3‑[5‑(1,2,4‑三唑‑1‑基)噻唑‑2‑基]苯并噁嗪及其制备方法与应用转让专利
申请号 : CN201510114707.X
文献号 : CN104725368B
文献日 : 2017-08-29
发明人 : 叶姣 , 元科阳 , 谢选青 , 胡艾希 , 丁娜 , 向建南
申请人 : 湖南大学
摘要 :
本发明涉及化学结构式Ⅰ所示的3‑[5‑(1,2,4‑三唑‑1‑基)噻唑‑2‑基]苯并噁嗪或其盐：式中R、R1选自：C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X2、X4选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。3‑[5‑(1,2,4‑三唑‑1‑基)噻唑‑2‑基]苯并噁嗪或其盐在制备抗癌药物中的应用。
权利要求 :
1.化学结构式Ⅰ所示的3-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪：其中，R＝t-Bu；R1＝H；X1＝H，Cl，Br或I；X2＝X4＝H；X3＝H，Cl，Br，I或NO2。
2.权利要求1所述的3-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪选自下列化合物：
3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6，8-二氯-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-溴-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-
5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6，8-二溴-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪或3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6，8-二碘-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪。
3.权利要求1所述的3-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪的制备方法；其特征在于它的制备反应如下：式中R、R1、X1～X4的定义如权利要求1所述。
4.权利要求1或2所述的3-[5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪在制备抗人宫颈癌细胞药物、抗人肺腺癌细胞药物或抗人乳腺癌细胞药物中的应用。
5.3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-溴-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪或3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-碘-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪在制备抗人宫颈癌细胞药物或抗人肺腺癌细胞药物中的应用。
说明书 :
3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪及其制备方法
与应用
技术领域
[0001] 本发明涉及新化合物3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪及其制备方法与应用。
背景技术
[0002] 唐子龙等描述了苯并噁嗪类化合物的制备与杀菌活性[Synthesis and Fungicidal Activity of Novel 2,3-Disubstituted-1,3-benzoxazines.Molecules,
2012,17,8174-8185]，杀菌活性见表1。
2012,17,8174-8185]，杀菌活性见表1。
[0003] 表1 苯并噁嗪类化合物的杀菌活性抑制率(％)
[0004]
[0005] Chylińska等描述了二氢-1,3-噁嗪衍生物的制备及抗癌活性[Dihydro-1,3-oxazine Derivatives and their Antitumor Activity.J.Med.Chem,1963,9,484-487]，见表2。
[0006] 表2 二氢-1,3-噁嗪衍生物对埃利希氏腹水癌的体外抑制活性
[0007]
发明内容
[0008] 本发明的目的在于提供了化学结构如式Ⅰ所示的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪或其盐：
[0009]
[0010] 式中R、R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X2选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐；3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪的化学名为3-[4-烷基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪。
[0011] 本发明的目的在于提供了化学结构如式Ⅱ所示的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪或其盐：
[0012]
[0013] 式中R选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X2选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、4
氟、氯、溴、碘或硝基；X 选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
氟、氯、溴、碘或硝基；X 选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
[0014] 本发明的目的在于提供了化学结构如式Ⅲ所示的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪或其盐：
[0015]
[0016] 式中X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X2选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
[0017] 本发明的目的在于提供了化学结构如式Ⅳ所示的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪或其盐：
[0018]
[0019] 式中X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；3 4
X选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X选自：
氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
X选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X选自：
氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
[0020] 本发明的目的在于提供了化学结构如式Ⅴ所示的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪或其盐：
[0021]
[0022] 式中X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；其盐选自：盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、苹果酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、马来酸盐或富马酸盐。
