茜素氨基膦酸酯衍生物及其合成方法和应用转让专利
申请号 : CN201310730928.0
文献号 : CN104744510B
文献日 : 2016-08-17
发明人 : 王恒山 , 潘英明 , 姚贵阳 , 叶鳗仪 , 黄日镇
申请人 : 广西师范大学
摘要 :
本发明公开了一系列茜素氨基膦酸酯衍生物及它们的合成方法和应用。所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法为：先以茜素和2-溴丙酸为原料，溶于极性溶剂中，在缚酸剂氢氧化钾存在的条件下反应得到2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸；再以2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸和α-氨基膦酸酯为原料，溶于极性溶剂中，在催化剂1-羟基苯并三唑和缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐存在的条件下反应至完全；向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，上硅胶柱层析纯化，即得。所述茜素氨基膦酸酯衍生物，其结构通式如下式(I)所示。
权利要求 :
1.茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，包括以下步骤：
1)以茜素和2-溴丙酸为原料，溶于极性溶剂中，在缚酸剂氢氧化钾存在的条件下反应至完全，向反应液中加入乙酸乙酯，水洗，收集水层，将水层调至酸性，有沉淀析出，过滤，收集沉淀，干燥，得到2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基)丙酸；
2)以2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基)丙酸和α-氨基膦酸酯为原料，溶于极性溶剂中，在催化剂1-羟基苯并三唑和缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐存在的条件下反应至完全；向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，上硅胶柱层析，用由体积比为1：4～100的乙酸乙酯和石油醚组成的混合溶剂洗脱，洗脱液蒸干溶剂，即得到相应的茜素氨基膦酸酯衍生物；
所述的茜素氨基膦酸酯衍生物的结构通式如下式(I)所示：其中，R为对溴苯基、邻溴苯基、间溴苯基、对氟苯基、邻氟苯基、对氯苯基、间氯苯基、邻氯苯基、间甲氧基苯基、邻甲氧基苯基、苯基、1-萘基、对甲氧基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、间氟苯基或2-萘基。
2.根据权利要求1所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：步骤2)中，所述的α-氨基膦酸酯为：α-O，O'二乙基氨基(4-溴苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(2-溴苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(3-溴苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(4-氟苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(2-氟苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(4-氯苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(3-氯苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(2-氯苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(3-甲氧基苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(2-甲氧基苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(1-萘基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(4-甲氧基苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(3-甲基苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(4-甲苯基)甲基膦酸二乙酯；
α-O，O'二乙基氨基(3-氟苯基)甲基膦酸二乙酯；或α-O，O'二乙基氨基(2-萘基)甲基膦酸二乙酯。
3.根据权利要求1所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：步骤1)和2)中，所述的极性溶剂为选自二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或任意两种以上的组合。
4.根据权利要求1～3中任一项所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：步骤1)中，所述缚酸剂氢氧化钾的加入量为茜素物质的量的3～5倍。
5.根据权利要求1～3中任一项所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：步骤1)中，所述反应的温度为低于50℃。
6.根据权利要求1～3中任一项所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：步骤2)中，所述催化剂1-羟基苯并三唑的加入量为2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-
2-基氧基)丙酸物质的量的0.05～0.5倍；所述缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐的加入量为2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基)丙酸物质的量的1～2倍。
7.根据权利要求1～3中任一项所述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法，其特征在于：步骤2)中，所述反应的温度为低于80℃。
说明书 :
茜素氨基膦酸酯衍生物及其合成方法和应用
技术领域
[0001] 本发明涉及茜素衍生物，具体涉及茜素氨基膦酸酯衍生物及其合成方法和应用。
背景技术
[0002] 茜素(Alizarin，化学名称为1，2-二羟基9,10-蒽醌)，自从茜素从茜草根部被提取纯化后，茜素及其衍生物有在全合成、结构改造，生物活性方面的研究引起了人们广泛的关注。已有的研究表明，茜素具体降血糖、抗炎、抗菌、抗病毒的作用，也有报道茜素具有一定的抗肿瘤活性。
[0003] α-氨基膦酸酯是具有生物活性和药物活性的中间体化合物，目前已被广泛用于抗生素、杀菌剂、酶抑制剂以及除草剂等方面。但目前尚未见有在茜素中引入α-氨基膦酸酯这种官能团的衍生物以及这类衍生物在抗肿瘤方面的公开报道。
发明内容
[0004] 本发明要解决的技术问题是提供一类结构新颖的茜素氨基膦酸酯衍生物，以及它们的合成方法和应用。
[0005] 本发明所述的茜素氨基膦酸酯衍生物，其结构通式如下式(I)所示：
[0006]
[0007] 其中，R为对溴苯、邻溴苯、间溴苯、对氟苯、邻氟苯、对氯苯、间氯苯、邻氯苯、间甲氧基苯、邻甲氧基苯、苯、1-萘、对甲氧基苯、间甲基苯、对甲基苯、间氟苯或2-萘。
[0008] 对应于上述R的选择，通式(I)化合物可以是：
[0009] (a)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0010] (b)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0011] (c)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0012] (d)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0013] (e)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0014] (f)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0015] (g)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0016] (h)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0017] (i)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0018] (j)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0019] (k)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0020] (l)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](1-萘基)甲基}膦酸二乙酯；
[0021] (m)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0022] (n)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-甲基苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0023] (o)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0024] (p)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯；
[0025] (q)O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-萘基)甲基}膦酸二乙酯。
[0026] 上述茜素氨基膦酸酯衍生物的合成方法包括以下步骤：
[0027] 1)以茜素和2-溴丙酸为原料，溶于极性溶剂中，在缚酸剂氢氧化钾存在的条件下反应至完全，向反应液中加入乙酸乙酯，水洗，收集水层，将水层调至酸性，有沉淀析出，过滤，收集沉淀，水洗，干燥，得到2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸；
[0028] 2)以2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸和α-氨基膦酸酯为原料，溶于极性溶剂中，在催化剂1-羟基苯并三唑和缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐存在的条件下反应至完全；向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，上硅胶柱层析，用由体积比为1：4～100的乙酸乙酯和石油醚组成的混合溶剂洗脱，洗脱液蒸干溶剂，即得到相应的茜素氨基膦酸酯衍生物。
[0029] 上述合成方法中，对应于茜素氨基膦酸酯衍生物，所述α-氨基膦酸酯的选择为：
[0030] α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0031] α-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0032] α-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0033] α-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0034] α-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0035] α-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0036] α-O，O'二乙基氨基（3-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0037] α-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0038] α-O，O'二乙基氨基（3-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0039] α-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0040] α-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0041] α-O，O'二乙基氨基（1-萘基）甲基膦酸二乙酯；
