一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法

摘要

本发明公开了一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法，这种方法是将茶树精油、薄荷醇、艾叶精油按一定比例混合制得天然芳香抑菌剂，并包覆于脂质体中获得芳香抑菌脂质体，再分散到壳聚糖‑海藻酸钠‑明胶溶液中，按一定程序进行冻干得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料。这种伤口敷料是多孔结构，具有高效的细菌捕获效果，因此能够持久、广谱、高效抗菌，同时具备良好的缓释抗菌、止血性、吸水性和透气性能，生物相容性好，并带有一定的薄荷香味，对大型伤口和烧伤有明显疗效。

权利要求

1.一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：(1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油在低温下混合搅拌，溶于磷酸盐缓冲溶液中，即得天然芳香抑菌剂；

(2)以每125mg大豆卵磷脂和胆固醇总质量与10ml天然芳香抑菌剂的比例，采用薄膜水化法制得脂质体悬液；

(3)将脂质体悬液加入预先配置好的壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液，再加入蔗糖作为稳定剂，低温充分搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开；

(4)将涂有液体的聚四氟乙烯板放入真空冷冻干燥箱，-5℃预冻6h，然后以1～10℃/h的速率降温至-55～-80℃，再抽真空维持在0.012mBar以下，冷冻干燥72～100h，即得芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料；

步骤(1)中，所述的茶树精油、薄荷醇和艾叶精油的质量比为1:1:1，所述的低温温度为

4℃，搅拌转速为60转/分；

步骤(2)中，大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为4:1；

步骤(2)中，所述的薄膜水化法为：将大豆卵磷脂和胆固醇溶于氯仿后倒入圆底烧瓶中，在室温下旋蒸至瓶壁形成一层均一的薄膜；在55℃超声水浴中将20ml加入天然抗菌剂的磷酸缓冲溶液预热至55℃，再加入覆有薄膜的圆底烧瓶中，超声振荡10分钟，超声频率为

400MHz，振荡频率为200转/分；

步骤(3)中，所述的壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液，是将壳聚糖、海藻酸钠和明胶的混合物以4g/100mL的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得；其中，壳聚糖、海藻酸钠和明胶的质量比为2～4:1:1，壳聚糖平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％；

步骤(3)中，脂质体悬液与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液的体积比为1:1～3；

步骤(3)中，蔗糖的加入量以脂质体悬液和壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液的混合物体积计为2g/100mL。

2.根据权利要求1所述的芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，磷酸缓冲溶液按照如下方法配制得到：氯化钠8g/L，氯化钾0.2g/L，磷酸氢二钠

1.44g/L，磷酸氢二钾0.24g/L，溶剂为水，用盐酸调pH值至6.5，加入质量分数为6％的吐温

80。

3.根据权利要求1所述的芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法，其特征在于，步骤(1)中，茶树精油、薄荷醇和艾叶精油的混合物以0.2～2g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液。

4.根据权利要求1所述的芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法，其特征在于，步骤(3)中，低温充分搅拌获得均一液体，低温温度为4～8℃；搅拌转速为100～200转/分。

说明书

一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法

技术领域

[0001] 本发明属于医用材料技术领域，具体涉及一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法。

背景技术

[0002] 壳聚糖是天然高分子生物多糖甲壳素脱乙酰化产物，具有优良的耐溶剂性和耐碱性，良好的生物相容性与皮肤亲和性，抑菌性、成膜性、透气性、吸水性、保湿性好，可止血、促进伤口愈合等优点，可用作医学材料。但由于壳聚糖脆性大，力学性能差，使其单独使用受到限制。目前，有大量文献报道壳聚糖与其它高分子共混改性制得性能优良的敷料膜。

