一种控制二氢杨梅素消旋率的方法

摘要

本发明属于化学/天然产物领域，公开了一种控制二氢杨梅素消旋率的方法，通过控制金属离子浓度实现，尤其是过渡金属离子。通过降低金属离子浓度可以降低二氢杨梅素消旋化作用；通过提高金属离子浓度可以促进二氢杨梅素消旋化作用。通过进一步控制温度和pH值，可以更好地控制消旋作用，从而在提取分离过程中获得光学纯的二氢杨梅素。其操作简便、安全、高效、经济，可形成规模化制备光学纯的右旋二氢杨梅素。

权利要求

1.一种控制二氢杨梅素消旋率的方法，其特征在于通过控制过渡金属离子浓度、pH和温度实现；

其中，阻止二氢杨梅素消旋化的方法为：通过将金属离子浓度降低至低于5×10-4mol/L，使温度降低至50℃以下，pH值为4-7来阻止二氢杨梅素消旋；

或者，促进二氢杨梅素消旋化的方法为：通过将金属离子浓度提高至高于5×10-4mol/L，使温度提高至95℃以上，pH值为8-11来促进二氢杨梅素消旋化。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于该方法是一种在提取过程中控制二氢杨梅素消旋的方法，从而得到不同消旋率的产物。

3.一种阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，其特征在于，所采用的提取溶剂金属离子含量低于5×10-4mol/L；

所述的提取溶剂为水、醇、酯、酮、醚中的一种或几种的混合物；

提取温度控制在50℃以下，pH值控制在4-7；

所述的水的导电率不高于10μs/cm。

4.如权利要求3所述的阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，其特征在于，所述的提取溶剂中不含金属离子。

5.如权利要求3所述的阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，其特征在于，所述的提取温度不低于35℃。

6.如权利要求3所述的阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，其特征在于，所述的提取温度为35～45℃。

7.如权利要求3所述的阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，其特征在于，所述的pH值为4～5。

说明书

一种控制二氢杨梅素消旋率的方法

技术领域

[0001] 本发明属于化学/天然产物领域，涉及一种控制二氢杨梅素消旋率的方法，尤其涉及一种在提取过程中控制二氢杨梅素消旋率的方法。

背景技术

[0002] 二氢杨梅素(dihydromyricelin)，又称蛇葡萄素(ampelopsin)，首先由Kotake和Kubota于1940年从蛇葡萄属植物楝叶玉葡萄(Ampelopsis meliaefolia)的叶中分离得到，是一种二氢黄酮醇类黄酮化合物，化学结构为3,5,7,3',4',5'-六羟基-2,3-双氢黄酮醇。二氢杨梅素广泛存在于蛇葡萄科蛇葡萄属植物中，也存在于杨梅科、杜鹃科、藤黄科、大戟科、橄榄科、豆科、山榄科及柳科等科植物中，在医药、保健、食品、畜牧、饲料等多个领域具有重要的应用价值。现代药理研究证明，二氢杨梅素具有抗氧化、抗肿瘤、抗炎、镇痛、降压、降糖、降脂、抑制体外血小板聚集和体内血栓的形成、解酒保肝、抗病原微生物及提高免疫力等多方面的作用，充分开发利用二氢杨梅素具有十分重要的实际意义。

[0003] 二氢杨梅素结构如式I所示。

[0004]

[0005] 二氢杨梅素为类白色针状结晶，mp 245-246℃，pKa 6.84。易溶于热水、热乙醇及丙酮，溶于乙醇、甲醇，极微溶于乙酸乙酯，不溶于氯仿、石油醚。21℃下在水、0.1mol/L HCl、生理盐水和pH6.86磷酸盐缓冲液中的溶解度分别为551.41、739.94、882.16和1433.64μg/mL，碱性溶液中溶解度较大。油/水分配系数约为11.5，脂溶性较强(海峡药学,2007,19(6):69-70)。二氢杨梅素的分子中含有6个酚羟基和2-、3-位的两个手性中心，因此稳定性较差，且存在左旋和右旋对映异构体。