[0042] α-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0043] α-O，O'二乙基氨基（3-甲基苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0044] α-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯；
[0045] α-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯；或
[0046] α-O，O'二乙基氨基（2-萘基）甲基膦酸二乙酯。
[0047] 上述α-氨基膦酸酯的合成可参考现有文献(B.Kaboudin,K.Moradi,Tetrahydron Lett.46(2005)2989-2991)进行。具体的合成方法可以是：在烧瓶中加醛(根据不同的α-氨基膦酸酯选择不同的醛)、醋酸铵和亚磷酸二乙酯(其中醛、醋酸铵和亚磷酸二乙酯的摩尔比为2～3：1～1.5：1～1.5，，在80～90℃条件下搅拌10～12h，再往该烧瓶中加入乙醚(乙醚的加入量是醛的物质的量的1～1.5倍)，冰浴下加浓盐酸使反应体系呈酸性(pH=5～6)并搅拌2～3h，体系用水萃取，收集水层再用乙醚萃取除去有机杂质，再收集水层，并向收集的水层中加入氢氧化钠溶液调节其pH为8～10，用乙酸乙酯(或乙醚)萃取，收集有机层，有机层经无水硫酸钠干燥，得到相应的α-氨基膦酸酯，所有的α-氨基膦酸酯均为淡黄色油状液体。该合成方法中，醛的选择为：对溴苯甲醛、邻溴苯甲醛、间溴苯甲醛、对氟苯甲醛、邻氟苯甲醛、对氯苯甲醛、间氯苯甲醛、邻氯苯甲醛、间甲氧基苯甲醛、邻甲氧基苯甲醛、苯甲醛、1-萘甲醛、对甲氧基苯甲醛、间甲基苯甲醛、对甲基苯甲醛、间氟苯甲醛或2-萘甲醛。
[0048] 上述合成方法中，所述的极性溶剂为选自二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、二氯甲烷和三氯甲烷中的一种或任意两种以上的组合。当极性溶液的选择为上述两种以上的组合时，它们之间的配比可以为任意配比。步骤1)中，具体在溶解时，可先将茜素用极性溶剂溶解后，再加入2-溴丙酸再混合在一起；也可将茜素和2-溴丙酸混合在一起后再加入极性溶剂溶解；氢氧化钾通常是以固体形式直接加入。极性溶剂的用量可根据需要确定，一般以能够溶解反应原料的量即可，通常情况下，1mmol的茜素用5～20mL的极性溶剂来溶解。步骤2)中，具体在溶解时，可将2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸和α-氨基膦酸酯分别用极性溶剂溶解，再混合在一起；也可将2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸和α-氨基膦酸酯混合在一起后再加入极性溶剂溶解；还可以将2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸用极性溶剂溶解后，直接加入α-氨基膦酸酯固体。极性溶剂的用量可根据需要确定，一般以能够溶解反应原料的量即可，通常情况下，1mmol的2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸或1mmolα-氨基膦酸酯用5～20mL的极性溶剂来溶解。
[0049] 上述合成方法的步骤1)中，茜素、2-溴丙酸为原料和氢氧化钾的物质的量之比优选为1：1：3～5。反应优选在低于50℃的条件下进行，优选是在10～40℃的条件下进行，更优选是在20～40℃的条件下进行。反应是否完全可采用薄层层析跟踪检测，在上述优选的反应温度条件下，搅拌反应至完全大约需要0.5～5天的时间。为了提高反应的产率，优选是将氢氧化钾分2～3批(每次间隔10～48h)加入。该步骤中，通常是用盐酸、硫酸、磷酸或硝酸等其它无机酸将水层调至酸性，优选是将水层调到pH为2～6。
[0050] 上述合成方法的步骤2)中，2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸和α-氨基膦酸酯的物质的量之比为化学反应式的计量比，为1：1。
[0051] 上述合成方法的步骤2)中，所述催化剂1-羟基苯并三唑(HOBT)的加入量为2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸物质的量的0.05～0.5倍，优选为2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸物质的量的0.05～0.2倍，更优选为2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸物质的量的0.1～0.2倍。由于催化剂的加入会产生放热反应，因此所述催化剂最好是在冰浴条件下加入。所述缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDAC)的加入量为2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸物质的量的1～2倍，优选为2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸物质的量的1～1.5倍。
[0052] 在本申请所述的合成方法的步骤2)中，2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸、α-氨基膦酸酯、催化剂和缩合剂的加料顺序没有特别的讲究，但是以下述加料顺序可以获得更高的收率：先将2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶解后，加入催化剂，搅拌均匀，然后再加入缩合剂，搅拌均匀后再加入α-氨基膦酸酯(此时α-氨基膦酸酯可以以固体的形式加入，也可以将其用极性溶剂溶解后以液体的形式加入)进行反应。
[0053] 上述合成方法的步骤2)中，反应优选在低于80℃的条件下进行，更优选是在20～40℃的条件下进行。反应是否完全可采用薄层层析跟踪检测，在上述优选的反应温度条件下，搅拌反应至完全大约需要3～5h的时间。
[0054] 上述合成方法的步骤2)中，所述用于洗脱的混合溶剂中，乙酸乙酯和石油醚的体积比优选为1：4～50，更优选为1：4～20，进一步优选为1：4～10，最优选为1：4～6。
[0055] 本发明还包括上述茜素氨基膦酸酯衍生物在制备抗肿瘤药物中的应用。
[0056] 本发明还包括以上述茜素氨基膦酸酯衍生物为有效成分制备的抗肿瘤药物。
[0057] 与现有技术相比，本发明提供了一系列结构新颖的茜素氨基膦酸酯衍生物，以及它们的其合成方法和应用。申请人发现大部分的茜素氨基膦酸酯衍生物具有的抗肿瘤活性均大于其母体茜素，具有较好的潜在药用价值，有望用于各种抗肿瘤药物的制备。
具体实施方式
[0058] 下面以具体实施例对本发明作进一步说明，但本发明并不局限于这些实施例。
[0059] 实施例1：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯(a)的合成
[0060] 1)α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0061] 在圆底烧瓶中加对溴苯甲醛、醋酸铵和亚磷酸二乙酯(摩尔比为2：1：1)，在80℃条件下搅拌反应10h，再往该圆底烧瓶中加入乙醚加入量是对溴苯甲醛的物质的量的1.2倍)，冰浴下加浓盐酸使反应体系呈酸性(pH=6)并搅拌3h，反应体系用水萃取，收集水层再用乙醚萃取除去有机杂质，再收集水层，并向收集的水层中加入质量浓度为10%的氢氧化钠溶液调节其pH为9，用乙酸乙酯萃取，收集有机层，有机层经无水硫酸钠干燥，得到α-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯。
[0062] 2)目标产物的合成：
[0063] 2.1)在圆底烧瓶中，将2.2mmol茜素溶于15mL二甲基亚砜中，然后加入6.6mmol缚酸剂氢氧化钾(以固体形式加入)，再加入2.2mmol2-溴丙酸，室温条件下搅拌反应至完全(约4天)，然后向反应液中加入乙酸乙酯，水洗，收集水层，将水层用盐酸调至酸性(pH=5)，有橙色沉淀析出，过滤，收集沉淀，水洗至中性，干燥，得到2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸；1H NMR(DMSO,500MHz):13.10(s,1H),8.29-8.16(m,2H),7.99-7.89(m,2H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.5Hz,1H),5.09(q,J=6.8Hz,1H),1.60(d,J=+
6.8Hz,3H);FAB-MS m/z:313[M+H];Anal.Calcd.C17H12O6:C,65.39;H,3.87.Found:C,
65.43;H,3.82.
6.8Hz,3H);FAB-MS m/z:313[M+H];Anal.Calcd.C17H12O6:C,65.39;H,3.87.Found:C,
65.43;H,3.82.
[0064] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于5mL二甲基亚砜中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌10min，然后加入1.1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌10min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-溴苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：5(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体a。
[0065] 对所得橙色固体a进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0066] Yields79.12%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.05(s,-OH,1H),8.33–8.28(m,Ar-H,2H),8.03–7.90(m,Ar-H,1H),7.86–7.76(m,Ar-H,3H),7.51(d,Ar-H,J=8.3Hz,1H),7.35(dd,Ar-H,J=8.5,2.1Hz,2H),7.23(m,Ar-H,1H,NH,1H),5.40(dd,PCH,J=20.8,9.1Hz,1H),
4.85(dd,OCHCO,J=27.8,6.9Hz,1H),4.20–3.77(m,OCH2,4H),1.65(d,CH3,J=6.8Hz,3H),
1.15(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.03,
181.30,170.61,168.40,153.32,151.20,135.03,134.04,133.76,133.33,131.87,131.68,
129.50,129.45,127.50,127.21,127.00,121.10,121.02,120.53,116.93,77.32,63.50,
63.08,50.06,18.65,16.25,16.20;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.29;ESI–MS m/z:616.1(M+H)+;Anal.Calc.(for C28H27BrNO8P):C,54.56;H,4.42;N,2.27;Found:C,54.60;H,4.52;N,
2.29.
