二噁烯并-和噁嗪-[2,3-D]嘧啶PI3K抑制剂化合物及使用方法

摘要

本申请描述了式I的二噁烯并-和噁嗪-[2,3-d]嘧啶PI3K抑制剂化合物，其具有抗癌活性、抗炎活性或免疫调节性质，且更具体地具有PI3激酶调节或抑制活性。本申请描述了使用式I的三环PI3K抑制剂化合物用于体外、原位和体内诊断或治疗哺乳动物细胞、生物体或相关的病理症状。

权利要求

1.选自式Ia的化合物，和其立体异构体和可药用盐：

其中：

R1独立地选自H、-CH3、-CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH2OCH3、-CH2F、-CHF2、-CF3和环丙基；

R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F、和环丙基；或R2基团形成3-至6-元碳环；

R3选自C6-C20芳基、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基，各基团任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基。

2.权利要求1的化合物，其中R1独立地选自H、-CH3、-CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH2OCH3、-CH2F、-CHF2和-CF3。

3.权利要求1的化合物，其中R1独立地选自H、-CH3和环丙基。

2

4.权利要求1-3任一项的化合物，其中R 独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基。

5.权利要求4的化合物，其中R2各自为-CH3。

6.权利要求1-3任一项的化合物，其中两个R2形成环丙基。

3

7.权利要求1-3任一项的化合物，其中R 为苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CN、-CF3、 -CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3和-S(O)2CH3。

8.权利要求1-3任一项的化合物，其中R3为3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基或选自以下的双环杂芳基：1H-吲唑基、1H-吲哚基、吲哚啉-2-酮基、1-(吲哚啉-1-基)乙酮基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、

1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-萘啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基和吡啶并[3,2-b]吡嗪基，各基团任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基。

9.权利要求1-3任一项的化合物，其中R3选自：

其中波浪线表示连接位点，

各基团任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基。

10.权利要求1-3任一项的化合物，其中R3为1H-吲唑-4-基。

11.权利要求1-3任一项的化合物，其中R3为选自以下的单环杂芳基：2-呋喃基、3-呋喃基、2-咪唑基、4-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、5-噁唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、2-吡嗪基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、2-嘧啶基、5-嘧啶基、

6-嘧啶基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-噻吩基、3-噻吩基、5-四唑基、1-四唑基、2-四唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、3-三唑基和1-三唑基，各基团任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基。

12.权利要求11的化合物，其中R3为2-氨基嘧啶-5-基。

3

13.权利要求1-3任一项的化合物，其中R选自：

其中波浪线表示连接位点，

各基团任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基。

14.权利要求1的化合物：

其中

R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

R3为苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或R3为单环杂芳基，其选自：吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自-NH2、-NHCH3和-OCH3的取代基取代；或

3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基或3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基；或双环杂芳基，其选自：1H-吲唑基、1H-吲哚基、吲哚啉-2-酮基、1-(吲哚啉-1-基)乙酮基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,

3-d]嘧啶基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-萘啶基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基和吡啶并[3,2-b]吡嗪基。

15.权利要求1的化合物：

其中

R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

R3为

苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或R3为

单环杂芳基，其选自吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自以下的取代基取代：-NH2、-NHCH3和-OCH3。

16.权利要求1的化合物：

其中

R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

3

R为：

苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或R3为1H-吲唑-4-基或2-氨基嘧啶-5-基。

17.权利要求1的化合物：

其中

R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

R3为：

苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或R3为2-氨基嘧啶-5-基。

18.权利要求1的化合物：

其中

R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

R2基团形成3-至6-元碳环环；

R3为：

苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或R3为单环杂芳基，其选自吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自以下的取代基取代：-NH2、-NHCH3和-OCH3。

19.权利要求1的化合物，其选自：

5-(4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺；

5-[(6R)-6-甲基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基]嘧啶-2-胺；

5-(7-甲基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺；

5-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺；

5-[4-吗啉代-7-(三氟甲基)-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基]嘧啶-2-胺；

5-(4-吗啉代螺[6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-7,1'-环丙烷]-2-基)嘧啶-2-胺；

5-(6-环丙基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺；

5-(7-叔丁基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺；

3-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)苯酚；

2-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶；

5-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)吡啶-2-胺；

N-[4-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)苯基]乙酰 胺；

5-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-N-甲基-吡啶-2-胺；

N-[3-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)苯基]甲磺酰胺；

2-(1H-吲哚-5-基)-7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶；

5-[7-(氟甲基)-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基]嘧啶-2-胺；

[2-(2-氨基嘧啶-5-基)-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-7-基]甲醇；和

5-(7-环丙基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺。

20.药物组合物，其包含权利要求1-19任一项的化合物和可药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。

21.权利要求20的药物组合物，其进一步包含选自以下的另外的治疗剂：化疗药物、抗炎药、免疫调节剂、神经营养因子、治疗心血管疾病的药物、治疗肝病的药物、抗病毒药、治疗血液病症的药物、治疗糖尿病的药物和治疗免疫缺陷病症的药物。

22.权利要求1-19任一项的化合物在制备用于治疗患者癌症的药物中的用途，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食管癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝脏癌和胆道癌、肾癌、肾脏癌、胰腺癌、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、唇癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌、霍杰金淋巴瘤或白血病。

23.权利要求22的用途，其中所述癌症为脑癌、舌癌或咽癌。

24.权利要求22的用途，其进一步包括向所述患者给予选自以下的另外的治疗剂：化疗药物、抗血管生成治疗药物、抗炎药、免疫调节剂、神经营养因子、治疗心血管疾病的药物、治疗肝病的药物、抗病毒药、治疗血液病症的药物、治疗糖尿病的药物和治疗免疫缺陷病症的药物。

25.权利要求24的用途，其中所述另外的治疗剂为贝伐单抗。

26.制备药物组合物的方法，其包括将权利要求1-19任一项的化合物与可药用载体组合。

27.治疗PI3K-介导的病症的试剂盒，其包含：

a)第一药物组合物，其包含权利要求1-19任一项的化合物；和

b)使用说明。

说明书

二噁烯并-和噁嗪-[2,3-D]嘧啶PI3K抑制剂化合物及使用

方法

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 按照37CFR§1.53(b)提交的该非临时申请按照35USC§119(e)要求2012年08月30日提交的美国临时申请61/694,898的权益，将其全部内容通过引用的方式并入本文。

技术领域

[0003] 本发明一般地涉及具有抗癌活性或者抗炎活性的化合物，并且更具体地，涉及抑制PI3激酶活性的化合物。本发明还涉及使用所述化合物体外、原位，和体内诊断或者治疗
哺乳动物细胞，或者相关病理状态的方法。

背景技术

[0004] 磷脂酰肌醇是细胞膜中存在的多种磷脂中的一种，其在细胞内信号转导(intracellular signal transduction)中起着重要作用。经由3'-磷酸化磷酸肌醇(3'-
phosphorylated phosphoinositide)的细胞信号传导(cell signaling)已经牵涉多种细
胞过程，例如恶性转化(malignant transformation)、生长因子信号传导、炎症和免疫
(Rameh等人(1999)J.Biol Chem,274:8347-8350)中。导致生成这些磷酸化信号转导产物的
酶，即磷脂酰肌醇3-激酶(也称为PI 3-激酶或PI3K)，最初被鉴定为具有与病毒癌蛋白和生
长因子受体酪氨酸激酶相关的活性，所述酶对磷脂酰肌醇(PI)及其位于肌醇环的3'-羟基
的磷酸化衍生物进行磷酸化(Panayotou等人(1992)Trends Cell Biol 2:358-60)。

[0005] 磷酸肌醇3-激酶(PI3K)是在肌醇环的3-羟基残基对脂质进行磷酸化的脂质激酶(lipid kinase)(Whitman等人(1988)Nature,332:664)。由PI3-激酶生成的3'-磷酸化磷脂
(PIP3)充当第二信使，所述第二信使募集具有脂质结合结构域(lipid binding domain)
(包括锤型同源(PH)区域)的激酶(如Akt和磷酸肌醇依赖性激酶-1(phosphoinositide-
dependent kinase-1，PDK1))。Akt与膜PIP3的结合引起Akt向质膜的易位，使得Akt与PDK1
接触，这造成了激活Akt的原因。肿瘤抑制因子磷酸酶(tumor-suppressor phosphatase)即
PTEN对PIP3 进行去磷酸化，因此充当Akt激活的负调节物。PI3-激酶Akt和PDK1在许多细胞
过程(包括细胞周期调节、增殖、存活、细胞凋亡(apoptosis)和运动性(motility))的调节
中是重要的，并且是诸如癌症、糖尿病和免疫炎症等疾病的分子机理的重要组成部分
(Vivanco等人(2002)Nature Rev.Cancer 2:489；Phillips等人(1998)Cancer 83:41)。

[0006] 癌症中主要的PI3-激酶同工型为I类PI3-激酶，p110α(α)(US 5824492；US 5846824；US 6274327)。其它同工型牵涉在心血管疾病和免疫-炎症性疾病中(Workman P
(2004)Biochem Soc Trans 32:393-396；Patel等人(2004)Proceedings of the American 
Association of Cancer Research(Abstract LB-247)95th Annual Meeting,March 27-
31,Orlando,Florida,USA；Ahmadi K and Waterfield MD(2004)Encyclopedia of 
Biological Chemistry(Lennarz W J,Lane M D eds)Elsevier/Academic Press)。PI3激
酶/Akt/PTEN途径对癌症药物开发而言是有吸引力的靶标，这是因为这些调节或抑制剂被
预期在癌细胞中抑制增殖、逆转对细胞凋亡的阻抑以及克服对细胞毒素剂(cytotoxic 
agent)的抗药性(Folkes等人(2008)J.Med.Chem.51:5522-5532；Yaguchi等人(2006)
Jour.of the Nat.Cancer Inst.98(8):545-556)。

[0007] 恶性神经胶质瘤是成人中最常见的原发性脑肿瘤。在胶质母细胞瘤(GBM)(最有侵袭性的神经胶质瘤亚型)中，肿瘤形成和生长似乎通过基因产物的扩增或者过度表达推动，
所述基因产物牵涉到参与生长因子引发的信号传导作用与破坏细胞周期调控的遗传改变
(genetic alteration)的共同作用(Holland EC(2001)Nat Rev Genet 2:120-129)。在GBM
中所述的基因组改变中，PTEN突变和/或缺失是最常见的，估计的频率为70-90％(Nutt C，
Louis DN(2005)Cancer of the Nervous System(McGraw-Hill，New York)，2nd Ed，
pp837-847.)。这些发现连同在GBM情况中PTEN状态的预后价值(Phillips HS，等人(2006)
Cancer Cell 9:157-163)暗示磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/Akt途径在促进高度侵袭性神经胶
质恶性肿瘤中的重要性，以及使用具有血脑屏障穿透性质的PI3K抑制剂治疗的机会。

[0008] 恶性神经胶质瘤使用外科手术、辐射，和替莫唑胺(TEMODARTM)的组合治疗，但是由于肿瘤复发，这些疗法最终以高频率失败。需要另外的疗法将有效浓度的有效药物递送至
脑，以治疗过度增殖性障碍如胶质母细胞瘤和转移性脑癌。

发明内容

[0009] 本发明一般地涉及具有抗癌活性、抗炎活性，或者免疫调节性质，并且更具体地，具有PI3激酶调节或者抑制活性的式I的二噁烯(dioxino)-和噁嗪-[2,3-d]嘧啶PI3k抑制
剂化合物。某些过度增殖性障碍的特征在于PI3激酶功能的调节，例如通过蛋白质的突变或
者过度表达。因此，本发明化合物可用于治疗过度增殖性障碍如癌症。化合物可抑制哺乳动
物中的肿瘤生长并可用于治疗人类癌症患者。

[0010] 本发明还涉及使用式I的二噁烯并-噁嗪-[2,3-d]嘧啶PI3k抑制剂化合物体外、原位和体内诊断或者治疗哺乳动物细胞、有机体或者相关病理状态的方法。

[0011] 式I化合物包括：

[0012]

[0013] 及其立体异构体、几何异构体、互变异构体和药用盐。取代基如本申请所述。

[0014] 本发明的另一方面提供药物组合物，其包含式I的二噁烯并-[2,3-d]嘧啶PI3k抑制剂化合物和药用载体。所述药物组合物还可包含一种或者多种另外的治疗剂。

[0015] 本发明的另一方面提供抑制PI3激酶活性的方法，其包括使PI3激酶与有效抑制量的式I化合物接触。

[0016] 本发明的另一方面提供预防或者治疗由PI3激酶调节的过度增殖性疾病或者障碍的方法，其包括向需要这种治疗的哺乳动物给药有效量的式I化合物。这种过度增殖性疾病
或者障碍的实例包括，但不限于，癌症。

[0017] 本发明的另一方面提供预防或者治疗过度增殖性障碍的方法，其包括向需要这种治疗的哺乳动物给药单独的或者与一种或者多种具有抗过度增殖性质的另外的化合物组
合的有效量的式I化合物。

[0018] 在另一方面，本发明提供使用本发明化合物治疗哺乳动物中的由PI3激 酶调节的过度增殖性疾病或者病症的方法。

[0019] 本发明的另一方面是本发明化合物用于治疗哺乳动物中的由PI3激酶调节的癌症(包括脑癌)的用途。

[0020] 本发明的另一方面包括试剂盒，其包含式I化合物、容器和任选的指导治疗的包装说明书或者标签。

[0021] 本发明的另一方面包括式I化合物的制备方法、分离方法和纯化方法。

[0022] 本发明的另一方面包括可用于制备式I化合物的新的中间体。

具体实施方式

[0023] 现将详细描述本发明一些实施方案，其实施例在所附结构式和化学式中说明。尽管本发明将结合所列实施方案来描述，应该理解的是，所述实施方案不是意在将本发明限
于这些实施方案。相反地，本发明意在涵盖可包括在如权利要求书所定义的本发明范围内
的所有可选形式、修改形式和等价形式。本领域技术人员将认识到与本申请描述的方法和
物质类似或等价的可用于实施本发明的多种方法和物质。本发明决不限于所描述的方法和
物质。若一篇或多篇所引入的文献、专利和类似材料与本申请不同或矛盾(包括但不限于所
定义的术语、术语用法、所描述的技术等)，则以本申请为准。

[0024] 定义

[0025] 本申请使用的术语“烷基”是指具有1-12个碳原子(C1-C12)的饱和直链或支链单价烃基，其中所述烷基可任选独立被一个或多个下文描述的取代基取代。在另一实施方案中，
烷基具有一至八个碳原子(C1-C8)，或具有一至六个碳原子(C1-C6)。烷基的实例包括，但不
限于，甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr，异丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，正丁基，-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu，异丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，仲丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，叔丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基，-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH
(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-
1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-
CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基 -2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH
(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3、1-庚基、1-辛基等。

[0026] 术语“烯基”是指具有2-8个碳原子(C2-C8)且具有至少一个不饱和位点(即碳碳sp2双键)的直链或支链单价烃基，其中所述烯基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代
基取代，并包括具有“顺式”和“反式”取向(或“E”和“Z”取向)的基团。实例包括但不限于乙烯基(ethylenyl或vinyl)(-CH＝CH2)、烯丙基(-CH2CH＝CH2)等。

[0027] 术语“炔基”是指具有2-8个碳原子(C2-C8)且具有至少一个不饱和位点(即碳碳sp三键)的直链或支链单价烃基，其中所述炔基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代
基取代。实例包括但不限于乙炔基(-C≡CH)、丙炔基(炔丙基、-CH2C≡CH)等。

[0028] 术语“碳环(carbocycle)”、“碳环基(carbocyclyl)”、“碳环(carbocyclic ring)”和“环烃基(cycloalkyl)”是指具有3至12个碳原子(C3-C12)作为单环或7至12个碳原子作为二环的单价非芳香性饱和或部分不饱和的环。具有7至12个原子的二环碳环可排列为例如
二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统，具有9或10个环原子的二环碳环可排列为二环[5,6]
或[6,6]系统，或排列为桥连系统(bridged system)如二环[2.2.1]庚烷、二环[2.2.2]辛烷
和二环[3.2.2]壬烷。单环碳环的实例包括但不限于环丙基、环丁基、环戊基、1-环戊-1-烯
基、1-环戊-2-烯基、1-环戊-3-烯基、环己基、1-环己-1-烯基、1-环己-2-烯基、1-环己-3-烯基、环己二烯基、环庚基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一碳基、环十二碳基等。

[0029] “芳基”表示通过从母体芳族环系中的单个碳原子除去一个氢原子得到的、具有6-20个碳原子(C6-C20)的单价芳族烃基。在示例性结构中一些芳基表示为“Ar”。芳基包括含有与饱和、部分不饱和的环或芳族碳环稠合的芳族环的二环基团。典型的芳基包括但不限于
由苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、联苯、茚基(indenyl)、茚满基(indanyl)、1,2-二氢萘、1,2,
3,4-四氢萘基等得到的基团。芳基可任选独立被本申请所述的一个或多个取代基取代。

[0030] 术语“杂环(heterocycle)”、“杂环基(heterocyclyl)”和“杂环(heterocyclic ring)”在本申请中可交换使用，是指具有3至约20个环原子的饱和或部分不 饱和(即在环
中具有一个或多个双键和/或三键)的碳环基团，其中至少一个环原子为选自氮、氧、磷和硫
的杂原子，其余环原子为C，其中一个或多个环原子任选独立被一个或多个下文描述的取代
基取代。杂环可以是具有3至7个环成员(2至6个碳原子以及1至4个选自N、O、P和S中的杂原
子)的单环或具有7至10个环成员(4至9个碳原子以及1至6个选自N、O、P和S中的杂原子)的
二环，例如二环[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系统。杂环描述在Paquette,Leo A.；"
Principles of Modern Heterocyclic Chemistry"(W.A.Benjamin,New York,1968),特别
是第1、3、4、6、7和9章；"The Chemistry of Heterocyclic Compounds,A series of 
Monographs"(John Wiley&Sons,New York,1950至今),特别是第13、14、16、19和28卷；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。“杂环基”还包括杂环基团与饱和、部分不饱和的环或芳族碳环或杂环稠合的基团。杂环的实例包括但不限于吗啉-4-基、哌啶-1-基、哌嗪基、2-氧代
哌嗪-4-基、3-氧代-哌嗪-4-基、吡咯烷-1-基、硫吗啉-4-基、S,S-二氧化硫吗啉-4-基、氮杂环辛烷-1-基(azocan-1-yl)、氮杂环丁烷-1-基、八氢吡啶并[1,2-a]吡嗪-2-基、[1,4]二氮
杂环庚烷-1-基、吡咯烷基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、四氢噻吩基、四氢吡喃基、二氢吡喃基、四氢硫吡喃基、哌啶子基、吗啉代、硫吗啉代、硫氧杂环己基、哌嗪基、高哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环庚烷基、硫杂环庚烷基、氧氮杂
基、二氮杂 基、硫氮杂 基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2H-吡喃基、4H-吡喃
基、二噁烷基、1,3-二氧杂环戊基、吡唑啉基、二硫杂环己基、二硫杂环戊基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂二环[3.1.0]己基、3-氮杂二环[4.1.0]庚基、氮杂二环[2.2.2]己基、3H-吲哚基、喹嗪基和N-吡啶基脲。螺环部分也包括在本定义的范围内。其中2个环原子被氧代(＝O)部分取代的杂环基的实例为嘧啶酮基
(pyrimidinonyl)和1,1-二氧代-硫吗啉基。本申请的杂环基团任选独立被本申请所述的一
个或多个取代基取代。

[0031] 术语“杂芳基”是指具有5、6或7元环的单价芳族基团，以及包括由5至20个原子组成的稠环系(其中至少一个环是芳族的)，其含有独立选自氮、氧和硫中的一个或多个杂原
子。杂芳基的实例为吡啶基(包括例如2-羟基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括例如4-羟基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噻唑基、噁二唑基、 噁唑基、异噻唑基、吡咯基、喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、三嗪基、异吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、二氮杂萘基和呋喃并吡啶基。所述杂芳基任选独立被本
申请所述的一个或多个取代基取代。

[0032] 杂环或杂芳基在适当连接时可以为碳连接的(碳联的)或氮连接的(氮联的)。通过举例而非限制，碳连接的杂环或杂芳基在以下位置进行连接：吡啶的2、3、4、5或6位；哒嗪的
3、4、5或6位；嘧啶的2、4、5或6位；吡嗪的2、3、5或6位；呋喃、四氢呋喃、噻吩(thiofuran或thiophen)、吡咯或四氢吡咯的2、3、4或5位；噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位；异噁唑、吡唑或异噻唑的3、4或5位；氮丙啶的2或3位；氮杂环丁烷的2、3或4位；喹啉的2、3、4、5、6、7或8位；
或异喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。

[0033] 通过举例而非限制，氮连接的杂环或杂芳基在以下位置进行连接：氮丙啶、氮杂环丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、
2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氢吲哚、1H-吲唑的1位；异吲哚或异二氢吲哚的2位；吗啉的4位；和咔唑或β-咔啉的9位。

[0034] 术语“治疗(treat)”和“治疗(treatment)”是指治疗性处置和预防性(prophylactic或preventative)措施，其中目的是预防或减缓(减轻)不期望的生理学变化
或障碍诸如癌的发展或扩散。出于本发明的目的，有益的或期望的临床结果包括但不限于
缓解症状、减小病变程度、稳定(即，并非恶化)疾病状态、延迟或减缓疾病进展、改善或缓和疾病状态以及好转(部分好转或完全好转)，无论这些结果是可检测的还是不可检测的。“治
疗”还可表示与未接受治疗的预期存活相比延长的存活。需要治疗的对象包括已经患有病
症或障碍的对象以及易患所述病症或障碍的对象或将要预防所述病症或障碍的对象。

[0035] 短语“治疗有效量”表示(i)治疗或预防本申请描述的具体疾病、病症或障碍的本发明化合物的量，(ii)削弱、改善或消除本申请描述的具体疾病、病症或障碍中的一种或多
种症状的本发明化合物的量，或(iii)预防或延迟本申 请描述的具体疾病、病症或障碍中
的一种或多种症状的发作的本发明化合物的量。在癌症的情况中，治疗有效量的药物可降
低癌细胞的数量；减小肿瘤尺寸；抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)癌细胞渗入周
围器官(peripheral organ)中；抑制(即在一定程度上减慢以及优选停止)肿瘤转移；在一
定程度上抑制肿瘤生长；和/或在一定程度上缓解与癌症相关的一种或多种症状。如果药物
可达到预防现存的癌细胞的生长和/或杀死现存的癌细胞程度，则其可以是细胞生长抑制
性的(cytostatic)和/或细胞毒性的。对于癌症治疗而言，可例如通过评价疾病进展时间
(TTP)和/或确定应答率(RR)来测量功效。