[0006] 二氢杨梅素一般是从葡萄科蛇葡萄属植物(如粤蛇葡萄、栋叶蛇葡萄、显齿蛇葡萄、大叶蛇葡萄、东北蛇葡萄、白蔹、山葡萄等)中提取，主要方法包括传统提取方法(浸泡、煎煮、回流提取)、微波提取法、超声波提取法、逆流提取法和超临界流体萃取法。

[0007] 传统提取方法多采用热水、热有机溶剂或两者的混合溶液作为提取剂，在50～100℃的温度下浸提、煎煮或加热回流提取1～3小时，减压过滤，得二氢杨梅素的粗提液，干燥粗提液，得二氢杨梅素粗产物，再对其进行提纯和精制。乙醇等有机溶剂的提取效果略优于热水，提取次数对最终提取率有明显影响。采用传统提取法的优点在于可以节省成本，同时较为适合工业化大生产(00117225.5；01114564.1；99119123.4；200710053387.7；200910066518.4；201110093346.7；201110123491.5；201110458347.7；201210401620.7；
201010284838.X；中国兽药杂志,2010,44(12):23-24；华中农业大学学报,2009,28(1):
106-110；食品研究与开发,2011,32(10):183-186；食品科技,2011,36(6):230-233；江西食品工业,2011,(2):33-36；现代食品科技,2009,25(8):907-910；中国现代应用药学,2000,
17(3):196-197；广东化工,2006,33(10):5-9；漳州师范学院学报(自然科学版),1999,12(2):62-64；安徽农业科学,2011,39(32):133-135；天然产物研究与开发,2002,14(4):38-
41；陈玉琼,华中农业大学,2006；易海燕,湖南中医药大学,2011)。

[0008] 将蛇葡萄属植物原料在溶剂中浸泡后进行微波辐射处理，50～100℃提取，趁热过滤。冷却滤液，二氢杨梅素即沉淀在滤液容器的底部和四周，过滤干燥，即得二氢杨梅素粗产物。但是普通微波系统提取藤茶中的黄酮类化合物的提取率略低，且因为普通的微波间歇系统不方便控制如温度、功率等参数，从而可能影响有效成分的保护及提取率(200410027782.4；200510032918.5；天然产物研究与开发,2006,17(5):636-638；食品科技,2007,(9):103-108；广州化工,2005,33(2):12-15；广州化工,2007,35(1):1-4；广州大学学报(自然科学版),2007,6(6):26-31)。

[0009] 超声波提取法是一个很好的从植物中提取二氢杨梅素的方法，较为省时省溶剂，提取率较高，适用范围广，易实现自动控制。采用70％的乙醇溶液作为提取剂，单级提取3次，仅20分钟藤茶总黄酮的提取率就可达35.68％(山地农业生物学报,2010,29(5):440-444)。乙醇浸泡30分钟后再超声提取30分钟，二氢杨梅素的得率25.36％(中华中医药学刊,
2011,29(10):2312-2314)。

[0010] 基于二氢杨梅素在热水和冷水中溶解度具有显著差异的特点，以100℃水作为提取剂，辅以弱碱性条件(pH8～9)，逆流提取二氢杨梅素，效果优于3次单级提取的效果(Food Science,2004,25(11):192-194)。逆流提取法提取二氢杨梅素具有降低能耗、环保节水、节约成本的优点，还可提高安全性(Journal of Hubei Institute for Nationalities(Natural Science Edition),2008,26(3):277-281)。利用微波穿透力强的加热方式，与逆流提取法协同可使料液浓度扩散更快，进而提高料液的浸出速度，因此逆流提取法也常与微波提取法结合使用(201010149014.1；201210229991.1；化工学报,2006,57(2):376-379)。

[0011] 超临界流体萃取法对有机物溶解能力更强，选择性更好，而且可在接近室温下完成整个分离操作。沈露在5L规模的超临界流体萃取藤茶实验中得到得率为84.3％、纯度为85.5％的二氢杨梅素(沈露,天津科技大学,2006)。但超临界流体萃取法设备投入成本高、规模化困难，目前多用于实验室研究，工业化生产较少。