4.85(dd,OCHCO,J=27.8,6.9Hz,1H),4.20–3.77(m,OCH2,4H),1.65(d,CH3,J=6.8Hz,3H),
1.15(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.03,
181.30,170.61,168.40,153.32,151.20,135.03,134.04,133.76,133.33,131.87,131.68,
129.50,129.45,127.50,127.21,127.00,121.10,121.02,120.53,116.93,77.32,63.50,
63.08,50.06,18.65,16.25,16.20;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.29;ESI–MS m/z:616.1(M+H)+;Anal.Calc.(for C28H27BrNO8P):C,54.56;H,4.42;N,2.27;Found:C,54.60;H,4.52;N,
2.29.
[0067] 因此，可确定所得橙色固体a为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0068]
[0069] 实施例2：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯(b)的合成
[0070] 1)α-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0071] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻溴苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0072] 2)目标产物的合成：
[0073] 2.1)同实施例1；
[0074] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌3min，然后加入1.5mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌13min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-溴苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：4(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体b。
[0075] 对所得橙色固体b进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0076] Yields88.44%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.98(s,-OH,1H),8.34–8.27(m,Ar-H,2H),8.01(dd,Ar-H,J=9.1,4.7Hz,1H),7.85–7.76(m,Ar-H,3H),7.74(s,Ar-H,1H),7.42–
7.33(m,Ar-H,2H),7.16–7.02(m,Ar-H,1H,NH,1H),6.06(dd,PCH,J=20.9,9.2Hz,1H),4.83(dd,OCHCO,J=28.0,6.8Hz,1H),4.23–3.67(m,OCH2,4H),1.73(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.36(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.11(t,OCH3,J=7.0Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.99,181.27,
170.60,167.36,153.15,151.15,134.97,134.44,134.00,133.76,133.01,129.63,129.09,
127.66,127.46,126.94,126.57,124.46,120.86,120.57,116.76,77.25,63.81,63.55,
49.75,18.64,16.34,16.04;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.32;ESI–MS m/z:616.1(M+H)+;
Anal.Calc.(for C28H27BrNO8P):C,54.56;H,4.42;N,2.27;Found:C,54.51;H,4.50;N,2.31.[0077] 因此，可确定所得橙色固体b为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
7.33(m,Ar-H,2H),7.16–7.02(m,Ar-H,1H,NH,1H),6.06(dd,PCH,J=20.9,9.2Hz,1H),4.83(dd,OCHCO,J=28.0,6.8Hz,1H),4.23–3.67(m,OCH2,4H),1.73(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.36(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.11(t,OCH3,J=7.0Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.99,181.27,
170.60,167.36,153.15,151.15,134.97,134.44,134.00,133.76,133.01,129.63,129.09,
127.66,127.46,126.94,126.57,124.46,120.86,120.57,116.76,77.25,63.81,63.55,
49.75,18.64,16.34,16.04;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.32;ESI–MS m/z:616.1(M+H)+;
Anal.Calc.(for C28H27BrNO8P):C,54.56;H,4.42;N,2.27;Found:C,54.51;H,4.50;N,2.31.[0077] 因此，可确定所得橙色固体b为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0078]
[0079] 实施例3：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯(c)的合成
[0080] 1)α-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0081] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间溴苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0082] 2)目标产物的合成：
[0083] 2.1)同实施例1；
[0084] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL甲醇中，在冰浴下滴加0.05mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌3min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-溴苯基）甲基膦酸二乙酯(用20mL乙醇溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：6(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体c。
[0085] 对所得橙色固体c进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0086] Yields86.12%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.02(s,-OH,1H),8.34–8.25(m,Ar-H,2H),8.00–7.92(m,Ar-H,1H),7.84–7.73(m,Ar-H,3H),7.47–7.26(m,Ar-H,4H),7.22–7.10(m,NH,1H),5.45(dd,PCH,J=20.13,8.3Hz,1H),4.89(q,OCHCO,J=30.6,13.6Hz,1H),4.19–
3.93(m,OCH2,4H),1.66(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.17(t,OCH3,J=7.2Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=
7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.99,181.29,170.66,153.40,151.22,134.97,
134.01,133.78,133.11,131.29,131.18,130.97,130.86,130.23,129.99,127.46,126.98,
126.63,122.68,121.31,116.92,77.41,68.27,63.15,48.89,18.56,16.18,16.07;ESI–MS +
m/z:616.1(M+H);Anal.Calc.(for C28H27BrNO8P):C,54.56;H,4.42;N,2.27;Found:C,
54.59;H,4.40;N,2.31.
3.93(m,OCH2,4H),1.66(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.17(t,OCH3,J=7.2Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=
7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.99,181.29,170.66,153.40,151.22,134.97,
134.01,133.78,133.11,131.29,131.18,130.97,130.86,130.23,129.99,127.46,126.98,
126.63,122.68,121.31,116.92,77.41,68.27,63.15,48.89,18.56,16.18,16.07;ESI–MS +
m/z:616.1(M+H);Anal.Calc.(for C28H27BrNO8P):C,54.56;H,4.42;N,2.27;Found:C,
54.59;H,4.40;N,2.31.
[0087] 因此，可确定所得橙色固体c为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-溴苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0088]
[0089] 实施例4：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯(d)的合成
[0090] 1)α-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0091] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对氟苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0092] 2)目标产物的合成：
[0093] 2.1)同实施例1；
[0094] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL二氯甲烷和三氯甲烷的混合溶液(二氯甲烷和三氯甲烷的体积比为1：1)中，在冰浴下滴加0.2mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌8min，然后加入1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌3min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-氟苯基）甲基膦酸二乙酯(用10mL三氯甲烷溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4.5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：20(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体d。
[0095] 对所得橙色固体d进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0096] Yields84.44%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.01(s,-OH,1H),8.31–8.26(m,Ar-H,2H),7.90(dd,Ar-H,J=9.3,4.5Hz,1H),7.83–7.72(m,Ar-H,3H),7.48–7.39(m,Ar-H,2H),
7.24(d,NH,J=5.5Hz,1H),7.05(t,Ar-H,J=8.6Hz,2H),5.43(dd,PCH,J=20.7,9.5Hz,1H),
4.89–4.84(dd,OCHCO,J=31.4,6.5Hz,1H),4.16–3.72(m,OCH2,4H),1.63(d,CH3,J=6.8Hz,
3H),1.13(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.05(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ
189.07,181.35,170.58,153.46,151.29,135.04,134.07,133.85,133.17,130.49,129.69,
129.58,127.54,127.34,127.04,121.31,120.54,116.99,115.85,115.68,115.50,77.40,
63.41,63.04,49.92,18.60,16.24,16.14;31PNMR(202MHz,Acetone)δ20.70;ESI–MS m/z:
554.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27FNO8P):C,60.54;H,4.90;N,2.52;Found:C,60.63;H,
4.89;N,2.50.
7.24(d,NH,J=5.5Hz,1H),7.05(t,Ar-H,J=8.6Hz,2H),5.43(dd,PCH,J=20.7,9.5Hz,1H),
4.89–4.84(dd,OCHCO,J=31.4,6.5Hz,1H),4.16–3.72(m,OCH2,4H),1.63(d,CH3,J=6.8Hz,
3H),1.13(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.05(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ
189.07,181.35,170.58,153.46,151.29,135.04,134.07,133.85,133.17,130.49,129.69,
129.58,127.54,127.34,127.04,121.31,120.54,116.99,115.85,115.68,115.50,77.40,
63.41,63.04,49.92,18.60,16.24,16.14;31PNMR(202MHz,Acetone)δ20.70;ESI–MS m/z:
554.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27FNO8P):C,60.54;H,4.90;N,2.52;Found:C,60.63;H,
4.89;N,2.50.