[0036] 术语“癌症(cancer)”是指哺乳动物中特征通常为未调节的细胞生长的生理病症或描述所述生理病症。“肿瘤”包含一种或多种癌细胞。癌症的实例包括但不限于癌
(carcinoma)、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤以及白血病(leukemia)或淋巴样恶性肿瘤(lymphoid malignancy)。所述癌症的更具体的实例包括鳞状细胞癌(例如上皮鳞状细胞癌)；肺癌，包
括小细胞肺癌、非小细胞肺癌(“NSCLC")、肺腺癌(adenocarcinoma of the lung)和肺鳞状
细胞癌(squamous carcinoma of the lung)；腹膜癌；肝细胞癌；胃癌(gastric or 
stomach cancer)，包括胃肠癌；胰腺癌；成胶质细胞瘤；子宫颈癌；卵巢癌；肝癌(liver 
cancer)；膀胱癌；肝细胞瘤(hepatoma)；乳腺癌(breast cancer)；结肠癌；直肠癌；结肠直肠癌；子宫内膜癌或子宫癌；唾液腺癌；肾癌或肾脏癌；前列腺癌；外阴癌(vulval cancer)；
甲状腺癌；肝脏癌(hepatic carcinoma)；肛门癌；阴茎癌；以及头颈癌。

[0037] “化疗药物”是可用于治疗癌症的化合物，而与其作用机理无关。化疗药物包括，但是不限于：烷化剂、抗代谢药、纺锤体毒性植物生物碱(spindle poison plant alkaloids)、细胞毒性/抗肿瘤抗生素(cytotoxic/antitumor antibiotics)、拓扑异构酶
抑制剂(topoisomerase inhibitors)、抗体、光敏性药物和激酶抑制剂。化疗药物包括在
“靶向疗法”和常规化学疗法中使用的化合物。化疗药物的实例包括：厄洛替尼(erlotinib)( Genentech/OSI Pharm.)、多西他赛(docetaxel)(
Sanofi-Aventis)、5-FU(氟尿嘧啶，5-氟尿嘧啶，CAS No.51-21-8)、吉西他滨
(gemcitabine)( Lilly)、PD-0325901(CAS No.391210-10-9,Pfizer)、顺铂
(cisplatin)(顺-二胺,二氯化铂(II),CAS No.15663-27-1)、卡铂(carboplatin)(CAS 
No.41575-94-4)、紫杉醇 (paclitaxel)( Bristol-Myers Squibb Oncology,
Princeton,N.J.)、培美曲塞(pemetrexed)( Eli Lilly)、曲妥单抗
(trastuzumab)( Genentech)、替莫唑胺(temozolomide)(4-甲基-5-氧代-
2,3,4,6,8-五氮杂二环[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺,CAS No.85622-93-1,
Schering Plough)、他莫昔芬(tamoxifen)((Z)-2-[4-
(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-N,N-二甲基-乙基胺,
)、多柔比星(doxorubicin)( )、Akti-1/2、HPPD和雷帕霉
素(rapamycin)。

[0038] 化疗药物的其它实例包括：奥沙利铂(oxaliplatin)( Sanofi)、硼替佐米(bortezomib)( Millennium Pharm.)、舒尼替尼(sutent)(
SU11248,Pfizer)、来曲唑(letrozole)( Novartis)、甲磺酸
伊马替尼(imatinib mesylate)( Novartis)、XL-518(MEK抑制剂,Exelixis,
WO 2007/044515)、ARRY-886(MEK抑制剂,AZD6244,Array BioPharma,Astra Zeneca)、SF-
1126(PI3K抑制剂,SemaforePharmaceuticals)、BEZ-235(PI3K抑制剂,Novartis)、XL-147
(PI3K抑制剂,Exelixis)、PTK787/ZK 222584(Novartis)、氟维司群(fulvestrant)(
AstraZeneca)、甲酰四氢叶酸(leucovorin)(亚叶酸)、雷帕霉素(西罗莫
司,  Wyeth)、拉帕替尼(lapatinib)( GSK572016,
GlaxoSmith Kline)、lonafarnib(SARASARTM,SCH 66336,Schering Plough)、索拉非尼
(sorafenib)( BAY43-9006,Bayer Labs)、吉非替尼(gefitinib)(
AstraZeneca)、伊立替康(irinotecan)( CPT-11,Pfizer)、
tipifarnib(ZARNESTRATM,Johnson&Johnson)、ABRAXANETM(Cremophor-free)、紫杉醇的白
蛋白工程化纳米微粒制剂(albumin-engineered nanoparticle formulations of 
paclitaxel)(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Il)、vandetanib(rINN,
ZD6474,  AstraZeneca)、chloranmbucil、AG1478、AG1571(SU 5271；
Sugen)、temsirolimus( Wyeth)、pazopanib(GlaxoSmithKline)、
canfosfamide( Telik)、塞替派(thiotepa)和环磷酰胺
(cyclosphosphamide)( )；磺酸烷基酯(alkyl sulfonate)诸
如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡(piposulfan)；氮丙啶诸如benzodopa、卡波醌、meturedopa和uredopa；乙撑亚胺(ethylenimine)和甲基氨基吖啶(甲基 amelamine)，包括六甲蜜胺、
三亚胺嗪(triethylenemelamine)、三亚乙基磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三亚乙
基硫化磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和trimethylomelamine；番荔枝内酯
(acetogenin)(尤其是布拉它辛(bullatacin)和布拉它辛酮(bullatacinone))；喜树碱(包
括合成性类似物托泊替康(topotecan))；苔藓抑素(bryostatin)；callystatin；CC-1065
(包括其阿多来新(adozelesin)、卡折来新(carzelesin)和比折来新(bizelesin)合成性类
似物)；cryptophycins(特别是cryptophycin 1和cryptophycin8)；多拉司他汀
(dolastatin)；duocarmycin(包括合成性类似物KW-2189和CB1-TM1)；艾榴塞洛素
(eleutherobin)；pancratistatin；sarcodictyin；spongistatin；氮芥诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺(氯phosphamide)、雌莫司汀、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺
(mechlorethamine)、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxide hydrochloride)、美法仑、新氮
芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺
(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；硝基脲诸如卡莫司汀、氯脲菌素
(chlorozotocin)、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫斯汀和雷莫司汀；抗生素诸如烯二炔
(enediyne)抗生素(例如刺孢霉素(calicheamicin)，刺孢霉素γ1I、刺孢霉素ωI1(Angew 
Chem.Intl.Ed.Engl.(1994)33:183-186)；蒽环类抗生素(dynemicin)，dynemicin A；二膦
酸盐(bisphosphonate)诸如氯膦酸盐(clodronate)；埃斯培拉霉素(esperamicin)；以及新
抑癌蛋白生色团(neocarzinostatin chromophore)和相关色蛋白烯二炔抗生素生色团
(enediyne antibiotic chromophore)、aclacinomysin、放线菌素(actinomycin)、
authramycin、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、放线菌素C(cactinomycin)、carabicin、去甲柔红霉素(carminomycin)、嗜癌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycin)、放线菌素
D(dactinomycin)、柔红霉素(daunorubicin)、地拖比星(detorubicin)、6-重氮基-5-氧代-
L-正亮氨酸(6-diazo-5-oxo-L-norleucine)、吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-
吡咯啉子基-多柔比星和去氧多柔比星、表柔比星(epirubicin)、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素如丝裂霉素C、麦考酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉
素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycins)、培洛霉素(peplomycin)、泊非霉素
(porfiromycin)、嘌罗霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星
(rodorubicin)、链黑霉素(streptonigrin)、链佐星(streptozocin)、杀结核菌素
(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁 (zinostatin)、佐柔比星；抗代谢物诸如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；叶酸类似物诸如二甲叶酸、甲氨喋呤、喋罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤
(thiamiprine)、硫鸟嘌呤(thioguanine)；嘧啶类似物诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞
苷(azacytidine)、6-氮鸟苷(6-azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、二脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、伊诺他滨(enocitabine)、氟
尿苷(floxuridine)；雄激素诸如卡普睾酮(calusterone)、丙酸甲雄烷酮(dromostanolone 
propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；
抗肾上腺素(anti-adrenal)诸如氨鲁米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛
司坦(trilostane)；叶酸补充剂(folic acid replenisher)诸如亚叶酸(frolinic acid)；
醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸
(aminolevulinic acid)；恩尿嘧啶(eniluracil)；安吖啶(amsacrine)；bestrabucil；比生群(bisantrene)；伊达曲杀(edatraxate)；地磷酰胺(defofamine)；秋水仙胺
(demecolcine)；地吖醌(diaziquone)；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；
埃坡霉素(epothilone)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓(gallium nitrate)；羟基脲
(hydroxyurea)；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidainine)；美登醇(maytansinoid)诸
如美登素(maytansine)和安丝菌素(ansamitocin)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌
(mitoxantrone)；mopidanmol；根瘤菌剂(nitraerine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；洛索蒽醌(losoxantrone)；鬼臼酸(podophyllinic 
acid)；2-乙基肼；丙卡巴肼(procarbazine)； 多糖复合物(JHS Natural Products,
Eugene,OR)；雷佐生(razoxane)；根霉素(rhizoxin)；西佐喃(sizofiran)；锗螺胺
(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2',
2"-三氯三乙胺；单端孢菌毒素(trichothecene)、verracurin A、杆孢菌素A和anguidine)；
乌拉坦；长春地辛；达卡巴嗪(dacarbazine)；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇
(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞
苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；塞替派；6-硫代鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨喋呤；铂类似物诸如顺铂和卡铂；长春碱；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨( )；诺消灵(novantrone)；替尼泊苷(teniposide)；伊达曲杀
(edatrexate)；柔红霉素；氨基喋呤；卡培他 滨( Roche)；伊班膦酸盐
(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS 2000；二氟甲基鸟氨酸
(difluoromethylornithine,DMFO)；类视黄醇(retinoid)诸如视黄酸(retinoic acid)；以
及上述任何物质的药用盐、酸和衍生物。

[0039] 以下物质也包括在“化疗药物”的定义中：(i)用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素药物，诸如抗雌激素药物(anti-estrogen)和选择性雌激素受体调节剂
(selective estrogen receptor modulator,SERM)，包括例如他莫昔芬(包括 
枸橼酸他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬
(trioxifene)、雷洛西芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮(onapristone)和
(枸橼酸托米芬(toremifine citrate))；(ii)抑制芳香酶(调节肾上腺中
雌激素产生)的芳香酶抑制剂，例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、 (醋酸甲地孕酮
(megestrol acetate))、 (依西美坦(exemestane)；Pfizer)、
formestanie、法倔唑(fadrozole)、 (伏氯唑(vorozole))、  (来
曲唑；Novartis)和 (阿那曲唑(anastrozole)；AstraZeneca)；(iii)抗雄激
素药物(anti-androgen)，诸如氟他胺、尼鲁米特(nilutamide)、比卡鲁胺(bicalutamide)、醋酸亮丙瑞林(leuprolide)和戈舍瑞林(goserelin)以及曲沙他滨(troxacitabine)(1,3-
二氧戊环核苷胞嘧啶类似物)；(iv)蛋白激酶抑制剂，诸如MEK抑制剂(WO 2007/044515)；
(v)脂质激酶抑制剂；(vi)反义寡核苷酸，特别是抑制异常细胞增殖中所涉及的信号转导途
径中的基因表达的反义寡核苷酸，例如PKC-α、Raf和H-Ras，诸如oblimersen(
Genta Inc.)；(vii)核酶诸如VEGF表达抑制剂(例如 )和HER2
表达抑制剂；(viii)疫苗诸如基因治疗疫苗，例如 和
rIL-2；拓扑异构酶1抑制剂诸如
rmRH；(ix)抗血管生成药物诸如贝伐单抗( Genentech)；以及上述任何物质的
药用盐、酸和衍生物。

[0040] 治疗性抗体也包括在“化学治疗剂”的定义中，诸如阿仑单抗(alemtuzumab)(Campath)、贝伐单抗( Genentech)；西妥昔单抗( Imclone)；帕
木单抗(panitumumab)( Amgen)、利妥昔单抗( Genentech/
Biogen Idec)、培妥单抗(pertuzumab)(OMNITARGTM,2C4,Genentech)、曲妥单抗(
 Genentech)、托西莫单抗(tositumomab)(Bexxar,Corixia)和抗体药物
缀合物奥吉妥单抗(gemtuzumab ozogamicin)( Wyeth)。

[0041] 具有作为化学治疗剂的治疗潜力而与本发明PI3K抑制剂联用的人化单克隆抗体包括阿仑单抗(alemtuzumab)、阿泊单抗(apolizumab)、阿塞单抗(aselizumab)、
atlizumab、bapineuzumab、贝伐单抗、莫比伐单抗(bivatuzumab mertansine)、莫坎妥单抗(cantuzumab mertansine)、西利单抗(cedelizumab)、赛妥单抗(certolizumab pegol)、
cidfusituzumab、cidtuzumab、达克单抗(daclizumab)、依库单抗(eculizumab)、依法单抗
(efalizumab)、依帕单抗(epratuzumab)、厄利单抗(erlizumab)、泛维单抗(felvizumab)、
芳妥单抗(fontolizumab)、奥吉妥单抗、奥英妥单抗(inotuzumab ozogamicin)、
ipilimumab、拉贝单抗(labetuzumab)、林妥单抗(lintuzumab)、马妥单抗(matuzumab)、美
泊单抗(mepolizumab)、莫维单抗(motavizumab)、motovizumab、那他单抗(natalizumab)、
尼妥单抗(nimotuzumab)、nolovizumab、numavizumab、ocrelizumab、奥马单抗
(omalizumab)、帕利单抗(palivizumab)、帕考单抗(pascolizumab)、pecfusituzumab、
pectuzumab、培妥单抗、培克单抗(pexelizumab)、ralivizumab、雷单抗(ranibizumab)、瑞利单抗(reslivizumab)、瑞利单抗(reslizumab)、resyvizumab、罗维单抗(rovelizumab)、
卢利单抗(ruplizumab)、西罗单抗(sibrotuzumab)、西利单抗(siplizumab)、索土单抗
(sontuzumab)、他单抗(tacatuzumab tetraxetan)、tadocizumab、他利单抗(talizumab)、
特非单抗(tefibazumab)、托单抗(tocilizumab)、托利单抗(toralizumab)、曲司单抗
(trastuzumab)、tucotuzumab celmoleukin、tucusituzumab、umavizumab、乌单抗
(urtoxazumab)和维西单抗(visilizumab)。

[0042] “代谢物”是通过具体化合物或其盐在体内的代谢而产生的产物。可使用本领域已知的常规技术鉴定化合物的代谢物，并使用诸如本申请所述的测试确定它们的活性。所述
产物可起因于例如所给药的化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶法裂解等。因此，本发明包括本发明化合物的代谢物，包括由以下方法产生的化合物，所述
方法包括使本发明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。

[0043] 术语“包装说明书”是指通常包括在治疗产品的市售包装中的说明书，其含有关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息，这些信息涉及上述治疗产品的使用。

[0044] 术语“手性”是指具有镜像配偶体(mirror image partner)不可重叠性质的分子，而术语“非手性”是指可与其镜像配偶体重叠的分子。

[0045] 术语“立体异构体”是指具有相同化学组成但原子或基团的取向在空间上的排列不同的化合物。

[0046] “非对映异构体”是指具有两个或更多手性中心并且其分子不互为镜像的立体异构体。非对映异构体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映异构体的混合物可通过高分辨分析操作诸如电泳和色谱来分离。

[0047] “对映异构体”是指互为不可重叠镜像的化合物的两种立体异构体。

[0048] 本申请使用的立体化学定义和常规通常遵循S.P.Parker,Ed.,McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；and 
Eliel,E.and Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,
Inc.,New York,1994。本发明化合物可含有不对称或手性中心，因此以不同立体异构形式
存在。预期的是，本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映异构体、对映异
构体和阻转异构体(atropisomers)及它们的混合物诸如外消旋混合物，形成了本发明的部
分。许多有机化合物以光学活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光的平面的能力。在描
述有光学活性的化合物时，使用前缀D和L或R和S来表示分子关于其一个或多个手性中心的
绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用于指定平面偏振光由化合物引起的旋转的符号，其中(-)
或l表示化合物是左旋的。前缀为(+)或d的化合物是右旋的。对于给定的化学结构而言，除
了这些立体异构体互为镜像外，这些立体异构体是相同的。具体的立体异构体也可称为对
映异构体，所述异构体的混合物通常称作对映异构混合物。对映异构体的50:50混合物称为
外消旋混合物或外消旋体，当化学反应或方法中没有立体选择性或立体专一性时可出现这
种情况。术语“外消旋混合物”和“外消旋体”是指两种对映异构物质的等摩尔混合物，其没有光学活性。

[0049] 术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指可通过低能垒(low energy barrier)互相转化的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(proton tautomer)(也称为质
子移变互变异构体(prototropic tautomer))包括通过质子迁移进行的互相转化，诸如酮-
烯醇异构化和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体(valence tautomer)包括通过一些成键
电子的重组进行的互相转化。

[0050] 本申请使用的短语“药用盐”是指本发明化合物的药用有机或无机盐。示例性盐包括但不限于硫酸盐、枸橼酸盐、乙酸盐、草酸盐、盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、异烟酸盐、乳酸盐、水杨酸盐、酸式枸橼酸盐、酒石酸盐、油酸盐、鞣酸盐(tannate)、泛酸盐(pantothenate)、酒石酸氢盐、抗坏血酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐、龙胆酸盐(gentisinate)、富马酸盐、葡糖酸盐、葡糖醛酸盐、糖二酸盐(saccharate)、甲酸盐、苯甲酸盐、谷氨酸盐、甲磺酸盐(mesylate)、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和扑酸盐(即1,1'-亚甲基-二-(2-羟基-3-萘甲酸盐))。药用盐可涉及另一种分子诸如乙酸根离
子、琥珀酸根离子或其它抗衡离子的包合物(inclusion)。抗衡离子可以是稳定母体化合物
电荷的任何有机或无机部分。此外，药用盐可在其结构中具有多于一个带电原子。多个带电
原子为药用盐的部分的情况可具有多个抗衡离子。因此，药用盐可具有一个或多个带电原
子和/或一个或多个抗衡离子。

[0051] 若本发明化合物为碱，则期望的药用盐可通过本领域可得的任何合适方法来制备，例如用无机酸(诸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等)或用有机酸(诸如乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、扁桃酸、富马酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羟乙酸、水杨酸、吡喃糖基酸(pyranosidyl acid)诸如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸、α-羟基酸诸如枸橼酸或酒石酸、
氨基酸诸如天冬氨酸或谷氨酸、芳族酸诸如苯甲酸或肉桂酸、磺酸诸如对甲苯磺酸或乙磺
酸等)处理游离碱。

[0052] 若本发明化合物为酸，则期望的可药用盐可通过任何合适方法来制备，例如用无机或有机碱(诸如胺(伯胺、仲胺或叔胺)、碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物等)处理游
离酸。合适盐的示例性实例包括但不限于从以下物质得到的有机盐：氨基酸诸如甘氨酸和
精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及环状胺诸如哌啶、吗啉和哌嗪；以及从以下物质得到的无机盐：钠、钙、钾、镁、锰、铁、铜、锌、铝和锂。

[0053] 短语“药用的”表示所述物质或组合物必须与制剂包含的其它成分和/或用其治疗的哺乳动物在化学上和/或毒理学上是相容的。

[0054] “溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的缔合物(association)或络合物(complex)。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。

[0055] 术语“本发明化合物(compound of this invention)”和“该发明化合物(compounds of the present invention)”和“式I的化合物”包括式I的化合物及其立体异
构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物，和药用盐和前药。

[0056] 本申请给出的任何式或结构(包括式I化合物)也意图表示这种化合物的水合物、溶剂合物，和多晶型物，及其混合物。

[0057] 二噁烯并-和噁嗪-[2,3-D]嘧啶PI3K抑制剂化合物

[0058] 本发明提供式I的二噁烯并-和噁嗪-[2,3-D]嘧啶PI3K抑制剂化合物，及其药物制剂，其潜在地用于治疗由PI3激酶(PI3K)调节的疾病、病症和/或障碍。更具体地，本发明提
供式I化合物及其立体异构体、几何异构体、互变异构体，和药用盐：

[0059]

[0060] 其中：

[0061] R1和R2独立地选自H、＝O、C1-C6烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基和C3-C12碳环基，其中烷基和碳环基任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、＝O、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、环丙基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基；或[0062] 所述R1基团或R2基团形成螺3-至6-元碳环或杂环环；

[0063] R3选自C6-C20芳基、C2-C20杂环基和C1-C20杂芳基，各基团任选被一个或多个独立地选自以下的基团取代：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH3、-CH2CN、-CN、-CF3、-CH2OH、 -CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHC(＝O)NHCH(CH3)2、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3、-S(O)2CH3、苄基、苄基氧基、吗啉基、吗啉代甲基和4-甲基哌嗪-1-基；

[0064] X选自O、S和NR；

[0065] R为H或C1-C6烷基.

