用于治疗与升高的诱导型一氧化氮合酶相关联的疾病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物

摘要

本发明的多个方面提供了用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病，包括自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病、神经变性疾病或者心血管疾病。具体地说，本发明的多个方面涉及包含半乳糖‑鼠李糖半乳糖醛酸酯的治疗性制剂用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病的用途，所述疾病包括自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病、神经变性疾病或者心血管疾病。

权利要求

1.半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物在制备用于治疗神经变性疾病、银屑病、皮肤和系统性红斑狼疮、系统性硬化和皮炎的药物组合物中的用途，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)残基和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基的低聚物的主要分支。

2.半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物在制备用于治疗神经变性疾病、银屑病、皮肤和系统性红斑狼疮、系统性硬化和皮炎的药物组合物中的用途，其中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是包括1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)残基和半乳糖醛酸甲酯(MeGalA)残基主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链与α-1,2连接的鼠李糖残基和α-1,4-连接的GalA残基交替低聚物的支化杂聚物连接，所述鼠李糖残基携带1,4-β-D-半乳糖残基、

1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合的低聚物的主要分支。

3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基以2:1到3:1的比率存在。

4.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基、所述1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合占总摩尔糖的至少10摩尔百分数。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa的平均分子量。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至80kDa的平均分子量。

7.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从20kDa至70kDa的平均分子量。

8.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至65kDa的平均分子量。

9.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从45kDa至65kDa的平均分子量。

10.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至20kDa的平均分子量。

11.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于，所述药物组合物进一步包括治疗剂，所述治疗剂是以下之一：半胱胺或其药学上可接受的盐、胱胺或其药学上可接受的盐、抗氧化化合物、卵磷脂、复合维生素B、胆盐配制品、大麻素-1(CB1)受体的拮抗剂、大麻素-1(CB1)受体的反向激动剂、过氧化物酶体增殖物激活受体的活性调节物、苯并硫氮杂 类或苯并硫杂 类化合物、抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反义构建体、杂原子连接的取代哌啶、具有脂连素的促分泌素活性或诱导物活性的酰胺类化合物、季铵类化合物、醋酸格拉默、正五聚蛋白、HMG-CoA还原酶抑制剂、N-乙酰半胱氨酸、异黄酮类化合物、大环内酯类抗生素、半乳糖凝集素抑制剂、抗体或前述的任意组合。

12.根据权利要求2所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基以2:1到3:1的比率存在。

13.根据权利要求2或12所述的用途，其特征在于，所述1,4-β-D-半乳糖残基、所述1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合占总摩尔糖的至少10摩尔百分数。

14.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa的平均分子量。

15.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至80kDa的平均分子量。

16.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从20kDa至70kDa的平均分子量。

17.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至65kDa的平均分子量。

18.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从45kDa至65kDa的平均分子量。

19.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从2kDa至20kDa的平均分子量。

20.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，当在测定中利用所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物处理用内毒素应激的单核细胞或者巨噬细胞时，测定导致来自激活的单核细胞或者巨噬细胞的TNF-α细胞因子减少至少25％。

21.根据权利要求1、2或12所述的用途，其特征在于，当在细胞生存力测定中利用所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物处理LX2永生化人肝星状细胞时，所述测定处理在施用所述化合物后实质上不导致激活的肝星状细胞的生存力降低。

22.根据权利要求1-4中任一项所述的用途，其特征在于，向需要该组合物的受试者施用导致以下至少一种情况的有效量的所述组合物：将iNOS在受疾病影响的组织中的表达减少至少10％；

其中所述受试者患有神经变性疾病、银屑病、皮肤和系统性红斑狼疮、系统性硬化或皮炎。

23.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述抗氧化化合物包括水溶性维生素E配制品、混合的类胡萝卜素、硒或它们的组合。

24.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述胆盐配制品包括熊脱氧胆酸、天然存在的胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸、合成性胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸或它们的组合。

25.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述正五聚蛋白是重组正五聚蛋白-2。

26.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述HMG-CoA还原酶抑制剂包括阿托伐他汀、辛伐他汀或它们的组合。

27.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述半乳糖凝集素抑制剂包括半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽、蛋白质抑制剂或它们的组合。

28.根据权利要求11所述的用途，其特征在于，所述抗体是抗赖氨酰氧化酶的抗体或抗结缔组织生长因子的抗体。

说明书

用于治疗与升高的诱导型一氧化氮合酶相关联的疾病的半乳

糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物

[0001] 相关申请的交叉引用

[0002] 本申请要求2012年6月6日提交的美国临时申请系列号61/656,288的权益和优先权，该文献的全部公开内容通过引用的方式完整地并入本文。

技术领域

[0003] 本发明的多个方面涉及用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病，包括自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病、神经变性疾病或者心血管疾病。

背景技术

[0004] 一氧化氮合酶(NOSs)是催化从L-精氨酸产生一氧化氮(NO)的酶家族。NO是一种重要的细胞信号分子。尽管一氧化氮具有正常的生理性细胞内和细胞外调节功能，但是一氧化氮产生过多在一些情况下可能是不利的。

发明内容

[0005] 本发明的多个方面涉及使用用于肠胃外或肠内施用的治疗性组合物治疗患有与升高的iNOS活性相关联的疾病的受试者的方法，所述治疗性组合物包含在可接受药用载体中的含有半乳糖的多糖化合物。

[0006] 在一些实施方案中，含有半乳糖的多糖化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。

[0007] 在一些方面，本发明涉及用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病的含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物的组合物。本发明的其他方面涉及用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物的用途。

[0008] 本发明的一些方面涉及一种含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物。在一些实施方案中，含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物可以用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病或用于制备治疗这种疾病的药物组合物。