[0023] 本发明的目的在于提供的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪选自下列化合物：3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-氯-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6，8-二氯-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-溴-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6，8-二溴-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-溴-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪、3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-碘-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪或3-[4-叔丁基-5-(1，2，4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6，8-二碘-3，4-二氢-2H-苯并[1，3]噁嗪；其结构式分别为下：
[0024]
[0025] 本发明的目的在于提供3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪的制备方法：其特征在于它的制备反应如下：
[0026]
[0027] 式中R、R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X2选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、4
氟、氯、溴、碘或硝基；X选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基。
氟、氯、溴、碘或硝基；X选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基。
[0028] 本发明的目的在于提供的3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪具有抗肿瘤活性，可用于制备抗肿瘤药物。
具体实施方式
[0029] 以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。
[0030] 实施例1
[0031] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0032]
[0033] 0.33g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.31g，收率91％，熔点99～101℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.12(s，9H，3×CH3)，4.78(s，2H，4-CH2)，5.46(s，2H，2-CH2)，6.92(d,J＝7.2Hz,1H,C6H4),7.00(t，J＝7.2Hz,1H,C6H4)，7.11(d，J＝7.2Hz,1H,C6H4)，7.20(t，J＝7.2Hz,1H,C6H4)，8.10(s，1H，C2N3H23-H)，8.27(s，1H，C2N3H25-H)。
[0034] 实施例2
[0035] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-氯-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0036]
[0037] 0.36g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-氯苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×
2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻
1
唑-2-基]-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.28g，收率75％，熔点130～133℃；H NMR(CDCl3，
400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.77(s，2H，4-CH2)，5.42(s，2H，2-CH2)，6.85(d，J＝8.7Hz，
1H，C6H3)，7.11(d，J＝2.5Hz，1H，C6H3)，7.15(dd，J＝2.5，8.7Hz，1H，C6H3)，8.08(s，1H，C2N3H23-H)，8.24(s，1H，C2N3H25-H)。
2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻
1
唑-2-基]-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.28g，收率75％，熔点130～133℃；H NMR(CDCl3，
400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.77(s，2H，4-CH2)，5.42(s，2H，2-CH2)，6.85(d，J＝8.7Hz，
1H，C6H3)，7.11(d，J＝2.5Hz，1H，C6H3)，7.15(dd，J＝2.5，8.7Hz，1H，C6H3)，8.08(s，1H，C2N3H23-H)，8.24(s，1H，C2N3H25-H)。
[0038] 实施例3
[0039] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6,8-二氯-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0040]
[0041] 0.40g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3,5-二氯苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-
1-基)噻唑-2-基]-6,8-二氯-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.36g，收率88％，熔点142～144℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.80(s，2H，4-CH2)，5.51(s，2H，2-CH2)，
7.03(d，J＝2.0Hz，1H，C6H2)，7.28(d，J＝2.0Hz，1H，C6H2)，8.08(s，1H，C2N3H23-H)，8.24(s，
1H，C2N3H25-H)。
1-基)噻唑-2-基]-6,8-二氯-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.36g，收率88％，熔点142～144℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.80(s，2H，4-CH2)，5.51(s，2H，2-CH2)，
7.03(d，J＝2.0Hz，1H，C6H2)，7.28(d，J＝2.0Hz，1H，C6H2)，8.08(s，1H，C2N3H23-H)，8.24(s，
1H，C2N3H25-H)。
[0042] 实施例4
[0043] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0044]
[0045] 0.41g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-溴苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×
2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.23g，收率55％，熔点130～132℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.77(s，2H，4-CH2)，5.42(s，2H，2-CH2)，6.79(d，J＝
