荠菜在防治烟草青枯病菌中的应用

摘要

本发明属于植物源农药技术领域，具体提供了一种荠菜在防治烟草青枯病菌中的应用。本发明探索荠菜提取物对烟草青枯病菌的抑制作用，结果发现荠菜提取物对烟草青枯病菌具有抑制作用，其抑制率为27.2％，其中根、茎、籽提取物抑菌效果最强，叶的抑菌效果为零。进一步研究结果显示荠菜根、茎、籽提取物对烟草青枯病菌的MIC值均为80mg/mL，为开发利用荠菜天然活性物质以及研究与开发新的生物农药提供了科学依据。

权利要求

1.一种荠菜在抑制烟草青枯病菌中的应用，其中，是指荠菜水提取物在抑制烟草青枯病菌中的应用，该荠菜水提取物是取荠菜洗净，晒干至含水量为0.5-3.5％后粉碎，用无菌水对荠菜粉进行提取，所得滤液入旋转蒸发仪浓缩至膏状得到。

2.一种荠菜在防治烟草青枯病菌中的应用，其中，是指荠菜水提取物在防治烟草青枯病菌中的应用，该荠菜水提取物是取荠菜洗净，晒干至含水量为0.5-3.5％后粉碎，用无菌水对荠菜粉进行提取，所得滤液入旋转蒸发仪浓缩至膏状得到。

3.一种荠菜在制备烟草青枯病菌杀菌剂的应用，其中，是指荠菜水提取物在制备烟草青枯病菌杀菌剂中的应用，该荠菜水提取物是取荠菜洗净，晒干至含水量为0.5-3.5％后粉碎，用无菌水对荠菜粉进行提取，所得滤液入旋转蒸发仪浓缩至膏状得到。

4.如权利要求1或2或3所述的应用，其特征在于，所述用无菌水对荠菜粉进行提取是指按1g荠菜粉加20-25mL无菌水的比例，于荠菜粉中加入无菌水，于25-26℃以80-120r/min震荡24-48h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取1次，合并两次滤液，所得滤液经双层纱布和滤纸过滤，再经0.22μm细菌过滤器过滤，即可。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，所述荠菜粉为荠菜全株粉、荠菜根粉、荠菜茎粉和荠菜籽粉中的一种或几种。

说明书

荠菜在防治烟草青枯病菌中的应用

技术领域

[0001] 本发明属于植物源农药技术领域，具体涉及一种荠菜在抑制、防治烟草青枯病菌中的应用。

背景技术

[0002] 荠菜(Capsella bursa-pastoris)，俗称护生草、净肠草，属十字花科荠菜属草本植物，同时，荠菜全草均可入药，又是药食同源植物。荠菜主要分布于亚热带和温带地区，其中我国各地均见其生长，特别在田野、路边、庭院等处较为常见。

[0003] 荠菜富含有机酸、麦角克碱、延胡索酸、类黄酮、生物碱、氨基酸、多肽、丹宁等多种活性成分，具有明目、强筋健骨、降压、消炎、镇痛、解痉、抗菌、抗癌、抗心律失常、清除自由基、抗脂质过氧化、抗病毒、防衰老等预防疾病和治疗疾病的功效。

[0004] 尽管荠菜医用方面的研究较多，但利用荠菜在防治植物病害方面的研究报道较少，尤其是防治烟草青枯病菌的研究鲜见。因此，本发明以荠菜提取物对植物病原菌是否具有抑制作用这一科学问题，首次进行室内抑菌试验，探索了提取方法，比较了不同部位抑菌活性大小，测定了MIC值等，初步明确了荠菜的开发潜力，旨在为今后研制植物源农药提供理论依据和实践基础。

