一种用青冈栎制备绿原酸的方法

摘要

本发明公开了青冈栎作为制备绿原酸原料的应用及用青冈栎制备绿原酸的方法。本发明所述的以青冈栎为原料制备绿原酸的方法为：取青冈栎的叶或树皮，加入溶媒进行提取，提取液浓缩，所得浓缩液经分离纯化得到绿原酸。与现有技术相比，本发明提供了一种青冈栎的新用途，为提取绿原酸开辟了一种新的原料；还提供了用青冈栎为原料制备绿原酸的方法，提取率高，所得绿原酸的纯度可达90％以上，原料来源广泛，成本低廉，适于工业化生产，具有良好的社会效益与经济效益。

权利要求

1.一种用青冈栎为原料制备绿原酸的方法，其特征在于：取青冈栎的叶或树皮，加入溶媒进行提取，提取液浓缩，所得浓缩液经分离纯化得到绿原酸；其中：所述的溶媒为水、乙醇或丙酮；所述乙醇或丙酮的浓度均为10～80v/v％；

所述浓缩液采用大孔树脂柱层析的方式进行分离纯化，在分离纯化时，先用水洗脱，然后用10～40v/v％乙醇洗脱，收集醇洗脱液，回收溶剂后所得浓缩液调pH值至3～6，放置析晶，再重结晶，得到高纯度的绿原酸；所述的高纯度是指经分离纯化所得的绿原酸用HPLC法测定纯度达90％以上。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述提取的方式为常温浸提、超声提取或加热提取。

说明书

一种用青冈栎制备绿原酸的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及青冈栎的新用途，具体涉及青冈栎作为制备绿原酸原料的应用及用青冈栎制备绿原酸的方法。

背景技术

[0002] 青冈栎(Cyclobalanopsis glauca(Thunb.)Oerst)又名铁椆、青栲、栎树等，是壳斗科青冈属常绿阔叶树种，为构成我国亚热带森林的主要树种之一，在我国绝大多省份均有分布，生于海拔60～2600米的山坡或沟谷，组成常绿阔叶林或常绿阔叶与落叶，阔叶混交林。

[0003] 绿原酸(Chlorogenic acid)是在植物体中经莽草酸途径产生，由咖啡酸与奎尼酸通过酯化反应生成，是自然界中广泛存在的多生物活性物质，主要存在于忍冬科、杜仲科、菊科、茜草科和蔷薇科等植物中，如金银花、杜仲、可可树以及咖啡等植物，是众多药材和中成药抗菌消炎、解毒、利胆的主要有效成分。现代药理学研究表明，绿原酸具有抗氧化、抗病毒、抗菌、抗肿瘤、抗辐射、抗诱变、清除自由基、保护心血管、降脂、降糖等药理作用。在医药保健行业、食品行业、日用化学行业、化学工业等领域广泛应用，是目前国际公认的“植物黄金”。

[0004] 目前生产药用或者生化级绿原酸主要是从金银花、杜仲叶中提取，由于这两种原料在中成药中广泛利用，可利用提取绿原酸的资源有限，且原料价格高，因此，在植物中寻找新的高含量的绿原酸植物资料就显得颇有意义。公开号为CN1634853A的发明专利公开了一种以烟草为原料提取绿原酸，然目前尚未见有以青冈栎叶作为原料提取绿原酸的公开报道。

发明内容

[0005] 本发明要解决的技术问题是提供一种青冈栎的新用途，具体是青冈栎作为制备绿原酸原料的应用及用青冈栎制备绿原酸的方法。

[0006] 本发明其中一个技术方案为：青冈栎作为制备绿原酸原料的应用。该技术方案中，所述的青冈栎是指青冈栎的叶或者是青冈栎的树皮。

[0007] 本发明还包括用青冈栎为原料制备绿原酸的方法，具体包括：取青冈栎的叶或树皮，加入溶媒进行提取，提取液浓缩，所得浓缩液经分离纯化得到绿原酸。

[0008] 上述方法中，作为原料的青冈栎的叶或树皮优选是先粉碎后再进行提取，本申请中优选采用青冈栎的叶为原料。

[0009] 上述方法中，所述的溶媒可以是现有常规提取绿原酸的溶媒，提取的方 式、分离纯化的方式也均与现有技术相同。所述的溶媒可以是水、乙醇或丙酮，其中乙醇或丙酮的浓度通常可以是10～80v/v％，更优选的浓度为40～80v/v％；所述提取的方式可以是常温浸提、超声提取或加热提取；所述浓缩液采用大孔树脂柱层析的方式进行分离纯化。

[0010] 在分离纯化时，所述的大孔树脂柱具体为聚苯乙烯型大孔吸附树脂柱，其型号的选择与现有技术相同，通常为D101、Diaion HP-20或AB-8等；在浓缩液上柱后，先用水洗脱，然后用10～40v/v％乙醇洗脱(洗脱时采用TLC跟踪检测，通常10～40v/v％乙醇的用量为柱体积的2～5倍)，收集醇洗脱液，回收溶剂后所得浓缩液调pH值至3～6，放置析晶，再重结晶，得到高纯度的绿原酸。通常用有机酸调节回收溶剂后所得浓缩液的pH值，如盐酸、醋酸等；通常采用10～40v/v％乙醇进行重结晶；在收集完醇洗脱液后，可以采用60～100v/v％的乙醇对树脂柱进行再生。采用该方法分离纯化所得的绿原酸的纯度可达90％以上(HPLC法)；提取率可达85％以上。

