地榆鞣质和黄芪多糖的新用途

摘要

本发明提供了地榆鞣质在制备与黄芪多糖联合用药治疗或/和预防骨髓抑制的药物中的用途。本发明将地榆鞣质和黄芪多糖联合使用后，发挥了协同增效作用，其药效活性显著提高，为临床用药提供了新的选择。

权利要求

1.地榆鞣质与黄芪多糖在制备治疗或/和预防骨髓抑制的联合用药物中的用途；地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为27：52。

2.一种治疗或/和预防骨髓抑制的药物组合物，其特征在于：它是含有如下重量配比的原料药制备而成的制剂：地榆鞣质与黄芪多糖的重量比27：52。

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于：所述地榆鞣质中鞣质含量为50～

99％；黄芪多糖中多糖含量为50～99％。

4.根据权利要求2或3所述的药物组合物，其特征在于：所述制剂为口服制剂。

5.权利要求2或3所述药物组合物在制备治疗或预防骨髓抑制或升高白细胞的药物中的用途。

6.权利要求4所述药物组合物在制备治疗或预防骨髓抑制或升高白细胞的药物中的用途。

说明书

地榆鞣质和黄芪多糖的新用途

技术领域

[0001] 本发明提供了地榆鞣质和黄芪多糖的新用途。

背景技术

[0002] 骨髓抑制是肿瘤放化疗最常见且重要的合并症。其外周血白细胞、血小板的明显下降，可引发致死性感染与出血，严重限制了肿瘤治疗的进程和预后。全世界范围内与重度骨髓抑制有关的治疗相关性死亡率达4％～12％。其原因绝大多数是因严重骨髓抑制，粒细胞缺乏所致各种难以控制的感染。此外，骨髓抑制期发热、出血使病人需住院进行系统抗感染治疗，以及止血、输血等，间接增加了肿瘤病人的治疗费用，也使病人的生活质量恶化。因此，骨髓抑制是干扰临床肿瘤医生实施放化疗治疗方案的危险障碍，也是阻碍肿瘤患者康复的致命威胁。

[0003] 目前，临床上对骨髓抑制的药物治疗和非药物治疗都不能达到临床医生的用药需求和对患者顺应性的需要。无论是输成分血，还是使用造血因子或外周造血干细胞移植，虽然疗效肯定，但都需要高额费用。同时也存在感染传染的危险，输进的白细胞在受者体内也会出现排异作用，存活时间较短，且有促进癌肿复发的可能。而生物制剂和化学药物都只能针对某一类血细胞减少症，其作用单一且副作用大，不能统筹骨髓保护和血细胞升高。中成药制剂起效缓慢，不能满足肿瘤病人放化疗之后体质快速恢复及继发性疾病预防的需要。

[0004] 因此，如何减轻放化疗所致骨髓抑制，促进骨髓造血功能恢复，升高外周血细胞是保证放化疗顺利完成、提高肿瘤临床疗效的关键问题。研究和开发物质基础清晰、作用机理明确、不良反应甚微的保髓生血天然药物迫在眉睫。

[0005] 地榆为蔷薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或长叶地榆Sanguisorbad officinalis L.var.longifolia(Bert.)Yuet Li的干燥根，始载于《神农本草经》，被列为中品。“其性微寒，味苦、酸、涩，归肝、大肠经”。具有凉血止血，解毒敛疮的功效。临床资料表明，地榆生药材对肿瘤患者因放化疗引起的白细胞减少症的治疗效果显著，服用量小(5mg起效)，成人日服最大剂量成仅为60mg生药材，现代研究表明，地榆升高白细胞的活性物质基础为皂苷和鞣质类成分。

[0006] 黄芪为豆科植物蒙古黄芪Astragalus  membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，具有培元固本、补中益气等多种功效。现代研究表明黄芪对各种原因引起的白细胞减少症，例如由于肿瘤放疗化疗，受X线及其它放射性物质辐射、苯中毒，服用某些解热镇痛药，某些感染性疾病等原因引起的白细胞减少症及某些不明原因引起的白细胞减少症均有良好的治疗作用，其主要有效成分为黄芪多糖。