[0066] 还应当理解，本文所述的与特定残基R1、R2、R3相关的每个实施方案可与本文所述的与另一残基R1、R2、R3相关的任何其它实施方案组合。

[0067] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ia和Ib：

[0068]

[0069] 式I化合物的示例性实施方案包括其中R1独立地选自H、-CH3、-CH2CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CH2CH2OH、-C(CH3)2OH、-CH2OCH3、-CN、-CH2F、-CHF2和-CF3。

[0070] 式I化合物的示例性实施方案包括其中R1独立地选自H、-CH3和环丙基。

[0071] 式I化合物的示例性实施方案包括其中R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基。

[0072] 式I化合物的示例性实施方案包括其中R2各自为-CH3。

[0073] 式I化合物的示例性实施方案包括其中两个R2形成＝O或环丙基。

[0074] 示例性式I化合物包括如下化合物，其中R3为取代有一个或者多个选自以下的基团的苯基：F、Cl、Br、I、-CH3、-CH2CH3、-CH(CH3)2、-CN、 -CF3、-CH2OH、-CO2H、-CONH2、-CONH(CH3)、-CON(CH3)2、-NO2、-NH2、-NHCH3、-N(CH3)2、-NHCOCH3、-OH、-OCH3、-OCH2CH3、-OCH(CH3)2、-SH、-NHC(＝O)NHCH3、-NHC(＝O)NHCH2CH3、-NHS(O)2CH3、-N(CH3)C(＝O)OC(CH3)3，和-S(O)2CH3。

[0075] 示例性式I化合物包括如下化合物，其中R3为任选取代的二环杂芳基，所述二环杂芳基选自1H-吲唑基、1H-吲哚基、二氢吲哚-2-酮基、1-(二氢吲哚-1-基)乙酮基、1H-苯并
[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑
基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、1H-吡咯并[2,3-c]吡啶基、
3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶
基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-二氮杂萘基、吡啶并[3,4-d]嘧啶基，和吡啶并[3,2-b]吡嗪。

[0076] 示例性式I化合物包括如下化合物，其中任选取代的R3选自：

[0077]

[0078]

[0079] 其中波浪线表示连接位点。

[0080] 在本发明的一项实施方案中，R3为1H-吲唑-4-基。

[0081] 示例性式I化合物包括其中R3为选自以下的任选取代的单环杂芳基：2-呋喃基、3-呋喃基、2-咪唑基、4-咪唑基、3-异噁唑基、4-异噁唑基、5-异噁唑基、2-噁唑基、4-噁唑基、
5-噁唑基、3-吡唑基、4-吡唑基、2-吡嗪基、3-哒嗪基、4-哒嗪基、5-哒嗪基、2-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、2-吡咯基、3-吡咯基、2-噻吩基、3-噻吩基、
5-四唑基、1-四唑基、2-四唑基、2-噻唑基、4-噻唑基、5-噻唑基、3-三唑基和1-三唑基。

[0082] 示例性式I化合物包括选自以下的任选取代的R3：

[0083]

[0084] 其中波浪线表示连接位点。

[0085] 示例性式I化合物包括其中R3为选自以下的任选取代的单环杂芳基：吡啶基、嘧啶基或吡唑基。

[0086] 示例性式I化合物包括其中R3为任选取代的嘧啶基。

[0087] 在本发明的一项实施方案中，R3为2-氨基嘧啶-5-基。

[0088] 示例性式I化合物包括任选取代的R3：

[0089]

[0090] 其中波浪线表示连接位点。

[0091] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ia：

[0092]

[0093] 其中

[0094] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0095] R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

[0096] R3为苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或[0097] R3为

[0098] 单环杂芳基，其选自：吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自-NH2、-NHCH3和-OCH3的取代基取代；或

[0099] 双环杂芳基，其选自：1H-吲唑基、1H-吲哚基、吲哚啉-2-酮基、1-(吲哚啉-1-基)乙酮基、1H-苯并[d][1,2,3]三唑基、1H-吡唑并[3,4-b]吡啶基、1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶基、1H-苯并[d]咪唑基、1H-苯并[d]咪唑-2(3H)-酮基、1H-吡唑并[3,4-c]吡啶基、1H-吡咯并
[2,3-c]吡啶基、3H-咪唑并[4,5-c]吡啶基、7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶基、7H-嘌呤基、1H-吡唑并[4,3-d]嘧啶基、5H-吡咯并[3,2-d]嘧啶基、2-氨基-1H-嘌呤-6(9H)-酮基、喹啉基、喹唑
啉基、喹喔啉基、异喹啉基、异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢异喹啉-1(2H)-酮基、3,4-二氢喹啉-2(1H)-酮基、喹唑啉-2(1H)-酮基、喹喔啉-2(1H)-酮基、1,8-萘啶基、吡啶并[3,4-d]嘧
啶基和吡啶并[3,2-b]吡嗪基。

[0100] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ia：

[0101]

[0102] 其中

[0103] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0104] R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

[0105] R3为

[0106] 苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或

[0107] R3为

[0108] 单环杂芳基，其选自吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自以下的取代 基取代：-NH2、-NHCH3和-OCH3。

[0109] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ia：

[0110]

[0111] 其中

[0112] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0113] R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

[0114] R3为：

[0115] 苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或

[0116] R3为1H-吲唑-4-基或2-氨基嘧啶-5-基。

[0117] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ia：

[0118]

[0119] 其中

[0120] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0121] R2独立地选自H、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

[0122] R3为：

[0123] 苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或

[0124] R3为2-氨基嘧啶-5-基。

[0125] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ia：

[0126]

[0127] 其中

[0128] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0129] R2基团形成3-至6-元碳环环；

[0130] R3为：

[0131] 苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或

[0132] R3为单环杂芳基，其选自吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自以下的取代基取代：-NH2、-NHCH3和-OCH3。

[0133] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ib：

[0134]

[0135] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ib：

[0136]

[0137] 其中

[0138] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0139] R2独立地选自H、＝O、-CH3、-C(CH3)3、-CH2OH、-CF3、-CH2F和环丙基；

[0140] R3为：

[0141] 苯基，其被一个或多个选自以下的基团取代：-NHCOCH3、-OH和-NHS(O)2CH3；或

[0142] R3为单环杂芳基，其选自吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自以下的取代基取代：-NH2、-NHCH3和-OCH3；且

[0143] R为C1-6烷基。

[0144] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ib：

[0145]

[0146] 其中

[0147] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0148] R2独立地选自H和＝O；

[0149] R3为单环杂芳基，其选自吡啶基、嘧啶基或吡唑基，任选被选自以下的取代基取代：-NH2、-NHCH3和-OCH3；且

[0150] R为C1-6烷基。

[0151] 本发明化合物的示例性实施方案包括式Ib：

[0152]

[0153] 其中

[0154] R1独立地选自H、-CH3和环丙基；

[0155] R2独立地选自H和＝O；

[0156] R3为2-氨基嘧啶-5-基；且

[0157] R为–CH3。

[0158] 本发明式I化合物可含有不对称或手性中心，因此以不同立体异构形式存在。预期的是，本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映 异构体、对映异构体和阻
转异构体(atropisomers)及它们的混合物诸如外消旋混合物，形成了本发明的部分。

[0159] 另外，本发明包括所有的几何和位置异构体。例如，如果式I化合物包含双键或者稠环，那么顺式和反式形式及其混合物包括在本发明范围内。单一位置异构体和位置异构
体的混合物也在本发明范围内。

[0160] 在本申请所示的结构中，在未指定任何具体手性原子的立体化学的情况下，那么将所有立体异构体视为和包括为本发明化合物。在立体化学通过表示具体构型的实心楔形
线或者虚线指定的情况下，那么立体异构体如所指定和定义的那样。

[0161] 本发明化合物可按非溶剂化形式以及与药用溶剂如水、乙醇等的溶剂化形式存在，并且本发明意图包括溶剂化和非溶剂化形式。

[0162] 本发明化合物也可按不同的互变异构形式存在，并且所有这种形式包括在本发明范围内。术语"互变异构体"或者"互变异构形式"是指可经低能垒相互转化的具有不同能量
的结构异构体。例如，质子互变异构体(也被称为质子转移互变异构体)包括经质子迁移相
互转化，例如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价键互变异构体包括通过一些成键电子的重组
相互转化。

[0163] 本发明还包括同位素标记的本发明化合物，其除以下事实外与本申请所述的那些化合物相同：一个或多个原子被原子质量或质量数不同于天然常见原子质量或质量数的原
子代替。预期所指定的任何具体原子或元素的所有同位素都包括在本发明化合物和其用途
的范围内。可引入本发明化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，如2H(D)、 3H、11C、13C、14C、13N、15N、15O、17O、18O、32P、33P、35S、18F、36Cl、123I和125I。某些同位素标记的本发明化合物(例如用3H和14C标记的那些化合物)可用于化合物和/或底物组
织分布测定。氚标记的(titiated)(3H)和碳-14(14C)同位素由于其易于制备及可检测性而
是有用的。此外，用较重的同位素如氘(即 2H)进行代替可得到由于较好的代谢稳定性(例
如体内半衰期增加或剂量需求降低)而带来的某些治疗优点，因此在一些情况下可以是优
选的。发射正电子的同位素如15O、13N、11C和18F可用于正电子发射断层扫描术(PET)研究以检查底物受体占据。同位素标记的本发明化合物通常可如下制备：按照与方案中和/或本申请
下述实施例中所披露类似的操作，用同位素标记的试剂代替非同位素标记的试剂。

[0164] 生物学评价

[0165] 可以通过许多直接和间接检测方法确定式I的化合物的PI3激酶活性。针对本申请所述的某些示例性化合物的p110α(alpha)以及其它同工型、PI3K结合活性(实施例901)和
针对肿瘤细胞的体外活性(实施例902)对其进行测定。本发明的某些示例性化合物具有小
于10nM的PI3K结合活性IC50值。本发明的某些化合物具有小于100nM的基于肿瘤细胞的活性
EC50值。

[0166] 式I的示例性化合物的细胞毒性或抑制细胞活性如下测量：在细胞培养基中建立增殖性哺乳动物肿瘤细胞系、加入式I的化合物、将细胞培养约6小时至约5天的一段时间；
然后测量细胞生存力(实施例902)。基于细胞的体外测定用于测量生存力即增殖(IC50)、细
胞毒性(EC50)和对细胞凋亡的诱导(胱天蛋白酶活化)。

[0167] 式I的示例性化合物的体外效能通过细胞增殖测定、CellTiter- 发光细胞生存力测定(购于Promega Corp.,Madison,WI)来测量(实施例902)。这种均质测定方法基于
鞘翅目萤光素酶(Coleoptera luciferase)的重组表达(US5583024；US 5674713；US 
5700670)并且基于存在的ATP(代谢活性细胞的指示物)的定量来确定培养物中生存细胞的
数目(Crouch等人(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88；US 6602677)。CellTiter- 测定
在96或384孔板中进行，使其顺应自动化高通量筛选(HTS)(Cree等人(1995)AntiCancer 
Drugs6:398-404)。所述均质测定操作涉及将单一的试剂(CellTiter- Reagent)直接
加到在补充有血清的培养基中培养的细胞中。洗涤细胞，除去培养基，不需要多次移液步
骤。在加入试剂并混合后在10分钟内系统检测到在384孔板中少至15细胞/孔。

[0168] 均质“加入-混合-测量”板引起细胞溶解以及与存在的ATP的量成比例的发光信号的产生。ATP的量直接与培养物中存在的细胞的数目成比例。CellTiter- 测定产生了
由萤光素酶反应产生的“辉光型(glow-type)”发光信号，取决于细胞类型和所用的培养基，所述发光信号具有通常超过五小时的半衰期。生存的细胞以相对发光单位(RLU)反映。底物
甲虫萤光素(Beetle Luciferin)通过重组萤火虫萤光素酶进行氧化脱羧，伴随ATP向AMP的
转化以及光子的产生。延长的半衰期消除了使用试剂注射器的需要并且为多个板的连续或
批量模式处理提供了灵活性。该细胞增殖测定可与各种多孔板如96或384孔板一起使用。数
据可通过发光计或CCD照相显像装置记录。发 光产量表现为随时间测量的相对光单位
(RLU)。

[0169] 式I的示例性化合物的抗增殖效应通过抗几种肿瘤细胞系的CellTiter- 测定(实施例902)来测量。针对所测试的化合物确立效能EC50值。体外细胞效能活性的范围为约
100nM至约10μM。某些测试的化合物具有终止某些肿瘤细胞系的增殖的小于1微摩尔浓度(1
μM)的EC50值。

[0170] 针对某些示例性化合物通过以下测定来测量某些ADME特性，所述测定包括：Caco-2透过性(实施例903)、肝细胞清除率(实施例904)、细胞色素P450抑制(实施例905)、细胞色
素P450诱导(实施例906)、血浆蛋白结合(实施例907)和hERG通道阻滞(实施例908)。

[0171] 测试了某些示例性化合物在荷瘤Taconic NCR裸鼠模型中的剂量渐增研究中的效力(实施例909)。使用U-87MG Merchant(衍生自U-87MG细胞的内部变异体(in-house 
variant)，得自ATCC，Manassas，VA)皮下异种移植物小鼠模型测试渐增剂量的式I化合物以
及媒介物(MCT，阴性对照)。在每日一次口服给药<28天后测量肿瘤生长延迟。测量在整个治
疗过程中的体重变化作为安全指标。也检查在这种相同的皮下肿瘤异种移植物模型中的药
物给药的剂量和时间依赖性的药代动力学和药效应答(实施例913)。

[0172] 使用经P-糖蛋白(MDR1)或者bcrp1稳定转染的MDCK细胞体外评价血脑屏障透过[性质]潜力(实施例911)。在单次静脉内或者口服剂量后通过测量化合物浓度(实施例912)
和/或通过测量在小鼠的脑中PI3K途径的调节(实施例913)，体内测定脑透过。脑肿瘤效力
在实施例914中通过GS-2(工程化以表达萤光素酶的多形性人胶质母细胞瘤(GBM))测量。每
日一次口服给药对于GS-2颅内植入物生长的影响通过磁共振成像(MRI)评价。将具有U-
87MG细胞的肿瘤异种移植物的小鼠用药物或者媒介物给药并分析样品的PK、PD，和/或IHC
分析(实施例915)。

[0173] 表1中的编号为101-118的示例性式I化合物根据本发明方法制备、表征并测试对PI3Kα的抑制(IC50或者与p110α结合的Ki小于1微摩尔，μM)和选择性，并且这些化合物具有以下结构和相应的名称(ChemBioDraw Ultra，版本11.0，CambridgeSoft Corp.，Cambridge MA)。

[0174] 表1.

[0175]

[0176]

[0177]

[0178]

[0179]

[0180] 式I化合物的给药

[0181] 本发明式I的化合物可通过适于待治疗的病症的任何途径给药。合适的 途径包括口服、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内、动脉内、皮内、鞘内和硬膜外)、经皮、直肠、经鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。对于局部免疫抑制治疗而言，化合物可通过损伤区给药(包括灌注或在移植前使移植物与抑制剂接触)来给药。应该理解的是优选的
途径可随例如受体的条件而变化。当口服给药化合物时，可将其与药用载体或赋形剂配制
成丸剂、胶囊剂、片剂等。当化合物肠胃外给药时，可将其与药用肠胃外媒介物一起配制，并且呈如下文详述的单位剂量可注射形式。

[0182] 治疗人类患者的剂量可为约10mg至约1000mg式I化合物。典型的剂量可为约100mg至约300mg所述化合物。剂量可每日给药一次(QID)、每日给药两次(BID)或更频繁地给药，
这取决于具体化合物的药物代谢动力学性质和药效学性质，包括吸收、分布、代谢和排泄。
另外，毒性因素可影响剂量和给药方案。当口服给药时，丸剂、胶囊剂或片剂可每日或以更
低的频率服用一段规定的时间。给药方案可重复多个治疗周期。

[0183] 使用式I的化合物的治疗方法

[0184] 本发明式I化合物可用于治疗过度增殖性疾病、病症和/或障碍，包括但不限于以脂质激酶例如PI3激酶的过表达为特征的那些疾病、病症和/或障碍。因此，本发明另一个方
面包括对可通过抑制脂质激酶(包括PI3)来治疗或预防的疾病或病症进行治疗或预防的方
法。在一个实施方案中，所述方法包括向有此需要的哺乳动物给药治疗有效量的式I化合物
或其立体异构体、几何异构体、互变异构体或药用盐。在一个实施方案中，人类患者用式I化合物和药用载体、辅料或媒介物治疗，其中所述式I化合物以可检测地抑制PI3激酶活性的
量存在。

[0185] 本发明的一个实施方案包括治疗患者中的癌症的方法，其包括向所述患者给药治疗有效量的本发明化合物，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道(genitourinary tract)癌、食管癌、喉(larynx)癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤(keratoacanthoma)、肺癌、表皮样癌(epidermoid 
carcinoma)、大细胞癌(large cell carcinoma)、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、肺腺癌(lung adenocarcinoma)、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌(adenocarcinoma)、甲状腺癌、滤泡性癌(follicular carcinoma)、未分化癌(undifferentiated carcinoma)、 乳头
状癌、精原细胞瘤(seminoma)、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝脏癌(liver carcinoma)和胆道癌、肾癌(kidney carcinoma)、肾脏癌、胰腺癌、骨髓样障碍(myeloid disorder)、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌(mouth)、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌和霍杰金淋巴瘤或白血病。

[0186] 在一个实施方案中，所述癌症为脑癌。

[0187] 在本发明的一个实施方案中，所述方法还包括向所述患者给药另外的治疗剂，所述另外的治疗剂选自化疗药物、血管生成抑制治疗药物、抗炎药、免疫调节剂、神经营养因
子、治疗心血管疾病的药物、治疗肝病的药物、抗病毒药、治疗血液病症的药物、治疗糖尿病的药物和治疗免疫缺陷病症的药物。在本发明的一个实施方案中，所述另外的治疗剂为贝
伐单抗。

[0188] 式I化合物还可用于治疗以蛋白激酶诸如由PIM(Proviral Insertion, Moloney)(例如参与淋巴瘤和实体瘤发展的基因Pim-1、Pim-2和Pim-3)编码的那些蛋白激酶的过表
达为特征的过度增殖性疾病(Cuypers et al.(1984)Cell,vol.37(1)pp.141-50；Selten 
et al.(1985)EMBO J.vol.4(7)pp.1793-8；van der Lugt et al.(1995)EMBO J.vol.14
(11)pp.2536-44；Mikkers et al.(2002)Nature Genetics,vol.32(1)pp.153-9；van 
Lohuizen et al.(1991)Cell,vol.65(5)pp.737-52)。

[0189] 可根据本发明方法治疗的癌症包括但不限于乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌症、食管癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌瘤、未分化的癌瘤、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝癌和胆道癌、肾癌、骨髓样障碍、淋巴样障碍、毛细胞癌、口腔癌和咽(口)癌、唇癌、舌癌、口癌、咽癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌症及霍奇金病(Hodgkin’s)和白血病。

[0190] 式I化合物可用于对哺乳动物细胞、有机体或相关病理学状态进行体外、原位和体内诊断或治疗及用于提供一般性关节保护作用，所述相关病理学状态为诸如系统性和局部
炎症、免疫炎性疾病诸如类风湿性关节炎、免疫抑制、器官移植排斥、变态反应、溃疡性结肠炎、克罗恩病(Crohn’s disease)、皮炎、哮喘、系统性红斑狼疮、斯耶格伦综合征(
Syndrome)、多发性硬化、 硬皮病/系统性硬化、特发性血小板减少性紫癜(ITP)、
抗中性粒细胞性细胞质抗体(ANCA)血管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)和牛皮癣。

[0191] 式I化合物可用于治疗需要穿越血脑屏障的脑部和中枢神经系统病症。一些式I化合物就递送至脑部而言具有有利的穿越血脑屏障的性质。可用式I化合物有效治疗的脑部
障碍包括转移性和原发性脑肿瘤，诸如成胶质细胞瘤和黑素瘤。

[0192] 通过局部递送至眼睛，式I化合物可用于治疗眼睛障碍如湿性和干性年龄相关的黄斑变性(wet and dry Age-related Macular Degeneration)(AMD)和视网膜水肿。一些
式I化合物就递送至并摄取至眼部而言具有有利的性质。对于治疗湿性AMD，一些式I化合物
与雷单抗( Genentech，Inc.)和贝伐单抗( Genentech，Inc.)
组合可增强效力并延长应答持续时间。

[0193] 本发明的另一方面提供本发明化合物，其用于治疗哺乳动物如人类中的本申请所述的疾病或者病症，所述哺乳动物如人类患有这种疾病或者病症。还提供了本发明化合物
在制备药物中的用途，所述药物用于治疗温血动物如哺乳动物(例如，人类)中的本申请所
述的疾病和病症，所述温血动物如哺乳动物(例如，人类)患有这种障碍。

[0194] 本发明的另一方面提供了本发明化合物在制备用于治疗癌症的药物中的用途，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食管癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝脏癌和胆道癌、肾癌、肾脏癌、胰腺癌、骨髓样障碍、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌和霍杰金淋巴瘤或白血病。

[0195] 本发明的另一方面是本发明化合物用于治疗癌症的用途，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食管癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、肺腺癌、 骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝脏癌和胆道癌、肾癌、肾脏癌、胰腺癌、骨髓样障碍、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌和霍杰金淋巴瘤或白血病。

[0196] 本发明的另一方面提供了本发明化合物，其用于治疗癌症，其中所述癌症为乳腺癌、卵巢癌、子宫颈癌、前列腺癌、睾丸癌、生殖泌尿道癌、食管癌、喉癌、成胶质细胞瘤、成神经细胞瘤、胃癌、皮肤癌、角化棘皮瘤、肺癌、表皮样癌、大细胞癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌、肺腺癌、骨癌、结肠癌、腺瘤、胰腺癌、腺癌、甲状腺癌、滤泡性癌、未分化癌、乳头状癌、精原细胞瘤、黑素瘤、肉瘤、膀胱癌、肝脏癌和胆道癌、肾癌、肾脏癌、胰腺癌、骨髓样障碍、淋巴瘤、毛细胞癌、口腔癌、鼻咽癌、咽癌、唇癌、舌癌、口癌、小肠癌、结肠直肠癌、大肠癌、直肠癌、脑癌和中枢神经系统癌和霍杰金淋巴瘤或白血病。

[0197] 本发明的另一方面提供了如上所述的本发明。

[0198] 药物制剂

[0199] 为了使用式I的化合物用于对哺乳动物(包括人)进行治疗性处置(包括预防性处置)，通常根据标准药学实践将其配制为药物组合物。根据本发明的这一方面，其提供了药
物组合物，其包含本发明化合物，以及结合有药用稀释剂或载体。

[0200] 本发明的一个实施方案包括药物组合物，其包含本发明化合物和药用载体、助流剂、稀释剂或赋形剂。

[0201] 本发明的一个实施方案包括制备药物组合物的方法，其包括使本发明化合物与药用载体组合。

[0202] 本发明的一个实施方案包括如上所述的药物组合物，其还包含另外的选自以下的治疗剂：化疗药物、抗炎药、免疫调节剂、神经营养因子、治疗心血管疾病的药物、治疗肝病的药物、抗病毒药、治疗血液病症的药物、治疗糖尿病的药物和治疗免疫缺陷病症的药物。

[0203] 典型的制剂通过将式I化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。合 适的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员公知的且包括以下物质：诸如碳水化合物、蜡、水溶性聚
合物和/或可溶胀性聚合物、亲水性物质或疏水性物质、明胶、油、溶剂、水等。所使用的具体载体、稀释剂或赋形剂将取决于应用本发明化合物的方式和目的。通常基于本领域技术人
员认为给药于哺乳动物是安全的溶剂(GRAS)来选择溶剂。通常，安全溶剂为无毒性含水溶
剂诸如水和可在水中溶解或混溶的其它无毒性溶剂。合适的含水溶剂包括水、乙醇、丙二
醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300)等及它们的混合物。制剂还可包含以下物质中的一种
或多种：缓冲剂、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、助悬剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、芳香剂、矫味剂和使药物(即本发明化合物或其药物组合物)具有优质外观或辅助药物产品(即药品)制备的其它已知添加剂。