[0097] 因此，可确定所得橙色固体d为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0098]
[0099] 实施例5：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯(e)的合成
[0100] 1)α-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0101] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻氟苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0102] 2)目标产物的合成：
[0103] 2.1)同实施例1；
[0104] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于5mL乙酸乙酯的混合溶液中，在冰浴下滴加0.08mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.8mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌13min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-氟苯基）甲基膦酸二乙酯(用
10mL乙酸乙酯溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：10(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体e。
10mL乙酸乙酯溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：10(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体e。
[0105] 对所得橙色固体e进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0106] Yields76.90%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.05(s,-OH,1H),8.35–8.28(m,Ar-H,2H),8.06–7.90(m,Ar-H,1H),7.87–7.73(m,Ar-H,3H),7.52–7.29(m,Ar-H,2H),7.21–6.94(m,Ar-H,2H,NH,1H),5.82(dd,PCH,J=21.0,9.5Hz,1H),4.88(dd,OCHCO,J=32.4,6.5Hz,
1H),4.21–3.81(m,OCH2,4H),1.65(d,CH3,J=6.4Hz,3H),1.16(m,OCH3,J=6.9Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=6.8Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.00,181.32,170.57,163.18,153.31,
151.28,135.01,134.05,133.79,133.13,132.80,129.89,129.75,129.58,129.48,129.07,
127.48,127.37,127.01,120.78,120.58,77.13,63.85,63.41,47.19,18.55,16.29,16.10;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.25;ESI–MS m/z:554.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27FNO8P):
C,60.54;H,4.90;N,2.52;Found:C,60.61;H,4.93;N,2.53.
1H),4.21–3.81(m,OCH2,4H),1.65(d,CH3,J=6.4Hz,3H),1.16(m,OCH3,J=6.9Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=6.8Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.00,181.32,170.57,163.18,153.31,
151.28,135.01,134.05,133.79,133.13,132.80,129.89,129.75,129.58,129.48,129.07,
127.48,127.37,127.01,120.78,120.58,77.13,63.85,63.41,47.19,18.55,16.29,16.10;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.25;ESI–MS m/z:554.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27FNO8P):
C,60.54;H,4.90;N,2.52;Found:C,60.61;H,4.93;N,2.53.
[0107] 因此，可确定所得橙色固体e为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0108]
[0109] 实施例6：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯(f)的合成
[0110] 1)α-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0111] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对氯苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0112] 2)目标产物的合成：
[0113] 2.1)同实施例1；
[0114] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于8mL乙酸乙酯和甲醇的混合溶液(乙酸乙酯和甲醇的体积比为2：1)中，在冰浴下滴加0.08mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.8mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌13min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-氯苯基）甲基膦酸二乙酯(用4mL甲醇和1mL乙醇溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约3.5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：8(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体f。
[0115] 对所得橙色固体f进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0116] Yields83.72%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.99(s,-OH,1H),8.30–8.22(m,Ar-H,2H),8.11(dd,Ar-H,J=9.3,3.9Hz,1H),7.99-7.75(m,Ar-H,4H),7.41–7.32(m,Ar-H,3H),
7.26–7.20(m,NH,1H),5.46(dd,PCH,J=21.1,9.5Hz,1H),4.88(dd,OCHCO,J=31.6,6.4Hz,
1H),4.08–3.71(m,OCH2,4H),1.63(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.06(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.96,181.25,170.89,170.83,163.11,
153.28,151.21,134.95,133.98,133.72,133.05,132.81,129.24,129.19,128.92,128.75,
127.43,126.93,121.06,120.48,116.82,77.11,63.80,63.43,49.92,18.54,16.13,16.02;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.45;ESI–MSm/z:570.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27ClNO8P):
C,58.80;H,4.76;N,2.45;Found:C,58.70;H,4.72;N,2.49.
7.26–7.20(m,NH,1H),5.46(dd,PCH,J=21.1,9.5Hz,1H),4.88(dd,OCHCO,J=31.6,6.4Hz,
1H),4.08–3.71(m,OCH2,4H),1.63(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.06(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.96,181.25,170.89,170.83,163.11,
153.28,151.21,134.95,133.98,133.72,133.05,132.81,129.24,129.19,128.92,128.75,
127.43,126.93,121.06,120.48,116.82,77.11,63.80,63.43,49.92,18.54,16.13,16.02;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.45;ESI–MSm/z:570.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27ClNO8P):
C,58.80;H,4.76;N,2.45;Found:C,58.70;H,4.72;N,2.49.
[0117] 因此，可确定所得橙色固体f为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0118]
[0119] 实施例7：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯(g)的合成
[0120] 1)α-O，O'二乙基氨基（3-氯苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0121] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间氯苯苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0122] 2)目标产物的合成：
[0123] 2.1)同实施例1；
[0124] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺和乙醇的混合溶液(N,N-二甲基甲酰胺和乙醇的体积比为1：5)中，在冰浴下滴加0.4mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌10min，然后加入1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌13min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-氯苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mLN,N-二甲基甲酰胺溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=
1：50(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体g。
1：50(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体g。
[0125] 对所得橙色固体g进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0126] Yields89.42%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.06(s,-OH,1H),8.36–8.26(m,Ar-H,2H),7.97(dd,Ar-H,J=9.3,4.8Hz,1H),7.85–7.74(m,Ar-H,3H),7.46–7.27(m,Ar-H,4H),
7.17(d,NH,J=8.0Hz,1H),5.43(dd,PCH,J=21.1,9.4Hz,1H),4.90(dd,OCHCO,J=6.8,1.2Hz,
1H),4.09–3.77(m,OCH2,4H),1.67(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.16(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.03,181.34,170.63,153.38,151.22,
136.61,135.03,134.58,134.06,133.77,133.10,129.98,128.45,127.96,127.51,127.26,
127.01,126.01,121.21,120.52,116.92,77.32,63.46,63.10,48.93,18.60,16.20,16.10;
ESI–MS m/z:570.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27ClNO8P):C,58.80;H,4.76;N,2.45;
Found:C,58.82;H,4.78;N,2.51.
7.17(d,NH,J=8.0Hz,1H),5.43(dd,PCH,J=21.1,9.4Hz,1H),4.90(dd,OCHCO,J=6.8,1.2Hz,
1H),4.09–3.77(m,OCH2,4H),1.67(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.16(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.03,181.34,170.63,153.38,151.22,
136.61,135.03,134.58,134.06,133.77,133.10,129.98,128.45,127.96,127.51,127.26,
127.01,126.01,121.21,120.52,116.92,77.32,63.46,63.10,48.93,18.60,16.20,16.10;
ESI–MS m/z:570.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27ClNO8P):C,58.80;H,4.76;N,2.45;
Found:C,58.82;H,4.78;N,2.51.
[0127] 因此，可确定所得橙色固体g为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0128]
[0129] 实施例8：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯(h)的合成
[0130] 1)α-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0131] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻氯苯苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0132] 2)目标产物的合成：
[0133] 2.1)在圆底烧瓶中，将3.3mmol茜素溶于20mL二甲基亚砜中，加入3.3mmol2-溴丙酸，再加入13.2mmol缚酸剂氢氧化钾(以固体形式加入，分2批加入，每批间隔24h)，40℃条件下室温条件下搅拌反应至完全(约3天)，然后向反应液中加入乙酸乙酯，水洗，收集水层，将水层用硫酸调至酸性(pH=2)，有橙色沉淀析出，过滤，收集沉淀，水洗至中性，干燥，得到2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸；1H NMR(DMSO,500MHz):13.10(s,
1H),8.29-8.16(m,2H),7.99-7.89(m,2H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.5Hz,1H),+
5.09(q,J=6.8Hz,1H),1.60(d,J=6.8Hz,3H);FAB-MS m/z:313[M+H];Anal.Calcd.C17H12O6:
C,65.39;H,3.87.Found:C,65.43;H,3.82.