[0012] 然而，在二氢杨梅素消旋化方面，目前的研究仍十分有限，尤其是在二氢杨梅素提取过程的消旋化研究方面几乎为零。上述已公开的二氢杨梅素提取方法中均未考虑产物的构型问题，既没有在提取过程中监测和/或控制二氢杨梅素的光学纯度，也没有对产物进行拆分鉴别或采用单晶X射线衍射、圆二色光谱等方法证明其立体构型，甚至没有对提取的二氢杨梅素光学纯度进行表征。部分文献在未做证明的情况下默认其构型为(2R,3R)，但是也有文献认为二氢杨梅素水溶液或乙醇水溶液中冷却结晶析出为消旋产物(Process Biochemistry,2006,41(3):567-570；Acta Crystallographica Section E:Structure Reports Online,2007,63(11):4384；Journal of Chromatography A,2002,973(1):217-220)。

[0013] 而实际上，同一化合物的对映异构体之间在生理活性、毒性、体内分布及代谢等方面均可能存在差异，如左氧氟沙星体外抗菌活性为右旋体的8～128倍；(S,S)-乙胺丁醇能治疗肺结核，但(R,R)-异构体则可导致失明。因而光学纯度化合物的制备、或化合物消旋率的控制，成为现代化学/医药领域的重要课题。

发明内容

[0014] 本发明的目的之一在于提供一种控制二氢杨梅素消旋率的方法。

[0015] 本发明的目的之二在于提供一种在提取过程中控制二氢杨梅素消旋率的方法。

[0016] 本发明的目的之三在于提供一种阻止二氢杨梅素消旋的提取方法。

[0017] 本发明的目的之四在于提供一种制备光学纯二氢杨梅素的方法。

[0018] 本发明的目的之五在于提供一种右旋二氢杨梅素。

[0019] 发明通过以下技术方案实现：

[0020] 本发明首次提供了一种控制二氢杨梅素消旋率的方法。

[0021] 该方法通过控制金属离子浓度，从而控制二氢杨梅素的消旋率。

[0022] 目前对化合物的消旋化研究表明，不同化合物旋光性变化受理化环境影响的敏感性不同。且在多种理化环境中，呈现不同的消旋率变化趋势。例如，α-对位取代苯基异戊酸的消旋化研究发现其在碱性条件下可发生消旋反应，随着反应温度升高，消旋反应加快，而且消旋率的对数值与温度呈线性关系。对S-沙丁胺醇的消旋化研究发现，在1mol/L硫酸溶液，80～90℃条件下，S-沙丁胺醇被外消旋化。

[0023] 而发明人首次发现，二氢杨梅素的消旋化受到金属离子浓度的显著影响。

[0024] 过渡金属离子是导致二氢杨梅素消旋的重要因素。水中存在的过渡金属离子是导致消旋的重要因素。

[0025] 水质对二氢杨梅素提取产物的光学纯度影响显著。使用自来水或矿泉水提取，产物中很容易出现两个对映异构体(图1)。

[0026] 通过降低金属离子浓度可以降低二氢杨梅素消旋化作用；通过提高金属离子浓度可以促进二氢杨梅素消旋化作用。

[0027] 优选地，所述的降低金属离子浓度是将金属离子浓度降低至低于5×10-4mol/L；所述的提高金属离子浓度是指将金属离子浓度提高至高于5×10-4mol/L。

[0028] 或者优选地，所述的降低金属离子浓度是将溶剂的导电率控制在不高于100μs/cm，优选不高于10μs/cm。

[0029] 本发明尤其提供了一种在提取过程中控制二氢杨梅素消旋率的方法。

[0030] 在本发明之前，未见文献对提取过程中二氢杨梅素的光学纯度进行研究。但是我们发现，不同提取条件下制备的二氢杨梅素的比旋度存在显著差异。

[0031] 在以蛇葡萄属植物为原料提取二氢杨梅素的研究中发现，二氢杨梅素的消旋率受到金属离子及提取温度的显著影响。

[0032] 在水中加入少量Fe3+后提取藤茶中的二氢杨梅素，30分钟和60分钟取少量提取液稀释后注入HPLC仪检测，提取产物的光学纯度分别为58.7％和38.3％(图2)。随着提取时间的延长，左旋二氢杨梅素的含量大大增加，产物逐渐消旋化。