[0007] 目前尚无将地榆中的活性成分与黄芪中的活性成分配伍的相关报道。

发明内容

[0008] 发明人基于地榆和黄芪升高白细胞物质基础的现代研究，在现代医药理论和临床用药经验指导下，以临床经验为基础，以药效实验为手段，拟定由地榆鞣质和黄芪多糖组成的药物组合物为骨髓抑制治疗的基本方药，再依据黄芪多糖和地榆鞣质保髓升白的临床用量作为因素水平进行等比基线设计，以白细胞数量为主要观察指标，观察不同配比剂量的地榆鞣质-黄芪多糖组合物对环磷酰胺诱导小鼠骨髓抑制的影响，筛选出最优组方与最佳配比关系，为研究治疗骨髓抑制的组分中药奠定基础。

[0009] 本发明的目的在于提供地榆鞣质和黄芪多糖的新用途。本发明的另一目的在于提供一种治疗或预防骨髓抑制的药物组合物。

[0010] 本发明提供了地榆鞣质在制备与黄芪多糖联合用药治疗或/和预防骨髓抑制的药物中的用途。

[0011] 进一步地，地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为1～50：1～160。

[0012] 更进一步地，地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为25～30：55～60。

[0013] 优选地，地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为27：57。

[0014] 本发明还提供了一种治疗或/和预防骨髓抑制的药物组合物，它是含有如下重量配比的原料制备而成的制剂：

[0015] 地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为1～50：1～160。

[0016] 进一步地，地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为25～30：55～60。

[0017] 优选地，地榆鞣质与黄芪多糖的重量比为27：57。

[0018] 其中，所述地榆鞣质中鞣质含量为50～99％；黄芪多糖中多糖含量为50～99％。

[0019] 其中，所述制剂为口服制剂。

[0020] 本发明还提供了上述药物组合物在制备治疗或预防骨髓抑制的药物中的用途。

[0021] 本发明还提供了上述药物组合物在制备具有升高白细胞作用的药物中的用途。

[0022] 本发明将地榆鞣质和黄芪多糖联合使用后，发挥了协同增效作用，其药效活性显著提高，为临床用药提供了新的选择。

附图说明

[0023] 图1各实验组小鼠外周血白细胞数量(注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与地榆鞣质组组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与黄芪多糖组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。)[0024] 图2各实验组小鼠骨髓DNA含量 (注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与地榆组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与黄芪组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。)[0025] 图3各实验组小鼠造血干细胞数量 (注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；与地榆组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与黄芪组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。)[0026] 图4各实验组小鼠造血组织容量 (注：与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01；
与地榆组比较，△P<0.05，△△P<0.01；与黄芪组比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01。)具体实施方式

[0027] 实施例1片剂

[0028]

[0029] 【制法】取处方量黄芪多糖和地榆鞣质，加入辅料混匀后，过80目筛，然后加95％乙醇制软材，16目网制粒；60℃温度干燥后整粒，然后加入硬脂酸镁50g，混匀，压成1000片，包衣即得。

[0030] 实施例2胶囊

[0031]

[0032] 【制法】取处方量黄芪多糖和地榆鞣质，加入辅料混匀后，过80目筛，然后加95％乙醇制软材，16目网制粒；60℃温度干燥后整粒，装胶囊，共制成1000粒。

[0033] 实施例3软胶囊

[0034]

[0035] 【制法】取处方量黄芪多糖和地榆鞣质，60℃干燥，充分混合后粉碎成细分，加入大豆油混匀，制成1000粒软胶囊。

[0036] 实施例4口服液

[0037]

[0038] 【制法】取处方量黄芪多糖和地榆鞣质，与辅料混合均匀后加1000ml纯净水搅拌溶解，混匀，过滤，灌装成1000瓶口服液，灭菌即得。

[0039] 实施例5滴丸

[0040]