1H),8.29-8.16(m,2H),7.99-7.89(m,2H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.5Hz,1H),+
5.09(q,J=6.8Hz,1H),1.60(d,J=6.8Hz,3H);FAB-MS m/z:313[M+H];Anal.Calcd.C17H12O6:
C,65.39;H,3.87.Found:C,65.43;H,3.82.
[0134] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL N,N-二甲基甲酰胺中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌6min，然后加入1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-氯苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL乙酸乙酯溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：100(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体h。
[0135] 对所得橙色固体h进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0136] Yields83.18%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.00(s,-OH,1H),8.30–8.21(m,Ar-H,2H),8.13(dd,Ar-H,J=9.3,4.6Hz,1H),7.83–7.70(m,Ar-H,3H),7.57(dd,Ar-H,J=7.7,
1.9Hz,1H),7.39–7.24(m,Ar-H,3H),7.16–7.08(m,NH,1H),6.06(dd,PCH,J=21.0,9.3Hz,
1H),4.96–4.87(dd,OCHCO,J=20.8,6.6Hz,1H),4.23–3.69(m,OCH2,4H),1.62(d,CH3,J=
6.8Hz,3H),1.17(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.04(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.99,181.31,170.62,163.17,153.29,151.27,135.00,134.04,133.77,133.11,
132.78,129.88,129.73,129.57,129.47,129.05,127.46,127.37,126.99,120.76,120.57,
77.12,63.83,63.40,47.18,18.70,16.23,16.04;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.31;ESI–MS m/z:570.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27ClNO8P):C,58.80;H,4.76;N,2.45;Found:C,
58.84;H,4.79;N,2.50.
1.9Hz,1H),7.39–7.24(m,Ar-H,3H),7.16–7.08(m,NH,1H),6.06(dd,PCH,J=21.0,9.3Hz,
1H),4.96–4.87(dd,OCHCO,J=20.8,6.6Hz,1H),4.23–3.69(m,OCH2,4H),1.62(d,CH3,J=
6.8Hz,3H),1.17(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.04(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.99,181.31,170.62,163.17,153.29,151.27,135.00,134.04,133.77,133.11,
132.78,129.88,129.73,129.57,129.47,129.05,127.46,127.37,126.99,120.76,120.57,
77.12,63.83,63.40,47.18,18.70,16.23,16.04;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.31;ESI–MS m/z:570.1(M–H)—;Anal.Calc.(for C28H27ClNO8P):C,58.80;H,4.76;N,2.45;Found:C,
58.84;H,4.79;N,2.50.
[0137] 因此，可确定所得橙色固体h为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-氯苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0138]
[0139] 实施例9：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯(i)的合成
[0140] 1)α-O，O'二乙基氨基（3-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0141] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间甲氧基苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0142] 2)目标产物的合成：
[0143] 2.1)同实施例8；
[0144] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于20mL二甲基亚砜中，在冰浴下滴加0.3mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌6min，然后加入1mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌10min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL N,N-二甲基甲酰胺溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，40℃条件下搅拌反应至完全(约3h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：30(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体i。
[0145] 对所得橙色固体i进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0146] Yields83.16%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.03(s,-OH,1H),8.33–8.23(m,Ar-H,2H),8.05–7.99(m,Ar-H,1H),7.83–7.71(m,Ar-H,3H),7.29–7.22(m,Ar-H,2H),7.04(d,NH,J=7.6Hz,1H),6.84(dd,Ar-H,J=16.7,8.0Hz,2H),5.46(dd,PCH,J=20.7,9.6Hz,1H),4.89(dd,OCHCO,J=6.7,0.9Hz,1H),3.96–3.83(m,OCH2,4H),3.81(s,OCH3,3H),1.66(d,CH3,J=
6.8Hz,3H),1.15(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.07(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.85,181.23,170.21,153.21,151.15,134.81,133.87,133.65,133.01,130.65,
128.99,129.78,128.66,127.32,126.87,126.60,125.88,125.14,123.12,120.81,120.38,
116.72,77.13,63.39,62.87,45.89,18.44,16.12,15.77;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.86;
—
ESI–MS m/z:566.2(M–H) ;Anal.Calc.(for C29H30NO9P):C,61.37;H,5.33;N,2.47;Found:
C,61.40;H,5.34;N,2.51.
6.8Hz,3H),1.15(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.07(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.85,181.23,170.21,153.21,151.15,134.81,133.87,133.65,133.01,130.65,
128.99,129.78,128.66,127.32,126.87,126.60,125.88,125.14,123.12,120.81,120.38,
116.72,77.13,63.39,62.87,45.89,18.44,16.12,15.77;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.86;
—
ESI–MS m/z:566.2(M–H) ;Anal.Calc.(for C29H30NO9P):C,61.37;H,5.33;N,2.47;Found:
C,61.40;H,5.34;N,2.51.
[0147] 因此，可确定所得橙色固体i为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0148]
[0149] 实施例10：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯(j)的合成
[0150] 1)α-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0151] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用邻甲氧基苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0152] 2)目标产物的合成：
[0153] 2.1)同实施例8；
[0154] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于5mL甲醇中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL N,N-二甲基甲酰胺溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，35℃条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：80(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体j。
[0155] 对所得橙色固体j进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0156] Yields86.52%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.08(s,-OH,1H),8.36–8.25(m,Ar-H,3H),8.02-7.84(m,Ar-H,4H),7.40(d,Ar-H,J=7.2Hz,1H),7.33(t,Ar-H,J=7.8Hz,1H),7.00(t,Ar-H,J=7.4Hz,1H),6.94(d,NH,J=8.2Hz,1H),5.96(dd,PCH,J=20.8,9.8Hz,1H),4.96(dd,OCHCO,J=27.6,6.8Hz,1H),4.03–3.96(m,OCH2,2H),3.97–3.76(m,OCH2,2H),3.91(s,OCH3,3H),1.67(d,CH3,J=6.6Hz,3H),1.18(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.0Hz,
3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.96,181.28,170.52,163.26,151.25,135.67,134.93,
133.97,133.72,133.05,129.72,129.61,127.41,127.01,126.92,120.84,120.48,120.06,
120.02,119.77,116.78,77.06,63.46,63.02,50.43,18.55,16.16,16.05;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.19;ESI–MS m/z:566.2(M–H)—;Anal.Calc.(for C29H30NO9P):C,61.37;H,5.33;
N,2.47;Found:C,61.43;H,5.37;N,2.50.
3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.96,181.28,170.52,163.26,151.25,135.67,134.93,
133.97,133.72,133.05,129.72,129.61,127.41,127.01,126.92,120.84,120.48,120.06,
120.02,119.77,116.78,77.06,63.46,63.02,50.43,18.55,16.16,16.05;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.19;ESI–MS m/z:566.2(M–H)—;Anal.Calc.(for C29H30NO9P):C,61.37;H,5.33;
N,2.47;Found:C,61.43;H,5.37;N,2.50.