发明内容

[0005] 本发明所要解决的技术问题是：针对荠菜防治植物病害技术上的空白，提供了一种荠菜在抑制、防治烟草青枯病中的应用。

[0006] 为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：一种荠菜在抑制烟草青枯病菌中的应用。

[0007] 本发明同时提供一种荠菜在防治烟草青枯病菌中的应用。

[0008] 上述所指的应用实质上是指荠菜提取物在抑制/防治烟草青枯病菌中的应用。

[0009] 上述荠菜提取物为荠菜水提取物，是取荠菜洗净，晒干至含水量为0.5-3.5％后粉碎，用无菌水对荠菜粉进行提取，所得滤液转入旋转蒸发仪浓缩至膏状得到。其中，粉碎是以8000-10000r/min的转速，用粉碎机粉碎成100-120目干粉。用无菌水对荠菜粉进行提取是指按1g荠菜粉加20-25mL无菌水的比例，于荠菜粉中加入无菌水，于25-26℃以80-120r/min震荡24-48h，过滤，收集滤液，滤渣重复提取1次，合并两次滤液，所得滤液经双层纱布和滤纸过滤，再经0.22μm细菌过滤器过滤，即得。

[0010] 上述荠菜提取物，可以采用荠菜全株作为原料，亦可采用荠菜根、荠菜茎或荠菜籽中的一种或几种混合作为原料。本文中的荠菜全株包括根、茎、叶和籽，以便于区分单独的荠菜根、荠菜茎和荠菜籽。

[0011] 本发明的荠菜的水提取物对烟草青枯病菌具有抑制作用；表明荠菜具有防治植物病害尤其是烟草青枯病菌的功能；同时本发明的实现，为开发利用荠菜天然活性物质以及研究与开发新生物农药如烟草青枯病菌杀菌剂提供了科学依据。

附图说明

[0012] 图1是荠菜提取物对烟草青枯病菌的抑制作用。

[0013] 其中：A代表荠菜水提取物；B代表无菌水。

具体实施方式

[0014] 供试植物和菌株

[0015] 新鲜荠菜来自湖南农业大学浏阳科研基地；烟草青枯病菌(Ralstonia solannacearum)由湖南农业大学植物保护学院植物病理学实验室提供。

[0016] 烟草青枯病菌菌种的活化：采用接种环刮取3环菌种接入牛肉膏蛋白胨斜面培养基(NA)，26-28℃下连续培养24-48h，待菌落长出后，制成浓度1.1×108CFU/mL菌悬液(以下均称为菌悬液)，备用。

[0017] 供试培养基

[0018] 牛肉膏蛋白胨培养基(NA)：牛肉膏5g、蛋白胨8g、氯化钠5g、琼脂20g、蒸馏水1000mL、pH 7.0-7.2；

[0019] 实施例1 荠菜的水提取物对烟草青枯病菌的抑制作用

[0020] 取荠菜(全株，包括根、茎、叶及籽)洗净，晒干至含水量为0.5-3.5％，以9000r/min的转速，用粉碎机粉碎成100-120目干粉。

[0021] 称取20g荠菜干粉，加入400mL无菌水，25℃条件下，120r/min震荡24h，过滤，收集滤液；滤渣重复提取1次，合并两次滤液，滤液经双层纱布和滤纸过滤，再经0.22μm细菌过滤器过滤，所得滤液置于压力为0.09-0.1Mpa，水浴温度为60℃，冷凝温度为6℃，转速为80r/min(旋转蒸发条件，下同)，旋转至膏状物，无菌水定容为荠菜的水提取物，4℃保存备用。

[0022] 采用抑菌圈法测定荠菜的水提取物对烟草青枯病菌的抑菌效果，灭菌的NA培养基倒入培养皿中待其冷却，移液枪移取200μL菌悬液，涂布均匀，打孔器(7mm)在培养基上打孔，注入100μL提取物，无菌水做对照，每处理重复3次，将平皿置于分别置于26-28℃细菌培养箱培养，观察结果，以出现最大抑菌圈的抑菌效果最佳，并用十字交叉法测量抑菌圈直径，计算抑制率。

[0023]