[0009] 本发明的多个方面涉及半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯在制备用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病的药物组合物中的用途，所述疾病包括自身免疫性疾病、慢性炎症性疾病、神经变性疾病或者心血管疾病。

[0010] 在一些实施方案中，所述方法包括以下步骤：获得用于肠胃外或肠内施用的组合物，所述组合物包含在可接受药用载体中的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物，以及向受试者施用有效量的用于肠胃外施用的组合物，所述受试者患有与升高的iNOS水平相关联的一种疾病。

[0011] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受试者中施用时，所述有效量的组合物可以导致在与升高的iNOS相关联的疾病影响的组织中升高的iNOS表达减少至少10％。

[0012] 在一些实施方案中，当在需要该组合物的受试者中施用时，所述有效量的组合物可以导致与升高的iNOS相关联的疾病的医学后果减少。

[0013] 在一些实施方案中，所述化合物是多糖并且可以在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯是具有主链的选择性解聚的支化杂聚物，所述主链主要包含1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，其转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)的侧链连接。

[0014] 在一些实施方案中，所述化合物是具有主链的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述主链主要包含1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，其转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)残基和1,5-α-L-阿拉伯糖(Ara)残基的侧链连接。

[0015] 在一些实施方案中，半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯含有其他侧链次要组分，包括木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和岩藻糖(Fuc)或者前述的任何组合。

[0016] 在一些实施方案中，所述半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包含以2:1到3:1的比率存在的1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基。在一些实施方案中，所述半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯包含占总摩尔糖的至少10摩尔百分数的1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合。

[0017] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯具有范围从5kDa至55kDa、从2至20kDa、从2至65KDa、从2kDa至80kDa、从45kDa至65KDa、或者从20kDa至70kDa的平均分子量。

[0018] 在一些实施方案中，当被用于处理产生半乳糖凝集素-3的应激的LX2永生化人肝星状细胞时，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物或者所述混合物能够减少半乳糖凝集素-3在细胞表面的表达或者大幅度地减少半乳糖凝集素-3在介质中的分泌。

[0019] 在一些实施方案中，当被用于处理LX2永生化人肝星状细胞时，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物不会引起生存力降低。在一些实施方案中，当在细胞生存力测定中被用于处理LX2永生化人肝星状细胞时，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物基本上不降低激活的肝星状细胞的生存力。

[0020] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物能够将TNF-α细胞因子从内毒素应激的单核细胞或者巨噬细胞中的分泌减少例如至少25％。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物或者混合物不抑制癌细胞凋亡模型或者细胞毒性模型中的癌细胞增殖，并且其中所述化合物对单核细胞/巨噬细胞或者激活的单核细胞/巨噬细胞没有细胞毒性。

[0021] 在一些实施方案中，所述化合物不抑制癌细胞中的癌细胞增殖，并且其在浓度高达500μg/mL时对单核细胞或者激活的单核细胞或者巨噬细胞没有细胞毒性。

[0022] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的治疗剂联合使用。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以用于混合物中。

[0023] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的半胱胺或其药学上可接受的盐，或胱胺或其药学上可接受的盐联合使用。

[0024] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽、水飞蓟素、硫辛酸和d-α-生育酚的组合物。

[0025] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含水溶性维生素E配制品、混合的类胡萝卜素或硒的组合物。

[0026] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的肠胃外或口服施用的卵磷脂或复合维生素B联合使用。

[0027] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的胆盐配制品联合使用，所述胆盐配制品包括但不限于熊脱氧胆酸、其他天然存在或合成性胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸。

[0028] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的大麻素-1(CB1)受体的拮抗剂和/或反向激动剂联合使用。

[0029] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的PPAR(过氧化物酶体增殖物激活受体)活性调节物联合使用。

[0030] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的由以下式代表的苯并硫氮杂 类或苯并硫杂 类化合物联合使用，所述化合物具有硫代酰胺键和季铵取代基。

[0031] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反义构建体联合使用。

[0032] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的可用作组胺H3拮抗剂的杂原子连接的取代哌啶及其衍生物联合使用。

[0033] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的抑制硬脂酰-辅酶αδ-9去饱和酶的吡咯烷衍生物联合使用。

[0034] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的具有脂连素的促分泌素活性或诱导物活性的酰胺类化合物联合使用。

[0035] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的季铵类化合物联合使用。

[0036] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的异黄酮类化合物联合使用。

[0037] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的大环内酯类抗生素联合使用。

[0038] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的目前用来治疗多发性硬化的免疫调节剂药物醋酸格拉默(Glatiramer acetate)(也称作共聚物1、Cop-1或克帕松(Copaxone)，如Teva Pharmaceuticals所销售)联合使用。

[0039] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的正五聚蛋白(包括但不限于重组正五聚蛋白-2)联合使用。

[0040] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯与治疗有效量的司汀组合，所述司汀例如但不限于HMG-CoA还原酶抑制剂如阿托伐他汀和辛伐他汀。

[0041] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯与治疗有效量的N-乙酰半胱氨酸组合。

[0042] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的可以抑制单一半乳糖凝集素蛋白或一组半乳糖凝集素蛋白的另一种半乳糖凝集素抑制剂联合使用，所述半乳糖凝集素抑制剂包括但不限于半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽或蛋白质抑制剂。

[0043] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以与治疗有效量的抑制赖氨酰氧化酶(或交联胶原蛋白的其他类似酶)的单克隆抗体或抗结缔组织生长因子的单克隆抗体联合使用。

附图说明

[0044] 将参考附图对本发明进行进一步解释，其中相同的结构在几个视图中始终由相同的数字表示。所示出的图不必然地符合比例，相反，当说明本发明的原理时通常将作为重点。

[0045] 图1A示出了根据一个实施例实验组肝组织中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)。图1B示出了根据一个实施例实验组肝组织中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的数字式形态测量学。