[0204] 制剂可使用常规溶解和混合操作来制备。例如，将大量药物物质(即本发明化合物或式I化合物的稳定化形式(例如与环糊精衍生物或其它已知复合剂在一起的复合物))在
一种或多种上述赋形剂存在下溶于合适的溶剂中。通常将本发明化合物配制成药物剂型以
提供可容易控制的药物剂量且使患者能够依从所开具的给药方案。

[0205] 药物组合物(或制剂)可按多种方式来包装，这取决于给药方法。通常，用于分配的制品包括容器，所述容器已在其中放置有呈合适形式的药物制剂。合适的容器是本领域技
术人员公知的且包括以下容器：诸如瓶(塑料瓶和玻璃瓶)、小袋、安瓿、塑料袋、金属筒等。
容器还可包括防止不慎接触包装内含物的防篡改组件。另外，容器已在其上设置有描述容
器内含物的标签。标签还可包括合适的注意事项。

[0206] 可制备本发明化合物的药物制剂用于多种给药途径和类型。例如，具有所需纯度的式I化合物可任选与药用稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂混合(Remington’s 
Pharmaceutical Sciences(1980)16th edition,Osol,A.Ed.)成冻干制剂、研细粉末剂或
含水溶液剂形式。配制可如下进行：在环境温度和合适的pH以所需纯度与生理学上可接受
的载体(即在所使用的剂量和浓度时对受体是无毒的载体)混合。制剂的pH主要取决于具体
的用途和化合物的浓度，但范围可为约3至约8。在乙酸盐缓冲液中的pH为5的制剂是合适的
实施方案。

[0207] 用于本申请的本发明化合物优选为无菌的。具体地，用于体内给药的制 剂必须是无菌的。上述无菌化通过用无菌滤膜进行过滤来容易地实现。

[0208] 所述化合物通常可按固体组合物、冻干制剂或含水溶液剂形式贮存。

[0209] 包含式I化合物的本发明药物组合物将以与良好医药实践一致的方式即量、浓度、时间安排、过程、媒介物和给药途径来配制、确定剂量和给药。在该背景下考虑的因素包括
所治疗的具体障碍、所治疗的具体哺乳动物、个体患者的临床情况、障碍的原因、药物的递
送位点、给药方法、给药的时间安排和医药实践者已知的其它因素。待给药的化合物的“治
疗有效量”将取决于所考虑的上述因素且是预防、改善或治疗由凝血因子介导的障碍所需
要的最小量。上述量优选低于对宿主具有毒性或使宿主显著较易于出血的量。

[0210] 作为一般建议，胃肠外给药的式I化合物的最初药物有效量在每剂中将为约0.01-100mg/kg，即约0.1至20mg/kg患者体重/日，其中所使用的化合物的典型最初范围为0.3至
15mg/kg/日。

[0211] 可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂在所使用的剂量和浓度时对受体是无毒的且包括缓冲剂，诸如磷酸盐、枸橼酸盐及其它有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和蛋氨酸；
防腐剂(诸如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯己双铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，诸如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；儿茶酚；间苯二酚；
环己醇；戊-3-醇；和间甲酚)；低分子量(少于约10个残基)多肽；蛋白质，诸如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，诸如聚乙烯基吡咯烷酮；氨基酸，诸如甘氨酸、谷氨酰
胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖及其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂，诸如EDTA；糖，诸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；形成盐的抗衡离子，诸如钠；金属复合物(例如Zn-蛋白质复合物)；和/或非离子型表面活性剂，诸如TWEENTM、
PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。还可将活性药物成分包埋在例如通过凝聚技术或通过界面
聚合而制备的微囊中，例如在胶体药物递送系统(例如脂质体、白蛋白微球、微乳、纳米粒和纳米囊)中或在巨乳液中分别为羟甲基纤维素或明胶微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。上
述技术参见Remington’s Pharmaceutical Sciences 16th edition,Osol,A.Ed.(1980)。

[0212] 可制备式I化合物的持续释放制剂。持续释放制剂的合适实例包括固态疏水性聚合物的半透性基质，其含有式I化合物，所述基质以成形制品形式(例如膜或微囊)存在。持
续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如聚(甲基 丙烯酸2-羟基乙基酯)或聚(乙烯醇))、
聚丙交酯(美国专利3,773,919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸的共聚物、不可降解的乙
TM
烯-乙酸乙烯基酯、可降解的乳酸-羟乙酸共聚物诸如LUPRON DEPOT (由乳酸-羟乙酸共聚
物和醋酸亮丙瑞林构成的注射用微球)和聚D-(-)-3-羟基丁酸。

[0213] 所述制剂包括适于本申请所述给药途径的那些制剂。所述制剂可方便地以单位剂量形式存在且可通过药学领域公知的任何方法来制备。技术和制剂通常参见Remington’s 
Pharmaceutical Sciences(Mack Publishing Co.,Easton,PA)。上述方法包括对活性成分
与构成一种或多种助剂的载体进行混合的步骤。通常，所述制剂如下制备：使活性成分与液
态载体或微细分散的固态载体或与这两种载体均匀和密切地混合，然后按需对产品进行成
形。

[0214] 可将适于口服给药的式I化合物的制剂制备成离散的单位，诸如各自含有预定量的式I化合物的丸剂、胶囊剂、扁囊剂或片剂。

[0215] 压制片可如下制备：用合适的机器对活性成分进行压制，所述活性成分呈自由流动形式，诸如粉末或颗粒，其任选混合有粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。模制片可如下制备：用合适的机器对用惰性液态稀释剂润湿的粉末状活性成分
的混合物进行模制。可任选对片剂进行包衣或压痕且任选进行配制以提供活性成分从所述
片剂中的缓慢或控制释放。

[0216] 可制备用于口服的片剂、含片剂、锭剂、水性或油性混悬剂、可分散的粉末剂或颗粒剂、乳剂、硬或软胶囊剂例如明胶胶囊剂、糖浆剂或酏剂。预期用于口服的式I化合物的制剂可根据药物组合物制备领域已知的任何方法来制备且上述组合物可含有包括甜味剂、矫
味剂、着色剂和防腐剂在内的一种或多种物质以提供适口的制剂。含有与适于制备片剂的
无毒的生理学上可接受的赋形剂混合在一起的活性成分的片剂是可接受的。这些赋形剂可
为例如惰性稀释剂，诸如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；制粒剂和崩解剂，诸如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，诸如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，诸如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可不经包衣或可通过已知的技术(包括微囊化)来包衣以延迟在胃肠道中的崩解
和吸收，由此提供历时较长时间的持续作用。例如，可使用时间延迟物质，诸如单独的或与
蜡在一起的单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。

[0217] 为了治疗眼部或其它外部组织例如嘴部和皮肤，所述制剂可按局部用软 膏剂或乳膏剂形式来施用，其含有的活性成分(或多种活性成分)的量为例如0.075至20％w/w。当
配制成软膏剂时，活性成分可与石蜡性或水可混溶性软膏基质一起使用。可选择地，活性成
分可与水包油型乳膏基质一起配制成乳膏剂。

[0218] 当需要时，乳膏基质中的水相可包括多元醇，即具有两个或更多个羟基的醇，诸如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括PEG 400)及它们的混合物。局部用制剂可按需包括促进活性成分吸收或渗透通过皮肤或其它作用区域的化合物。上述皮
肤渗透促进剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。

[0219] 本发明乳剂中的油相可由已知的成分以已知的方式来构成。尽管所述相可仅包含乳化剂，但期望其包含至少一种乳化剂与脂肪或油或与脂肪和油两者的混合物。优选地，亲
水性乳化剂与作为稳定剂的亲脂性乳化剂包括在一起。含有或不含有稳定剂(或多种稳定
剂)的乳化剂(或多种乳化剂)一起构成所谓的乳化蜡且所述蜡与油和脂肪一起构成形成乳
膏剂中的油性分散相的所谓的乳化软膏基质。适用于本发明制剂的乳化剂和乳剂稳定剂包
括  60、 80、十八烷基醇/十六烷基醇、苄醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和月
桂基硫酸钠。

[0220] 式I化合物的水性混悬剂含有与适于制备水性混悬剂的赋形剂混合在一起的活性物质。上述赋形剂包括助悬剂，诸如羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素、聚维酮、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯基吡咯烷酮、西黄蓍胶和阿拉伯胶；和分散剂或润湿剂，诸如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂
酸酯)、氧化乙烯与长链脂肪醇的缩合产物(例如十七亚乙氧基十六烷基醇
(heptadecaethyleneoxycetanol))、氧化乙烯与由脂肪酸和己糖醇酐(hexitol 
anhydride)衍生的偏酯(partial ester)的缩合产物(例如聚氧乙烯失水山梨醇单油酸酯
(polyoxyethylene sorbitan monooleate))。水性混悬剂还可含有一种或多种防腐剂(诸
如对羟基苯甲酸乙酯或对羟基苯甲酸正丙酯)、一种或多种着色剂、一种或多种矫味剂和一
种或多种甜味剂(诸如蔗糖或糖精)。

[0221] 式I化合物的药物组合物可呈无菌注射剂诸如无菌注射用水性或油性混悬剂形式。该混悬剂可根据本领域已知的方法使用上述那些合适的分散剂或润湿剂和助悬剂来配
制。无菌注射剂还可为在无毒的胃肠外可接受的稀释 剂或溶剂中的无菌注射用溶液剂或
混悬剂，诸如在丁-1,3-二醇中的溶液剂或制备成冻干粉末剂。可使用的可接受的媒介物和
溶剂包括水、林格溶液(Ringer’s solution)和等渗氯化钠溶液。另外，无菌不挥发性油通
常可用作溶剂或混悬介质。出于该目的，可使用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油一
酯或甘油二酯。另外，脂肪酸诸如油酸也可用于制备注射剂。

[0222] 可与载体物质组合以制备单一剂量形式的活性成分的量将随所治疗的宿主和具体的给药模式而变化。例如，意在用于口服给药于人类的定时释放制剂可含有约1至1000mg
活性物质及合适和适宜量的载体物质，所述载体物质可占总组合物的约5至约95％(重量:
重量)。可制备药物组合物以提供可容易测量的给药量。例如，意在用于静脉内输注的水性
溶液剂可含有约3至500μg活性成分/毫升溶液，从而可进行速率为约30mL/hr的合适体积的
输注。

[0223] 适于胃肠外给药的制剂包括水性和非水性无菌注射溶液剂，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使所述制剂与所预期的受体的血液等渗的溶质；及水性和非水性无菌混
悬剂，其可包含助悬剂和增稠剂。

[0224] 适于局部给药于眼部的制剂还包括滴眼剂，其中将活性成分溶于或悬浮于合适的载体(尤其是用于活性成分的含水溶剂)中。存在于上述制剂中的活性成分的浓度优选为约
0.5至20％w/w，约0.5至10％w/w，或约1.5％w/w。

[0225] 适于在口中局部给药的制剂包括糖锭剂，其含有处于矫味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或西黄蓍胶)中的活性成分；锭剂，其含有处于惰性基质(诸如明胶和甘油或蔗糖和
阿拉伯胶)中的活性成分；和口腔洗剂，其包含处于合适的液态载体中的活性成分。

[0226] 适于直肠给药的制剂可按含有合适基质(其包含例如可可脂或水杨酸酯)的栓剂形式存在。

[0227] 适于肺内或经鼻给药的制剂具有例如范围为0.1至500微米的粒度(包括范围为0.1至500微米且增量微米数为诸如0.5、1、30、35微米等的粒度)，其通过经由鼻道快速吸入或经口吸入来给药以到达肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液剂。适于气
雾给药或干粉给药的制剂可根据常规方法来制备且可与其它治疗剂(诸如迄今用于治疗或
预防下述障碍的化合物)一起递送。

[0228] 适于阴道给药的制剂可按阴道栓剂、棉塞、乳膏剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂形式存在，这些制剂除活性成分外还含有本领域已知为合适的 载体。

[0229] 所述制剂可包装在单位剂量容器或多剂量容器例如密封的安瓿或小瓶中且可在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，其仅需要在使用前即时加入无菌液态载体例如水以供注射。
现用现配的注射溶液剂和混悬剂由上述种类的无菌粉末剂、颗粒剂和片剂来制备。优选的
单位剂量制剂为含有本申请上述日剂量或单位日亚剂量或其合适分数的活性成分的那些
制剂。

[0230] 本发明还提供兽用组合物，因此其含有上述至少一种活性成分及兽用载体。兽用载体为可用于给药所述组合物这一目的的物质且可为固态、液态或气态物质，这些物质在
兽医领域中要么是惰性的要么是可接受的且与活性成分是相容的。这些兽用组合物可通过
胃肠外、口服或任何其它期望的途径来给药。

[0231] 联合治疗

[0232] 式I化合物可单独使用或与其它治疗剂联用以治疗本申请描述的疾病或障碍，诸如过度增殖性障碍(例如癌症)。在一些实施方案中，式I化合物与具有抗过度增殖性或可用
于治疗过度增殖性障碍(例如癌症)的第二化合物在药物组合制剂中联用或在作为联合治
疗的给药方案中联用。所述药物组合制剂或给药方案中的第二化合物优选具有针对式I化
合物的补充活性以使它们不彼此不利地影响。存在于组合中的上述化合物的量合适地为对
于所预期的目的是有效的量。在一个实施方案中，本发明组合物包含式I化合物与本申请描
述的化学治疗剂的组合。

[0233] 联合治疗可按同时给药方案或先后给药方案来给药。当先后给药时，组合可在两次或更多次给药中来给药。联合给药包括使用分开的制剂或单一的药物制剂来同时给药和
以任何顺序来相继给药，其中优选在一段时间内两种(或所有)活性药物同时发挥它们的生
物学活性。

[0234] 任何上述共给药的药物的合适剂量为目前使用的那些剂量且可由于新鉴定的药物及其它化学治疗剂或治疗的联合作用(协同作用)而降低。

[0235] 联合治疗可提供“协同作用”且被证实“是具有协同作用的”，即当活性成分一起使用时实现的作用大于分别使用这些化合物所得到的作用的总和。当活性成分(1)在所组合的单位剂量制剂中共配制及同时给药或递送；(2)以分开的制剂形式交替或平行递送；或
(3)通过一些其它给药方案来给药时，可实现协同作用。当在交替治疗中递送时，当化合物
例如通过不同注射器中的不 同注射剂、分开的丸剂或胶囊剂或分开的输注剂来先后给药
或递送时，可实现协同作用。通常，在交替治疗期间，将有效剂量的每种活性成分先后(即顺序)给药，而在联合治疗中，将有效剂量的两种或更多种活性成分一起给药。

[0236] 在抗癌治疗的具体实施方案中，式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、药用盐或前药可与其它化学治疗剂、激素药物或抗体药物(诸如本申请描述的那些药物)联用及与外科治疗和放射治疗联用。因此，本发明联合治疗包括给药
至少一种式I化合物或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、药用盐或前药及使用至少一种其它癌症治疗方法。将对式I化合物(或多种式I化合物)及其它具有
药物活性的化学治疗剂(或多种化学治疗剂)的量及相对的给药时间安排进行选择以实现
所期望的联合治疗作用。

[0237] 式I的化合物的代谢产物

[0238] 本申请描述的式I的体内代谢产物也在本发明范围内。上述产物可源于例如对所给药的化合物进行的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺化、酯化、脱酯化、酶法裂解等。因此，本发明包括式I化合物的代谢物，包括通过以下方法来产生的化合物，所述方法包括使本发
明化合物与哺乳动物接触足以产生其代谢产物的一段时间。

[0239] 代谢产物通常如下鉴定：制备本发明化合物的经放射性标记的(例如14C或3H)同位素，将其以可检测的剂量(例如大于约0.5mg/kg)胃肠外给药于动物诸如大鼠、小鼠、豚鼠、
猴或人类，允许足以发生代谢的时间(通常为约30秒至30小时)，然后从尿液、血液或其它生
物样品中分离其转化产物。这些产物是容易分离的，这是因为对它们进行了标记(其它产物
通过使用能够与代谢物中存活的抗原表位发生结合的抗体来分离)。代谢物的结构以常规
方式例如通过MS、LC/MS或NMR分析来确定。通常，对代谢物的分析以与本领域技术人员公知
的常规药物代谢研究相同的方式来进行。代谢产物，只要它们不是在体内另外存在的，就可
用于对本发明化合物的治疗性给药进行诊断性测定。

[0240] 制品

[0241] 本发明另一个实施方案提供包含可用于治疗上述疾病和障碍的物质的制品或“试剂盒”。试剂盒包含容器，所述容器包含式I化合物。试剂盒还可 包含在容器上或与容器相
关的标签或包装说明书。术语“包装说明书”用于指通常包括在治疗产品的市售包装中的说
明书，其含有关于适应症、用法、剂量、给药、禁忌症和/或注意事项的信息，这些信息涉及上述治疗产品的使用。

[0242] 本发明的一个实施方案包括用于治疗PI3K介导的病症的试剂盒，其包含本发明化合物和使用说明。

[0243] 合适的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、发泡包装等。容器可由多种材料(诸如玻璃或塑料)来形成。容器可容纳有效治疗所述病症的式I化合物或其制剂且可具有无菌出口
(例如容器可为静脉内溶液剂袋或具有可被皮下注射针头刺穿的塞的小瓶)。组合物中的至
少一种活性药物为式I化合物。标签或包装说明书指示所述组合物可用于治疗所选择的病
症诸如癌症。另外，标签或包装说明书可指示有待治疗的患者为患有障碍诸如过度增殖性
障碍、神经变性、心脏肥大、疼痛、偏头痛或神经创伤性疾病或事件的患者。在一个实施方案中，标签或包装说明书指示包含式I化合物的组合物可用于治疗起因于异常细胞生长的障
碍。标签或包装说明书还可指示所述组合物可用于治疗其它障碍。可选择地或额外地，所述
制品还可包含第二容器，所述第二容器包含药用缓冲液，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸
盐缓冲盐水、林格溶液和右旋糖溶液。其还可包含基于商业和使用者立场而期望的其它物
质，包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。

[0244] 试剂盒还可包含关于给药式I化合物及第二药物制剂(若存在)的指导。例如，若试剂盒包含第一组合物(其含有式I化合物)和第二药物制剂，则试剂盒还可包含关于将第一
和第二药物组合物同时、先后或分开给药于需要其的患者的指导。

[0245] 在另一个实施方案中，试剂盒适于递送式I化合物的固态口服形式，诸如片剂或胶囊剂。上述试剂盒优选包含多个单位剂量。上述试剂盒可包含具有关于其预期用途的给药
方法的卡片。上述试剂盒的实例为“发泡包装”。发泡包装在包装工业中是公知的且广泛用
于包装药物单位剂量形式。当需要时，可提供记忆辅助件，其例如呈数字、字母或其它标记
形式或带有日历插入件，其指明在治疗时间表中可进行给药的那些天。

[0246] 根据一个实施方案，试剂盒可包含(a)在其中含有式I化合物的第一容器；和任选的(b)在其中含有第二药物制剂的第二容器，其中所述第二药物制 剂包含具有抗过度增殖
活性的第二化合物。可选择地或额外地，试剂盒还可包含第三容器，其包含药用缓冲液，诸
如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格溶液和右旋糖溶液。其还可包含基于商业
和使用者立场而期望的其它物质，包括其它缓冲液、稀释剂、滤器、针头和注射器。

[0247] 在试剂盒包含式I组合物和第二治疗剂的一些其它实施方案中，试剂盒可包含用于容纳分开的组合物的容器，诸如分开的瓶或分开的箔包装，然而，分开的组合物也可容纳
在单一的未分开的容器中。通常，试剂盒包含关于给药分开的组分的指导。当分开的组分优
选以不同的剂型(例如口服和胃肠外)或不同的给药间隔来给药时或当逐渐增加组合中各
个组分的剂量是开具处方的医生所期望的时，试剂盒形式是特别有利的。

[0248] 式I化合物的制备

[0249] 式I的三环化合物可通过包括与化学领域公知的方法所类似的方法的合成途径，特别是根据本申请所包含的说明书来合成。原料通常获自商业来源如Aldrich Chemicals
(Milwaukee,WI)或容易地使用本领域技术人员公知的方法制备(例如，通过通常在Louis 
F.Fieser and Mary Fieser,Reagents for Organic Synthesis,v.1-23,Wiley,N.Y.
(1967-2006ed.),或Beilsteins Handbuch der organischen Chemie,4,
Aufl.ed.Springer-Verlag,Berlin,包括附录(也可通过Beilstein在线数据库获得)中描
述的方法制备)。

[0250] 在某些实施方案中，式I的化合物可利用公知操作容易地制备，所述公知操作用于制备杂环化合物，其描述于：Comprehensive Heterocyclic Chemistry II,Editors 
Katritzky and Rees,Elsevier,1997,e.g.Volume 3；Liebigs Annalen der Chemie,(9):
1910-16,(1985)；Helvetica Chimica Acta,41:1052-60,(1958)；Arzneimittel-
Forschung,40(12):1328-31,(1990)。

[0251] 式I化合物可单独制备或制备成包含至少2种例如5至1,000种或10至100种化合物的化合物库。式I化合物的库可通过本领域技术人员已知的操作使用溶液相或固相化学通
过组合性“分/混”(combinatorial‘split and mix’)措施或通过多重平行合成来制备。因此，本发明另一个方面提供包含至少2种化合物或其药用盐的化合物库。

[0252] 出于说明性目的，一般操作示出了制备式I化合物及关键中间体的一般方法。实施例章节包含关于单独反应步骤的更详细说明。本领域技术人员应该理解的是，其它合成途
径可用于合成本发明化合物。尽管在方案、 一般操作和实施例中描述了一些原料和途径，
但可替换为其它类似的原料和途径以提供多种衍生物和/或反应条件。另外，通过下述方法
制备的多种化合物可根据本申请使用本领域技术人员公知的常规化学方法来进一步修饰。

[0253] 当制备式I化合物时，可能需要对中间体中的末端官能团(remote functionality)(例如伯胺或仲胺)进行保护。对上述保护的需要将随末端官能团的性质和
制备方法的条件而变化。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(BOC)、苄基氧基羰基(CBZ)和芴-9-基甲基氧基羰基(Fmoc)。对上述保护的需要由本领域技术人员
来容易地确定。关于保护基及其使用的一般描述参见T.W.Greene,Protective Groups in 
Organic Synthesis,John Wiley&Sons,New York,1991。

[0254] 分离方法

[0255] 在制备本发明化合物的方法中，可能有利的是，将反应产物彼此分离和/或与原料分离。通过本领域常见技术将每步或多步中的所需产物分离和/或纯化(以下称为分离)至
所需要的均匀度。通常，上述分离涉及多相萃取、从溶剂或溶剂混合物中结晶、蒸馏、升华或色谱。色谱可涉及任何数目的方法，包括例如反相和正相、尺寸排阻、离子交换、高、中和低压液相色谱法和装置、小规模分析、模拟移动床(SMB)和制备性薄层或厚层色谱及小规模薄
层和快速色谱技术。