[0157] 因此，可确定所得橙色固体j为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0158]
[0159] 实施例11：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](苯基)甲基}膦酸二乙酯(k)的合成
[0160] 1)α-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0161] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0162] 2)目标产物的合成：
[0163] 2.1)同实施例8；
[0164] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于5mL甲醇中，在冰浴下滴加0.2mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌10min，然后加入1.2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌5min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（苯基）甲基膦酸二乙酯，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：60(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体k。
[0165] 对所得橙色固体k进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0166] Yields88.16%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.04(s,-OH,1H),8.33–8.28(m,Ar-H,2H),8.06–8.01(m,Ar-H,1H),7.85–7.78(m,Ar-H,3H),7.47–7.03(m,Ar-H,5H,NH,1H),5.50(dd,PCH,J=20.7,9.6Hz,1H),4.91(dd,OCHCO,J=32.3,6.8Hz,1H),3.97–3.69(m,OCH2,4H),
1.66(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),1.05(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.04,181.19,170.48,153.43,151.36,135.01,134.03,133.81,
133.14,131.80,130.45,129.66,129.61,129.55,127.51,127.30,127.01,123.97,121.28,
120.51,116.95,77.36,63.42,63.06,49.77,18.56,16.21,16.15;31P NMR(202MHz,Acetone)δ20.99;ESI–MS m/z:538.2(M+H)+;Anal.Calc.(forC28H28NO8P):C,62.57;H,5.25;
N,2.61;Found:C,62.53;H,5.27;N,2.60.
1.66(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),1.05(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.04,181.19,170.48,153.43,151.36,135.01,134.03,133.81,
133.14,131.80,130.45,129.66,129.61,129.55,127.51,127.30,127.01,123.97,121.28,
120.51,116.95,77.36,63.42,63.06,49.77,18.56,16.21,16.15;31P NMR(202MHz,Acetone)δ20.99;ESI–MS m/z:538.2(M+H)+;Anal.Calc.(forC28H28NO8P):C,62.57;H,5.25;
N,2.61;Found:C,62.53;H,5.27;N,2.60.
[0167] 因此，可确定所得橙色固体k为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0168]
[0169] 实施例12：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](1-萘基)甲基}膦酸二乙酯(l)的合成
[0170] 1)α-O，O'二乙基氨基（1-萘基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0171] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用1-萘甲醛代替对溴苯甲醛。
[0172] 2)目标产物的合成：
[0173] 2.1)同实施例8；
[0174] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于15mL丁醇中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.3mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌6min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（1-萘基）甲基膦酸二乙酯(用5mL丁醇溶解配成溶液，以溶液的方式加入)，50℃条件下搅拌反应至完全(约3.5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：40(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体l。
[0175] 对所得橙色固体l进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0176] Yields89.14%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.05(s,-OH,1H),8.33–8.20(m,Ar-H,3H),8.08(dd,Ar-H,J=9.4,3.1Hz,1H),7.83–7.56(m,Ar-H,6H),7.57(dd,Ar-H,J=14.5,
7.1Hz,1H),7.53–7.45(m,Ar-H,2H),7.27(d,NH,J=9.3Hz,1H),6.39(dd,PCH,J=20.8,
9.6Hz,1H),4.91(dd,OCHCO,J=20.4,6.7Hz,1H),4.01–3.52(m,OCH2,4H),1.62(d,CH3,J=
6.7Hz,3H),1.18(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),0.85(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.97,181.35,170.39,170.34,153.34,151.27,134.94,134.87,133.99,133.77,
130.77,129.11,129.03,128.78,128.54,127.44,126.99,126.73,126.00,125.26,123.24,
122.96,120.93,120.50,116.84,77.12,63.51,62.99,46.01,18.56,16.24,15.89;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.33;ESI–MSm/z:586.2(M–H)—;Anal.Calc.(for C32H30NO8P):C,65.41;
H,5.15;N,2.38;Found:C,65.50;H,5.17;N,2.40.
7.1Hz,1H),7.53–7.45(m,Ar-H,2H),7.27(d,NH,J=9.3Hz,1H),6.39(dd,PCH,J=20.8,
9.6Hz,1H),4.91(dd,OCHCO,J=20.4,6.7Hz,1H),4.01–3.52(m,OCH2,4H),1.62(d,CH3,J=
6.7Hz,3H),1.18(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),0.85(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.97,181.35,170.39,170.34,153.34,151.27,134.94,134.87,133.99,133.77,
130.77,129.11,129.03,128.78,128.54,127.44,126.99,126.73,126.00,125.26,123.24,
122.96,120.93,120.50,116.84,77.12,63.51,62.99,46.01,18.56,16.24,15.89;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.33;ESI–MSm/z:586.2(M–H)—;Anal.Calc.(for C32H30NO8P):C,65.41;
H,5.15;N,2.38;Found:C,65.50;H,5.17;N,2.40.
[0177] 因此，可确定所得橙色固体l为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](1-萘基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0178]
[0179] 实施例13：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯(m)的合成
[0180] 1)α-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0181] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对甲氧基苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0182] 2)目标产物的合成：
[0183] 2.1)同实施例8；
[0184] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL二甲基亚砜中，在冰浴下滴加0.5mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入1.5mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-甲氧基苯基）甲基膦酸二乙酯，60℃条件下搅拌反应至完全(约3h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：5(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体m。
[0185] 对所得橙色固体m进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0186] Yields84.82%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.99(s,-OH,1H),8.30–8.21(m,Ar-H,2H),7.89–7.68(m,Ar-H,4H),7.42–7.20(m,Ar-H,2H,NH,1H),6.80(dd,Ar-H,J=89.3,
8.4Hz,2H),5.41(dd,PCH,J=20.2,9.6Hz,1H),4.87(dd,OCHCO,J=12.3,5.3Hz,1H),4.15–
3.80(m,OCH2,4H),3.70(s,OCH3,3H),1.63(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=6.9Hz,
3H),1.06(t,OCH3,J=7.0Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.91,181.20,170.26,159.46,
153.33,151.25,134.88,133.92,133.73,133.06,129.07,127.38,127.07,126.90,126.47,
120.99,120.43,116.80,114.11,113.90,77.25,63.21,62.77,55.20,49.84,18.52,16.18,
16.13;HRMS(m/z)(ESI):calcd for C29H30NO9P[M+H+]:567.16852;found:567.16357;
Anal.Calc.(for C29H30NO9P):C,61.37;H,5.33;N,2.47;Found:C,61.40;H,5.35;N,2.45.[0187] 因此，可确定所得橙色固体m为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式为：
8.4Hz,2H),5.41(dd,PCH,J=20.2,9.6Hz,1H),4.87(dd,OCHCO,J=12.3,5.3Hz,1H),4.15–
3.80(m,OCH2,4H),3.70(s,OCH3,3H),1.63(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=6.9Hz,
3H),1.06(t,OCH3,J=7.0Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.91,181.20,170.26,159.46,
153.33,151.25,134.88,133.92,133.73,133.06,129.07,127.38,127.07,126.90,126.47,
120.99,120.43,116.80,114.11,113.90,77.25,63.21,62.77,55.20,49.84,18.52,16.18,
16.13;HRMS(m/z)(ESI):calcd for C29H30NO9P[M+H+]:567.16852;found:567.16357;
Anal.Calc.(for C29H30NO9P):C,61.37;H,5.33;N,2.47;Found:C,61.40;H,5.35;N,2.45.[0187] 因此，可确定所得橙色固体m为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲氧基苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式为：
[0188]
[0189] 实施例14：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-甲基苯基)甲基}膦酸二乙酯(n)
[0190] 1)α-O，O'二乙基氨基（3-甲基苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0191] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间甲基苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0192] 2)目标产物的合成：
[0193] 2.1)在圆底烧瓶中，将4.4mmol茜素溶于25mL二甲基亚砜中，加入4.4mmol2-溴丙酸，再加入22mmol缚酸剂氢氧化钾(以固体形式加入)，15℃条件下室温条件下搅拌反应至完全(约2天)，然后向反应液中加入乙酸乙酯，水洗，收集水层，将水层用磷酸调至酸性(pH=6)，有橙色沉淀析出，过滤，收集沉淀，水洗至中性，干燥，得到2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,
1
10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸；H NMR(DMSO,500MHz):13.10(s,1H),8.29-8.16(m,2H),7.99-
7.89(m,2H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.5Hz,1H),5.09(q,J=6.8Hz,1H),1.60(d,J=
6.8Hz,3H);FAB-MS m/z:313[M+H]+;Anal.Calcd.C17H12O6:C,65.39;H,3.87.Found:C,
65.43;H,3.82.