[0033] 温度也对二氢杨梅素提取过程的消旋化具有重要影响。高温可导致二氢杨梅素消旋。

[0034] 为了考察温度对二氢杨梅素光学纯度的影响，取藤茶茎叶适量，选择不同的提取溶剂和温度进行试验。提取0.5～2小时后，取提取液少量，稀释约50倍后滤过，取续滤液注入HPLC仪检测。结果显示，随着温度的升高，二氢杨梅素的光学纯度降低(表1，图3)。

[0035] 表1.温度对二氢杨梅素光学纯度的影响

[0036]

[0037] 相比之下，光照、酸和氧化剂对二氢杨梅素光学异构体的含量影响则不大。

[0038] 在使用纯化水提取二氢杨梅素的试验中，不采用任何避光措施，加入稀硫酸调节pH为4～7，或加入次氯酸钠调节水中余氯含量为0.6～0.8mg/L(与自来水中余氯含量相同)，控制其他提取条件，仍然可以获得高光学纯度的右旋二氢杨梅素。取右旋二氢杨梅素水溶液三份，分别置于照度为4500±500lx的紫外光下、加入硫酸调节pH为4～5、或加入次氯酸钠调节水中余氯含量为0.6～0.8mg/L，50℃保温1小时后取样注入HPLC仪检测。酸性条件下二氢杨梅素稳定性较好，含量未见明显下降，也未出现左旋异构体。在光和氧化条件下二氢杨梅素降解明显，峰面积显著减小，但是也未出现左旋异构体。因此，光照、酸和氧化剂可能会对二氢杨梅素提取的提取收率造成影响，但是不是控制产物光学纯度的重要因素。

[0039] 碱能够造成二氢杨梅素消旋。

[0040] 在纯化水中加入NaOH调节pH为8～11后提取藤茶中的二氢杨梅素，60分钟和120分钟取少量提取液稀释后注入HPLC仪检测，提取产物的光学纯度分别为51.6％和37.3％(图4)。随着提取时间的延长，左旋二氢杨梅素的含量增加，产物的光学纯度降低。

[0041] 上述对多种理化环境因素的研究表明，二氢杨梅素的消旋化对离子、特别是过渡金属离子尤其敏感因此，控制二氢杨梅素的消旋率，可以通过控制金属离子浓度实现，尤其是过渡金属离子浓度。

[0042] 同时二氢杨梅素的消旋化对温度也较为敏感，可通过进一步控制温度来控制消旋化。通过降低温度来阻止二氢杨梅素消旋化；或者通过提高温度来促进二氢杨梅素消旋化。

[0043] 优选地，通过同时控制金属离子浓度及温度来实现。

[0044] 进一步优选地，同时控制pH值。通过使环境pH值偏向碱性促进二氢杨梅素消旋；通过使环境pH值偏向酸性阻止二氢杨梅素消旋。

[0045] 在提取二氢杨梅素的过程中，尤其是从蛇葡萄属植物为原料提取二氢杨梅素的过程中，通过控制金属离子浓度和/或温度，更优选地进一步控制pH值，可以控制二氢杨梅素的消旋率，从而获得不同光学纯的提取物。

[0046] 进一步地，本发明提供了一种阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，以及，一种获得光学纯二氢杨梅素的方法。

[0047] 发明人对目前市售的二氢杨梅素进行了检测，发现均不是光学纯的产品，甚至部分样品为消旋体(图5)。事实上，无论是购买的二氢杨梅素还是按照目前公开的方法制备的二氢杨梅素，均存在消旋的现象，但并未见有文献重视提取过程中引起消旋的关键因素。

[0048] 表2.市售二氢杨梅素的光学纯度分析结果

[0049]

[0050]

