重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶

摘要

本发明涉及生物制品领域，特别是涉及一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶及其制备方法。所述眼用凝胶的组分及用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子1500-1800IU，人血白蛋白0.05-0.20mg，卡波姆0.6-1.0mg，pH调节剂适量，注射用水加至0.4ml。本发明的眼用凝胶剂细腻均匀、使用舒适、药效持久、对眼部安全、无刺激，稳定性高。配方中不添加抑菌剂，防止了抑菌剂长期使用带来的危害，增加了产品的安全性。

权利要求

1.一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，其特征在于，所述眼用凝胶的组分及用量为：重组牛碱性成纤维细胞生长因子1680IU；

人血白蛋白0.1mg；

卡波姆0.8mg；

pH调节剂适量；

注射用水加至0.4ml；

其中，所述的pH调节剂为氢氧化钠或三乙醇胺，所述眼用凝胶的制备方法为：

（1）将注射用水倒入不锈钢桶中，搅拌下加入处方量的卡波姆，溶胀过夜，得卡波姆溶液备用；

（2）将处方量的pH调节剂加入步骤（1）中得到的卡波姆溶液，调节pH值为6.5-7.5后搅拌均匀，倒入稀配罐；

（3）加入适量注射用水荡洗不锈钢桶，荡洗后的注射水一并倒入稀配罐，在121℃热压下灭菌30min，冷却至37℃得透明凝胶备用；

（4）将处方量重组牛碱性成纤维细胞生长因子和人血白蛋白溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；

（5）在无菌条件下将步骤（3）得到的透明凝胶和步骤（4）得到的溶液混合均匀，得凝胶药液；

（6）检测步骤（5）所得的凝胶药液，合格后，在百级环境下，使用三合一灌封设备灌装药液至容积为0.1-1ml的单剂量包装容器即得成品。

说明书

重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶

技术领域

[0001] 本发明涉及生物制品领域，特别是涉及一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶及其制备方法。

背景技术

[0002] 碱性成纤维细胞生长因子（Basic fibroblast growth factor，简写为bFGF）主要分布于垂体、脑和神经组织及视网膜、肾上腺、胎盘等，主要作用在起源于中胚层和神经外胚层的骨骼细胞、成纤维细胞和骨细胞，是重要的促有丝分裂因子，也是形态发生和分化的诱导因子，促进创伤愈合与组织修复，促进组织和神经再生，特别是对烧伤角膜上皮的再生、角膜基质层和内皮层的修复均有促进作用。

[0003] 自1972年DNA重组技术诞生以来，生命科学进入了一个崭新的发展时期，以基因工程为核心的现代生物技术已应用到农业、医药、轻工、化工、环境等各个领域。重组牛碱性成纤维细胞生长因子（Recombinant bovine basic fibroblast growth factor，简写为rb-bFGF）是由含有高效表达牛碱性成纤维细胞生长因子基因的大肠杆菌，经发酵、分离和高度纯化后得到的活性因子，是一种新型的重组基因工程制品。经研究发现，rb-bFGF可治疗各种原因引起的角膜上皮缺损和点状角膜病变：复发性浅层点状角膜病变、轻中度干眼、角膜擦伤、轻中度化学烧伤、角膜手术及术后愈合不良、地图状(或营养性)单疤性角膜溃疡和大疱性角膜炎等眼部疾病。

[0004] 眼睛是人体十分脆弱的器官，对于眼部的药物的辅料和用量要求严格，尤其对眼用药物的涂展性要求十分严格，眼部用药一般有滴眼液、眼用凝胶等，为了获得较持久的药效，一般选用眼用凝胶。中国专利 CN102389392B公开了一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，凝胶基质为羟丙基甲基纤维素和卡波姆，pH值调节剂为氢氧化钠或盐酸，该眼用凝胶剂具有刺激小，易涂布、药效持久的优点，但是，该眼用凝胶的凝胶基质中的羟丙基甲基纤维素溶于水后有轻微乳光，而且在热水中溶解度较小，易析出，含有羟丙基甲基纤维素的凝胶基质不适合高温灭菌，该眼用凝胶对眼部存在一定的安全性问题，而且卡波姆是一种高度亲水性阴离子聚合物，与酸性原料配伍会降低其粘性，从而影响该眼用凝胶剂的涂展性，不利于临床志愿者使用。

发明内容

[0005] 针对现有技术眼用凝胶的安全性较低，药效质量难以保证的缺陷，本发明的目的是提供一种稳定性高、刺激性小、药效持久、安全而且利于工业化生产的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶及其制备方法。