[0046] 图2示出了根据一个实施例实验组肝组织中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的免疫组织化学染色。

[0047] 图3示出了根据一个实施例实验组肝组织中的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的数字式形态测量学。

具体实施方式

[0048] 本文中公开了本发明的详细实施方案；然而，应当理解，所公开的实施方案仅是说明本发明可以按多种形式来实施。此外，所给出的与本发明的多个实施方案相关的每个实施例都旨在进行说明，而非是限制性的。另外，附图不一定按比例绘制，可以放大一些特征以显示特定组分的细节。此外，图中所显示的任何量值、说明等旨在进行说明，而非是限制性的。因此，本文中公开的特定结构和功能细节不得理解为限制性的，而仅应理解为教导本领域技术人员以多种方式使用本发明的代表性基础。

[0049] 在本申请中，除非另外专门声明，否则单数的使用意指包括复数。另外，除非另外声明，否则“或”的使用意指“和/或”。同样，“包含”和“包括”不意在是限制性的。应当理解，本文中所描述的本发明的方面和实施方案包括“由方面和实施方案组成”和/或“基本上由方面和实施方案组成”。

[0050] 除非另外说明，否则本文中所表述的全部百分数均是重量/重量。

[0051] 一氧化氮合酶(NOSs)是催化从L-精氨酸产生一氧化氮(NO)的酶家族。NO是一种重要的细胞信号分子。已经分离和表征了这种酶的三个主要同工型，每个同工型与不同的生理功能相关联：免疫反应(诱导型NOS或者iNOS)、平滑肌松弛(内皮型NOS或者eNOS)和神经元信号传导(神经元型NOS或者nNOS)。诱导型同工型，iNOS，参与免疫反应，在生理相关浓度结合钙调蛋白，并产生NO作为免疫防御机理，因为NO是具有未配对电子的自由基。它是脓毒性休克的近因并且可以在自身免疫性疾病中起作用。此外，已经表明iNOS表达的增加在包括传染性疾病、自身免疫性疾病和慢性炎症性疾病、神经变性疾病和心血管疾病的多种人类疾病中是重要的。

[0052] 本发明多个方面涉及一种用于减少iNOS表达的方法，该方法对治疗这些人病症具有潜力。

[0053] iNOS诱导可以参与许多人类疾病的发病机理。

[0054] 例如，已经表明了iNOS是脓毒性休克的近因。iNOS产生NO在内毒素性(脓毒性)和细胞因子诱导的休克期间引起过度的血管舒张。

[0055] 已经表明iNOS表达的增加与自身免疫性疾病和慢性炎症性疾病相关联，所述自身免疫性和慢性炎症性疾病包括但不限于类风湿性关节炎、多发性硬化、干燥综合征(Sjogren’s syndrome)、哮喘、支气管扩张症、特发性肺纤维化、溃疡性结肠炎、克罗恩病、坏死性小肠结肠炎、乳糜泻、肾小球肾病和其他肾炎性疾病、慢性炎症肝病(病毒性、酒精性、脂肪性肝炎、胆汁性、自身免疫性)、银屑病、皮肤和系统性红斑狼疮、系统性硬化、皮炎和根尖周炎。

[0056] 已经显示了iNOS表达的增加与包括但不限于阿尔茨海默病和帕金森病的神经变性疾病相关联。

[0057] 已经表明了iNOS表达的增加与心血管疾病相关联，所述心血管疾病包括但不限于心肌炎、扩张型心肌病和心力衰竭、心脏同种异体移植排斥、动脉粥样硬化和肺动脉高压。

[0058] 已经表明iNOS表达的增加与癌生物学相关联并且在多种肿瘤中表达。

[0059] iNOS可以通过在多种细胞类型中的表达参与人类疾病，所述细胞包括但不限于上皮细胞、间质细胞、内皮细胞、巨噬细胞和多种类型的免疫细胞。

[0060] 在一些实施方案中，半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或者半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以减少iNOS表达的一种机理是通过结合到半乳糖凝集素蛋白。

[0061] 半乳糖凝集素(也称作半乳素或S-凝集素)是结合β-半乳糖苷的凝集素家族。半乳糖凝集素作为通用名在1994年针对动物凝集素家族提出(Barondes,S.H.等人,Galectins:a family of animal b-galactoside-binding lectins.Cell 76,597-598,1994)。该家族由含有至少一个对β-半乳糖苷存在亲和力的特征性糖识别结构域(CRD)并共有某些序列元件定义。在相同肽链内部，一些半乳糖凝集素含有仅存在一些额外氨基酸的CRD，而其他半乳糖凝集素含有由连接肽连接的两个CRD，并且一种半乳糖凝集素(半乳糖凝集素-3)含有与一种不同类型结构域连接的一个CRD。半乳糖凝集素糖识别结构域(CRD)是约135个氨基酸的β-夹层。两个折叠片略微弯曲，同时6条链形成凹陷侧并且5条链形成凸出侧。凹陷侧形成其中结合糖的槽(Leffler H,Carlsson S,Hedlund M,Qian Y,Poirier F(2004)."Introduction to galectins".Glycoconj.J.19(7-9):433-40)。

[0062] 已经显示多种类型的生物现象与半乳糖凝集素相关，例如，发育、分化、形态发生、肿瘤转移、凋亡、RNA剪接，等等。然而，关于半乳糖凝集素借以展示这些功能(特别就糖识别而言)的机制，相对知之甚少。

[0063] 通常，糖结构域结合到与糖蛋白接合的半乳糖残基。已经鉴定到以串联方式含有一个或两个糖结构域的至少15种哺乳动物半乳糖凝集素蛋白。

[0064] 每种半乳糖凝集素蛋白具有一个半乳糖结合结构域和允许与其他半乳糖凝集素蛋白同型二聚化或异二聚化的其他结构域。半乳糖凝集素蛋白在生理条件下以低水平在宽范围的细胞和组织中表达并存在于胞核、细胞质中并且由非传统分泌途径分泌入胞外空间。