[0051] 可见，由于目前对于二氢杨梅素提取/制备过程消旋率几乎没有控制手段，导致光学纯二氢杨梅素的匮乏。

[0052] 本发明提供了一种阻止二氢杨梅素消旋的提取方法，该方法是在提取过程中保证提取溶剂不含金属离子或使金属离子含量限定在极低的范围以内，例如，在5×10-4mol/L以内。所述的溶剂可以是水、醇、酯、酮、醚等强极性溶剂中的一种或几种的混合物。若含水，则水的电导率应不高于100μs/cm，优选不高于10μs/cm；例如为0.05～100μs/cm，优选0.05～10μs/cm。

[0053] 进一步地，控制提取过程中的温度低于50℃。优选地，控制温度为35～45℃。

[0054] 进一步地，控制pH值小于7；优选地，为4～5。

[0055] 更进一步地讲，本发明所述的获得光学纯的右旋二氢杨梅素的提取方法，是以控制提取过程中的温度、pH和离子浓度为主要特征。这里所说的控制提取温度是指提取时温度不能超过49℃，优选35～45℃；提取条件不能为碱性，优选pH4～5。这里所说的控制离子浓度是指提取环境中尽量少地存在或不存在金属离子，因此在提取和纯化过程中若使用到水，则水电导率应不高于100μs/cm，优选不高于10μs/cm；例如，为0.05～100μs/cm，或优选0.05～10μs/cm。

[0056] 作为一种示例性实施方式，本发明提供的一种光学纯的右旋二氢杨梅素的分离提取方法包括以下的步骤：

[0057] (1)称取一定量的蛇葡萄属植物茎叶，加入乙醇-水溶液(去离子水)。

[0058] (2)在低于50℃的温度下搅拌或超声提取30～60分钟，得到提取液，滤过。

[0059] (3)滤液于35～50℃水浴旋转蒸发至无醇，调节pH为4～7，加入热去离子水使固体完全溶解，得二氢杨梅素粗品溶液。

[0060] (4)对二氢杨梅素粗品进行精制纯化。

[0061] 在本发明的一个优选实施方案中，采用如下步骤进行分离提取：

[0062] (1)称取一定量的蛇葡萄属植物茎叶，加入75％乙醇，原料与75％乙醇的料液比为1:5～1:10。

[0063] (2)在低于50℃的温度下搅拌或超声提取30分钟，得到提取液，滤过。

[0064] (3)滤液于35～50℃水浴旋转蒸发至无醇，调节pH为4～7，加入热去离子水使固体完全溶解，得二氢杨梅素粗品溶液。

[0065] (4)选用活性炭吸附脱色、多次重结晶、色谱分离等方法，对二氢杨梅素粗品进行精制纯化。

[0066] 通过本发明的提取方法，可以获得光学纯的右旋二氢杨梅素。该提取产物的光学纯度可高达到98％以上，这是一种目前市场上为空白的产品，是由本发明首次制备获得并提供的产品。

[0067] 因此，本发明同时提供了一种右旋二氢杨梅素，其光学纯度为60％以上；优选地，所述产品的光学纯度为80％以上；更优选地，为85％以上；进一步优选地，为95％以上。

[0068] 上述方法适用于以蛇葡萄属植物为原料提取分离光学纯的右旋二氢杨梅素，其操作简便、安全、高效、经济，易于形成规模化制备光学纯的右旋二氢杨梅素。

[0069] 结合表1和表2来看，表1所采用的提取方法中，提取温度和提取溶剂的类型，和现有技术所公开的并没有太大的差异，例如，高温下采用水进行提取，唯一不同的是，本发明所采用的溶剂是尤其去除了金属离子的溶剂，其获得的产物光学纯度达到78.2～94.8％。然而，市面上可获得的任何二氢杨梅素产品，其光学纯度均在60％以下。究其原因，很可能是因为目前的二氢杨梅素提取和生产方法中，均没有对离子浓度进行控制，从而导致无法获得较高的光学纯度的产品。这一点长期以来被生产者和研究者所忽略。