[0256] 另一类分离方法涉及用所选择的试剂对混合物进行处理以与所需产物、未反应的原料、反应副产物等结合或使所需产物、未反应的原料、反应副产物等是可分离的。上述试
剂包括吸附剂或吸收剂，诸如活性炭、分子筛、离子交换介质等。可选择地，所述试剂可为酸(在碱性物质的情况下)、碱(在酸性物质的情况下)、结合剂诸如抗体、结合蛋白、选择性螯
合剂诸如冠醚、液/液离子萃取剂(LIX)等。

[0257] 对合适分离方法的选择取决于所涉及的物质性质，例如沸点和分子量(在蒸馏和升华中)、存在或不存在极性官能团(在色谱中)、物质在酸性和碱性介质中的稳定性(在多
相萃取中)等。本领域技术人员将使用最有可能实现所需分离的技术。

[0258] 非对映异构体的混合物可基于其理化差异通过本领域技术人员公知的方法(诸如色谱和/或分级结晶)来分离成其单独的非对映异构体。对映异构体可如下分离：对映异构
体的混合物通过与具有光学活性的合适化合物(例如 手性助剂诸如手性醇或Mosher’s酰
氯)反应而转化为非对映异构体的混合物，对非对映异构体进行分离，然后将单独的非对映
异构体转化(例如水解)为相应的纯对映异构体。另外，一些本发明化合物可为阻转异构体
(例如取代的联芳族化合物)且被认为是本发明一部分。对映异构体还可通过使用手性HPLC
柱来分离。

[0259] 单一的立体异构体，例如基本不含有其立体异构体的对映异构体，可通过对外消旋混合物进行拆分来得到，所述拆分所使用的方法为诸如使用具有光学活性的拆分剂来形
成非对映异构体(Eliel,E.and Wilen,S“. Stereochemistry of Organic Compounds”,
John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994；Lochmuller,C.H.,(1975)J.Chromatogr.,113
(3):283-302)。本发明手性化合物的外消旋混合物可通过任何合适的方法来分离，所述方
法包括(1)与手性化合物形成离子性非对映异构盐且通过分级结晶或其它方法来分离；(2)
与手性衍生剂形成非对映异构化合物，对非对映异构体进行分离且转化为纯立体异构体；
和(3)在手性条件下对基本纯的或富集的立体异构体进行直接分离。参见“Drug 
Stereochemistry,Analytical Methods and Pharmacology”,Irving W.Wainer,Ed.,
Marcel Dekker,Inc.,New York(1993)。

[0260] 在方法(1)中，非对映异构盐可如下形成：使对映异构体纯的手性碱诸如马钱子碱、奎宁、麻黄碱、番木鳖碱、α-甲基-β-苯基乙胺(安非他明)等与带有酸性官能团的不对称化合物诸如羧酸和磺酸反应。对非对映异构盐的分离可通过分级结晶或离子色谱来实现。
为了对氨基化合物的光学异构体进行分离，加入手性羧酸或磺酸诸如樟脑磺酸、酒石酸、扁
桃酸或乳酸，这可引起非对映异构盐的形成。

[0261] 可选择地，通过方法(2)使待拆分的底物与手性化合物的一种对映异构体反应以形成非对映异构体对(Eliel,E.and Wilen,S.“Stereochemistry of Organic 
Compounds”,John Wiley&Sons,Inc.,1994,p.322)。非对映异构化合物可如下形成：使不对
称化合物与对映异构体纯的手性衍生剂诸如薄荷基衍生物反应，然后对非对映异构体进行
分离且水解，得到纯的或富集的对映异构体。确定光学纯度的方法涉及制备外消旋混合物
的手性酯[诸如在碱存在下制备薄荷基酯例如氯甲酸(-)-薄荷基酯或制备Mosher酯即乙酸
α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基酯(Jacob III.J.Org.Chem.(1982)47:4165)]且就两种阻转
异构性对映异构体或非对映异构体的存在而对1H NMR光谱进行分析。阻转异 构性化合物
的稳定非对映异构体可按照对阻转异构性萘基-异喹啉类化合物进行分离的方法(WO 
1996/015111)通过正相和反相色谱来分离。在方法(3)中，两种对映异构体的外消旋混合物
可通过使用手性固定相的色谱来分离(“Chiral Liquid Chromatography”(1989)
W.J.Lough,Ed.,Chapman and Hall,New York；Okamoto,J.Chromatogr.,(1990)513:375-
378)。富集的或纯化的对映异构体可通过用于区分具有不对称碳原子的其它手性分子的方
法诸如旋光或圆二色性来区分。

[0262] 一般制备方法

[0263] Suzuki偶联：

[0264]

[0265] Suzuki型偶联反应用于将单环杂芳基、稠合双环杂环、稠合双环杂芳基或苯基连接在式1化合物的2-氯-嘧啶1中间体的嘧啶环的2-位上。例如，1可与芳基或杂芳基硼酸酯
试剂2(其中R为H)或被保护的硼酸酯如频哪醇组合。例如，将1.5当量的4-(4,4,5,5-四甲
基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)1H-吲唑24溶于约3当量的碳酸钠中，为约1mol水溶液
和约等体积的乙腈。添加催化量或更多的低价态钯试剂如双(三苯基膦)二氯钯(II)得到3。
取代基R1’,R2’,R3’可以是如上所定义的R1,R2,R3，或其被保护形式或前体。

[0266] 多种硼酸或硼酸酯可用于代替所指出的吲唑硼酸酯。或者，吲唑的氮可被保护，例如N-THP保护的化合物25。在一些情况中，使用乙酸钾代替碳酸钠以调节水层的pH。Suzuki
钯偶联反应可在微波条件下优化和/或加速。该反应可在压力下在微波反应器如Biotage 
Optimizer(Biotage,Inc.)中在约100-150℃加热约10至30分钟。将内容物冷却，浓缩并用
乙酸乙酯或另外的有机溶剂萃取。在蒸发有机层后，Suzuki偶联产物3，可在硅胶上纯化或
通过反相HPLC纯化。

[0267] 多种钯催化剂可用于卤化物1和硼酸或硼酸酯2如4-(4,4,5,5-四甲基 -1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑24或4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基(1,3,2-二氧杂硼杂环戊
烷-2-基))嘧啶-2-基胺26的钯介导的交叉Suzuki偶联反应中。低价态Pd(II)和Pd(0)催化
剂可Suzuki偶联反应中，此类催化剂包括PdCl2(PPh3)2,Pd(t-Bu)3,PdCl2dppf CH2Cl2,Pd
(PPh3)4,Pd(OAc)/PPh3,Cl2Pd[(Pet3)]2,Pd(DIPHOS)2,Cl2Pd(Bipy),[PdCl(Ph2PCH2PPh2)]2,Cl2Pd[P(o-tol)3]2,Pd2(dba)3/P(o-tol)3,Pd2(dba)/P(furyl)3,Cl2Pd[P(furyl)3]2,Cl2Pd
(PmePh2)2,Cl2Pd[P(4-F-Ph)3]2,Cl2Pd[P(C6F6)3]2,Cl2Pd[P(2-COOH-Ph)(Ph)2]2,Cl2Pd[P(4-COOH-Ph)(Ph)2]2，和封装催化剂Pd EnCatTM30、Pd EnCatTMTPP30以及Pd(II)EnCatTMBINAP30(US2004/0254066)。一种此类的Suzuki钯催化剂为[1,1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯
(II)，与二氯甲烷的复合物，表示为Pd(dppf)Cl2。

[0268] 实施例

[0269] 可容易地对实施例中描述的化学反应进行调整以适于制备多种本发明的其它PI3K抑制剂，并且制备本发明化合物的备选方法被认为包括在本发明的范围内。例如，本发
明的非示例性化合物的合成可通过本领域技术人员显而易见的变化形式来顺利进行，这些
变化形式例如，通过适当保护反应性官能团，通过利用并非本申请所述的且本领域已知的
其它合适试剂和/或通过反应条件的常规变化形式。可供选择地，本申请披露的或本领域已
知的其它反应将被理解为具有制备本发明的其它化合物的适用性。

[0270] 在下文描述的实施例中，除非另有说明，所有温度以摄氏度列出。试剂购于商业供应商，如Sigma Aldrich Chemical Company、Lancaster、TCI或Maybridge，并且除非另有说明不经进一步纯化就使用。下文列出的反应通常在氮气或氩气的正压力下或在干燥管(除
非另有说明)中在无水溶剂中进行，反应烧瓶通常装有用于通过注射器引入底物和试剂的
橡胶隔片。玻璃器皿烘干和/或加热干燥。柱色谱在具有硅胶柱或硅胶SEP 柱
(Waters)的Biotage系统(制造商：Dyax Corporation)上进行。1H NMR光谱(400MHz)在氘代
CDCl3、d6-DMSO、CH3OD或d6-丙酮溶液(报道为ppm)中，使用氯仿作为参比标准(7.25ppm)获
得。当报道峰的多重性时，使用以下缩写：s(单峰)、d(双峰)、t(三重峰)、m(多重峰)、br(宽峰)、dd(双双峰)、dt(双三峰)。偶合常数(当给出时)报道为赫兹(Hz)。

[0271] HPLC通过以下示例性方法进行：

[0272] (A)LCMS短(short)方法-10min运行

[0273] HPLC-Agilent 1200

[0274]

[0275] 质谱-Agilent quadrupole 6140

[0276] 离子化 正电性ESI

[0277] 扫描范围 110-800amu

[0278] (B)Waters Acquity/LCT长方法-20min运行

[0279] Waters Acquity UPLC

[0280]

[0281] 质谱-Waters LCT Premier XE

[0282] 离子化 正电性ESI

[0283] 扫描范围 100-800amu

[0284] (C)LCMS 2.5min手性方法

[0285] 移动相A:CO2

[0286] 移动相B：甲醇

[0287] 等度洗脱条件：25％B

[0288] 流速：5mL/min

[0289] 出口压力：120巴

[0290] 温度：40℃

[0291] 柱：ChiralCel OJ(4.6x50mm，3μm)

[0292] Uv：230nm

[0293] 系统：Berger Analytical SFC/MS

[0294] 手性纯化：

[0295] 条件A：

[0296] 移动相A：CO2

[0297] 移动相B：甲醇

[0298] 等度洗脱条件：25％B

[0299] 流速：60mL/min

[0300] 出口压力：100巴

[0301] 温度：40℃

[0302] 柱：ChiralCel OJ(21.2x250mm，5μm)

[0303] Uv：230nm

[0304] 系统：Berger MGII

[0305] 实施例1 6-羟基-5-甲氧基-1H-嘧啶-2,4-二酮，钠盐

[0306]

[0307] 在40℃在氮气氛下，将金属钠(1.15g,0.05mol)分批添加至乙醇(经 分子筛干燥，50mL)中，并搅拌该混合物直至形成溶液。添加脲(3.0g,0.05 mol)并将混合物在100℃
加热15分钟直至实现完全溶解。将反应混合物稍微冷却并添加丙二酸甲氧基甲基酯(8.1g,
0.05mol)，几乎立即形成粉红色/白色沉淀。进一步添加无水乙醇(10mL)以维持可搅拌的混
合物。将所得悬浮液在100℃(回流)加热4小时。将反应混合物在真空中浓缩并将残余物在
高真空下干燥得到6-羟基-5-甲氧基-1H-嘧啶-2,4-二酮，钠盐，为粉红色/白色固体，其无
需分析或纯化即用于后续步骤。

[0308] 实施例22,4,6-三氯-5-甲氧基-嘧啶

[0309]

[0310] 将6-羟基-5-甲氧基-1H-嘧啶-2,4-二酮，钠盐(21mmol)悬浮于磷酰氯(20mL)中并将混合物分配于两个20mL微波反应瓶中。将反应混合物使用微波辐照在130-140℃(～10-
12巴)加热30分钟(小心！压力显著升高！)。合并冷却的反应混合物并倾倒至温(约40℃)水
中(小心！)并将所得混合物用乙酸乙酯萃取两次，将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)，过滤
并在真空中浓缩得到2,4,6-三氯-5-甲氧基-嘧啶，为结晶黄色/棕色固体(3.75g,84％)。1H 
NMR(CDCl3):3.98(3H,s).

[0311] 实施例32,4,6-三氯-5-羟基-嘧啶

[0312]

[0313] 在氮气氛下，将2,4,6-三氯-5-甲氧基-嘧啶(4.0g,18.7mmol)于DCM(200mL)中的溶液冷却至0℃并滴加三溴化硼(6.6mL,65mmol)处理。在室温搅拌18小时后，将反应混合物
冷却并用甲醇(25mL，小心，放热！)稀释并将反应混合物用水(200mL)稀释。将水层用DCM萃
取，将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到2,4,6-三氯-5-羟基-嘧啶，为淡
褐色固体(2.55g,71％)。13C NMR(DMSO-d6):149.23(C),145.25(C),145.08(C).LCMS
(Method C):RT＝2.65/2.77.[M-H]-197/199.

[0314] 实施例44-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑24- 路线1

[0315]

[0316] 向3-溴-2-甲基苯胺(5.0g，26.9mmol)在氯仿(50mL)中的溶液添加乙酸钾(1.05当量，28.2mmol，2.77g)。添加乙酸酐(2.0当量，53.7mmol，5.07mL)，同时在冰-水中冷却。然后将混合物在室温搅拌10分钟，然后形成白色胶凝状固体。先后添加18-冠醚-6(0.2当量，
5.37mmol，1.42g)和亚硝酸异戊酯(2.2当量，59.1mmol，7.94mL)，并将混合物在回流下加热
18小时。将反应混合物冷却，并在氯仿(3x 100mL)和碳酸氢钠饱和水溶液(100mL)之间分
配。将合并的有机萃取液用盐水(100mL)洗涤，分离并干燥(MgSO4)。将粗产物蒸发至硅胶上
并通过色谱法用20％-40％EtOAc-汽油(petrol)洗脱纯化，得到1-(4-溴-吲唑-1-基)-乙酮
A(3.14g，49％)，为橙色固体，和4-溴-1H-吲唑B(2.13g，40％)，为淡橙色固体。A：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ2.80(3H，s)，7.41(1H，t，J＝7.8Hz)，7.50(1H，d，J＝7.8Hz)，8.15(1H，s)，
8.40(1H，d，J＝7.8Hz)。B：1H NMR(400MHz，CDCl3)7.25(1H，t，J＝7.3Hz)，7.33(1H，d，J＝
7.3Hz)，7.46(1H，d，J＝7.3Hz)，8.11(1H，s)，10.20(1H，br s)。

[0317] 向1-(4-溴-吲唑-1-基)-乙酮A(3.09g，12.9mmol)在MeOH(50mL)中的溶液添加6N HCl水溶液(30mL)，并将混合物在室温搅拌7小时。蒸发MeOH，并将混合物在EtOAc(2×50mL)
和水(50mL)之间分配。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，分离并干燥(MgSO4)。将溶剂通
过在减压下蒸发除去，得到4-溴-1H-吲唑B(2.36g，93％)。

[0318] 向4-溴-1H-吲唑B(500mg，2.54mmol)和双(频哪醇合)二硼烷(1.5当量，3.81mmol)在DMSO(20mL)中的溶液添加乙酸钾(3.0当量，7.61mmol，747mg；在干燥枪中干燥)和PdCl2
(dppf)2(3mol％，0.076mmol，62mg)。将混合物用氩气脱气并在80℃加热40小时。将反应混
合物冷却并在水(50mL)和乙醚(ether)(3X 50mL)之间分配。将合并的有机层用盐水(50mL)
洗涤，分离并干燥(MgSO4)。粗物质通过色谱法用30％-40％EtOAc-汽油洗脱纯化，得到4-
(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑24(369mg，60％) 和吲唑
(60mg，20％)的不可分离的3:1混合物，分离为黄色胶状物，其在静置后固化，作为灰白色固体提供。1H NMR(400MHz，d6-DMSO)1.41(12H，s)，7.40(1H，dd，J＝8.4Hz，6.9Hz)，7.59(1H，d，J＝8.4Hz)，7.67(1H，d，J＝6.9Hz)，10.00(1H，br s)，8.45(1H，s)，和吲唑：7.40(1H，t)，
7.18(1H，t，J＝7.9Hz)，7.50(1H，d，J＝9.1Hz)，7.77(1H，d，J＝7.9Hz)，8.09(1H，s)；杂质在
1.25。

[0319] 实施例54-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑24-路线2

[0320]

[0321] 向2-甲基-3-硝基苯胺(2.27g，14.91mmol)在乙酸(60mL)中的溶液添加亚硝酸钠(1.13g，1.1当量)在水(5mL)中的溶液。在2小时后，将深红色溶液倒在冰/水上，并通过过滤收集所得沉淀物，得到4-硝基-1H-吲唑C(1.98g，81％)。

[0322] 将4-硝基-1H-吲唑C(760mg，4.68mmol)、钯/炭(10％，催化的)和乙醇(30mL)的混合物在氢气球下搅拌4小时。然后，通过硅藻土(celite)过滤反应混合物，并真空除去溶剂，得到1H-吲唑-4-基胺D(631mg，100％)。

[0323] 在低于0℃的温度，将亚硝酸钠(337mg，4.89mmol)在水(2mL)中的水溶液滴加至1H-吲唑-4-基胺D(631mg，4.74mmol)在6M盐酸(7.2mL)中的悬浮液。在搅拌30分钟后，将四
氟硼酸钠(724mg)添加至反应混合物。得到粘性溶液，将其过滤并简单地用水洗涤，得到4-
重氮基-1H-吲唑四氟硼酸盐E(218mg，20％)，为深红色固体。

[0324] 将无水甲醇(4mL)用氩气吹洗5分钟。向其添加4-重氮基-1H-吲唑四氟 硼酸盐(218mg，0.94mmol)、双(频哪醇合)二硼烷(239mg，1.0当量)和[1,1’-二(二苯基膦基)二茂
铁]二氯化钯(II)(20mg)。将反应混合物搅拌5小时，然后通过硅藻土过滤。将残留物使用快
速色谱法纯化，得到4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑24
(117mg)。

[0325] 实施例61-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑25(路线A)

[0326]

[0327] 步骤A：制备4-氯-1H-吲唑：向带有搅拌子的250ml烧瓶添加2-甲基-3-氯苯胺(8.4ml，9.95g，70.6mmol)、乙酸钾(8.3g，84.7mmol)和氯仿(120ml)。将这种混合物在搅拌下冷却至0℃。历时2分钟，向冷却的混合物滴加乙酸酐(20.0ml，212mmol)。将反应混合物温热至25℃并搅拌1小时。此时，将反应混合物加热至60℃。添加亚硝酸异戊酯(18.9ml，
141mmol)，并将反应混合物在60℃搅拌过夜。一旦完成，添加水(75ml)和THF(150ml)，并将
反应混合物冷却至0℃。添加LiOH(20.7g，494mmol)，并将反应混合物在0℃搅拌3小时。添加水(200ml)，并用EtOAc(300ml，100ml)萃取产物。将有机层合并，用MgSO4干燥并真空浓缩，得到4-氯-1H-吲唑11.07g(100％)，为橙色固体。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.18(d，J＝1Hz，
1H)，7.33(d，J＝8Hz 1H)，7.31(t，J＝7Hz，1H)，7.17(dd，J＝7Hz，1Hz 1H)。LCMS(正电性ESI)m/e 153(M+1)。

[0328] 步骤B：制备4-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑：向带有机械搅拌的1L烧瓶添加4-氯-1H-吲唑(75.0g，0.492mol)、对甲苯磺酸吡啶鎓(1.24g，4.92mmol)、CH2Cl2(500ml)和3,4-二氢-2H-吡喃(98.6ml，1.08mol)。在搅拌下，将这种混合物加热至45℃并保持16小
时。反应混合物的分析显示产生两种产物异构体。将反应混合物冷却至25℃并添加CH2Cl2
(200ml)。用水(300ml)和饱和NaHCO3(250ml)洗涤溶液。用MgSO4干燥有机相并浓缩至 干。通过溶解在EtOAc/己烷(4:6，1L)中并添加SiO2(1.2L)，纯化粗产物。过滤混合物并用EtOAc/
己烷(4:6，2L)洗涤滤饼。真空浓缩有机相，得到4-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-吲唑
110.2g(95％)，为橙色固体。异构体1：1HNMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(d，J＝1Hz，1H)，7.50(dd，J＝9Hz，1Hz 1H)，7.29(dd，J＝9Hz，8Hz 1H)，7.15(dd，J＝8Hz，1Hz 1H)5.71(dd，J＝9Hz，
3Hz 1H)4.02(m，1H)3.55(m，1H)2.51(m，1H)2.02(m，2H)1.55(m，3H)。LCMS(正电性ESI)m/e 
237(M+1)；异构体2：1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.25(d，J＝1Hz，1H)，7.62(dd，J＝9Hz，1Hz 
1H)，7.20(dd，J＝9Hz，8Hz1H)，7.06(dd，J＝8Hz，1Hz 1H)5.69(dd，J＝9Hz，3Hz 1H)4.15(m，
1H)3.80(m，1H)2.22(m，2H)2.05(m，1H)1.75(m，3H)。LCMS(正电性ESI)m/e 237(M+1)。

[0329] 步骤C：制备1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑：向带有搅拌子的500ml烧瓶添加4-氯-1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-1H-
吲唑(10.0g，42.2mmol)、DMSO(176ml)、PdCl2(PPh3)2(6.2g，8.86mmol)、三环己基膦(0.47g，
1.69mmol)、双(频哪醇合)二硼烷(16.1g，63.4mmol)和乙酸钾(12.4g，0.127mol)。在搅拌
下，将混合物加热至130℃并保持16小时。将反应混合物冷却至25℃并添加EtOAc(600ml)并
用水(2x250ml)洗涤。将有机相用MgSO4干燥并真空浓缩至干。将粗产物通过SiO2填料
(120g)，用10％EtOAc/己烷(1L)和30％EtOAc/己烷(1L)洗脱纯化。真空浓缩滤液，得到
13.9g(100％)1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-
基)-1H-吲唑，为在乙酸乙酯中的20％(wt/wt)溶液。1H NMR显示存在约20％(wt/wt)双(频
哪醇合)二硼烷。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.37(s，1H)，7.62(dd，J＝14Hz，2Hz 1H)，7.60(dd，J＝7Hz，1Hz1H)，7.31(dd，J＝8Hz，7Hz 1H)5.65(dd，J＝9Hz，3Hz 1H)4.05(m，1H)3.75(m，
1H)2.59(m，1H)2.15(m，1H)2.05(m，1H)1.75(m，3H)1.34(s，12H)。LCMS(正电性ESI)m/e 245(M+1)。

