测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法

摘要

本发明公开一种测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法，它包括对照品溶液的制备步骤、供试品溶液的制备步骤和高效液相色谱测定步骤，确定产品每1ml含苦杏仁苷不得少于1.2mg，本发明使用高效液相色谱法对控制止咳枇杷糖浆产品质量的苦杏仁苷含量进行测定，相比于现有标准中无含量测定项的检测，能直接通过检测苦杏仁苷的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，苦杏仁苷分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，这样能更好地控制止咳枇杷糖浆产品的质量。

权利要求

1.测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一：对照品溶液的制备：取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含

80μg的溶液，即得对照品苦杏仁苷溶液；

步骤二：供试品溶液的制备：量取本品止咳糖浆5mL，置10mL容量瓶，加乙醇定容至容量瓶刻度，摇匀，用滤纸过滤，取续滤液1mL，置10mL容量瓶，用流动相稀释至容量瓶刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，续滤液即为供试品溶液；

步骤三：用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为

1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，理论板数按苦杏仁苷峰计不低于4000，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得供试品溶液中的苦杏仁苷含量；

所述流动相中各成分的体积比为：甲醇：水＝20：80；

所述步骤三中，使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。

说明书

测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种药物的检测方法，具体涉及测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法。

背景技术

[0002] 止咳枇杷糖浆为常用中药制剂，具清肺，止咳，化痰的功效，用于咳嗽多痰，支气管炎的治疗，由于止咳枇杷糖浆现行质量标准(《卫生部药品标准》中药成方制剂第九册)(WS3-B-1702-94)仅规定了常规检查，具体为：(1)取本品止咳枇杷糖浆1mL，加水10mL，强力振摇，有持久性泡沫生成；(2)取本品10mL，加氢氧化钠试液使成碱性，用氯仿10mL提取，分取氯仿层，用1％硫酸溶液提取，酸液加碘化铋钾试液，生成棕色沉淀。此标准无含量测定项检测，不能有效地控制药品的内在质量，根据相关要求，需要对该制剂增订含量测定标准，以更好的控制产品质量。

[0003] 止咳枇杷糖浆的处方组成为：枇杷叶391g、白前125g、桑白皮234g、桔梗78g、百部94g、薄荷油3mL，其中枇杷叶为该方主药，被确定为含量检测对象。

[0004] 中国药典2010版以熊果酸和齐墩果酸为枇杷叶的含量测定成分，然而由于制剂工艺所导致的损失，熊果酸和齐墩果酸的含量极微，因此熊果酸和齐墩果酸不适合作为该制剂的含量指标。文献表明枇杷叶含苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、鞣质、维生素B和维生素C等成分，而苦杏仁苷具有止咳化痰作用，为枇杷叶的活性成分，适合作为含量测定对象。

[0005] 因此，迫切需要研发一种测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法，来作为评定止咳枇杷糖浆质量的标准具有重要的意义。

发明内容

[0006] 为克服上述现有背景技术的不足，本发明的目的在于提供一种能更好地控制止咳枇杷糖浆产品质量的苦杏仁苷含量的测定方法。

[0007] 本发明的目的是通过如下措施来达到的：一种测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法，包括以下步骤：

[0008] (1)对照品溶液的制备：取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含80μg的溶液，即得对照品苦杏仁苷溶液；

[0009] (2)供试品溶液的制备：量取本品止咳糖浆5mL，置10mL容量瓶，加乙醇定容至容量瓶刻度，摇匀，用滤纸过滤，取续滤液1mL，置10mL容量瓶，用流动相稀释至容量瓶刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，续滤液即为供试品溶液；

[0010] (3)用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，理论板数按苦杏仁苷峰计不低于4000，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含苦杏仁苷不得少于1.2mg为合格；