[0070] 发明人通过分别以纯水，以及添加了少量Fe3+(2.5×10-3mol/L)后的纯水作为提取溶剂，发现少量的金属离子存在，即显著地降低了产品的光学纯度(经过30分钟的提取，光学纯度从100％降低至58.7％)。这验证了金属离子浓度这一长期被忽略的因素，是影响二氢杨梅素消旋率的最重要的因素。

附图说明

[0071] 图1是不同水质条件下二氢杨梅素提取产物中对映异构体的含量，其中A为自来水提取；B为矿泉水提取。

[0072] 图2是使用含Fe3+的水提取的二氢杨梅素中对映异构体的含量，其中A为提取30分钟后取样检测的结果；B为提取60分钟后取样检测的结果。

[0073] 图3是不同温度下二氢杨梅素提取产物中对映异构体的含量，其中A为95～100℃的沸水煎煮提取；B为70～90℃热水浸提；C为60～80℃的乙醇回流提取；D为乙醇溶液在常温或稍加热的条件下(20～50℃)提取。

[0074] 图4是使用pH为8～11的纯化水提取的二氢杨梅素中对映异构体的含量，其中A为提取60分钟后取样检测的结果；B为提取120分钟后取样检测的结果。

[0075] 图5是市售和提取的二氢杨梅素样品光学纯度测定结果。A～G分别为贵州苗药生物科技有限公司、长沙华康生物技术开发有限公司、湖北康宝泰精细化工有限公司、张家界至诚生物有限公司、宁波德康生物制品有限公司、上海晶纯生化科技股份有限公司(阿拉丁)、美国Sigma-Aldrich公司产品。

[0076] 图6是本研究中建立的RP-HPLC测定二氢杨梅素对映异构体的方法。A为消旋二氢杨梅素的色谱图，(-)-二氢杨梅素在前(峰1)，(+)-二氢杨梅素在后(峰2)；B和C则分别为左旋与右旋二氢杨梅素的色谱图。

[0077] 图7是二氢杨梅素的圆二色谱图。A为空白溶液的圆二色谱图，B为消旋二氢杨梅素的圆二色谱图，C为右旋二氢杨梅素的圆二色谱图。

[0078] 图8是二极管阵列检测器对消旋二氢杨梅素中的两个峰的光谱扫描结果。A是峰1的光谱图，B是峰2的光谱图。

[0079] 图9是考察手性添加剂对色谱分离效果的影响结果。A为流动相中没有加入手性添加剂的色谱图，B为流动相中加入了手性添加剂的色谱图，其他色谱条件保持不变。

[0080] 图10是加样回收试验。A为消旋二氢杨梅素的色谱图，B为右旋二氢杨梅素的色谱图，C为在消旋二氢杨梅素中加入右旋二氢杨梅素的色谱图。

具体实施方式

[0081] 以下是对本发明实质内容的进一步说明，本发明不受此限制，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

[0082] 实施例1  RP-HPLC测定二氢杨梅素的光学纯度方法的构建和验证

[0083] 本发明研究建立了一种二氢杨梅素对映体的手性流动相添加剂RP-HPLC法拆分方法，对提取过程中二氢杨梅素的光学纯度进行检测。该方法以手性添加剂加入有机相与水相组成的色谱流动相系统，能有效的分离二氢杨梅素的对映异构体。

[0084] 仪器与条件：Waters e2695高效液相色谱仪(配Waters 2998光电二极管阵列检测器)，十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇:β-环糊精溶液(取β-环糊精18g，磷酸10ml，加水1000ml溶解)10:90为流动相；流速为每分钟0.8ml；柱温为30℃；紫外检测波长为290nm(二极管阵列检测器扫描范围为210～400nm)。

[0085] 实施步骤：取消旋二氢杨梅素对照品(购自阿拉丁试剂(上海)有限公司，批号36805，纯度>98％)适量，精密称定，用适量甲醇溶解制成每1ml中约含50μg的溶液，作为对照品溶液。取右旋二氢杨梅素样品适量，精密称定，用适量甲醇溶解制成每1ml中约含50μg的溶液，作为供试品溶液。