[0006] 本发明的发明目的通过以下的实施方式来实现。

[0007] 一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，所述眼用凝胶的组分及用量为：

[0008] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1500-1800 IU；

[0009] 人血白蛋白 0.05-0.20 mg；

[0010] 卡波姆 0.6-1.0 mg；

[0011] pH调节剂 适量；

[0012] 注射用水 加至0.4 ml；

[0013] 其中，所述的pH调节剂为氢氧化钠或三乙醇胺。

[0014] 本发明的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，所述眼用凝胶优选的组分及用量为：

[0015] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1680 IU；

[0016] 人血白蛋白 0.1mg；

[0017] 卡波姆 0.8mg；

[0018] pH调节剂 适量；

[0019] 注射用水 加至0.4ml；

[0020] 其中，所述的pH调节剂为氢氧化钠或三乙醇胺。

[0021] 另外，本发明还提供了一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备方法，包含以下步骤：

[0022] （1）将注射用水倒入不锈钢桶中，搅拌下加入处方量的卡波姆，溶胀过夜，得凝卡波姆溶液备用；

[0023] （2）将处方量的pH调节剂加入步骤（1）中得到的卡波姆溶液，调节pH值为6.5-7.5后搅拌均匀，倒入稀配罐；

[0024] （3）加入适量注射用水荡洗不锈钢桶，荡洗后的注射水一并倒入稀配罐，在121℃热压下灭菌30min，冷却至37℃得透明凝胶备用；

[0025] （4）将处方量重组牛碱性成纤维细胞生长因子和人血白蛋白溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；

[0026] （5）在无菌条件下将步骤（3）得到的透明凝胶和步骤（4）得到的溶液混合均匀，得凝胶药液；

[0027] （6）检测步骤（5）所得的凝胶药液，合格后，在百级环境下，使用三合一灌封设备灌装药液至容积为 0.1-1ml 的单剂量包装容器即得成品。

[0028] 本发明的卡波姆基质是一种水性凝胶基质，能耐受低温贮存和高温湿热灭菌的作用，避免了因不耐高温灭菌析出造成延展性能差，难于涂抹的问题，而且卡波姆基质具有良好的生物相容性，对眼睛和皮肤没有刺激，是理想的凝胶基质。

[0029] 本发明通过试验例6的稳定性试验证明在2℃～8℃下，12个月内各项指标符合标准，其中本发明的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的涂展性最佳，说明本发明的凝胶基质最好，利于该组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的使用。

[0030] 本发明通过试验例7的刺激性试验证明本发明单次及多次给药后各只家兔各时间点均未发现受试药物对受试动物眼有明显刺激作用，其眼刺激综合平均值均为0，每只家兔给药及观察期间均未见躁动、嗜睡等异常行为活动。说明本发明的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶对眼部无刺激性，安全性高，质量完全达到国家标准，有利于该重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的推广和应用。

[0031] 本发明通过临床试验得出采用本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶，在治疗各种角膜炎中取得了最佳疗效。用本发明眼用凝胶治疗120例，其中痊愈94例，显效23例，无效3例，有效率97.5%。经长期临床观察，无毒、无副作用，并不产生耐药性。