[0065] 半乳糖凝集素的半乳糖结合结构域与位于细胞表面上或胞外基质蛋白上的含有糖蛋白的半乳糖结合。半乳糖凝集素上的二聚化结构域促进半乳糖凝集素蛋白的相互作用，因而在膜或基质糖蛋白之间产生相互作用。这些相互作用促进细胞-细胞、细胞-基质和基质-基质相互作用和膜受体缔合，这可以引起细胞受体活性的激活、失活或调节，导致调节胞内信号传导和后续事件。

[0066] 某些半乳糖凝集素蛋白从处于病理状态的细胞明显上调并且以高的量分泌。处于组织炎症状态和修复(纤维化、瘢痕化)的多种炎性细胞(包括但不限于巨噬细胞和淋巴细胞)表达半乳糖凝集素，特别是半乳糖凝集素-1和半乳糖凝集素-3。

[0067] 待治疗的“受试者”可以意指人或者非人类受试者。

[0068] 术语“有效量”意指半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或与半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯联用的其他药剂的量，所述量在作为肠胃外剂量或在口服制剂中施用于患有与升高的iNOS相关联的疾病的动物或人时能够将受疾病影响的组织中的iNOS表达减少至少10％。

[0069] 对于人类受试者，含有半乳糖的多糖的有效量可以是在0.5mg/kg直至25mg/kg体重、或1mg/kg、或2mg/kg、或5mg/kg、或7.5mg/kg、或10mg/kg体重或15mg/kg体重的范围内。

[0070] 在一些方面，表征了用于治疗有需求的受试者中iNOS参与其中的一种或多种疾病、病症或病状(例如，控制、减轻、缓解、改善或延缓其进展)的方法或用于预防所述疾病、病症或病状的方法(例如，延迟其发作或降低形成风险)。所述方法包括向该受试者施用有效量的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物或向患有与升高的iNOS水平相关联的许多疾病之一的受试者施用有效量的包含半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物的组合物。

[0071] 术语“药学上可接受载体”指生理相容的任何和全部溶剂、分散介质，例如，人白蛋白或交联型明胶多肽、包衣、抗细菌剂和抗真菌药化合物、等渗剂(例如，氯化钠或谷氨酸钠)和吸收延迟性化合物等。用于药学活性物质的此类介质和化合物的用途是本领域熟知的。优选地，载体适于口服、静脉内、肌内、皮下、肠胃外、脊髓或硬膜外施用(例如，通过注射或输注)。取决于施用途径，活性化合物可以包覆于保护该化合物免遭可能使这种化合物失活的酸和其他天然条件作用的材料中。

[0072] 术语“功效”在一些实施方案中指在iNOS相关的疾病中表明改善，包括但不限于终末器官损伤减少或者疾病的体征和症状改善。

[0073] 本发明的多个方面涉及使用用于肠胃外或肠内施用的治疗性组合物治疗患有与升高的iNOS活性相关联的疾病的受试者的方法，所述治疗性组合物包含在可接受药用载体中的含有半乳糖的多糖化合物。

[0074] 在一些实施方案中，所述治疗方法包括获得包含在可接受的药用载体中的化合物的用于肠胃外或肠内施用的组合物的步骤。

[0075] 在一些方面，本发明涉及用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病的含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物的组合物。在一些实施方案中，所述组合物是含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物。术语“混合物”意指混合在一起以形成组合的多于一种组分。出于本发明的目的，“混合物”意指在施用之前或之后或与之同时的任何时间，两种或更多种化合物的混合物。

[0076] 本发明的一些方面涉及用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物的用途。在一些实施方案中，含有半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯和治疗剂的混合物可以用于治疗与升高的iNOS相关联的疾病或用于制备治疗这种疾病的药物组合物。

[0077] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物可以通过美国专利No.8,236,780和美国申请系列号13/573,442中，以及名称为“Compositions of novel carbohydrate drug for the treatment of human diseases(用于治疗人类疾病的新糖药物组合物)”的国际专利申请No.PCT/US12/55311中描述的方法产生，并且这些文献通过引用的方式明确地大体上全部并入本文。

[0078] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物可以基本上不含有微生物内毒素、农业杀虫剂、农业除草剂、铜、重金属、蛋白质、含氮化合物或前述物质的任意组合。通过使用“基本上不含”，意指以重量计该组合物包含小于5％、小于2％、小于1％、小于0.5％。

[0079] 在一些实施方案中，当在细胞生存力测定中被用于处理LX2永生化人肝星状细胞时，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物不会引起生存力降低。例如，当被用于处理LX2永生化人肝星状细胞时，当以多达500μg/mL的浓度使用时，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物不会引起生存力降低。

[0080] 在一些实施方案中，当被用于处理产生半乳糖凝集素-3的应激的LX2永生化人肝星状细胞时，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物能够引起半乳糖凝集素-3在细胞表面的表达大幅度地减少或者半乳糖凝集素-3在介质中的分泌大幅度地减少。

[0081] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物能够减少TNF-α细胞因子从内毒素应激的单核细胞中的分泌。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物能够将TNF-α从激活的单核细胞或激活的巨噬细胞中的分泌减少至少25％。

[0082] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物不抑制癌细胞凋亡模型或者细胞毒性模型中的癌细胞增殖。在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸聚糖化合物对单核细胞或巨噬细胞或者激活的单核细胞或巨噬细胞没有细胞毒性。

[0083] 在一些实施方案中，所述化合物不抑制癌细胞在癌细胞中的增殖，并且其在浓度高达500μg/mL时对单核细胞或巨噬细胞或者激活的单核细胞或巨噬细胞没有细胞毒性。