8.8Hz，1H，C6H3)，7.21-7.32(m，2H，C6H3)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.25(s，1H，C2N3H25-H)。
2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.23g，收率55％，熔点130～132℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.77(s，2H，4-CH2)，5.42(s，2H，2-CH2)，6.79(d，J＝
8.8Hz，1H，C6H3)，7.21-7.32(m，2H，C6H3)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.25(s，1H，C2N3H25-H)。
[0046] 实施例5
[0047] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6,8-二溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0048]
[0049] 0.49g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3,5-二溴苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到白色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-
1-基)噻唑-2-基]-6,8-二溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.33g，收率66％，熔点148～150℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.80(s，2H，4-CH2)，5.51(s，2H，2-CH2)，
7.22(d，J＝2.2Hz，1H，C6H2)，7.58(d，J＝2.2Hz，1H，C6H2)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.26(s，
1H，C2N3H25-H)。
1-基)噻唑-2-基]-6,8-二溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.33g，收率66％，熔点148～150℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.80(s，2H，4-CH2)，5.51(s，2H，2-CH2)，
7.22(d，J＝2.2Hz，1H，C6H2)，7.58(d，J＝2.2Hz，1H，C6H2)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.26(s，
1H，C2N3H25-H)。
[0050] 实施例6
[0051] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6,8-二碘-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0052]
[0053] 0.58g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3,5-二碘苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到浅黄色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6,8-二碘-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.40g，收率67％，熔点167～
169℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.12(s，9H，3×CH3)，4.75(s，2H，4-CH2)，5.49(s，2H，2-CH2)，7.40(d，J＝1.6Hz，1H，C6H2)，7.95(d，J＝1.6Hz，1H，C6H2)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.26(s，1H，C2N3H25-H)。
169℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.12(s，9H，3×CH3)，4.75(s，2H，4-CH2)，5.49(s，2H，2-CH2)，7.40(d，J＝1.6Hz，1H，C6H2)，7.95(d，J＝1.6Hz，1H，C6H2)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.26(s，1H，C2N3H25-H)。
[0054] 实施例7
[0055] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0056]
[0057] 0.37g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-5-硝基苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×
2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到黄色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.22g，收率52％，熔点132～135℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.89(s，2H，4-CH2)，5.54(s，2H，2-CH2)，7.00(d，J＝
8.4Hz，1H，C6H3)，8.08～8.10(m，3H，C2N3H2，C6H3)，8.23(s，1H，C2N3H25-H)。
2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到黄色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.22g，收率52％，熔点132～135℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.89(s，2H，4-CH2)，5.54(s，2H，2-CH2)，7.00(d，J＝
8.4Hz，1H，C6H3)，8.08～8.10(m，3H，C2N3H2，C6H3)，8.23(s，1H，C2N3H25-H)。
[0058] 实施例8
[0059] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0060]
[0061] 0.45g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3-溴-5-硝基苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到黄色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-
1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.39g，收率85％，熔点188～
191℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.93(s，2H，4-CH2)，5.63(s，2H，2-CH2)，8.05(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)，8.11(s，1H，C2N3H23-H)，8.29(s，1H，C2N3H25-H)，8.38(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)。
1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-溴-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.39g，收率85％，熔点188～