[0041] 【制法】取处方量黄芪多糖和地榆鞣质混合均匀，加入已熔融的PEG-4000和PEG-6000，搅拌混匀，滴入二甲基硅油冷凝成型，共滴制成1000丸。

[0042] 实施例6颗粒剂

[0043]

[0044] 【制法】取处方量黄芪多糖和地榆鞣质，加入辅料混匀后，过80目筛，然后加95％乙醇制软材，16目网制粒；60℃温度干燥后整粒，分装，共装成1000袋。

[0045] 以下通过试验例具体说明本发明的有益效果。

[0046] 试验例1本发明药物治疗骨髓抑制的药效试验

[0047] 1实验材料

[0048] 1.1药材

[0049] (1)地榆鞣质(含量为50％～99％)。

[0050] (2)黄芪多糖(含量为50％～99％)。

[0051] 1.2阳性药：重组人粒细胞击落刺激因子。

[0052] 1.3实验动物 SPF级KM小鼠。

[0053] 1.4化学试剂

[0054] (1)环磷酰胺。(2)生理盐水。(3)无水乙醇。(4)DMEM培养基。(5)胎牛血清。(6)双抗(青霉素+链霉素)。

[0055] 1.5实验仪器

[0056] (1)全自动血球分析仪。(2)紫外分光光度计。(3)全功能酶标仪。(4)恒温摇床。(5)匀浆机。(6)低温离心机。(7)流式细胞仪。

[0057] 2实验方法

[0058] 2.1药物组对

[0059] 为全面有效地对初选方剂进行最佳药物配伍和最佳剂量配比关系的筛选，并尽量减少试验次数，本实验采用等比基线法进行处方设计。参照地榆鞣质和黄芪多糖治疗白细胞减少症的起效剂量的为配比基线(地榆鞣质:5～50mg，黄芪多糖40～160mg)，其间黄芪多糖剂量以10～30％递减，地榆鞣质剂量以10～30％递增，或者地榆鞣质剂量以10～40％递减，黄芪多糖剂量以10～40％递增向两侧扩展，最后扩大到极点，两侧极点分别为单纯黄芪多糖和单纯地榆鞣质。以黄芪多糖和地榆鞣质两种药物若干种配比分组，根据研究目的以两药主要效应和次要效应为评价指标，通过综合信息分析，进行各配比的优化筛选。二药配比比例见表1。

[0060] 表1黄芪多糖和地榆鞣质等比基线配比设计表

[0061]

[0062] 2.2最佳剂量的药理实验筛选

[0063] 2.2.1受试药物的制备

[0064] 按表1中组合物用量分别称取1～9剂量组的黄芪多糖和地榆鞣质，分别加入一定体积的纯净水溶解混匀，得1～9组药物组合物溶液。

[0065] 2.2.2实验分组及给药

[0066] 所有动物适应性喂养1周后按体重随机分为：正常组、模型组、阳性组(粒细胞集落刺激因子组)；提取物1～9组，每组12只。各实验组自实验当天开始按0.2ml/kg剂量灌胃给予相应药物，正常组和模型组小鼠灌胃等体积纯净水，连续10天。

[0067] 2.2.3动物模型制备及标本采集

[0068] 实验第4天，除空白组外，其余各组小鼠按100mg·kg-1剂量腹腔注射环磷酰胺生理盐水溶液，连续4天，空白组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。实验第10天，各实验组小鼠眼眶取血，用装有EDTA抗凝剂的0.5mlEP管收集待测；断颈处死小鼠，取左右两侧股骨在超净工作台上，除净肌肉和结缔组织。

[0069] 2.2.4检测指标及方法

[0070] ①外周血象检测：采用全自动血球计数仪对各实验组小鼠外周血白细胞(WBC)进行计数。

[0071] ②骨髓DNA含量测定：剥离小鼠左侧后肢股骨，用眼科手术剪将股骨两端剪断，露出骨髓腔。用10ml0.005mol/L的CaCl2冲洗骨髓至离心管中，4℃冰箱放置30min，2500r/min离心15min。弃上清，加入0.2mo1/L HClO4溶液5ml，振荡混匀后，90℃加热15min。用流水冷却至室温冷却后过滤，滤液经紫外分光光度计测定268nm的吸光度A值。