[0011] 所述流动相中各成分的体积比为：甲醇：水＝20∶80。

[0012] 进一步地，使用高效液相色谱测定时，所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。

[0013] 本发明的有益效果在于：本发明使用高效液相色谱法对控制止咳枇杷糖浆产品质量的苦杏仁苷含量进行测定，相比于现有标准中无含量测定项的检测，本发明能直接通过检测苦杏仁苷的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，苦杏仁苷分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，这样能更好地控制止咳枇杷糖浆产品的质量。

附图说明

[0014] 图1为苦杏仁苷对照品色谱图；

[0015] 图2为供试品色谱图；

[0016] 图3为阴性对照色谱图；

[0017] 图4为苦杏仁苷标准曲线。

具体实施方式

[0018] 下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细描述，但它们并不构成对本发明的限定，仅作举例而已。同时通过说明本发明的优点将变得更加清楚和容易理解。

[0019] 实施例

[0020] 本发明提供一种测定止咳枇杷糖浆中有效成分苦杏仁苷含量的方法，包括以下步骤：

[0021] (1)对照品溶液的制备：取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含80μg的溶液，即得对照品苦杏仁苷溶液；

[0022] (2)供试品溶液的制备：量取本品止咳糖浆5mL，置10mL容量瓶，加乙醇定容至容量瓶刻度，摇匀，用滤纸过滤，取续滤液1mL，置10mL容量瓶，用流动相稀释至容量瓶刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液，续滤液即为供试品溶液；

[0023] (3)用高效液相色谱测定：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，其中流动相流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为210nm，理论板数按苦杏仁苷峰计不低于4000，分别吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，得供试品溶液每1mL含苦杏仁苷不得少于1.2mg为合格；

[0024] 所述流动相中各成分的体积比为：甲醇：水＝20：80；所用色谱柱的柱高250mm，内径4.6mm，填充剂粒径为5μm。

[0025] 相关试验报告如下：

[0026] 1、仪器与试药

[0027] DIONEX高效液相色谱仪，ΜVD170μLC紫外检测器，电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)，Welch(月旭)Μltimate XB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)。止咳枇杷糖浆(湖北端正药业有限公司生产，批号130101、130102、130103)；苦杏仁苷对照品(中国食品药品检定研究院，批号110820-201004，供含量测定用)；HPLC用水为双蒸水(实验室自制)，甲醇为色谱纯，乙醇(国药集团化学试剂有限公司)、甲醇(国药集团化学试剂有限公司)等均为分析纯。

[0028] 1.1 对照品溶液的制备

[0029] 取苦杏仁苷对照品适量，精密称定，加流动相制成每1mL含80μg的溶液，即得对照品苦杏仁苷溶液；

[0030] 1.2 对照品贮备液的制备

[0031] 精密称取苦杏仁苷对照品12.82mg至25mL容量瓶，用流动相定容，得对照品贮备液。

[0032] 1.3 供试品溶液的制备

[0033] 精密量取本品5mL，置10mL容量瓶，加乙醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液1mL，用流动相稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜滤过，取续滤液，即得。

[0034] 1.4 阴性对照溶液的制备

[0035] 现行止咳枇杷糖浆制法《( 卫生部药品标准》中药成方制剂第九册))如下：

[0036] 枇杷叶391g，白前125g，桑白皮234g，桔梗78g，百部94g，薄荷油3ml，以上六味，除薄荷油外，枇杷叶、桔梗、百部、桑白皮粉碎成粗粉。照流浸膏剂与浸膏剂项下的渗漉法试验，用50～60％乙醇为溶剂进行渗漉，收集漉液，回收乙醇，浓缩成1：2的稠膏；白前加水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，滤过，浓缩成1：2的稠膏，放置12小时，滤过，加水适量稀释后，加蔗糖900g、苯甲酸3.75g、枸橼酸0.75g，煮沸使溶解，趁热滤过，加入上述醇浸膏，搅匀，加入薄荷油及香精4.05ml(溶于适量乙醇)，加水至1500ml，搅匀，灌装，即得。

