕊花糖苷的方法，其具体步骤如下：

[0025] 称取1kg裸花紫珠叶，干燥粉碎过80目筛，向粉碎的裸花紫珠叶中加入0.2kg夹带剂(水：甲醇：正己烷：氨水＝55％：15％：25％：5％)，浸泡12小时，搅拌均匀后加入到萃取釜中，釜中压力设为35MPa，利用超临界二氧化碳萃取技术，在温度30℃下静态萃取0.1小时后；再以0.1L/min动态萃取1.5小时；收集得到毛蕊花糖苷粗品92.3g(经HPLC检测纯度82.1％)。

[0026] 将毛蕊花糖苷粗品50g溶于150ml甲醇，加入150ml乙醚冷藏结晶得38.8g，经HPLC检测毛蕊花糖苷的纯度>99.5％。所述HPLC检测方法参见李才堂等，中国实验方剂学杂志，Vol 18(1)，2012,84-86.

[0027] 实施例2-3

[0028] 除下表所列技术参数之外，其他制备方法同实施例1

[0029]

[0030]

[0031] 实施例4

[0032] 毛蕊花糖苷纯品的室温放置稳定性检查

[0033] 任意取以上制备的毛蕊花糖苷样品，避光放置于室温下。在七天后进行测定，每一点重复测量3次，其测量结果作为室温放置稳定性检验结果。检验结果见下表。由检验结果可知，本发明的毛蕊花糖苷避光室温放置一周内稳定。

[0034] 室温放置稳定性检验结果(％)

[0035]