1
10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸；H NMR(DMSO,500MHz):13.10(s,1H),8.29-8.16(m,2H),7.99-
7.89(m,2H),7.72(d,J=8.4Hz,1H),7.31(d,J=8.5Hz,1H),5.09(q,J=6.8Hz,1H),1.60(d,J=
6.8Hz,3H);FAB-MS m/z:313[M+H]+;Anal.Calcd.C17H12O6:C,65.39;H,3.87.Found:C,
65.43;H,3.82.
[0194] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL二氯甲烷中，在冰浴下滴加0.2mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌5min，然后加入1.7mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，继续搅拌8min；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-甲基苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二氯甲烷配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：8(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体n。
[0195] 对所得橙色固体n进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0196] Yields87.32%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ12.97(s,-OH,1H),8.31–8.23(m,Ar-H,2H),7.90(dd,Ar-H,J=9.6,4.1Hz,1H),7.81–7.69(m,Ar-H,3H),7.27–7.23(m,Ar-H,2H),
7.13–6.96(m,Ar-H,2H,NH,1H),5.46(dd,PCH,J=9.7,5.3Hz,1H),4.82(dd,OCHCO,J=12.2,
5.5Hz,1H),4.17–3.70(m,OCH2,4H),2.20(s,CH3,3H),1.73(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.32(t,
13
OCH3,J=7.1Hz,3H),1.05(t,OCH3,J=7.1Hz,3H); C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.94,181.22,
170.45,153.38,151.28,138.35,134.90,134.28,133.92,133.08,129.02,128.87,128.43,
127.41,127.10,126.92,124.88,121.05,120.84,120.49,116.83,63.35,63.12,50.46,
49.23,21.24,18.70,16.33,16.16;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.02;HRMS(m/z)(ESI):calcd for C29H30NO8P[M+H+]:551.17090;found:551.16870;Anal.Calc.(for C29H30NO8P):C,
63.15;H,5.48;N,2.54;Found:C,63.20;H,5.47;N,2.50.
7.13–6.96(m,Ar-H,2H,NH,1H),5.46(dd,PCH,J=9.7,5.3Hz,1H),4.82(dd,OCHCO,J=12.2,
5.5Hz,1H),4.17–3.70(m,OCH2,4H),2.20(s,CH3,3H),1.73(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.32(t,
13
OCH3,J=7.1Hz,3H),1.05(t,OCH3,J=7.1Hz,3H); C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.94,181.22,
170.45,153.38,151.28,138.35,134.90,134.28,133.92,133.08,129.02,128.87,128.43,
127.41,127.10,126.92,124.88,121.05,120.84,120.49,116.83,63.35,63.12,50.46,
49.23,21.24,18.70,16.33,16.16;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ21.02;HRMS(m/z)(ESI):calcd for C29H30NO8P[M+H+]:551.17090;found:551.16870;Anal.Calc.(for C29H30NO8P):C,
63.15;H,5.48;N,2.54;Found:C,63.20;H,5.47;N,2.50.
[0197] 因此，可确定所得橙色固体n为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-甲基苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0198]
[0199] 实施例15：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基（] 4-甲苯基）甲基}膦酸二乙酯(o)的合成
[0200] 1)α-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0201] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用对甲基苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0202] 2)目标产物的合成：
[0203] 2.1)同实施例14；
[0204] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL三氯甲烷中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入2mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（4-甲苯基）甲基膦酸二乙酯(用10mL二甲基亚砜配成溶液，以溶液的方式加入)，20℃条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：15(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体o。
[0205] 对所得橙色固体o进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0206] Yields83.98%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.00(s,-OH,1H),8.33–8.25(m,Ar-H,2H),7.87–7.69(m,Ar-H,4H),7.36–7.09(m,Ar-H,4H，NH,1H),5.44(dd,PCH,J=20.3,9.6Hz,
1H),4.88(dd,OCHCO,J=6.8,1.2Hz,1H),4.14–3.69(m,OCH2,4H),2.33(s,CH3,3H),1.64(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.07(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.95,181.25,170.27,170.21,153.42,151.29,138.00,134.91,133.95,133.78,
133.12,131.42,129.39,127.71,127.67,127.42,127.14,126.94,121.09,120.45,116.86,
63.23,62.77,50.24,49.01,21.09,18.55,16.19,16.13;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.23;
HRMS(m/z)(ESI):calcd for C29H30NO8P[M+H+]:551.17090;found:551.16852;Anal.Calc.(for C29H30NO8P):C,63.15;H,5.48;N,2.54;Found:C,63.21;H,5.53;N,2.58.[0207] 因此，可确定所得橙色固体o为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
1H),4.88(dd,OCHCO,J=6.8,1.2Hz,1H),4.14–3.69(m,OCH2,4H),2.33(s,CH3,3H),1.64(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.14(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.07(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ188.95,181.25,170.27,170.21,153.42,151.29,138.00,134.91,133.95,133.78,
133.12,131.42,129.39,127.71,127.67,127.42,127.14,126.94,121.09,120.45,116.86,
63.23,62.77,50.24,49.01,21.09,18.55,16.19,16.13;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.23;
HRMS(m/z)(ESI):calcd for C29H30NO8P[M+H+]:551.17090;found:551.16852;Anal.Calc.(for C29H30NO8P):C,63.15;H,5.48;N,2.54;Found:C,63.21;H,5.53;N,2.58.[0207] 因此，可确定所得橙色固体o为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](4-甲苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0208]
[0209] 实施例16：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯(p)的合成
[0210] 1)α-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0211] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用间氟苯甲醛代替对溴苯甲醛。
[0212] 2)目标产物的合成：
[0213] 2.1)同实施例14；
[0214] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于10mL甲醇中，在冰浴下滴加0.3mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入1.6mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（3-氟苯基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜配成溶液，以溶液的方式加入)，10℃条件下搅拌反应至完全(约5h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：15(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体p。
[0215] 对所得橙色固体p进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0216] Yields80.93%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.02(s,-OH,1H),8.34–8.28(m,Ar-H,2H),7.96(dd,Ar-H,J=9.3,4.7Hz,1H),7.85–7.74(m,Ar-H,3H),7.38–7.24(m,Ar-H,2H),
7.21–7.11(m,Ar-H,2H),7.03–6.94(m,NH,1H),5.49(dd,PCH,J=9.5,5.1Hz,1H),4.90(dd,OCHCO,J=32.1,6.3Hz,1H),4.16–3.80(m,OCH2,4H),1.74(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.32(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.07,189.01,
181.24,170.62,153.19,151.23,137.02,134.98,134.02,133.99,133.81,133.13,130.28,
127.48,126.98,123.56,121.34,120.54,116.95,115.17,114.98,77.26,63.50,63.12,
50.18,18.66,16.39,16.21;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.93;HRMS(m/z)(ESI):calcd for C28H27FNO8P[M+H+]:555.14583;found:555.14386;Anal.Calc.(for C28H27FNO8P):C,60.54;
H,4.90;N,2.52;Found:C,60.56;H,4.92;N,2.54.