[0330] 实施例71-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑25(路线B)

[0331]

[0332] 步骤A：制备4-硝基-1H-吲唑：将2-甲基-3-硝基苯胺(200g，1.315摩尔)和乙酸(8000ml)的混合物冷却至15-20℃，并历时30min缓慢添加亚硝酸钠(90.6g，1.315摩尔)在
水(200ml)中的溶液。在添加后，将反应温度提高至25-30℃并将反应混合物在此温度搅拌
2-3小时。通过TLC监测反应进展，并在反应完成后过滤产物并用乙酸(1000ml)洗涤残留物。
将乙酸在真空下(550mm Hg)在低于80℃蒸馏，并添加水(8000ml)，冷却至25-30℃并搅拌
30min。将浆液过滤并用水(1000ml)洗涤。将粗产物在加热下在70-80℃干燥2小时，然后吸
收在5％乙酸乙酯/正己烷(100:2000ml)溶液中并在环境温度搅拌1-1.5小时。将悬浮液过
滤并用5％乙酸乙酯/正己烷混合物(25:475ml)洗涤。将所得产物在真空下在低于80℃干燥
1
10-12小时，得到4-硝基-1H-吲唑，为棕色固体(150g，70％)：mp：200-203℃；H NMR
(200MHz，CDCl3)δ13.4(br，1H)，8.6(s，1H)，8.2-7.95(dd，2H)，7.4(m，1H)。ESMS m/z 164(M+1)。纯度：95％(HPLC)。

[0333] 步骤B：制备4-氨基-1H-吲唑：将4-硝基-1H-吲唑(200g，1.22摩尔)和10％钯/炭(20.0g)在EtOH(3000ml)中的混合物在环境温度氢化(反应放热，并且温度升至50℃)。在反
应完成后，通过过滤除去催化剂。将溶剂在真空下在低于80℃蒸发，并冷却至室温并将正己
烷(1000ml)添加至残留物并搅拌30min。将分离的固体过滤并用正己烷(200ml)洗涤。将产
物在真空下在70-80℃干燥10-12小时，得到4-氨基-1H-吲唑，为棕色固体(114g，70％)，
1
m.p.：136-143℃。H NMR(200MHz，CDCl3)δ12(br，1H)，8.0(s，1H)，7.1-7.0(dd，2H)，6.5(d，
1H)，3.9(m，2H)。ESMS m/z 134(M+1)。纯度：90-95％(HPLC)

[0334] 步骤C：制备4-碘-1H-吲唑：将4-氨基-1H-吲唑(50.0g，0.375摩尔)在水(100ml)和浓盐酸(182ml)中的混合物冷却至-10℃。在约30-60min内，在-10℃，向其滴加亚硝酸钠
(51.7g，0.75摩尔)在水(75ml)中的溶液(在添加 期间观察到起泡)。在另一烧瓶中，在室温
制备碘化钾(311g，1.87摩尔)在水(3000ml)中的混合物，并在30-40℃，在约30-40min内，向其添加上面的冷却的重氮盐。将反应混合物在30℃维持1小时，在完成反应后，添加乙酸乙
酯(500ml)并将反应混合物通过硅藻土过滤。分离各层，并用乙酸乙酯(2X500ml)萃取水层。
将合并的有机层用5％海波(hypo)溶液(2x500ml)、盐水(500ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。
将粗产物通过色谱法(硅胶，己烷，15-20％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到4-碘-1H-吲唑，为橙
色固体(23.0g，25％)。mp：151-177C：1H NMR(200MHz，CDCl3)δ12.4(br，1H)，8.0(s，1H)，7.6(dd，2H)，7.1(d，1H)。ESMS m/z 245(M+1)。纯度：95-98％(HPLC)。

[0335] 步骤D：制备4-碘-1-(2-四氢吡喃基)吲唑：将4-氨基-1H-吲唑(250.0g，1.024摩尔)、3,4-二氢-2H-吡喃(126.0g，1.5摩尔)和PPTS(2.57g，0.01摩尔)在CH2Cl2(1250ml)中的混合物加热至50℃并保持2小时。将反应混合物冷却至室温并倒入水(625ml)中，分离各层，
并用CH2Cl2(250ml)萃取水层。将合并的有机层用水(625ml)洗涤，干燥(Na2SO4)并浓缩。将
粗残留物通过色谱法(硅胶，己烷，5-10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到4-碘-1-(2-四氢吡喃
基)吲唑，为油状物(807.0g，60％)。1H NMR(200MHz，CDCl3)δ8.5(s，1H)，7.8(m，1H)，7.6(d，
1H)，7,.25(m，1H)，5.7(dd，1H)，4.2-3.8(dd，1H)，2.2-2.0(m，4H)2.0-1.8(m，4H)。ESMS m/z 
329(M+1)。

[0336] 步骤E：制备1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑：将4-碘-1-(2-四氢吡喃基)吲唑(100g，0.304摩尔)、二频哪醇二硼
(96.4g，0.381摩尔)、PdCl2(dppf)(8.91g，0.012摩尔)和乙酸钾(85.97g，0.905摩尔)在
DMSO(500ml)中的混合物加热至80℃并保持2-3小时。在完成后，将反应混合物冷却至室温
并添加水(1500ml)。将反应物料萃取至乙酸乙酯(3x 200ml)中，将合并的有机层蒸发，干燥
(Na2SO4)并浓缩。将粗产物通过柱色谱法(硅胶，己烷，5-10％乙酸乙酯/己烷)纯化，得到1-(四氢-2H-吡喃-2-基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吲唑25，
1
为粘性棕色油状物(70.0g，70％)。H NMR(CDCl3)δ8.5(s，1H)，7.8(m，1H)，7.6(d，1H)，7.25(m，1H)，5.7(dd，1H)，4.2-3.8(dd，1H)，2.2-2.0(m，4H)2.0-1.8(m，4H)1.4-1.2(s，12H)。
ESMS m/z 329(M+1)

[0337] 实施例84-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基))嘧啶 -2-基胺26

[0338]

[0339] 向4-甲基嘧啶-2-基胺(8.0g，0.073mol)在氯仿(320mL)中的溶液添加N-溴琥珀酰亚胺(13.7g，0.077mol)。将反应混合物避光搅拌18小时。LC/MS显示反应完成。将混合物用
DCM稀释，然后用1N NaOH水溶液和盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤并浓缩，得到5-溴-4-甲基
嘧啶-2-基胺(12g，收率：86％)。

[0340]

[0341] 将5-溴-4-甲基嘧啶-2-基胺(5.0g，26mmol)、乙酸钾(7.83g，79.8mmol)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷
(7.43g，29.2mmol)在二噁烷(140mL)中的混合物在氮气下搅拌20min。将1,1’-二(二苯基膦
基)二茂铁氯化钯(II)二氯甲烷加合物(1.08g，1.33mmol)添加至反应混合物。将反应混合
物在氮气下加热至115℃并保持18小时。完成后，冷却混合物并添加EtOAc。将所得混合物超
声处理并过滤。使用另外的EtOAc洗涤固体。将合并的有机萃取液用水洗涤，用MgSO4干燥，
过滤并浓缩。将粗产物通过色谱法用20～100％EtOAc/己烷洗脱纯化，得到4.5g 4-甲基-5-
1
(4,4,5,5-四甲基(1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基))嘧啶-2-基胺26(收率：74％)。H-NMR
(DMSO，400MHz)：δ8.28(s，1H)，6.86(br s，2H)，2.35(s，3H)，1.25(s，12H)。MS(ESI)m/e(M+H+)236.15，154.07。

[0342] 实施例101 5-(4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺101

[0343] 步骤1：(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯

[0344]

[0345] 将2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(3.0g,15.0mmol)、乙醇酸乙酯(16.7mL,17.3mmol)、三苯基膦(4.5g,17.3mmol)和DIAD(3.4mL,17.3mmol)于二噁烷(100mL)中的混合物在室温搅
拌18小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2，梯度0-15％乙酸乙酯/环己
烷)纯化得到(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯，为白色固体(2.67g,62％)。1H NMR
(400MHz,CDCl3):δ4.77(2H,s),4.28(2H,q,J＝7.14Hz),1.32(3H,t,J＝7.15Hz).

[0346] 步骤2：(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯

[0347]

[0348] 将(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯(2.67g,9.35mmol)、吗啉(815μL,9.35mmol)和三乙胺(2.6mL,18.7mmol)于IMS(50mL)中的混合物在室温搅拌2小时，然后将
反应在真空中浓缩。将所得残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠水溶液之间分配。将水相进
一步用乙酸乙酯萃取，将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到(2,4-二氯-
6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯(2.97g,95％)。LCMS:RT＝3.35min,[M+H]+＝336/
338/340.

[0349] 步骤3：2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇

[0350]

[0351] 在-78℃向(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯(188mg,0.56mmol)于THF(2.5mL)中的溶液中添加DIBAL-H(2.0mL,2.0mmol,1M于THF中的溶液)并将
所得混合物历时30分钟温热至0℃。将反应混合物用甲醇和罗谢尔盐(1M水溶液)淬灭并将
水相用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到2-(2,4-二
氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇，为油状物(156mg,95％)。LCMS:RT＝2.60min,[M+
H]+＝294/296/298.

[0352] 步骤4：2-氯-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0353]

[0354] 向2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇(145mg,0.49mmol)于THF(5mL)中的溶液中添加氢化钠(59mg,1.50mmol,60％于矿物油中的分散液)并将所得混合物
在室温搅拌30分钟。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的
有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到2-氯-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯
并[2,3-d]嘧啶，为白色固体(114mg,90％)。LCMS:RT＝2.62min,[M+H]+＝258/260.

[0355] 步骤5：将2-氯-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(114mg,0.44mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺(196mg,
0.88mmol)、PdCl2dppf.DCM(36mg,0.04mmol)和碳酸铯(430mg,1.32mmol)于二噁烷(5mL)和
水(0.5mL)中的混合物脱气，然后在100℃加热2小时。进一步添加5-(4,4,5,5-四甲基-[1,
3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺(100mg,0.44mmol)、PdCl2dppf.DCM(36mg,
0.04mmol)并再将混合物在100℃加热2小时。将反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将
合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并真空浓缩。将所得残余物上样至 SCX-2柱，其用
甲醇洗涤，且将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真空中浓缩。将所得残余
物通过柱色谱(SiO2,梯度0-10％甲醇/DCM)纯化然后用乙醚研磨得到101(37mg,27％)。
LCMS:RT＝2.75min,[M+H]+＝317.1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.90(2H,s),7.01(2H,s),4.42-
4.36(2H,m),4.25-4.18(2H,m),3.70(8H,s).

[0356] 实施例102 5-[(6R)-6-甲基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基]嘧啶-2-胺102

[0357] 步骤1：(R)-2-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-丙酸乙酯

[0358]

[0359] 将2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(600mg,3.01mmol)、(R)-2-羟基-丙酸乙酯(411μL,3.60mmol)、三苯基膦(906mg,3.45mmol)和DIAD(678μL,3.45mmol) 于二噁烷(5mL)中的混
合物在室温搅拌18小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-25％
乙酸乙酯/环己烷)纯化得到(R)-2-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-丙酸乙酯(522mg,
52％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.30-4.16(2H,m),4.12(1H,q,J＝7.14Hz),1.70(3H,d,J＝
6.78Hz),1.29(3H,t,J＝7.19Hz).

[0360] 步骤2:(R)-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙酸乙酯

[0361]

[0362] 将(R)-2-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-丙酸乙酯(522mg,1.74mmol)、吗啉(152μL,1.74mmol)和三乙胺(484μL,3.48mmol)于乙醇(15mL)中的混合物在室温搅拌18小时，然
后在乙酸乙酯和水之间分配。将水相进一步用乙酸乙酯萃取，将合并的有机萃取物干燥
(Na2SO4)并在真空中浓缩得到(R)-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙酸乙酯
(490mg,80％)。LCMS:RT＝3.57min,[M+H]+＝350/352.

[0363] 步骤3：(R)-2-氯-6-甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0364]

[0365] 在-78℃向(R)-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙酸乙酯(175mg,0.50mmol)于THF(5mL)中的溶液中添加DIBAL-H(2.0mL,2.0mmol,1M于THF中的溶液)并将所
得混合物历时30分钟温热至0℃。将反应混合物用罗谢尔盐(1M水溶液)淬灭并将水相用乙
酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩。将所得残余物溶解于THF
(10mL)中，向所得溶液中添加氢化钠(60mg,1.50mmol,60％于矿物油中的分散液)并将所得
混合物在室温搅拌18小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。将
合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到(R)-2-氯-6-甲基-4-吗啉-4-基-6,7-
二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为白色固体(157mg,定量)。LCMS:RT＝2.89min,[M+H]+＝
272/274.

[0366] 步骤4：将(R)-2-氯-6-甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧 啶(65mg,0.24mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺
(80mg,0.36mmol),Pd(OAc)2(1mg,10mol％)、(S)-phos(4.1,20mol％)和磷酸钾(106mg,
0.50mmol)于正丁醇(2.25mL)和水(0.25mL)中的混合物脱气，然后在100℃加热18小时。将
反应混合物用水稀释并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓
缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-5％甲醇/DCM)纯化得到102(23mg,29％).LCMS:
RT＝3.09min,[M+H]+＝331.1H NMR(400MHz,DMSO):δ9.15(2H,s),5.73(2H,s),4.44(1H,dd,
J＝11.44,2.17Hz),4.31-4.24(1H,m),4.08(1H,dd,J＝11.45,8.21Hz),3.89-3.73(8H,m),
1.42(3H,d,J＝6.38Hz).

[0367] 实施例103 5-(7-甲基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺103

[0368] 步骤1：(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸

[0369]

[0370] 向(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯(581mg,1.73mmol)于THF(10mL)和水(2.5mL)的溶液中添加LiOH(951μL,1.90mmol,2M水溶液)并将所得混合物在室
温搅拌2.5小时。将反应混合物用1M HCl淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥
(Na2SO4)并在真空中浓缩得到(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸，为白色固体
(515mg,97％)。1HNMR(400MHz,CDCl3):δ4.59(2H,s),3.93-3.87(4H,m),3.81-3.75(4H,m).

[0371] 步骤2：2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-N-甲氧基-N-乙基-乙酰胺

[0372]

[0373] 将(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸(722mg,2.34mmol)和CDI(493mg,3.04mmol)于DCM(5mL)中的混合物在室温搅拌1.5小时，然后添加三乙胺(457μL,
3.28mmol)和O,N-二甲基-羟基胺盐酸盐(320mg, 3.28mmol)。将所得混合物搅拌18小时，然
后用1M HCl淬灭。将水层用DCM萃取并将合并的有机萃取物用盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)
并在真空中浓缩得到2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-N-甲氧基-N-乙基-乙酰
胺，为黄色油状物(830mg,定量)。LCMS:RT＝2.83min,[M+H]+＝351/353/355.

[0374] 步骤3：1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙-2-酮

[0375]

[0376] 在-78℃向2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-N-甲氧基-N-乙基-乙酰胺(200mg,0.60mmol)于THF(4mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(1.28mL,1.79mmol,1.4M于
THF/甲苯中的溶液)并将所得混合物温热至室温并搅拌3小时。将所得混合物用1M HCl淬灭
并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用盐水萃取，然后干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得
到1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙-2-酮，为白色固体(146mg,80％)。LCMS:
RT＝2.90min,[M+H]+＝306/308/310.

[0377] 步骤4：1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙-2-醇

[0378]

[0379] 在-78℃向1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙-2-酮(146mg,0.48mmol)于THF(5mL)中的溶液中添加DIBAL-H(580μL,0.58mmol,1M于甲苯中的溶液)，将
所得混合物温热至0℃并搅拌1.5小时。将反应混合物冷却至-78℃，然后进一步添加DIBAL-
H(480μL,0.48mmol)，将混合物温热至0℃并搅拌2小时。将反应混合物用罗谢尔盐(1M水溶
液)淬灭并将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物用盐水洗涤，然后干燥(Na2SO4)
并在真空中浓缩得到1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙-2-醇(148mg,定量)。
LCMS:RT＝2.84min,[M+H]+＝308/310/312.

[0380] 步骤5：2-氯-7-甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0381]

[0382] 向1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-丙-2-醇(148mg,0.48mmol)于THF(8mL)中的溶液中添加氢化钠(58mg,1.44mmol,60％于矿物油中的分散液)并将所得混合物
在室温搅拌4小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有
机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到2-氯-7-甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二
噁烯并[2,3-d]嘧啶，为灰白色固体(139mg,定量)。LCMS:RT＝2.94min,[M+H]+＝272/274.

[0383] 步骤6：将2-氯-7-甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(99mg,0.36mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺
(97mg,0.44mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(28mg,0.04mmol)和碳酸钠(1.2mL,1.20mmol,1M水溶液)于
乙腈(1.2mL)中的混合物脱气，然后使用微波辐照在140℃加热25分钟。将反应混合物过滤，
用乙酸乙酯冲洗。分离滤液相并将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)
并在真空中浓缩。将所得的残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-4％甲醇/DCM)纯化然后用乙醚
研磨得到103，为白色固体(12mg,11％)。LCMS:RT＝3.06min,[M+H]+＝331.1H NMR(400MHz,
DMSO):δ8.90(2H,s),7.01(2H,s),4.57-4.47(1H,m),4.36(1H,dd,J＝11.41,2.34Hz),3.82
(1H,dd,J＝11.43,7.60Hz),3.77-3.61(8H,m),1.34(3H,d,J＝6.44Hz)

[0384] 实施例104 5-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺104

[0385] 步骤1：1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-2-甲基-丙-2-醇

[0386]

[0387] 在-78℃向自实施例101得到的(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯(2.45g,7.29mmol)于THF(100mL)中的溶液中添加甲基溴化镁(14.58mL,43.74mmol,3.0M
乙醚溶液)并将所得混合物在0℃搅拌2小时。 将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭并用
乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到1-(2,4-二氯-6-吗
啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-2-甲基-丙-2-醇，为琥珀色胶状物(2.18g,93％)。LCMS:RT＝
3.00min,[M+H]+＝322/324/326.

[0388] 步骤2：2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0389]

[0390] 向1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-2-甲基-丙-2-醇(2.18g,6.77mmol)于THF(150mL)中的溶液中添加氢化钠(812mg,20.31mmol,60％于矿物油中的分
散液)并将所得混合物在室温搅拌5小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液淬灭并用乙酸
乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩。将所得残余物用环己烷研磨
得到2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为白色固体
(1.35g,70％)。LCMS:RT＝3.03min,[M+H]+＝286/288.

[0391] 步骤3：5-(7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-嘧啶-2-基胺

[0392]

[0393] 将2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(285mg,1.00mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺
(440mg,1.99mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(70mg,0.10mmol)和碳酸钠(3.3mL,3.3mmol,1M水溶液)于
乙腈(7mL)中的混合物脱气，然后使用微波辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物用甲醇
和DCM稀释并吸附至硅藻土上。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-4％甲醇/DCM，然后
SiO2,梯度0-100％乙酸乙酯/环己烷)纯化得到104，为白色固体(245mg,71％)。LCMS:RT＝
3.28min,[M+H]+＝345.1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.90(2H,s),7.00(2H,s),3.97(2H,s),3.70
(8H,s),1.35(6H,s).

[0394] 实施例105 5-[4-吗啉代-7-(三氟甲基)-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基]嘧啶-2-胺105

[0395] 步骤1：2-氯-4-吗啉-4-基-7-三氟甲基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0396]

[0397] 将微波瓶填充2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(200mg,1.00mmol)和2-三氟甲基-环氧乙烷(429μL,5.01mmol)，然后密封。将反应混合物在95℃加热48小时，然后冷却并在真空中浓
缩。将所得残余物溶于IMS(5mL)中，然后用三乙胺(198μL,1.42mmol)和吗啉(83μL,
0.95mmol)处理。将橙色混合物在室温搅拌18小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过
柱色谱纯化(SiO2,梯度0-20％乙酸乙酯/环己烷)得到2-氯-4-吗啉-4-基-7-三氟甲基-6,
7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为白色固体(105mg,32％)。LCMS:RT＝3.20min,[M+H]+
＝326/328.

[0398] 步骤2：将微波瓶填充2-氯-4-吗啉-4-基-7-三氟甲基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(105mg,0.32mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-
嘧啶-2-基胺(143mg,0.64mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(23mg,0.03mmol)和碳酸钠(1.06mL,
1.06mmol,1M水溶液)于乙腈(1.6mL)中的溶液，然后将容器排空并用氩气回充(x3)。使用微
波将混合物在120℃加热30分钟。将反应混合物用H2O/DCM/甲醇稀释，然后吸附至硅藻土
上，然后通过柱色谱(SiO2,梯度0-4％甲醇/DCM，然后SiO2，梯度0-90％乙酸乙酯/环己烷)纯化随后在乙醚中研磨得到105，为白色固体(60mg,49％)。LCMS:RT＝3.52min,[M+H]+＝
385.1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.92(2H,s),7.08(2H,s),5.51-5.41(1H,m),4.53-4.41(2H,
m),3.78-3.65(8H,m)

[0399] 实施例106 5-(4-吗啉代螺[6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-7,1'-环丙烷]-2-基)嘧啶-2-胺106

[0400] 步骤1：1-(2,6-二氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基氧基)-环丙烷甲酸甲酯

[0401]

[0402] 在-78℃向2,4,6-三氯-5-甲氧基-嘧啶(213mg,1.00mmol)和1-羟基-环丙烷甲酸甲酯(139mg,1.20mmol)于THF(4mL)中的溶液中添加氢化钠(48mg,1.20mmol,60％于矿物油
中的分散液)。将所得混合物温热至室温并搅拌2小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液
淬灭并用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到1-(2,6-二
氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基氧基)-环丙烷甲酸甲酯，为白色固体(300mg,定量)。LCMS:RT＝
3.49min,[M+H]+＝341/343/345.

[0403] 步骤2：[1-(2,6-二氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基氧基)-环丙基]-甲醇

[0404]

[0405] 在-78℃向1-(2,6-二氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基氧基)-环丙烷-甲酸甲酯(293mg,1.00mmol)于DCM(8mL)中的溶液中添加DIBAL-H(4.00mL,4.00mmol,1M于THF中的溶液)，将
所得混合物温热至0℃并搅拌90分钟。将反应混合物先后用甲醇和罗谢尔盐(1M水溶液)淬
灭并将混合物用乙酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到[1-
(2,6-二氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基氧基)-环丙基]-甲醇，为油状物(220mg,83％)。LCMS:RT＝
2.86min,[M+H]+195/197/199.