[0072] ③骨髓造血干计数(HSPC，以造血干细胞表型分子CD34为标记物)用含牛血清白蛋白浓度为0.2％的PBS缓冲液冲出小鼠右侧股骨骨髓细胞，取出106个细胞离心，弃上清，加入30μL正常小鼠血清以封闭非特异结合位点，再加入10μL FITC标记的大鼠抗小鼠CD34抗体，对照管加入10μL相应对照抗体，4℃避光反应30min。加入2mL红细胞裂解液，作用5min，洗细胞2次，加入终浓度为3μg/mL的PI染液，采用流式细胞仪检测骨髓细胞CD34+抗原表达。

[0073] ④骨髓病理形态检测：取部分骨髓，10％中性福尔马林固定，塑料包埋，股骨中段横向切片，Giemsa染色，高倍光镜下观测骨髓造血组织容量百分率变化。

[0074] 2.3统计方法

[0075] 采用SPSS17.0软件进行统计分析，数据以均数±标准差 表示，组间采用单因素方差分析，方差齐者组间进行LSD检验，方差不齐者进行Tamhane’sT2检验。

[0076] 2.4实验结果

[0077] 2.4.1对骨髓抑制小鼠外周血细胞数量的影响结果见图1。

[0078] 由图1可知，与正常组比较，模型组小鼠外周血WBC有极显著降低(P<0.01)；与模型组比较，组合物1～9组小鼠外周血WBC均有显著升高(P<0.05)，其中，组合物6组有极显著升高(P<0.01)；与地榆鞣质、黄芪多糖组比较，组合物1～9组小鼠外周血WBC均有升高趋势，组合物6组小鼠外周血WBC有显著升高(P<0.05)。

[0079] 2.5.2对骨髓抑制小鼠DNA含量的影响结果见图2。

[0080] 由图2可知，与正常组比较，模型组小鼠骨髓DNA含量有极显著降低(P<0.01)；与模型组比较，组合物1～9组小鼠骨髓DNA含量均有显著升高(P<0.05)，其中，组合物6组有极显著升高(P<0.01)；与地榆鞣质、黄芪多糖组比较，组合物1～9组骨髓DNA含量均有升高趋势，组合物6组小鼠骨髓DNA含量均有显著升高(P<0.05)。

[0081] 2.5.3对骨髓抑制小鼠造血干细胞数量的影响结果见图3。

[0082] 由图3可知，与正常组比较，模型组小鼠造血干细胞数量有极显著降低(P<0.01)；与模型组比较，组合物1～9组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)，其中，组合物6组有极显著升高(P<0.01)；与地榆鞣质、黄芪多糖组比较，组合物1～9组造血干细胞数量均有升高趋势，组合物6组小鼠造血干细胞数量均有显著升高(P<0.05)。

[0083] 2.5.4对骨髓抑制小鼠造血组织容量的影响结果见图4。

[0084] 由图4可知，与正常组比较，模型组小鼠造血组织容量有极显著降低(P<0.01)；与模型组比较，组合物1～9组小鼠造血组织容量均有显著升高(P<0.05)，其中，组合物6组有极显著升高(P<0.01)；与地榆鞣质、黄芪多糖组比较，组合物1～9组造造血组织容量均有升高趋势，组合物6组小鼠造血组织容量均有显著升高(P<0.05)。

[0085] 3实验结论

[0086] (1)黄芪多糖与地榆鞣质9种比例配伍对环磷酰胺所致小鼠骨髓抑制均具有良好的治疗作用，且各种比例配伍的治疗效果均优于黄芪多糖和地榆鞣质单用。

[0087] (2)黄芪配伍地榆治疗骨髓抑制的最佳比例为52mg:27mg。