[0024] 结合参见图1，结果表明荠菜的水提取物对烟草青枯病菌产生抑制作用，其抑菌圈直径为17.3mm，抑制率为27.5％。因此，荠菜中含有更多的抑制烟草青枯病菌的活性成分，可以作为有效抑菌物质的提取材料。

[0025] 实施例2 荠菜不同部位的水提取物对烟草青枯病菌的抑制作用

[0026] 以实施例1中的方法制备荠菜根干粉，称取20g荠菜根干粉，加入500mL无菌水，26℃以80r/min震荡48h，收集滤液；滤渣重复提取一次，合并2次过滤液，滤液经双层纱布和滤纸过滤，再经0.22μm细菌过滤器过滤，所得滤液入旋转蒸发仪旋转蒸发得膏状物，用无菌水定容至20mL，获得苋菜根的水提取物。采用上述方法分别制备荠菜叶、茎、籽的水提取物。

[0027] 采用抑菌圈法测定荠菜不同部位的水提取物对烟草青枯病菌的抑菌效果。灭菌的NA培养基倒入培养皿中待其冷却，移液枪移取200μL菌悬液，涂布均匀，打孔器(7mm)在培养基上打孔，注入100μL提取物，无菌水做对照，每处理重复3次，将平皿置于分别置于26-28℃细菌培养箱培养，观察结果，以出现最大抑菌圈的抑菌效果最佳，并用十字交叉法测量抑菌圈直径，计算抑制率，结果见下表1。

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[0029] 表1 荠菜不同部位的水提取物对烟草青枯病菌抑制作用的影响

[0030]

[0031] 注：不同小写字母表示显著差异(ρ<0.05)，不同大写字母表示极显著差异(ρ<0.01)。

[0032] 结果表明，荠菜根、茎、籽的水提取物均有抑菌效果，其抑制率分别为38.6％、30.1％、38.4％，根和籽的水提取物的抑菌效果最好，两者的抑制率无显著性差异；茎的水提取物抑菌效果次之，抑制率与前两者相比，具有极显著性差异；而荠菜叶的水提取物对烟草青枯病菌没有抑制作用。由此可见，荠菜叶中无菌水溶性的抑菌物质或者其含量极低，因此，荠菜抑菌物质是存在于荠菜的根、茎、籽中，且不同部位抑菌物质的活性不同。同时，实施例1采用的是荠菜全株为提取原料，但提取物的抑制率仅为27.5％，而根、茎、籽的水提取物抑制率均大于30％，这可能与叶的水提取物无抑菌作用有关。

[0033] 实施例3 荠菜不同部位的水提取物对烟草青枯病菌的MIC值

[0034] 用无菌水分别定容荠菜的根、茎、籽水提膏状物(试验证实无菌水提取的荠菜叶活性物没有抑菌效果，故不测定其MIC)，分别制成浓度为240mg/mL的母液，用二倍稀释法将母液稀释成5种不同浓度的荠菜活性物，依次得到240mg/mL、200mg/mL、160mg/mL、80mg/mL、40mg/mL的稀释液，用抑菌圈法分别测定不同浓度的根、茎、籽的水提取物的抑菌效果，无菌水做对照，每浓度重复3次，以完全无菌生长的提取物最高稀释度为该提取物的最低抑菌浓度，结果见下表2。

[0035] 试验结果表明，当根、茎、籽的水提取物浓度为80mg/mL及以上时，提取物仍对烟草青枯病菌生长有很好的抑制作用，但当浓度降为40mg/mL时，根、茎、籽的水提取物均无抑菌效果。由于荠菜根、茎、籽的水提取物对植物病原菌产生抑制作用的最小浓度在80mg/mL，故所求根、茎、籽的水提取物MIC均为80mg/mL。

[0036] 表2 荠菜不同部位水提物的MIC测定

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[0038] 注：“+”表示有抑菌效果，“－”表示无抑菌效果。