[0084] 在一些实施方案中，所述化合物是多糖并且可以在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯(GA-RG)的亚型，称作半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，一种选择性解聚的支化杂聚物，其主链主要由1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分组成，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，其转而与任意数目的主要包含1,
4-β-D-半乳糖(Gal)残基和1,5-α-L阿拉伯糖(Ara)残基的侧链连接或其组合。其他的侧链次要组分可以包括木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和岩藻糖(Fuc)。

[0085] 在一些实施方案中，所述化合物可以从天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果胶合成，如同从含有8-12％果胶的苹果渣制备出的那一种。

[0086] 在一些实施方案中，可以在糖苷连接的甲氧基化α-1,4-连接的GalA的充分受控和特异性水解情况下合成所述化合物，同时保留含有富集量的1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的侧链。可以通过GC-MS(气相色谱-质谱法)和AELC-PAD(阴离子交换液相色谱-脉冲安培检测器)法定量地测定1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的量。

[0087] 在一些实施方案中，可以通过如下的方法产生所述化合物，即：该方法包括在1到100mM还原形式的额外过渡金属离子如Cu++存在或不存在的情况下，通过从抗坏血酸产生的离子化OH-和/或过氧化物定向过氧化裂解糖苷键所分解代谢的解聚。其他过渡金属离子如Ca++或Fe++可以用于此目的。

[0088] 在一些实施方案中，所述解聚化合物可以在2℃至60℃的温度暴露于8至10之间的pH 10至30分钟以启动受控有限的去甲氧基化，以产生与最高87％的初始水平相比甲氧基化程度为40％至70％的解聚化合物，并且可以称作中等甲氧基化的化合物。认为半乳糖醛酸的完全甲氧基化是大约DE 87％。

[0089] 在一些实施方案中，所述解聚组合物可以暴露于多次热酸性醇洗涤(例如在30-80℃的温度范围内)以除去任何残留的内毒素、铜和重金属、农业污染物和其他杂质。

[0090] 在一些实施方案中，所述化合物是在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯或半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯的多糖，一种具有2,000至80,000Da，或者20,000至70,000Da，2,000至65,000Da，或者45,000至65,000Da，或者2,000-20,000Da或者5,000至
55,000道尔顿的平均分子量分布的支化杂聚物，如通过SEC-RI和/或SEC-MALLS法确定。

[0091] 在一些实施方案中，本发明化合物中1,5-α-L-Ara残基的摩尔百分数可以是零或仅以至多1％的痕量存在。

[0092] 在一些实施方案中，所述化合物是具有可以分别超过10％总摩尔糖的1,4-β-D-Gal残基和1,5-α-L-Ara残基摩尔百分数的半乳阿拉伯糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯，所述1,4-β-D-Gal残基和1,5-α-L-Ara残基的近似比率范围是从1:1至3:1。

[0093] 在一些实施方案中，所述化合物可以是分子量范围大幅度降低的高度可溶的改性多糖，从而与治疗性制剂相容以通过多种途径用于多种施用，所述途径包括但不限于静脉内、皮下、关节内、吸入和口服。例如，该化合物可以是从大约例如大约2,000至大约80,000Da，或者例如从大约2,000至大约65,000Da，或者例如从大约20,000至70,000Da，或者例如从大约45,000至65,000Da，或者例如从大约2,000至20,000Da或者例如从大约5,000至
45,000Da。

[0094] 在一些实施方案中，所述1,4-连接的半乳糖醛酸和半乳糖醛酸甲酯残基主链可以占总糖类摩尔含量的55到85之间的摩尔百分数，所述交替性α-1,2-连接的鼠李糖残基和α-1,4-连接的GalA残基的支化杂聚物可以占总糖类摩尔含量的1到3之间的摩尔百分数，所述低聚物1,4-β-D-半乳糖的主要支链可以占总糖类摩尔含量的6到15之间的摩尔百分数，所述低聚物1,5-α-L-阿拉伯糖的主要支链可以占总糖类摩尔含量的2到8之间的摩尔百分数，如通过气相色谱/质谱法表征。

[0095] 在一些实施方案中，所述1,4-β-D-半乳糖残基、1,5-α-L-阿拉伯糖残基或其组合可以占总糖类摩尔含量的至少8摩尔百分数。

[0096] 在一些实施方案中，所述1,4-β-D-半乳糖残基和1,5-α-L-阿拉伯糖残基可以以2:1的比例存在。

[0097] 在一些实施方案中，所述化合物具有范围从40％到70％(最高为87％)的甲氧基化程度。

[0098] 在一些实施方案中，所述化合物的半乳糖醛酸甲酯与半乳糖醛酸的比例在2:1到1:2的范围内。

[0099] 在一些实施方案中，所述化合物的半乳糖醛酸甲酯加上半乳糖醛酸与半乳糖的比例在4:1到8:1的范围内。

[0100] 在一些实施方案中，所述化合物是多糖并且可以在化学上定义为半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯(GR)，一种选择性解聚的支化杂聚物，其主链主要由1,4-连接的半乳糖醛酸(GalA)部分组成，伴随较少的交替性1,4-连接的GalA和1,2-连接的鼠李糖(Rha)的主链组成，其转而与任意数目的主要包含1,4-β-D-半乳糖(Gal)的侧链连接。其他侧链次要组分可以包括阿拉伯糖(Ara)、木糖(Xyl)、葡萄糖(Glu)和岩藻糖(Fuc)。

[0101] 在一些实施方案中，所述化合物可以从天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果胶合成，所述果胶可以来自任何植物来源，包括但不限于柑橘果、苹果或甜菜。