191℃；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.93(s，2H，4-CH2)，5.63(s，2H，2-CH2)，8.05(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)，8.11(s，1H，C2N3H23-H)，8.29(s，1H，C2N3H25-H)，8.38(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)。
[0062] 实施例9
[0063] 3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-碘-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪的制备
[0064]
[0065] 0.50g(1mmol)4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-1-基)-2-(2-羟基-3-碘-5-硝基苄氨基)噻唑、1mL甲醛、0.07g(0.2mmol)SnCl4·5H2O和32mL混合溶剂(V氯仿︰V环己烷＝1︰7)，85℃回流反应，TLC监测至反应完全。冷却，旋蒸，加入30mL乙酸乙酯，三乙胺调pH＝8，20mL×2水洗，20mL×2盐洗，MgSO4干燥，旋蒸，柱色谱分离，得到黄色固体3-[4-叔丁基-5-(1,2,4-三唑-
1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-碘-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.46g，收率90％，熔点173～
1
176℃；H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.89(s，2H，4-CH2)，5.62(s，2H，2-CH2)，8.07(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.26(s，1H，C2N3H25-H)，8.57(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)。
1-基)噻唑-2-基]-6-硝基-8-碘-3,4-二氢-2H-苯并[1,3]噁嗪0.46g，收率90％，熔点173～
1
176℃；H NMR(CDCl3，400MHz)δ：1.11(s，9H，3×CH3)，4.89(s，2H，4-CH2)，5.62(s，2H，2-CH2)，8.07(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)，8.09(s，1H，C2N3H23-H)，8.26(s，1H，C2N3H25-H)，8.57(d，J＝2.6Hz，1H，C6H2)。
[0066] 实施例10
[0067] 3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪的抗肿瘤活性
[0068] 1.抗肿瘤活性原理
[0069] MTT法生物活性测试又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT分析法以活细胞代谢物还原剂噻唑蓝[3-(4，5-二甲基-2-噻唑)-2，5-二苯基溴化四氮唑；3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyl-tetrazolium bromide，MTT]为基础。MTT为黄色化合物，是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素C的作用下四氮唑环(tetrazolium)开裂，生成蓝色水不溶性的甲瓒(Formazan)结晶并沉积在细胞中，甲瓒结晶的生成量仅与活细胞数目成正比(死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将MTT还原)。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在570nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。
[0070] 2.抗肿瘤活性实验
[0071] 试样：3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪(Ⅰ)或其盐：
[0072]
[0073] 式中R、R1选自：氢、C1～C2烷基、C3～C4直链或C3～C4支链烷基；X1选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴或碘；X2选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基；X3选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基、氟、氯、溴、碘或硝基；X4选自：氢、氘、甲基、乙基、C3～C4直链烷基或C3～C4支链烷基。
[0074] 细胞系：宫颈癌细胞系Hela、人肺腺癌细胞A549和人乳腺癌细胞MCF-7(中南大学湘雅医学院细胞库提供)。
[0075] 试剂：噻唑蓝(MTT)、RPMI 1640培养液、新生牛血清、抗生素(美国英杰生命技术公司)；胰酶(美国AMRESCO公司)；96孔培养板(美国英杰生命技术公司)；二甲基亚砜(美国Sigma公司)。
[0076] 仪器：HFsafe-1500型超净工作台、HF151UV型CO2培养箱(上海力申科学仪器有限公司)；XSP-15C型倒置显微镜(上海长方光学仪器有限公司)；Multiskan MK3型酶标仪(美国Thermo公司)；超纯水制备仪(美国Milli-Q公司)。
[0077] 实验操作：试样对于hela细胞的测试。细胞的实验操作过程相同，一次实验过程中，每种试样设置5个浓度梯度，每个浓度四个平行试样，并通过空白组对照得出结论。
[0078] 1)倒掉长满癌细胞的培养瓶中的培养基，加入5mL PBS清洗，倒掉PBS，加入1mL胰酶，放入37℃、5％CO2培养箱。
[0079] 2)取出培养瓶，加入RPMI 1640培养基，用吸管反复吸打吹散细胞。
[0080] 3)细胞悬液接种于96孔培养板，第1孔不加细胞悬液，其余每板100μL(约10000个细胞)，放入37℃、5％CO2培养箱中培养中48小时。
[0081] 4)试样配置。用DMSO作为溶剂，配置浓度梯度为1.0μmol/mL、0.3μmol/mL、0.1μmol/mL、0.03μmol/mL、0.01μmol/mL的溶液。
[0082] 5)吸取每孔内的悬浮液，加入试样，放入37℃、5％CO2培养箱中培养中48小时。每组实验平行3次。
[0083] 6)取出上药48小时的96孔培养板，吸出每孔培养液，每孔120μL PBS清洗一次，加入每孔20μL 5mg/mLMTT液，放入37℃、5％CO2培养箱中培养中3～4小时。
[0084] 7)吸出孔内MTT后，加入每孔150μL DMSO液(包括第1空)，将培养板置于微孔板扳荡器上振荡，使结晶物溶解。
[0085] 8)酶标仪检测各孔OD值(检测波长570nm)。
[0086] 3.抗肿瘤活性评价
[0087] 1)细胞抑制率计算：
[0088] 细胞抑制率(％)＝(正常OD值－加药OD值)/正常OD值×100％
[0089] 2)IC50值计算
[0090] 试样浓度对数值与细胞抑制率线性回归，计算试样对细胞的半数抑制浓度IC50值。试样对于Hela细胞、A549细胞和MCF-7细胞的IC50见表3～5。
[0091] 表3 3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪对于Hela细胞的IC50
[0092]
[0093] 表4 3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪对于A549细胞的IC50
[0094]
[0095] 表5 3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪对于MCF-7细胞的IC50
[0096]
[0097]
[0098] 测试结果显示，3-[5-(1,2,4-三唑-1-基)噻唑-2-基]苯并噁嗪对于人宫颈癌细胞(Hela细胞)、人肺腺癌细胞(A549细胞)或人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)具有良好的抑制活性，可用于制备抗肿瘤药物。