[0406] 步骤3：2,4-二氯-6-(1-羟基甲基-环丙氧基)-嘧啶-5-醇

[0407]

[0408] 使用微波辐照将[1-(2,6-二氯-5-甲氧基-嘧啶-4-基氧基)-环丙基]-甲醇(800mg,3.02mmol)和氯化锂(600mg,14.15mmol)于无水DMF(3mL)中的混合物在140℃加热
10分钟，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱纯化(SiO2,梯度0-5％甲醇/DCM)得
到2,4-二氯-6-(1-羟基甲基-环丙氧 基)-嘧啶-5-醇(300mg,40％)。LCMS:RT＝2.52min,
[M-H]-＝249/251/253.

[0409] 步骤4：7-环丙基-2,4-二氯-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0410]

[0411] 向2,4-二氯-6-(1-羟基甲基-环丙氧基)-嘧啶-5-醇(135mg,0.54mmol)和三苯基膦(180mg,0.65mmol)于THF(8mL)中的溶液中添加DIAD(128μL,0.65mmol)并将混合物在室
温搅拌30分钟，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱纯化(SiO2,梯度0-25％乙酸
乙酯/环己烷)得到7-环丙基-2,4-二氯-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为白色固
体(90mg,72％).1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.30(2H,s),1.36-1.29(2H,m),1.01-0.95(2H,
m).

[0412] 步骤5：2-氯-7-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0413]

[0414] 使用微波辐照将7-环丙基-2,4-二氯-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(93mg,0.40mmol)、吗啉(150μL,1.71mmol)和三乙胺(80μL,0.57mmol)于IMS(3mL)中的混合
物在140℃加热35分钟，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱纯化(SiO2,0-20％乙
酸乙酯/环己烷)得到2-氯-7-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧
啶，为白色固体(98mg,87％)。LCMS:RT＝3.02min,[M+H]+＝284/286.

[0415] 步骤6：将2-氯-7-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(98mg,0.34mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺
(144mg,0.65mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(25mg,0.035mmol)和碳酸钠(1.0mL,1.0mmol,1M水溶液)
于乙腈(4mL)中的混合物脱气，然后使用微波辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物上样
至 SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并
在真空中浓缩。将所得残余物通过反相HPLC(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/
水，5-98％梯度的乙腈)纯化得到106，为白色固体(41mg,35％)。LCMS:RT＝3.24min,[M+H]+
＝343.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.12(2H,s),5.20(2H,宽s),4.16(2H,s),3.82(8H,s),1.29
(2H,t,J＝6.89Hz),0.88(2H, t,J＝6.88Hz).

[0416] 实施例107 5-(6-环丙基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺107

[0417] 步骤1：环丙基-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙酸甲酯

[0418]

[0419] 向2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(250mg,1.25mmol)、环丙基-羟基-乙酸甲酯(245mg,1.88mmol)和三苯基膦(493mg,1.88mmol)于THF(12mL)中的溶液中滴加DIAD(370μL,
1.88mmol)。将所得悬浮液搅拌18小时，然后添加二噁烷(10mL)，并将反应进一步搅拌6小
时。将非均相混合物在真空中浓缩并将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-30％乙酸乙
酯/环己烷)得到环丙基-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙酸甲酯，为白色固体(224mg,
32％)。LCMS:RT＝3.66min,[M+H]+＝311/313/315.

[0420] 步骤2：环丙基-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸甲酯

[0421]

[0422] 向环丙基-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙酸甲酯(224mg,0.72mmol)于IMS(4mL)中的溶液中添加三乙胺(150μL,1.08mmol)，然后添加吗啉(63μL,0.72mmol)。将黄色
溶液在室温搅拌2.5小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-20％
乙酸乙酯/环己烷)纯化得到环丙基-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸甲酯，
为无色胶状物(233mg,89％)。1H NMR(CDCl3):δ3.99(1H,d,J＝9.54Hz),4.03-3.83(4H,m),
3.80-3.75(4H,m),3.78(3H,s),1.32-1.21(1H,m),0.70-0.57(2H,m),0.52-0.45(1H,m),
0.33-0.26(1H,m).

[0423] 步骤3：2-环丙基-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇

[0424]

[0425] 在-78℃在氮气氛下向环丙基-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸甲酯(233mg,0.64mmol)于THF(6.5mL)中的溶液中滴加DIBAL-H(1.93mL,1.93mmol,1.0M于甲
苯中)。将反应混合物温热至室温并搅拌20小时，然后用罗谢尔盐(15mL,1M水溶液)淬灭。将
混合物用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取并将合并的有机相干燥(Na2SO4)，然后在真空中浓缩得到
2-环丙基-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇，为无色胶状物(215mg,定
量)。1H NMR(CDCl3):δ3.94-3.88(2H,m),3.87-3.82(4H,m),3.79-3.73(4H,m),3.48-3.41
(1H,m),1.11-0.99(1H,m),0.60-0.51(1H,m),0.51-0.42(1H,m),0.19-0.11(1H,m),0.03--
0.05(1H,m).

[0426] 步骤4：2-氯-6-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0427]

[0428] 向2-环丙基-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇(215mg,0.64mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加氢化钠(71mg,1.93mmol,65％于矿物油中的分散
液)并将反应搅拌2小时。将反应用饱和氯化铵水溶液(15mL)和水(5mL)淬灭，然后用乙酸乙
酯(3x 20mL)萃取。将合并的有机相用盐水(15mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，然后在真空中浓缩得到2-氯-6-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为白色固体
(191mg,定量)。LCMS:RT＝3.18min,[M+H]+＝298/300.

[0429] 步骤5：将微波瓶填充2-氯-6-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(191mg,0.64mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧
啶-2-基胺(283mg,1.28mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(45mg,0.06mmol)、碳酸钠(2.11mL,2.11mmol,
1M水溶液)和乙腈(2.5mL)。将该容器密封然后排空并再填充氩气(x3)，然后使用微波辐照
在120℃加热30分钟。将反应混合物过滤，然后通过柱色谱(SiO2,梯度0-4％甲醇/DCM)纯
化。将所得残余物用乙醚研磨得到107，为白色固体(21mg,9％)。LCMS:RT＝3.54min, [M+H]+
1
＝357.H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.89(2H,s),7.00(2H,s),4.53(1H,dd,J＝11.48,
2.34Hz),4.22(1H,dd,J＝11.50,7.87Hz),3.75-3.67(8H,m),3.65-3.58(1H,m),1.01-0.99
(1H,m),0.63-0.55(2H,m),0.51-0.42(2H,m).

[0430] 实施例108 5-(7-叔丁基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺108

[0431] 步骤1：3,3-二甲基-1-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-丁-2-醇

[0432]

[0433] 将2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(400mg,2.01mmol)和2-叔丁基环氧乙烷(3mL)的混合物在100℃加热3小时，然后冷却并在真空中浓缩。将所得残余物在热甲醇中研磨并除去不溶
性物质。将滤液在真空中浓缩并将所得残余物通过柱色谱(SiO2,0-15％乙酸乙酯/环己烷)
纯化得到3,3-二甲基-1-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-丁-2-醇，为白色固体(275mg,
52％).1H NMR(400MHz,CDCl3):δ4.28(1H,dd,J＝9.38,2.19Hz),4.00(1H,t,J＝9.19Hz),
3.76-3.69(1H,m),2.53(1H,d,J＝3.48Hz),0.95(9H,s).

[0434] 步骤2:1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-3,3-二甲基-丁-2-醇

[0435]

[0436] 向3,3-二甲基-1-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-丁-2-醇(275mg,1.05mmol)于IMS(3mL)中的溶液中添加三乙胺(291μL,2.09mmol)，然后添加吗啉(100μL,1.15mmol)，并
在室温搅拌2小时。将反应用饱和碳酸氢钠水溶液淬灭然后用乙酸乙酯萃取。将合并的萃取
物干燥(Na2SO4)，然后在真空中浓缩得到1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-3,3-
二甲基-丁-2-醇(255mg,77％)。LCMS:RT＝3.57min,[M+H]+＝350/352/354.

[0437] 步骤3：7-叔丁基-2-氯-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0438]

[0439] 向1-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-3,3-二甲基-丁-2-醇(255mg,0.73mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加氢化钠(87mg,2.18mmol,60％于矿物油中的分散
液)并将混合物在室温搅拌1.5小时。将反应用饱和氯化铵水溶液淬灭，然后用乙酸乙酯萃
取(x2)。将合并的有机层干燥(Na2SO4)，然后通过硅胶垫用乙酸乙酯洗脱。将相关的级份在
真空中浓缩得到7-叔丁基-2-氯-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为
白色固体(250mg,100％)。LCMS:RT＝3.64min,[M+H]+＝314/316.

[0440] 步骤4:将微波瓶填充7-叔丁基-2-氯-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.16mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-
2-基胺(70mg,0.32mmol)和双(二-叔丁基(4-二甲基氨基苯基)膦)二氯钯(II)(11mg,
0.02mmol,10mol％)，然后密封。将容器排空并回充氮气，然后添加碳酸钠(0.25mL,
0.25mmol,1M水溶液)和乙腈(0.75mL)。使用微波辐照将混合物在150℃加热30分钟，然后将
混合物过滤并将滤液在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,0-5％甲醇/DCM)纯
化，然后用环己烷/乙醚研磨得到108，为白色固体(13mg,22％)。LCMS:RT＝4.04min,[M+H]+
＝373.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.14(2H,s),5.25(2H,s),4.44(1H,dd,J＝11.08,1.92Hz),
3.99(1H,dd,J＝8.97,1.89Hz),3.91-3.69(9H,m),1.12(9H,s).

[0441] 实施例109 3-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)苯酚109

[0442] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、3-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊
烷-2-基)-苯酚(58mg,0.26mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(12mg,0.02mmol)和碳酸钠(0.5mL,
0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶液，然后排空并回充氮气，然后使用微波辐照在
120℃加热30分钟。将反应混合物上样至 SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨
的甲醇溶液洗 脱。将碱性级份合并并在真空中浓缩。将所得残余物通过乙醚研磨纯化得到
109，为白色固体(38mg,63％)。LCMS:RT＝4.13min,[M+H]+＝344.1HNMR(400MHz,CDCl3):δ
7.87-7.82(2H,m),7.26(1H,t,J＝7.6Hz),6.91(1H,dd,J＝2.4,7.6Hz),3.92(2H,s),3.90-
3.80(8H,m),1.47(6H,s).

[0443] 实施例110 2-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶110

[0444] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、2-甲氧基嘧啶-5-基硼酸(42mg,0.27mmol)、Pd
(PPh3)2Cl2(12mg,0.02mmol)和碳酸钠(0.5mL,0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶
液，然后排空并回充氮气，然后使用微波辐照在120℃加热。将反应混合物上样至
SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真空中浓
缩。将所得残余物通过乙醚研磨纯化得到得到110，为白色固体(30mg,17％)。LCMS:RT＝
4.18min,[M+H]+＝360.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.33(2H,s),4.07(3H,s),3.92(2H,s),
3.83(8H,s),1.47(6H,s)

[0445] 实施例111 5-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)吡啶-2-胺111

[0446] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊
烷-2-基)-吡啶-2-基胺(58mg,0.26mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(12mg,0.02mmol)和碳酸钠(0.5mL,
0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶液，然后排空并回充氮气，然后使用微波辐照在
120℃加热30分钟。将反应混合物上样至 SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨
的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真空中浓缩。将所得残余物通过反相HPLC
(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/水，5-98％梯度的乙腈)纯化得到111，为白色
固体(32mg,53％)。LCMS:RT＝2.73min,[M+H]+＝344.1HNMR(400MHz,CDCl3):δ9.01(1H,d,J
＝2.1Hz),8.33(1H,dd,J＝2.1,8.5Hz),6.50(1H,d,J＝8.5Hz),4.61(2H,broad s),3.89
(2H,s),3.86-3.77(8H,m),1.43(6H,s)

[0447] 实施例112N-[4-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)苯基]乙酰胺112

[0448] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、N-[4-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环
戊烷-2-基)-苯基]-乙酰胺(69mg,0.26mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(12mg,0.02mmol)和碳酸钠
(0.5mL,0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶液，然后排空并回充氮气，然后使用微波
辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物上样至 SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物
用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真空中浓缩。将所得残余物通过反相HPLC
(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/水，5-98％梯度的乙腈)纯化得到112，为白色
固体(40mg,59％)。LCMS:RT＝2.73min,[M+H]+＝344.1HNMR(400MHz,CDCl3):δ8.28(2H,d,J
＝8.8Hz),7.54(2H,d,J＝8.8Hz),7.22(1H,broad s),3.90(2H,s),3.87-3.78(8H,m),2.19
(3H,s),1.46(6H,s)

[0449] 实施例113 5-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)-N-甲基-吡啶-2-胺113

[0450] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、甲基-[5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼
杂环戊烷-2-基)-吡啶-2-基]-氨基甲酸叔丁酯(88mg,0.26mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(12mg,
0.02mmol)和碳酸钠(0.5mL,0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶液，然后排空并回充
氮气，然后使用微波辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物上样至 SCX-2柱，其用
甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真空中浓缩。将所得残余
物通过反相HPLC(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/水，5-98％梯度的乙腈)纯化
得到113，为白色固体(20mg,32％)。LCMS:RT＝2.79min,[M+H]+＝358.1H NMR(400MHz,
CDCl3):δ9.04(1H,d,J＝2.4Hz),8.35(1H,dd,J＝2.4,8.6Hz),6.39(1H,d,J＝8.6Hz),4.84
(1H,broad s),3.89(2H,s),3.85-3.76(8H,m),2.97(3H,d,J＝5.2Hz),1.45(6H,s)

[0451] 实施例114N-[3-(7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2- 基)苯基]甲磺酰胺114

[0452] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、3-(甲磺酰基氨基)苯基硼酸(57mg,0.27mmol)、
Pd(PPh3)2Cl2(12mg,0.02mmol)和碳酸钠(0.5mL,0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶
液，然后排空并回充氮气，然后使用微波辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物上样至
SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真
空中浓缩。将所得残余物通过反相HPLC纯化(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/
水，5-98％梯度的乙腈)得到114，为白色固体(11mg,15％).LCMS:RT＝4.22min,[M+H]+＝
421.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ8.19-8.12(1H,m),8.05-8.02(1H,m),7.44-7.37(2H,m),6.34
(1H,broad s),3.92(2H,s),3.88-3.79(8H,m),3.00(3H,s),1.47(6H,s)

[0453] 实施例115 2-(1H-吲哚-5-基)-7,7-二甲基-4-吗啉代-6H-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶115

[0454] 将微波瓶填充自实施例104得到的2-氯-7,7-二甲基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(50mg,0.18mmol)、5-吲哚基硼酸(42mg,0.26mmol)、Pd(PPh3)2Cl2
(12mg,0.02mmol)和碳酸钠(0.5mL,0.5mmol,1M水溶液)于乙腈(1.5mL)中的溶液，然后排空
并回充氮气，然后使用微波辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物上样至 SCX-2
柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在真空中浓缩。将所
得残余物通过反相HPLC纯化(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/水，5-98％梯度的
乙腈)得到115，为白色固体(11mg,17％).LCMS:RT＝4.37min,[M+H]+＝367.1H NMR(400MHz,
CDCl3):δ8.67(1H,s),8.28-8.20(2H,m),7.39(1H,d,J＝8.6Hz),7.23-7.19(1H,m),6.61
(1H,broad s),3.91(2H,s),3.90-3.82(8H,m),1.48(6H,s)

[0455] 实施例118 5-(7-环丙基-4-吗啉代-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶-2-基)嘧啶-2-胺118

[0456] 步骤1:(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-环丙基-乙酸甲酯

[0457]

[0458] 向环丙基-羟基-乙酸甲酯(1.00g,7.68mmol)于DCM(9mL)中的溶液中添加叔丁基二甲基甲硅烷基氯(1.27g,8.45mmol)和咪唑(628mg,9.22mmol)。将反应混合物在室温搅拌
65小时，然后用水(10mL)和1M HCl(5mL)淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3x 15mL)萃取并将合
并的有机相用1M HCl(10mL)、盐水(10mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，然后在真空中浓缩。从而得到(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-环丙基-乙酸甲酯，为琥珀色油状物(1.66g,88％)。1HNMR
(400MHz,CDCl3):δ3.81(1H,d,J＝6.33Hz),3.74(3H,s),1.23-1.13(1H,m),0.89(9H,s),
0.52-0.0.38(4H,m),0.06(3H,s),0.04(3H,s).

[0459] 步骤2:2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙醇

[0460]

[0461] 在-78℃在氮气氛下向(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-环丙基-乙酸甲酯(1.66g,6.79mmol)于DCM(27mL)中的溶液中滴加DIBAL-H(20.37mL,20.37mmol,1.0M于甲苯中)。将
反应混合物在-78℃搅拌2.5小时，然后在0℃搅拌1小时，然后用罗谢尔盐(30mL,1M水溶液)
淬灭。将混合物用乙酸乙酯(3x 30mL)萃取，然后将合并的有机相干燥(Na2SO4)并在真空中
浓缩得到2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙醇，为淡橙色油状物(764mg,
52％)。1H NMR(400MHz,CDCl3):δ3.66-3.49(2H,m),3.09(1H,ddd,J＝7.96,6.40,3.80Hz),
1.96(1H,dd,J＝7.43,5.46Hz),0.91(9H,s),0.91-0.82(1H,m),0.57-0.43(2H,m),0.34-
0.24(1H,m),0.23-0.14(1H,m),0.11(3H,s),0.07(3H,s).

[0462] 步骤3：5-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙氧基]-2,4,6-三氯-嘧啶

[0463]

[0464] 向2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(250mg,1.25mmol)、2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙醇(407mg,1.88mmol)和三苯基膦(493mg,1.88mmol)于THF(12mL)中的溶液中
添加DIAD(370μL,1.88mmol)。将反应混合物在室温搅拌18小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-30％乙酸乙酯/环己烷)纯化得到5-[2-(叔丁基-二甲基-
硅烷基氧基)-2-环丙基-乙氧基]-2,4,6-三氯-嘧啶，为粘稠黄色油状物(411mg,83％)。1H 
NMR(400MHz,CDCl3):δ4.14(1H,dd,J＝8.83,6.02Hz),3.99(1H,dd,J＝8.82,4.21Hz),
3.60-3.53(1H,m),1.13-1.03(1H,m),0.89(9H,s),0.56-0.50(2H,m),0.46-0.28(2H,m),
0.10(3H,s),0.07(3H,s).

[0465] 步骤4：4-{5-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙氧基]-2,6-二氯-嘧啶-4-基}-吗啉

[0466]

[0467] 向5-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙氧基]-2,4,6-三氯-嘧啶(411mg,1.03mmol)于IMS(5mL)中的溶液中添加三乙胺(215μL,1.55mmol)，然后添加吗啉
(94μL,1.08mmol)。将反应混合物在室温搅拌4小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-20％乙酸乙酯/环己烷)纯化得到4-{5-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧
基)-2-环丙基-乙氧基]-2,6-二氯-嘧啶-4-基}-吗啉，为无色胶状物(387mg,84％)。LCMS:
RT＝5.22min,[M+H]+＝448/450/452.

[0468] 步骤5：1-环丙基-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇

[0469]

[0470] 向4-{5-[2-(叔丁基-二甲基-硅烷基氧基)-2-环丙基-乙氧基]-2,6-二氯-嘧啶-4-基}-吗啉(386mg,0.86mmol)于THF(10mL)中的溶液中滴加TBAF(947μL,0.95mmol,1.0M于
THF中的溶液)。将反应混合物在室温搅拌3小时，然后将反应用饱和氯化铵水溶液(20mL)淬
灭。将混合物用乙酸乙酯(3x 20mL)萃取，然后将合并的有机相用盐水(10mL)洗涤，干燥
(Na2SO4)并在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度-50％乙酸乙酯)纯化得到
1-环丙基-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇，为无色胶状物(196mg,
68％)。LCMS:RT＝3.04min,[M+H]+＝334/336.

[0471] 步骤6：2-氯-7-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶

[0472]

[0473] 向1-环丙基-2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙醇(196mg,0.59mmol)于THF(10mL)中的溶液中添加氢化钠(65mg,1.77mmol,65％于矿物油中的分散
液)并将反应混合物在室温搅拌4小时。将反应用饱和氯化铵水溶液(15mL)淬灭，然后用乙
酸乙酯(3x 20mL)萃取。将合并的有机相干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到2-氯-7-环丙基-
4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶，为白色固体(205mg,定量)。LCMS:RT
＝3.19min,[M+H]+＝298/300.

[0474] 步骤7:将微波瓶填充2-氯-7-环丙基-4-吗啉-4-基-6,7-二氢-[1,4]二噁烯并[2,3-d]嘧啶(205mg,0.49mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧
啶-2-基胺(324mg,1.47mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(51mg,0.07mmol),碳酸钠(2.41mL,2.41mmol,
1M水溶液)和乙腈(2.5mL)。将容器密封，然后排空并回充氩气(x3)，然后使用微波辐照在
120℃加热30分钟。将反应混合物过滤并将滤液在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱
(SiO2,梯度0-4％甲醇/DCM)纯化，然后在乙醚/戊烷中研磨。将所得残余物通过反相HPLC纯
化(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/水，10-98％梯度的甲醇)得到118，为灰白色
固体(4.5mg,3％)。LCMS:RT＝3.52min,[M+H]+＝357.1H NMR(400MHz,DMSO-d6):δ8.91(2H,
s),7.01(2H,s),4.40(1H,dd,J＝11.38,2.41Hz),4.01(1H,dd,J＝11.41,7.52Hz),3.80-
3.60(9H,m),1.11-0.98(1H,m),0.69-0.41(4H,m).

[0475] 实施例119 5-(8-甲基-4-吗啉代-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪-2-基)嘧啶-2-胺119

[0476] 步骤1:甲基-[2-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯

[0477]

[0478] 将2,4,6-三氯-嘧啶-5-醇(300mg,1.50mmol)、(2-羟基-乙基)-甲基-氨基甲酸叔丁酯(300mg,1.71mmol)、三苯基膦(455mg,1.73mmol)and DIAD(339μL,1.73mmol)于二噁烷
(2.5mL)中的混合物在室温搅拌1.5小时，然后在真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱
(SiO2,梯度0-50％乙酸乙酯/环己烷)纯化得到甲基-[2-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙
基]-氨基甲酸叔丁酯(666mg,定量).LCMS:RT＝3.09min,[M-Boc+Na]+＝279.