7.21–7.11(m,Ar-H,2H),7.03–6.94(m,NH,1H),5.49(dd,PCH,J=9.5,5.1Hz,1H),4.90(dd,OCHCO,J=32.1,6.3Hz,1H),4.16–3.80(m,OCH2,4H),1.74(d,CH3,J=6.8Hz,3H),1.32(t,OCH3,J=7.1Hz,3H),1.09(t,OCH3,J=7.1Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.07,189.01,
181.24,170.62,153.19,151.23,137.02,134.98,134.02,133.99,133.81,133.13,130.28,
127.48,126.98,123.56,121.34,120.54,116.95,115.17,114.98,77.26,63.50,63.12,
50.18,18.66,16.39,16.21;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.93;HRMS(m/z)(ESI):calcd for C28H27FNO8P[M+H+]:555.14583;found:555.14386;Anal.Calc.(for C28H27FNO8P):C,60.54;
H,4.90;N,2.52;Found:C,60.56;H,4.92;N,2.54.
[0217] 因此，可确定所得橙色固体p为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](3-氟苯基)甲基}膦酸二乙酯，其结构式如下式所示：
[0218]
[0219] 实施例17：O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-萘基)甲基}膦酸二乙酯(q)的合成
[0220] 1)α-O，O'二乙基氨基（2-萘基）甲基膦酸二乙酯的合成
[0221] 按实施例1中步骤1)所述的方法和条件进行合成，不同的是，用2-萘甲醛代替对溴苯甲醛。
[0222] 2)目标产物的合成：
[0223] 2.1)同实施例14；
[0224] 2.2)在圆底烧瓶中，将1mmol2-（1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-基氧基）丙酸溶于5mL甲醇中，在冰浴下滴加0.1mmol催化剂1-羟基苯并三唑，室温搅拌均匀，然后加入1.5mmol缩合剂1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，搅拌均匀；再往该圆底烧瓶中滴加1mmolα-O，O'二乙基氨基（2-萘基）甲基膦酸二乙酯(用5mL二甲基亚砜配成溶液，以溶液的方式加入)，室温条件下搅拌反应至完全(约4h)，然后向反应液中加入三氯甲烷，水洗，收集有机层，有机层用无水硫酸钠干燥后上硅胶柱层析，以乙酸乙酯：石油醚=1：15(体积比)组成的混合溶剂洗脱，薄层层析跟踪检测，收集洗脱液，洗脱液蒸干溶剂，得到橙色固体q。
[0225] 对所得橙色固体q进行分析，其理化和波谱特性如下：
[0226] Yields85.62%;1H NMR(500MHz,CDCl3)δ13.09(s,-OH,1H),8.32(dd,Ar-H,J=6.6,4.4Hz,2H),8.11(dd,Ar-H,J=9.5,4.0Hz,1H),7.93–7.81(m,Ar-H,6H),7.65(d,Ar-H,J=
8.3Hz,1H),7.58(d,Ar-H,J=8.6Hz,1H),7.51–7.47(m,Ar-H,2H),7.30(d,NH,J=8.5Hz,1H),
5.66(dd,PCH,J=20.7,9.5Hz,1H),4.90(dd,OCHCO,J=28.2,6.7Hz,1H),4.21–3.62(m,OCH2,
4H),1.66(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.16(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),1.03(t,OCH3,J=7.0Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.09,183.36,181.40,157.80,153.43,135.05,134.09,133.18,
132.95,131.78,128.66,128.19,128.11,127.96,127.71,127.55,127.40,127.06,126.47,
125.48,123.84,121.15,120.87,120.61,81.21,77.32,63.62,63.30,49.52,18.67,17.83,
16.27;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.90;ESI–MS m/z:586.2(M–H)—;Anal.Calc.(forC32H30NO8P):C,65.41;H,5.15;N,2.38;Found:C,65.45;H,5.20;N,2.42.[0227] 因此，可确定所得橙色固体q为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-萘基)甲基}膦酸二乙酯,其结构式如下式所示：
8.3Hz,1H),7.58(d,Ar-H,J=8.6Hz,1H),7.51–7.47(m,Ar-H,2H),7.30(d,NH,J=8.5Hz,1H),
5.66(dd,PCH,J=20.7,9.5Hz,1H),4.90(dd,OCHCO,J=28.2,6.7Hz,1H),4.21–3.62(m,OCH2,
4H),1.66(d,CH3,J=6.7Hz,3H),1.16(t,OCH3,J=7.0Hz,3H),1.03(t,OCH3,J=7.0Hz,3H);13C NMR(125MHz,CDCl3)δ189.09,183.36,181.40,157.80,153.43,135.05,134.09,133.18,
132.95,131.78,128.66,128.19,128.11,127.96,127.71,127.55,127.40,127.06,126.47,
125.48,123.84,121.15,120.87,120.61,81.21,77.32,63.62,63.30,49.52,18.67,17.83,
16.27;31P NMR(202MHz,CDCl3)δ20.90;ESI–MS m/z:586.2(M–H)—;Anal.Calc.(forC32H30NO8P):C,65.41;H,5.15;N,2.38;Found:C,65.45;H,5.20;N,2.42.[0227] 因此，可确定所得橙色固体q为O，O'二乙基{[2-(1-羟基-9,10-二氧代-9,10-二氢蒽-2-氧甲基)丙酰氨基](2-萘基)甲基}膦酸二乙酯,其结构式如下式所示：
[0228]
[0229] 为了说明本发明所述茜素氨基膦酸酯衍生物在制药中的用途，申请人对上述实施例1～17制得的化合物进行了抗肿瘤活性实验。
[0230] 以临床使用的肿瘤治疗药物5-氟尿嘧啶为阳性对照药，以相应溶剂作阴性对照，以HCT-116（人结肠癌细胞），MGC-803(肺癌细胞)，NCI（肺癌细胞），A549(肺癌细胞)，KB(口腔表皮样癌细胞)为受试细胞株；用MTT法对化合物进行了体外抗肿瘤活性测试。
[0231] 将药物和细胞共培养48h，根据预实验细胞生长速率的结果，接种一定密度的细胞4 5
190μL于96孔培养板（约5×10～1×10个/孔）。
190μL于96孔培养板（约5×10～1×10个/孔）。
[0232] 培养24h待细胞贴壁后，分别加入系列浓度的样品10μL，每个样品设5个复孔，其中乙醇终浓度＜1%.另设阴性对照孔4个，加入10μL空白基质。
[0233] 细胞于饱和湿度、5%CO2，37℃条件下孵化48h.每孔加入10μL MTT（5mg/ml），继续培养4h。
[0234] 吸去上清液，加入DMSO150μL/孔，充分溶解后用酶标仪在测定波长为570nm和参考630nm处测定OD值，计算每个给药孔细胞增殖抑制率，结果如下述表1所示。
[0235] 表1化合物对不同细胞株的IC50值
[0236]
[0237] 从表中可以看出，茜素本身的体外抗肿瘤活性不高，但是大多数茜素氨基膦酸酯衍生物的细胞毒性都大幅度地高于茜素的活性。对于人肺癌NCI细胞，大多数的衍生物显示了较好的体外抗肿瘤活性，如化合物e和h对NCI细胞具有了更高的活性(IC50值都为3.80μM)，超过临床治疗癌症的药物五氟尿嘧啶。对于口腔表皮样癌KB细胞，大多数衍生物的活性均高于药物五氟尿嘧啶。
[0238] 为了进一步验证上述所有化合物对人体正常细胞的细胞毒性，我们利用MTT法对人体静脉内皮细胞HUVEC（正常细胞）进行了活性筛选，结果表明所有化合物的IC50值都比对肿瘤细胞的IC50值大，也就是说所有衍生物对人正常细胞的毒性要小于这些化合物对肿瘤细胞的毒性。
[0239] 由上述体外抗肿瘤活性测试试验表明，本发明所述的茜素氨基膦酸酯衍生物，可