[0102] 在一些实施方案中，所述化合物可以从天然的、高度支化的、加工最少和高度甲氧基化的USP果胶合成，如同从含有8-12％果胶的苹果渣制备出的那一种。

[0103] 在一些实施方案中，可以在糖苷连接的甲氧基化α-1,4-连接的GalA的充分受控和特异性水解情况下合成所述化合物，同时保留含有富集量的1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的侧链。可以通过GC-MS(气相色谱-质谱法)和AELC-PAD(阴离子交换液相色谱-脉冲安培检测器)法定量地测定1,4-β-D-Gal和1,5-α-L-Ara的量。

[0104] 在一些实施方案中，可以通过如下的方法产生所述化合物，即：该方法包括在1到100mM还原形式的额外过渡金属离子如Cu++存在或不存在的情况下，通过从抗坏血酸产生的离子化OH-和/或过氧化物定向过氧化裂解糖苷键所分解代谢的解聚。其他过渡金属离子如Ca++或Fe++也可以用于此目的。

[0105] 在一些实施方案中，所述解聚化合物可以在2℃至30℃的温度暴露于8至10之间的pH 10至30分钟以启动受控有限的去甲氧基化，以产生与最高87％的初始水平相比甲氧基化程度为40％至70％的解聚化合物，并且可以称作中等甲氧基化的化合物。认为半乳糖醛酸的完全甲氧基化是大约DE 87％。

[0106] 在一些实施方案中，所述解聚组合物可以暴露于多次热酸性醇洗涤(50-65℃)以除去任何残留的内毒素、铜和重金属、农业污染物和其他杂质。

[0107] 在一些实施方案中，通过修饰天然存在的聚合物以针对所需范围降低分子量、减少烷基化基团(去甲氧基化或脱乙酰化)，制备可溶性化学改变的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯。在化学修饰之前，天然多糖可以具有在大约40,000-1,000,000Da之间范围内的分子量，伴随多个糖分支，例如，由1至20个葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖等单糖组成的分支，并且这些分支可以通过中性单糖如鼠李糖连接到主链。这些分子可以进一步包括单个或一连串可以从少到约2％至多到约70％酯化的糖醛酸糖主链。多个分支本身可以具有多个糖分支，所述多个分支任选地包含主要产生疏水实体的中性糖和中性糖衍生物。

[0108] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯组合物可以使用来自任何植物来源的果胶原料通过各种处理产生，所述处理包括加热、高或低pH、多种形式的分子量排阻过滤(或这些方法的组合)，所述果胶原料包括但不限于苹果、柑橘或甜菜果胶，其中一些可作为USP果胶物质商业上可获得。

[0109] 在一些实施方案中，所述化合物落在包括基本上脱甲氧基化的聚半乳糖醛酸主链的大类内，所述聚半乳糖醛酸主链具有从其上悬垂的鼠李糖残基。认为在这种类型的物质中，从主链悬垂的末端半乳糖单元结合到半乳糖凝集素蛋白。剩余的分子主体可以激动化合物在调节免疫系统反应方面的作用。尽管不希望受推测限制，但是剩余的分子主体可以与剩余的半乳糖凝集素蛋白部分相互作用和/或可以延长糖部分与它的结合。

[0110] 尽管前面的讨论已经主要涉及基于改性果胶的治疗性物质，但是应当理解本发明不受此限制。根据本发明的一般原理，可以使用可与半乳糖凝集素相互作用于并且阻断半乳糖凝集素的一大类化合物中的任何物质。在一个实施方案中，这些物质包括糖类物质，因为这类物质毒性低并且显示出与半乳糖凝集素强烈的相互作用或显示出强烈的抗炎作用。改性果胶物质包括一个特定组的糖类物质。同样，可以类似地使用其合成和半合成类似物如聚半乳糖醛酸物质。

[0111] 然而，本发明的另一类物质包括具有与第二部分连接的第一部分的分子，所述第一部分一般是糖类并且能够结合到半乳糖凝集素，所述第二部分失活或否则调节蛋白质活性。该第二部分不需要是糖类并且可以包括交联包含半乳糖凝集素蛋白活性部分的蛋白质区段或与半乳糖凝集素相互作用的另一种蛋白质的活性部分或否则使之变性的物质。这类物质包括活性种类如单独或组合的硫或其他硫族元素如巯基、硫氢基等。其他活性种类可以包括氰基、硫氰酸酯、烷基化剂、醛等。一些活性种类可以是蛋白质，包括但不限于单克隆抗体。

[0112] 有效量的本发明的化合物或者包含有效量的该化合物的组合物可以通过多种途径施用，所述途径包括通过作为重复静脉推注或恒量输注给予的静脉内输注的肠胃外途径、皮内注射、作为重复快速浓注或恒量输注的皮下给予、关节内注射、在合适的制剂中吸入或口服施用。

[0113] 施用的量取决于化合物制剂、施用途径等，并通常在例行试验中经验性地确定，并且取决于靶、宿主和施用途径等必然将会出现变化。

[0114] “施用”指经口、或者肠胃外，包括静脉内、皮下、局部用药、透皮、真皮内、透黏膜、腹膜内、肌内、囊内、眶内、心内、经气管、皮下、角皮下、关节内、被膜下、蛛网膜下、椎管内、硬膜外和胸骨内注射和输注。

[0115] 在一些实施方案中，所述治疗性组合物可以口服、通过静脉内注射、通过皮下注射或通过输注施用。

[0116] 有效肠胃外剂量可以通过静脉内、真皮内、皮下或者由医学从业人员实施的其他途径每日(按一个剂量或分次剂量)，每周三次，每周两次，或者每月给予以施用药物。

[0117] 在一些实施方案中，有效量的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以在用于口服施用的制剂中施用。配制可以包括物理改变化合物或添加各种增强含有半乳糖的多糖口服吸收的物质的方法。有效口服剂量可以是有效肠胃外剂量的10倍和至多100倍。有效口服剂量可以每日按一个剂量或分次剂量，或每周两次、三次或每月给予。