[0479] 步骤2:[2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙基]-甲基-氨基甲酸叔丁酯

[0480]

[0481] 将甲基-[2-(2,4,6-三氯-嘧啶-5-基氧基)-乙基]-氨基甲酸叔丁酯(1.50mmol)、吗啉(130μL,1.50mmol)和三乙胺(417μL,3.00mmol)于乙醇(5mL)中的混合物在室温搅拌1
小时，然后在乙酸乙酯和水之间分配。将水相进一步用乙酸乙酯萃取，将合并的有机萃取物
干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩得到[2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙基]-甲
基-氨基甲酸叔丁酯(定量)。LCMS:RT＝3.89min,[M-CH2CH2NMeBoc+H]+＝250/252/254.

[0482] 步骤3:2-氯-8-甲基-4-吗啉-4-基-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪

[0483]

[0484] 将[2-(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙基]-甲基-氨基甲酸叔丁酯(1.50mmol)和4M HCl于甲醇(10mL)中的混合物在室温搅拌1.5小时，然后在真空中浓缩并
与乙醇共沸。将所得残余物溶于甲醇(10mL)，然后用三乙胺(3.0mL)处理，并将混合物在室
温搅拌30分钟，然后在真空中浓缩。 将所得残余物通过柱色谱纯化(SiO2,梯度0-50％乙酸
乙酯/环己烷)得到2-氯-8-甲基-4-吗啉-4-基-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪
(368mg,91％over3步骤s).LCMS:RT＝2.94min,[M+H]+＝271/273.

[0485] 步骤4:将2-氯-8-甲基-4-吗啉-4-基-7,8-二氢-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪(120mg,0.44mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶-2-基胺
(196mg,0.88mmol)、PdCl2dppf.DCM(36mg,0.04mmol)和碳酸铯(573mg,1.76mmol)于二噁烷
(5mL)和水(0.5mL)中的混合物脱气并在100℃加热18小时。将反应混合物用水稀释并用乙
酸乙酯萃取。将合并的有机萃取物干燥(Na2SO4)并在真空中浓缩。将所得的残余物上样至
SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在
真空中浓缩。将所得残余物通过柱色谱(SiO2,梯度0-5％甲醇/DCM)纯化然后用乙醚研磨得
到119(357mg,24％)。LCMS:RT＝3.04min,[M+H]+＝330.1H NMR(400MHz,DMSO):δ8.94(2H,
s),6.92(2H,s),4.16(2H,t,J＝4.37Hz),3.67(4H,t,J＝4.57Hz),3.52(4H,t,J＝4.56Hz),
3.48(2H,t,J＝4.36Hz),3.13(3H,s).

[0486] 实施例120 2-(2-氨基嘧啶-5-基)-8-甲基-4-吗啉代-6H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪-7(8H)-酮120

[0487] 步骤1:2-氯-8-甲基-4-吗啉-4-基-8H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪-7-酮

[0488]

[0489] 使用微波辐照将(2,4-二氯-6-吗啉-4-基-嘧啶-5-基氧基)-乙酸乙酯(501mg,1.49mmol)、甲基胺(1.0mL,2.0mmol,2M于THF中)和三乙胺(250μL,1.79mmol)于IMS(10mL)
中的混合物在140℃加热35分钟。将反应混合物在真空中浓缩并将所得残余物通过柱色谱
(SiO2,0-20％乙酸乙酯/环己烷)纯化得到2-氯-8-甲基-4-吗啉-4-基-8H-嘧啶并[5,4-b]
[1,4]噁嗪-7-酮(159mg,38％)。LCMS:RT＝2.93min,[M+H]+＝285/287.

[0490] 步骤2:将2-氯-8-甲基-4-吗啉-4-基-8H-嘧啶并[5,4-b][1,4]噁嗪-7-酮(100mg,0.35mmol)、5-(4,4,5,5-四甲基-[1,3,2]二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-嘧啶 -2-基胺(116mg,
0.53mmol)、Pd(PPh3)2Cl2(25mg,0.035mmol)和碳酸钠(1.0mL,1.0mmol,1M水溶液)于乙腈
(4mL)中的混合物脱气，然后使用微波辐照在120℃加热30分钟。将反应混合物上样至
SCX-2柱，其用甲醇洗涤并将产物用2M氨的甲醇溶液洗脱。将碱性级份合并并在
真空中浓缩。将所得残余物通过反相HPLC纯化(Phenomenex Gemini 5μm C18,0.1％HCO2H/
水，5-98％梯度的乙腈)得到120，为白色固体(86mg,71％).LCMS:RT＝3.04min,[M+H]+＝
344.1H NMR(400MHz,CDCl3):δ9.14(2H,s),5.25(2H,broad s),4.62(2H,s),3.81(8H,s),
3.49(3H,s).

[0491] 实施例901p110αPI3K结合测定

[0492] 结合测定：初始偏振实验用Analyst HT (Molecular Devices Corp,Sunnyvale,CA.)进行。用于荧光偏振亲和力测量的试样如下制备：将1:3连续稀释的p110α
PI3K(Upstate Cell Signaling Solutions,Charlottesville,VA)(由20μg/毫升在偏振缓
冲液(10mM Tris pH 7.5、50mM NaCl、4mM MgCl2、0.05％Chaps和1mM DTT)中的最终浓度开
始)加到最终浓度为10mM的PIP2(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)中。在室温孵育30分
钟后，反应通过加入GRP-1和PIP3-TAMRA探针(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)(最终
浓度分别为100nM和5nM)来停止。在384孔黑色低容量 (PerkinElmer,
Wellesley,MA.)中用标准截止滤波器对罗丹明荧光团进行读取(λex＝530nm；λem＝590nm)。
将荧光偏振值绘制为蛋白质浓度的函数且EC50值如下得到：使用 软件
(Synergy software,Reading,PA)将数据拟合成四参数方程。该实验还确定了适用于以下
抑制剂竞争实验的蛋白质浓度。

[0493] 抑制剂IC50值如下确定：将0.04毫克/毫升p110αPI3K(最终浓度)与PIP2(10mM最终浓度)一起加到以下孔中，所述孔含有在最终浓度为25mM的ATP(Cell Signaling 
Technology,Inc.,Danvers,MA)/偏振缓冲液中1:3连续稀释的拮抗剂。在室温孵育30分钟
后，反应通过加入GRP-1和PIP3-TAMRA探针(Echelon-Inc.,Salt Lake City,UT.)(最终浓
度分别为100nM和5nM)来停止。在384孔黑色低容量 (PerkinElmer,
Wellesley,MA.)中用标准截止滤波器对罗丹明荧光团进行读取(λex＝530nm；λem＝590nm)。
将荧光偏振值绘制为拮抗剂浓度的函数且IC50值如下得到：用Assay Explorer软件 (MDL,
San Ramon,CA.)将数据拟合成四参数方程。

[0494] 可选择地，对PI3K的抑制在放射性测定中使用浓度为1μM的纯化重组酶和ATP来确定。将式I化合物在100％DMSO中连续稀释。将激酶反应混合物在室温孵育1h且反应通过加
入PBS来停止。然后IC50值使用S形剂量响应曲线拟合(可变斜率)来确定。

[0495] 实施例902体外细胞增殖测定

[0496] 式I化合物的效力通过细胞增殖测定使用以下方案来测量(Promega Corp.Technical Bulletin TB288；Mendoza等人(2002)Cancer Res.62:5485-5488)：

[0497] 1.将100μl细胞培养物等分液(在培养基中含有约104个细胞(PC3(前列腺癌)、Detroit562(咽癌)或MDAMB361.1(乳腺癌))置于384孔壁不透明的板的每个孔中。

[0498] 2.制备含有培养基但不含有细胞的对照孔。

[0499] 3.将化合物加到实验孔中且孵育3-5天。

[0500] 4.将板平衡至室温且保持约30分钟。

[0501] 5.加入体积与存在于每个孔中的细胞培养基的体积相同的CellTiter- 试剂。

[0502] 6.内含物用定轨振荡器混合2分钟以使细胞溶解。

[0503] 7.将板在室温孵育10分钟以使发光信号稳定。

[0504] 8.记录发光信号且以图表形式报道为RLU＝相对发光单位。

[0505] 可选择地，将细胞以最佳密度接种在96孔板中且在测试化合物存在下孵育4天。然后将Alamar BlueTM加到测定培养基中且将细胞孵育6h，然后在激发波长为544nm且发射波
长为590nm的情况下进行读取。EC50值使用S形剂量响应曲线拟合来计算。术语EC50是指半数
最大有效浓度且为以下浓度，所述浓度的药物在一定暴露时间后所引起的响应为基线响应
和最大响应之间的中点。其通常用于测量药物的效力。

[0506] 式I示例性化合物对多种肿瘤细胞系的抗增殖作用通过CellTiter- 测定来测量，包括以下：

[0507]

[0508]

[0509] 实施例903Caco-2透过性

[0510] 将Caco-2细胞以1×105个细胞/cm2接种到Millipore 板上且孵育20天。然后对化合物的透过性进行评价。将化合物涂覆于细胞单层的顶侧表面(A)且对透过到
底侧(B)隔室中的化合物进行测量。将其反向进行(B-A)以研究主动转运。计算每种化合物
的透过性系数值Papp即对化合物穿过膜的透过率的度量。通过与人类吸收已被确定的对照
化合物进行比较，将化合物分为低吸收潜力组(Papp(Papp>/＝1.0×106cm/s)。

[0511] 为了评价化合物发生主动流出的能力，确定由底侧(B)向顶侧(A)的转运 与由A向B的转运的比例。B-A/A-B的值>/＝1.0表明主动细胞流出的发生。

[0512] 实施例904肝细胞清除率

[0513] 使用冷藏的人肝细胞的混悬液。以1mM或3μM的化合物浓度和0.5×106个活细胞/毫升的细胞密度进行孵育。DMSO在孵育中的最终浓度为约0.25％。还在不存在细胞的情况
下进行对照孵育以显示任何非酶降解。在0、5、10、20、40和60分钟(对照试样仅在60分钟)从孵育混合物中一式两份地取出试样(50μL)且加到含有内标的MeOH(100μL)中以使反应停
止。甲苯磺丁脲(tolbutamide)、7-羟基香豆素(7-羟基coumarin)和睾酮(testosterone)可
用作对照化合物。对试样进行离心且将在每个时间点收集的上清液用于通过LC-MSMS来分
析。通过相对于时间绘制峰面积比(母体化合物峰面积/内标峰面积)的自然对数，固有清除
率(CLint)如下计算：CLint(μl/min/百万个细胞)＝V×k，其中k为消除速率常数，得自相对于时间绘制的浓度的自然对数的梯度；V为由孵育体积得到的体积项且表示为μL·106个细
胞-1。

[0514] 实施例905细胞色素P450抑制

[0515] 可针对CYP450靶标(1A2、2C9、2C19、2D6、3A4)以约10种浓度(最大浓度为约100μM)一式两份地对式I化合物进行筛选。标准抑制剂(呋拉茶碱(furafylline)、磺胺苯吡唑(sulfaphenazole)、反苯环丙胺(tranylcypromine)、奎尼丁(quinidine)、酮康唑
(ketoconazole))可用作对照。板可使用BMG LabTechnologies PolarStarTM以荧光模式来
读取。

[0516] 实施例906细胞色素P450诱导

[0517] 可将来自单一供体的新鲜分离的人肝细胞孵育约48h，然后以三种浓度加入式I化合物且孵育72h。在孵育结束前30分钟和1h，加入针对CYP3A4和CYP1A2的探针底物。在72h，
取出细胞和培养基且每种探针底物的代谢程度通过LC-MS/MS来定量。实验通过使用相应
P450的诱导剂(以一种浓度一式三份地孵育)来对照。

[0518] 实施例907血浆蛋白结合

[0519] 在缓冲液和10％血浆(v/v,在缓冲液中)中制备式I化合物的溶液(5μM,DMSO的最终浓度为0.5％)。组装96孔HT透析板以使每个孔被纤维素半透膜一分为二。将缓冲液溶液
加到膜的一侧且将血浆溶液加到另一侧；然后在37℃一式三份地孵育2h。然后将细胞排空
且将每批化合物的溶液合并成两组(不含有血浆的和含有血浆的)，然后通过LC-MSMS使用
针对不含有血浆 的溶液(6个点)和针对含有血浆的溶液(7个点)的两组校正标准品来分
析。计算化合物的未结合分数值。

[0520] 实施例908hERG通道阻断

[0521] 式I化合物调节铷从稳定表达hERG钾通道的HEK-294细胞中流出的能力使用已建立的流出方法学来评价。在含有RbCl的培养基中制备细胞，铺板到96孔板中且使其生长过
夜以形成单层。流出实验如下开始：在室温吸出培养基且每个孔用3×100μL预孵育缓冲液
+
(含有低[K ])洗涤。末次吸出后，将50μL化合物工作储备液(2×)加到每个孔中且在室温孵
育10分钟。然后将50μL刺激缓冲液(含有高[K+])加到每个孔中，得到最终测试化合物浓度。
然后将细胞板在室温再孵育10分钟。然后将80μL上清液从每个孔中转移到96孔板的相应孔
中且通过原子发射光谱法来分析。以10点一式两份IC50曲线(n＝2,最大浓度为100μM)对化
合物进行筛选。

[0522] 实施例909体内肿瘤异种移植物

[0523] NCR裸小鼠(Taconic Farms，IN)在右胁肋中用在HBSS/基质胶(1:1，v/v)中的5百万U-87MG Merchant(衍生自U-87MG细胞的内部变异体，得自ATCC，Manassas，VA)细胞皮下
接种。在分到具有相似尺寸肿瘤的不同剂量组后，将带有肿瘤异种移植物的小鼠通过强饲
法用药物或者媒介物每日口服给药<28天。在整个研究过程中，肿瘤尺寸每周至少记录两
次。小鼠体重也每周至少记录两次，并每日观察小鼠。肿瘤体积使用Ultra Cal-IV测径器
(型号54-10-111；Fred V.Fowler Co.,Inc.；Newton,MA)以两个垂直维度(长度和宽度)测
量，并使用Excel v.11.2(Microsoft Corporation；Redmond，WA)分析。肿瘤抑制图使用
GraphPad PrismTM，Version 5.0c(GraphPad Software，Inc.；La Jolla，CA)绘制。肿瘤体积
3 2
用以下公式计算：肿瘤尺寸(mm )＝(较长测量值×较短测量值 )x 0.5

[0524] 动物体重使用Adventurer ProTMAV812天平(Ohaus Corporation；PineBrook，NJ)测量。图使用GraphPad PrismTM，Version 5.0c生成。百分比重量变化使用下式计算：个体百分比重量变化＝((新重量/初始重量)-1)x 100。

[0525] 将肿瘤体积超过2000mm3或者体重减轻超过起始重量20％的小鼠根据管理指南实施安乐死。

[0526] 在研究结束(EOS)时的百分比肿瘤生长抑制(％TGI)使用下式计算：

[0527] ％TGI＝(1-[(AUC/日)治疗÷(AUC/日)对照])X 100，其中AUC/日是自然比例 的拟合的肿瘤生长曲线下的面积除以研究的天数。对每个剂量组，将Log2(肿瘤体积)生长轨迹针
对每个组中的固定的时间和剂量效应用受限三次样条(cubic splines)拟合。拟合通过线
性混合效应模型进行，使用在R版本2.12.0(R Development Core Team 2008；R 
Foundation for Statistical Computing；Vienna，Austria)中的R软件包‘nlme’，版本
3.1-97(11)。

[0528] 将部分应答(PR)定义为在任何研究日不会变成完全应答(CR)的>50％的起始肿瘤体积减少。将CR定义为在任何研究日的100％的起始肿瘤体积减少。研究肿瘤发病率(STI)
反映在最后肿瘤体积测量时具有可测量肿瘤的组中动物数目。

[0529] 也使用线性混合效应分析将随时间推移和应答于剂量的体重的百分比变化模型化。

[0530] 实施例910磷酸AKT诱导测定

[0531] 将细胞以5×105个细胞/孔接种在6孔组织培养板中过夜。细胞用浓度为EC80的式I化合物处理。处理后，细胞用冷的PBS洗涤一次且在1×细胞提取缓冲液(Biosource,
Carlsbad,CA)中裂解，所述缓冲液补充有蛋白酶抑制剂(Roche,Mannheim,Germany)、1mM 
PMSF和磷酸酶抑制剂混合物1和2(Sigma,St.Louis,MO)。蛋白质浓度使用Pierce BCA蛋白
质测定试剂盒(Rockford,IL)来确定。pAkt(Ser473)水平和总Akt水平使用珠粒试剂盒
(Biosource,Carlsbad,CA)和Luminex Bio-Plex系统(Bio-Rad,Hercules,CA)来评价。

[0532] 实施例911血脑屏障活性/透过测定MDCKI-MDR1和MDCKII-Bcrp1测定

[0533] 使用异源性地表达人Pgp或者小鼠Bcrp1的Madin-Darby犬肾(MDCK)细胞测定是否化合物是这些转运蛋白的底物，并因此评价血脑屏障透过的可能性。MDR1-MDCKI细胞由NCI
(National Cancer Institute，Bethesda，MD)许可，而Bcrp1-MDCKII细胞得自Netherlands Cancer Institutes(Amsterdam，The Netherlands)。在使用之前4天，将细胞以1.3x105细
胞/mL的接种密度接种在24孔微孔滤板(聚酯膜，1μM孔径；Millipore；Billerica，MA)上。化合物在顶端至基侧(A-B)和基侧至顶端(B-A)的方向上以5μM测试。将化合物溶解在转运缓
冲液中，所述转运缓冲液由具有10mM HEPES(Invitrogen Corporation，Grand Island，NY)
的Hank平衡盐溶液(HBSS)组成。使用萤光 黄(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)作为细胞旁路
标志物。在2小时孵育后，在A-B和B-A方向上的表观透过性(Papp)使用以下方程计算：

[0534] P表观＝(dQ/dt)x 1/C0x 1/A

[0535] 其中dQ/dt是在接收室中的化合物表观速率，C0是在供给室中的浓度以及A是插入物的表面积。使用定义为P表观(B-A)/P表观(A-B)的流出比率评价使用测试的转运蛋白(P-糖蛋白或者bcrp1)的化合物的主动流出程度。化合物通过LC-MS/MS分析。

[0536] 测量式I示例性化合物在大鼠中的脑蛋白质结合，包括以下：

[0537]

[0538] 实施例912测定脑中的化合物浓度

[0539] 将脑在给药后的1和6小时在每个时间点从3个不同的动物收集，用冰冷盐水洗涤，称重并在-80℃贮存，直到分析。对于化合物定量，将小鼠脑在3体积水中匀化。将匀化物通
过蛋白质沉淀用含有内标的乙腈提取。进行LC-MS/MS分析。将脑匀化物浓度转化成脑浓度
以计算脑-对-血浆比率。

[0540] 实施例913在脑中PI3K途径的调节的测量

[0541] 为分析PI3K途径调节，将含有10mM Tris pH 7.4、100mM NaCl、1mM EDTA、1mM EGTA、1mM NaF、20mM Na4P2O7、2mM Na3VO4、1％Triton X-100、10％甘油、0.1％SDS和0.5％脱氧胆酸盐的细胞提取缓冲液(Invitrogen，Camarillo，CA)补充有磷酸酶、蛋白酶抑制剂
(Sigma，St.Louis，MO)和1mM PMSF，并添加至冰冻的脑活检物。将在给药后1和6小时收集的脑用小杵(Konte Glass Company，Vineland，NJ)匀化，简单地在冰上超声处理，并在4℃以
20,000g离心20分钟。蛋白质浓度使用BCA蛋白质测 定(Pierce、Rockford，IL)测定。将蛋白质通过电泳分离并转移至NuPage硝酸纤维素膜(Invitrogen，Camarillo，CA)。使用Licor 
OdysseyTM红外检测系统(Licor，Lincoln，NE)评价并量化蛋白质表达。PI3K途径标志物通过免疫印迹法使用针对pAktser473和总Akt的抗体(Invitrogen，Camarillo，CA和Cell 
Signaling，Danvers，MA)评价。

[0542] 实施例914脑肿瘤体内效力测定

[0543] 将CD-1裸小鼠(Charles River Laboratories，Hollister，CA)在立体定向手术下使用在HBSS中的内部工程化以表达萤光素酶的GS-2(多形性人胶质母细胞瘤)细胞颅内接
种。在细胞接种后的四周时，将具有通过磁共振成像(MRI)证实的脑异种移植物的小鼠在分
成具有相似尺寸肿瘤的组后通过强饲法用药物或者媒介物每日一次口服给药28天。在28天
给药期结束时重复MRI(4.7T，Varian，Inc.，Palo Alto，CA)，以评价治疗应答。

[0544] 小鼠体重每周至少记录两次，并每日观察小鼠。动物体重使用Adventurer TM
Pro AV812天平(Ohaus Corporation；Pine Brook，NJ)测量。图使用GraphPad Prism，
Version 5.0c生成。百分比重量变化使用下式计算：个体百分比重量变化＝((新重量/初始
重量)-1)x 100。体重减轻超过起始重量20％的小鼠根据管理指南实施安乐死。

[0545] 历经每个动物成像的两个时间，将肿瘤体积变化模型化为线性。针对这些数据，将线性混合效应模型使用在R版本2.12.0(R Development Core Team2010；R Foundation 
for Statistical Computing；Vienna，Austria)中的R软件包‘nlme’，版本3.1-97拟合。混合效应模型考虑随时间推移在各个小鼠上的重复测量，并适当地处理小鼠内相互关系。也
使用线性混合效应分析将随时间推移体重百分比变化模型化。

[0546] 在最终治疗给药后的2和8小时收集血浆和脑样品，用于药代动力学(PK)、药效(PD)和/或免疫组织化学(IHC)分析。

[0547] 实施例915体内肿瘤异种移植物PK/PD研究

[0548] 将NCR裸小鼠(Taconic Farms，IN)在右胁肋中使用在HBSS/基质胶TM，BD Biosciences(1:1，v/v)中的5百万U-87MG Merchant(衍生自U-87MG细胞的内部变异体，得
自ATCC，Manassas，VA)细胞皮下接种。将带有>600mm3的肿瘤异种移植物的小鼠在分至具有
相似尺寸肿瘤的组中后用药物或者媒介物给药一次。在治疗给药后的1、4、12和24小时收集
血浆、皮下肿瘤异 种移植物、骨骼肌和脑样品，用于PK、PD和/或IHC分析。

[0549] 当词语“包含”和“包括”在本说明书和所附权利要求书中使用时，它们意在具体说明所描述的特征、整数、组分或步骤的存在，但不排除一种或多种其它特征、整数、组分、步骤或其组合的存在或加入。

[0550] 尽管出于澄清理解的目的已经通过解释和示例的方式详细地描述了前述发明，但是这些说明和实例不应当理解为对本发明范围的限制。所有本文中引用的专利和科学文献
的公开都全文结合在此作为参考。