[0037] 按上述处方及工艺制成不含枇杷叶的阴性对照品，按1.3项下的方法制成阴性对照溶液。

[0038] 2.方法与结果

[0039] 2.1 色谱系统适应性试验

[0040] Μltimate XB-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-水(体积比20∶80)为流动相；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；检测波长：210nm；分别取制备好的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液进样，进样量都为20μL，结果如图1至3，图1苦杏仁苷保留时间在16.715min；
与图1苦杏仁苷对照品保留时间相对应，图2中的苦杏仁苷色谱峰与其他杂质峰完全分离，分离效果好，因此说明实验所采用的色谱柱、流动相及配比、保留时间的选择恰当，色谱条件良好；图3中阴性对照溶液在与对照品溶液和供试品溶液相同保留时间处未显苦杏仁苷色谱峰，故认为对测定无干扰。

[0041] 2.2 标准曲线

[0042] 取苦杏仁苷对照品储备液，稀释制成系列浓度，精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，照2.1条件测定色谱峰面积，相关浓度与峰面积见表1，以对照品溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为：Y＝0.2716x—1.36466，r＝0.9981，见图4，结果表明在苦杏仁苷在9.61～153.8μg/mL线性关系良好。

[0043] 表1 线性关系

[0044]

[0045] 2.3 精密度试验

[0046] 精密吸取对照品溶液20μL，按2.1色谱条件测定，重复进样5次，测定吸收峰面积，结果见表2，RSD为1.92％，表明仪器精密度良好，该方法测定的数值准确、可信。

[0047] 表2 精密度试验结果

[0048]

[0049] 2.4 重复性试验

[0050] 取批号为120102枇杷止咳糖浆5份，按供试品溶液制备方法及2.1色谱条件测定，测定其吸收峰面积，结果见表3，RSD为2.62％，表明该方法的重复性良好。

[0051] 表3 重复性试验结果

[0052]

[0053] 2.5 稳定性试验

[0054] 取同一份供试品溶液，分别于0h，1h，4h，8h，12h，24h分别进样6次,测定其吸收峰面积，结果RSD为1.19％，表明溶液在24h内稳定，结果见表4。

[0055] 表4 稳定性试验结果

[0056]

[0057] 2.6 加样回收率

[0058] 精密吸取已知含量的同一批枇杷止咳糖浆(批号为131002)5份，每份糖浆1mL，各份中分别加入苦杏仁苷1795.5μg，用乙醇定容至2mL，再按供试品溶液制备方法过滤，取续滤液1mL用流动相稀释并定容至10mL，0.45μm滤膜滤过，取续滤液制备供试液，按2.1色谱条件测定、计算,结果见表5，苦杏仁苷平均回收率为95.19％。

[0059] 表5 加样回收试验结果

[0060]

[0061] 3.含量测定及限度制订

[0062] 对3批样品制备供试品溶液，按2.1色谱条件测定，计算含量，结果见表6，3批样品每100mL苦杏仁苷的含量为158.39mg至161.57mg。

[0063] 表6 枇杷止咳糖浆样品含量测定结果

[0064]

[0065] 上述三批样品为小样检测，实际生产中为大样检测，根据3批样品的含量结合生产实际，确定本品每1mL含苦杏仁苷(C20H27NO11)的量不得少于1.20mg，确定止咳枇杷糖浆中苦杏仁苷含量大于或等于1.20mg/mL，说明其是按现行止咳枇杷糖浆制法所得的合格品；若苦杏仁苷含量少于1.20mg/mL，说明该止咳枇杷糖浆不合格。

[0066] 结论：以上方法学考察的各项数据均符合中药质量标准研究的有关规定，正文所述方法适用于测定止咳枇杷糖浆中苦杏仁苷的含量，因此能直接通过检测苦杏仁苷的含量来控制药品的内在质量，而且本测定方法中，苦杏仁苷分离效果好，稳定性和准确度高，重复性好，表明该方法科学、合理、可行。

[0067] 其它未详细说明的部分均属于现有技术。