[0118] 在一些实施方案中，本文所述的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物可以与一种或者更多种其他治疗剂共同施用。在某些实施方案中，作为多剂量方案的部分，可以将额外的药剂与本发明化合物分开(例如，依次地，例如，按照与施用本发明化合物不同的重叠时间表)施用。在其他实施方案中，这些药剂可以是单一剂型的部分，在单一组合物中与本发明化合物混合在一起。在又一个实施方案中，这些药剂可以作为在与本发明化合物大约相同的时间施用的单独剂量给予。

[0119] 在一些实施方案中，所述半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯可以用于混合物中。

[0120] 当组合物包含半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物和一种或者多种额外治疗剂或者预防剂的组合时，化合物和额外药剂均可以按正常情况下在单药治疗方案中所施用剂量的大约1％至100％之间和更优选大约5％至95％之间的剂量水平存在。

[0121] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的半胱胺或其药学上可接受的盐、或胱胺或其药学上可接受的盐联合使用。[参见美国专利No.7,994,226，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0122] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含甘草酸苷、五味子、抗坏血酸、L-谷胱甘肽、水飞蓟素、硫辛酸和d-α-生育酚的组合物。[参见美国专利No.7,078,064，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0123] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的各种抗氧化化合物联合使用，所述联合使用包括但不限于肠胃外或口服施用包含水溶性维生素E配制品、混合的类胡萝卜素或硒的组合物[参见美国专利No.6,596,762，该文献通过引用的方式明确地大体上并入]。

[0124] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的肠胃外或口服施用的卵磷脂或复合维生素B联合使用[参见美国专利No.7,018,652；6,180,139，该文献通过引用的方式明确地大体上并入]。

[0125] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的胆盐配制品联合使用，所述胆盐配制品包括但不限于熊脱氧胆酸、其他天然存在或合成性胆酸或胆酸盐的鹅脱氧胆酸。[参见美国专利No.6,297,229，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0126] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的大麻素-1(CB1)受体拮抗剂和/或反向激动剂联合使用。[参见美国专利Nos.7,999,107；7,906,652，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0127] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的PPAR(过氧化物酶体增殖物激活受体)活性调节物联合使用。[参见美国专利No.7,994,353，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0128] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的由以下式代表的苯并硫氮杂 类或苯并硫杂 类化合物联合使用，所述化合物由含有硫代酰胺键和季铵取代基的分子式表示。[参见美国专利号7,973,030，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0129] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的抑制蛋白质酪氨酸磷酸酶PTPRU的RNA反义构建体联合使用。[参见美国专利号7,897,583，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0130] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的可用作组胺H3拮抗剂的杂原子连接的取代哌啶及其衍生物联合使用。[参见美国专利No.7,846,946，该文献通过引用的方式明确地大体上并入]。

[0131] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的抑制硬脂酰-辅酶αδ-9去饱和酶的吡咯烷衍生物联合使用。[参见美国专利No.7,754,745，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0132] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的具有脂连素的促分泌素活性或诱导物活性的酰胺类化合物联合使用。[参见美国专利No.7,732,637，该文献通过引用的方式明确地大体上并入]。

[0133] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的季铵类化合物联合使用。[参见美国专利No.7,312,208，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0134] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的异黄酮类化合物联合使用。[参见美国专利No.6,592,910，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0135] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的大环内酯类抗生素联合使用。[参见美国专利No.5,760,010，该文献通过引用的方式明确地大体上并入。]

[0136] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的目前用来治疗多发性硬化的免疫调节剂药物醋酸格拉默(Glatiramer acetate)(也称作共聚物1、Cop-1或克帕松(copaxone)，如Teva Pharmaceuticals所销售)联合使用。

[0137] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的司汀联合使用，所述司汀例如但不限于HMG-CoA还原酶抑制剂如阿托伐他汀和辛伐他汀。

[0138] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的N-乙酰半胱氨酸联合使用。

[0139] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的可以抑制单一半乳糖凝集素蛋白或一组半乳糖凝集素蛋白的另一种半乳糖凝集素抑制剂联合使用，所述半乳糖凝集素抑制剂包括但不限于半乳糖凝集素的有机小分子抑制剂、单克隆抗体、RNA抑制剂、小结合肽或蛋白质抑制剂。

[0140] 在一些实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的抑制赖氨酰氧化酶的单克隆抗体或与结缔组织生长因子结合的单克隆抗体联合使用。

[0141] 在另一个实施方案中，所述化合物是半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯并且可以与治疗有效量的正五聚蛋白(包括但不限于重组正五聚蛋白-2)联合使用。

[0142] 在一些实施方案中，有效量的含有半乳糖的多糖可以通过多种途径施用，所述途径包括通过作为重复静脉推注或恒量输注给予的静脉内输注的肠胃外途径、皮内注射、作为重复快速浓注或恒量输注皮下给予或口服施用。

[0143] 对于实验动物，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内、腹内或皮下给予)是在2mg/kg直至160mg/kg体重、或10mg/kg、或30mg/kg、或60mg/kg、或90mg/kg或120mg/kg体重范围内。

[0144] 对于实验动物，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内、腹内或皮下给予)可以每周三次、每周二次、每周一次、每两周一次、每月一次或作为恒量输注施用。

[0145] 对于人类受试者，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内或皮下给予)是在0.5mg/kg直至25mg/kg体重、或1mg/kg、或2mg/kg、或5mg/kg、或7.5mg/kg、或10mg/kg体重或
15mg/kg体重的范围内。