[0086] 取对照品溶液10μl，注入液相色谱仪，出峰顺序为(-)-对映体在前，(+)-对映体在后，对映体之间的分离度大于l.5。理论板数按(+)-对映体峰计算应不低于1000。记录的色谱图中对映体前峰与后峰的面积比应为0.9～1.1(图6)。取供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，(+)-对映体峰的面积应占总峰面积的98％以上。

[0087] 方法验证：二氢杨梅素消旋对照品和右旋供试品在HPLC测定前均用旋光仪和圆二色谱仪进行了表征，比旋度分别为0°和+32.46°，圆二色谱图如图7所示。消旋对照品的色谱图中，两个峰的光谱图完全吻合(图8)；去掉流动相中的手性添加剂，保持其他条件不变，获得的二氢杨梅素色谱图中则仅出现一个峰，峰面积为(-)-对映体和(+)-对映体两峰面积之和(图9)；加样回收试验中，加入的右旋二氢杨梅素与消旋二氢杨梅素中(+)-对映体的出峰时间完全一致(图10)。各结果表明，本色谱条件下分离出来的两个色谱峰分别为二氢杨梅素的两个对映异构体。本方法专属性好，提取溶剂等不干扰测定；平行制备6份样品，两对映体峰面积的RSD分别为1.41％和1.65％，重复性良好；高、中、低3种浓度样品的平均加样回收率(n＝9)分别为101.21±1.05％和101.64±1.28％，准确度较好。因此，本方法能有效的分离检测二氢杨梅素的对映异构体。

[0088] 实施例2  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0089] 取藤茶茎叶，加入5倍量的75％乙醇(盐酸调节pH至6.1)，超声30分钟，滤过，滤液置50℃水浴旋转蒸发至无醇，加沸水(电导率为4.2μs/cm)混匀，放冷析晶，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为98.2％。

[0090] 实施例3  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0091] 取藤茶茎叶，加入10倍量的95％乙醇(用盐酸调节pH至4.6)，超声60分钟，滤过，滤液置40℃水浴旋转蒸发至无醇，加沸水(水电导率为2.7μs/cm)混匀，放冷析晶，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为99.6％。

[0092] 实施例4  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0093] 取藤茶茎叶，加入8倍量的75％乙醇(用盐酸调节pH至5.5)，超声45分钟，滤过，滤液置35℃水浴旋转蒸发至无醇，加沸水(水电导率为1.0μs/cm)混匀，放冷析晶，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为99.4％。

[0094] 以上具体实施方案均能够获得98％以上的右旋二氢杨梅素，有效成分含量高，质量稳定，可用于高纯度二氢杨梅素的规模化生产。

[0095] 实施例5  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0096] 取藤茶茎叶，加入10倍量的矿泉水(电导率大于100μs/cm)，超声30分钟，滤过，滤液置50℃水浴旋转蒸干，加沸水混匀，放冷析晶，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为82.4％。

[0097] 实施例6  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0098] 取藤茶茎叶，加入10倍量的水(电导率为1.2μs/cm)，煮沸60分钟，趁热滤过，放冷析晶。取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为78.2％。

[0099] 实施例7  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0100] 取藤茶茎叶，加入10倍量的水(电导率为1.5μs/cm)，在70～90℃的水中浸提30分钟，趁热滤过；滤渣再加入8倍量的水，继续浸提30分钟，趁热滤过；合并两次滤液，放冷析晶。取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为92.1％。

[0101] 实施例8  从藤茶中提取二氢杨梅素

[0102] 取藤茶茎叶，加入5倍量的无水乙醇，60～80℃水浴回流提取60分钟，滤过，滤液置35℃水浴旋转蒸发至无醇，加沸水(水电导率为2.0μs/cm)混匀，放冷析晶，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，趁热抽滤，滤液放冷析晶，反复多次，待析出晶体为浅黄色时，取晶体加沸水溶解，活性炭吸附，滤过，滤液趁热用石油醚萃取，水层放冷析晶，得到白色晶体，滤过，干燥，即得。经检测，产品的光学纯度(ee％)为94.8％。