[0032] 总之，与现有技术相比，本发明具有以下的优点：

[0033] 1)本发明的眼用凝胶剂细腻均匀、使用舒适、药效持久；

[0034] 2)本发明的眼用凝胶剂对眼部安全、无刺激，没有副作用；

[0035] 3)本发明的眼用凝胶剂稳定性高，质量有保障，利于该眼用凝胶剂的工业化生产。

具体实施方式

[0036] 下面结合本发明较佳的实施例做进一步的说明，这些实施例应理解为不会限制本发明的实施范围，其变型及等同方式均被涵盖在本发明的保护范围内。

[0037] 实施例1、本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备[0038] 处方：

[0039] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1680000 IU；

[0040] 人血白蛋白 0.1 g；

[0041] 卡波姆 0.8 g；

[0042] 三乙醇胺 适量；

[0043] 注射用水加至400 ml；

[0044] 共制 1000支

[0045] 制备工艺如下：

[0046] （1）将注射用水倒入不锈钢桶中，搅拌下加入处方量的卡波姆，溶胀过夜，得卡波姆溶液备用；

[0047] （2）将处方量的三乙醇胺加入步骤（1）中得到的卡波姆溶液，调节pH值为6.5-7.5后搅拌均匀，倒入稀配罐；

[0048] （3）加入适量注射用水荡洗不锈钢桶，荡洗后的注射水一并倒入稀配罐，在121℃热压下灭菌30min，冷却至37℃得透明凝胶备用；

[0049] （4）将处方量重组牛碱性成纤维细胞生长因子和人血白蛋白溶于适量的注射用水中，用0.22μm滤膜过滤除菌；

[0050] （5）在无菌条件下将步骤（3）得到的透明凝胶和步骤（4）得到的溶液混合均匀，得凝胶药液；

[0051] （6）检测步骤（5）所得的凝胶药液，合格后，在百级环境下，使用三合一灌封设备灌装药液至容积为 0.1-1ml 的单剂量包装容器，即得成品。

[0052] 实施例2、本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备[0053] 处方：

[0054] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1500000 IU；

[0055] 人血白蛋白 0.05 g；

[0056] 卡波姆 0.6 g；

[0057] 氢氧化钠 适量；

[0058] 注射用水加至400 ml；

[0059] 共制 1000支

[0060] 制备工艺如实施例1。

[0061] 实施例3、本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备[0062] 处方：

[0063] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1800000 IU；

[0064] 人血白蛋白 0.2g；

[0065] 卡波姆 1.0 g

[0066] 三乙醇胺 适量；

[0067] 注射用水加至400 ml；

[0068] 共制 1000支

[0069] 制备工艺如实施例1。

[0070] 对比例4、一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备

[0071] 处方：

[0072] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1680000 IU；

[0073] 人血白蛋白 0.2 g；

[0074] 羟丙基甲基纤维素 1.00 g；

[0075] 氢氧化钠 适量；

[0076] 注射用水加至400 ml；

[0077] 共制 1000支

[0078] 制备方法如实施例1。

[0079] 对比例5、一种重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的制备

[0080] 处方：

[0081] 重组牛碱性成纤维细胞生长因子 1600000 IU；

[0082] 人血白蛋白 0.08 g；

[0083] 甘露醇 0.10 g

[0084] 卡波姆 0.78 g；

[0085] 羟丙基甲基纤维素 0.21 g

[0086] 氢氧化钠 适量；

[0087] 注射用水加至400 ml；

[0088] 共制 1000支

[0089] 制备工艺如实施例1。

[0090] 试验例6、本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶长期稳定性试验[0091] 将实施例1、对比例4和对比例5的眼用凝胶剂灌装后密封置于2℃～8℃下进行实验，分别于第0个月、1个月、3个月、6个月、9个月、12个月末检测凝胶的外观、装量、pH值、生物学活性（IU）、生物学活性（%）、涂展性和无菌检查。结果如下表：

[0092] 其中涂展性的标准为：

[0093] （1）优：眼用凝胶松软粘稠，易于延展，与肌肤粘合；

[0094] （2）良好：眼用凝胶较松软粘稠，延展时出现粉粒；

[0095] （3）一般：眼用凝胶稀释偏软，延展时与肌肤不粘合。

[0096] 表1、本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶稳定性试验[0097]

[0098] 表2、对比例4的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶稳定性试验[0099]

[0100] 表3、对比例5的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶稳定性试验[0101]

[0102] 由表1、表2和表3得出，实施例1、对比例4和对比例5制备的眼用凝胶，在2℃～8℃下，12个月内各项指标符合标准，其中本发明的重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的涂展性最佳，说明本发明的凝胶基质最好，利于该组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的使用。

[0103] 试验例7、本发明重组牛碱性成纤维细胞生长因子眼用凝胶的眼刺激性试验[0104] 使用家兔单次和多次给予本发明实施例1制备的眼用凝胶进行试验。

[0105] 1、试验动物

[0106] 家兔，体重2.2-2.5kg，雌雄兼用，受试动物无任何炎性反应和眼损伤。

[0107] 2、试验用药

[0108] 采用本发明实施例1制备的眼用凝胶，赋形剂作为对照。

[0109] 3、试验方法

[0110] 采用同体左右侧自身对比法，试验前24小时内对每只家兔的双眼进行检查，筛选出无眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的50只家兔进行试验。

[0111] 3.1单次给药眼刺激试验：

[0112] 将试验用药眼用凝胶1滴滴入家兔右眼结膜囊内，左眼滴入等量的赋形剂作为对照，给药后让家兔被动闭合10秒，然后滴入2%荧光素钠，使用裂隙灯观察给药后1、2、4、24、48、72小时至5天的局部刺激反应情况。

[0113] 3.2多次给药眼刺激试验

[0114] 将试验用药眼用凝胶1滴滴入家兔右眼结膜囊内，左眼滴入等量的赋形剂作为对照，给药后让家兔被动闭合10秒，然后滴入2%荧光素钠，使用裂隙灯观察，每天给药1次，连续给药10天，每天给药前以及最后一次给药后1、2、4、24、48、72小时至5天的局部刺激反应情况。

[0115] 4、试验判断

[0116] 将每一个观察时间每一家兔的眼角膜、虹膜和结膜的刺激反应分值相加得总积分，将一组的积分综合除以家兔数，即得最后分值。

[0117] 表4 眼刺激反应分值标准

[0118]

[0119] 表5 眼刺激程度分值标准

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