[0146] 对于人类受试者，含有半乳糖的多糖的有效肠胃外剂量(静脉内或皮下给予)可以每周三次、每周二次、每周一次、每两周一次、每月一次或作为恒量输注施用。

[0147] 也可能需要比上述的那些剂量低或者高的剂量。针对任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于多种因素，包括所用的具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康状态、性别、膳食、施用时间、排泄速率、药物联合、疾病、病状或者症状的严重性和过程和治疗医师的判断。

[0148] 一旦患者的状况改善，如果需要，可以施用维持量的本发明化合物、组合物或者组合。随后，当已经将症状减轻至所想要的水平时，剂量或给药频率或二者可以随症状的变化减低至保持改善的状况的水平。然而，一旦任何疾病症状复发，患者可能需要基于长期的断续治疗。

[0149] 在一些实施方案中，可以通过iNOS相关疾病的血清生物标记水平变化至少10％评价治疗有效量。

[0150] 在一些实施方案中，可以通过肝组织或血清中半乳糖凝集素-3水平至少10％的降低评价治疗有效量。

[0151] 在一些实施方案中，可以通过血清中半乳糖凝集素-3水平的变化评价治疗有效量。

[0152] 将通过以下实施例进一步描述本发明。应当理解，这些实例仅起到说明目的并且不得被解释为以任何方式限制本发明。

[0153] 实施例1：制备半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯化合物的方法

[0154] 以下仅是产生治疗性多糖的说明性例子，不旨在限制本发明。在这种情况下，所产生的半乳糖-鼠李糖半乳糖醛酸酯已经在本申请中标记为GR-MD-02。

[0155] 将苹果果胶USP HM(50kg)溶解并且在水中加热至35-85℃。添加1M HCl或NaOH以便调节溶液的pH至pH 5-7并充分混合。将混合在35-85℃设定点继续2小时。根据需要加入1M NaOH或HCl以将pH再调节到5和7之间。将溶液冷却至30℃。在30℃，将pH调节到5和7之间。

[0156] 将CuSO4加入到调节过pH的果胶溶液中，从而形成1mM的最终CuSO4浓度。将1mM CuSO4溶液在10℃和30℃之间的温度混合30分钟。

[0157] 在30分钟1mM CuSO4混合步骤结束时，加入50克抗坏血酸钠(量经预先校准以获得所需的MW)并混合5到20分钟。加入H2O2，以0.02开始并直至1.0摩尔/kg果胶(对于初始的开始果胶MW预先校准)，并且将H2O2浓度维持4小时(使用定量检验，Sigma，St-Louis)，同时将溶液pH维持在4和7之间。

[0158] 向溶液加入5M NaOH从而形成pH在8和10之间的溶液。将调节过pH的溶液混合10-30分钟。随后，向调节过pH的溶液加入浓HCl以将溶液的pH调节到4和5之间。一旦调节到pH 
4和5之间，可以将溶液在2℃和8℃之间保持混合2至24小时。

[0159] 随后将溶液加热到80℃持续30-180分钟，并且向该溶液加入1-5kg过滤助剂(Celite)，并将添加过Celite的溶液搅拌30分钟，随后过滤。弃去过滤产生的固体。

[0160] 将滤液在真空下浓缩1.5-3倍，随后将pH调节到3和5之间。按50％重量加入热的乙醇或异丙醇。将混合物搅拌1-2小时以沉淀产物，随后过滤混合物。弃去滤液，留下白色至米白色沉淀物。

[0161] 向该溶液加入冷的96％乙醇，并且随后将所产生的浆液搅拌30分钟。将溶液过滤并弃去滤液。重复96％乙醇浆液步骤，接着是最终过滤并回收白色至米白色沉淀物。

[0162] 实施例2：减少脂肪性肝炎小鼠模型中INOS的治疗方法

[0163] 该实施例中使用的实验模型是其中诱导糖尿病并施用高脂膳食的小鼠，一个已经称作STAM小鼠的模型。在出生后立即用单次注射链脲佐菌素诱导糖尿病，接着4周后小鼠开始摄食高脂膳食。这是一个经证明的慢性炎症模型，其中，小鼠一致地形成脂肪性肝炎伴随肝细胞脂肪积累、肝细胞毒性迹象、门脉和小叶炎性浸润、窦周纤维化、晚期纤维化伴发结节形成、肝硬化并且最终在一定百分数的动物中形成肝细胞癌。

[0164] 将如实施例1中所述产生的GR-MD-02以60mg/kg的剂量每周两次静脉内给予四(4)周，在所述模型开始后第9周开始直至第12周。

[0165] 图1A显示了在溶媒处理的对照肝中在肝组织中检测到iNOS的量相对于正常动物升高，并且在用GR-MD-02处理后显著降低。图1B显示了iNOS免疫反应性的定量结果，该定量结果表明用GR-MD-02处理导致iNOS免疫反应性的统计显著降低。

[0166] 将如实施例1中所述产生的GR-MD-02以120mg/kg、60mg/kg、30mg/kg、10mg/kg的剂量每周一次静脉内给予六周，各自在该模型的第6周开始并且在12周结束。

[0167] 图2显示了在溶媒处理的对照肝中在肝组织中检测到iNOS的量相对于正常动物升高，并且在用多种剂量的GR-MD-02(10mg/kg、30mg/kg、60mg/kg或者120mg/kg)处理后降低。图3显示了iNOS免疫反应性的定量结果，该定量结果表明用多种每周一次剂量的GR-MD-02处理导致iNOS免疫反应性降低，在每周一次30mg/kg和10mg/kg的剂量时具有统计显著降低。

[0168] 可以理解本文所描述的实施例和实施方案是仅仅用于说明性目的，并且根据它们的各种修改或改变将包括在本申请的精神与范围内以及所附权利要求书的范围内。本文中引用的全部出版物、专利和专利申请在此通过引用的方式大体上完整并入。