[0011] 与现有技术相比，本发明提供了一种青冈栎的新用途，为提取绿原酸开辟了一种新的原料；还提供了用青冈栎为原料制备绿原酸的方法，提取率高，所得绿原酸的纯度可达90％以上，原料来源广泛，成本低廉，适于工业化生产，具有良好的社会效益与经济效益。

具体实施方式

[0012] 以下各实施例中，涉及的干燥的青冈栎叶中绿原酸的含量为2.1％(HPLC法)。

[0013] 以下的实施例中，涉及干燥的青冈栎树皮中绿原酸的含量为1.2％(HPLC法)。

[0014] 以下各实施例中，乙醇、丙酮的浓度均为体积百分比浓度。

[0015] 实施例1

[0016] 取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加12倍量的60％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，滤渣加10倍量的60％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取液；水提取液再过滤，滤液通过0.5kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为D101)吸附，依次用3倍柱体积去离子水、3倍柱体积30％乙醇溶液、3倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调pH至3，放置析出晶体，用40％乙醇溶液重结晶2次，得到产品19.2g，纯度为94.8％，提取率为86.7％。

[0017] 结构鉴定：通过MS、1H-NMR和13C-NMR等谱学数据鉴定化合物，结果与文献报道值进行对比。

[0018] LCIT-TOF-MS：m/z 353.0869(M-H)(计算值C16H17O9,353.0873)。

[0019] 1H-NMR(500MHz,CD3OD)δ:1.92-2.22(4H,m,H-2a,H-2b,H-6a,H-6b),3.64(1H,dd,J＝3.4,8.5Hz,H-4),4.15(1H,m,H-3),5.34(1H,m,H-5),6.30(1H,d,J＝15.9Hz,H-8'),6.76(1H,d,J＝8.3Hz,H-5'),6.93(1H,dd,J＝2.0,8.3Hz,H-6'),7.03(1H,d,J＝2.0Hz,H-2'),7.58(1H,d,J＝15.9Hz,H-7')。

[0020] 13C-NMR(125MHz,CD3OD)δ:38.4(C-6)，39.5(C-2)，71.4(C-5)，72.5(C-4)，73.8(C-3)，76.9(C-1)，115.2(C-8')，115.3(C-2')，116.6(C-5')，123.1(C-6')，127.6(C-1')，
146.7(C-3')，147.2(C-7')，149.3(C-4')，165.8(C-9')，173.5(C-7)。

[0021] 上述MS、1H-NMR和13C-NMR数据与文献报道基本一致，故鉴定为绿原酸。

[0022] 纯度检查：采用HPLC分析法[色谱柱：Cosmosil 5C18AR II(4.6×250mm，5μm)；柱温：35℃；流动相：CH3CN-50mM H3PO4，0～39分钟4-30％CH3CN；流速：0.8mL/min；检测波长：325mm]测得制备的绿原酸纯度为94.8％。

[0023] 实施例2

[0024] 取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加6倍量的40％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，滤渣加6倍量的40％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取液；水提取液再过滤，滤液通过0.5kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为D101)吸附，依次用2倍柱体积去离子水、2倍柱体积30％乙醇溶液、2倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调pH至2，放置析出晶体，用40％乙醇溶液重结晶2次，得到产品19.1g，纯度为95.8％，提取率为87.1％。

[0025] 其结构、纯度鉴定同实施例1。

[0026] 实施例3

[0027] 取干燥的青冈栎树皮1.0kg，粉碎，过2号筛，加10倍量的60％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，滤渣加8倍量的60％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取液；水提取液再过滤，滤液通过0.5kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为AB-8)吸附，依次用4倍柱体积去离子水、4倍柱体积30％乙醇溶液、2倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调pH至3，放置析出晶体，用40％乙醇溶液重结晶2次，得到产品10.8g，纯度为96.2％，提取率为86.6％。

[0028] 其结构、纯度鉴定同实施例1。

[0029] 实施例4

[0030] 取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加6倍量的20％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，滤渣加6倍量的20％乙醇溶液，室温下超声提取1小时，功率为250W，超声频率为40kHz，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取液；水提取液再过滤，滤液通过0.5kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为D101)吸附，依次用2倍柱体积去离子水、2倍柱体积30％乙醇溶液、2倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调pH至4，放置析出晶体，用40％乙醇溶液重结晶2次，得到产品19.3g，纯度为96.7％，提取率为88.9％。

[0031] 其结构、纯度鉴定同实施例1。

[0032] 实施例5

[0033] 取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加12倍量的60％乙醇溶液，50℃提取1.5小时，过滤，滤渣加10倍量的60％乙醇溶液，50℃提取1小时，过滤，合并滤液，回收乙醇，得到无醇的水提取液；水提取液再过滤，滤液通过1.0kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为AB-8)吸附，依次用3倍柱体积去离子水、4倍柱体积30％乙醇溶液、3倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调PH至3，放置析出晶体，用40％乙醇溶液重结晶2次，得到产品20.1g，纯度为92.2％，提取率为88.2％。

[0034] 其结构、纯度鉴定同实施例1。

[0035] 实施例6

[0036] 取干燥的青冈栎叶1.0kg，粉碎，过2号筛，加6倍量的40％丙酮溶液，50℃提取1.5小时，过滤，滤渣加6倍量的40％丙酮溶液，50℃提取1小时，过滤，合并滤液，回收丙酮，得到浓缩液；浓缩液再过滤，滤液通过0.5kg聚苯乙烯型大孔吸附树脂(型号为D101)吸附，依次用2倍柱体积去离子水、2倍柱体积30％乙醇溶液、2倍柱体积80％乙醇溶液洗脱，收集30％乙醇洗脱液，回收溶剂至有晶体析出，用盐酸调pH至2，放置析出晶体，用40％乙醇溶液重结