[0003] 茶树精油，是澳洲互叶白千层叶片经水蒸气蒸馏获得的油性提取物，具有特殊的芳香气味。茶树精油具有显著的抑菌活性和广泛的抗菌谱范围，对常见的革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌都具有强烈的抑制作用，与化学抑菌剂相比副作用和残留毒性小的独特优势，对皮肤无刺激作用。茶树精油具有净化空气、杀菌、免疫、防腐、提供细胞营养等用途，可以作为安全有效的医用敷料抗菌剂。

[0004] 艾叶精油是从艾草的叶子、茎的提取物，挤压法和溶剂提取法提炼萃取的挥发性芳香物质。艾叶精油的主治功效，理气血，温经脉，祛寒湿，止痛，抗菌，消炎，激励消化腺，镇咳化痰，促循环，补气，提升免疫力。

[0005] 薄荷醇，有机化合物，无色针状结晶或粒状。为薄荷和欧薄荷精油中的主要成分，以游离和酯的状态存在。薄荷醇有8种异构体，它们的呈香性质各不相同，左旋薄荷醇具有薄荷香气并有清凉的作用，消旋薄荷醇也有清凉作用，其他的异构体无清凉作用。可用作牙膏、香水、饮料和糖果等的赋香剂。在医药上用作刺激药，作用于皮肤或粘膜，有清凉止痒作用；内服可用于头痛及鼻、咽、喉炎症等。

[0006] 但是精油的氧化产物会引起皮肤过敏，因此将植物精油及其组分通过脂质体技术包封起来，制备出性质稳定的具有良好抗菌性能的抗菌剂。另外，脂质体以悬液形式无法在大面积的皮肤滞留，需要固定在一种支架材料中持续发挥抗菌效果。因此，将精油脂质体加入到壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液中，按一定程序冻干得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料，具有重要的应用价值和发展前景。

[0007] 发明专利ZL201310574818.X中公开了一种壳聚糖基静电纺丝复合伤口敷料及其制备方法。该方法采用静电纺丝法制备含有植物精油的壳聚糖纳米纤维再与壳聚糖流延膜组合成复合伤口敷料。方法操作简单，敷料生物相容性好，环境友好，不添加过多的助剂、有机溶剂，对人体皮肤也无刺激性，具有一定的植物芳香味，较强的抑菌性，良好的缓释性，能够一定程度遮盖伤口化脓产生的异味，还能加速消除患者的神经紧张，缓解压力，愉悦心情，满足人们精神上的享受。舒适性也大大提高，使敷料更加贴合皮肤，很适合关节部位的伤口处理，可以减少伤者关节运动时皮肤拉伸带来的疼痛。但是该敷料采用的是溶出型杀菌机理，植物精油成分的释放使得抑菌的作用时间较短。而扩散进入伤口渗出液可能降低精油浓度，影响杀菌的效力。

发明内容

[0008] 本发明所要解决的技术问题是提供一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的新型制备方法，该方法制备得到的壳聚糖基伤口敷料能长期的保持杀菌效力的。

[0009] 为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

[0010] 一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法，该方法包括如下步骤：

[0011] (1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油在低温下混合搅拌，溶于磷酸盐缓冲溶液中，即得天然芳香抑菌剂；

[0012] (2)以每125mg大豆卵磷脂和胆固醇总质量与10ml天然芳香抑菌剂的比例，采用薄膜水化法制得脂质体悬液；

[0013] (3)将脂质体悬液加入预先配置好的壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液，再加入蔗糖作为稳定剂，低温充分搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开；

[0014] (4)将涂有液体的聚四氟乙烯板放入真空冷冻干燥箱，-5℃预冻6h，然后以1～10℃/h的速率降温至-55～-80℃(优选为5℃/h的速率降温至-80℃)，再抽真空维持在0.012mBar以下，冷冻干燥72～100h(优选为90h)，即得芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料。

[0015] 步骤(1)中，所述的茶树精油、薄荷醇和艾叶精油的质量比为1:1:1，所述的低温温度为4℃，搅拌转速为60转/分。

[0016] 步骤(1)中，磷酸缓冲溶液按照如下方法配制得到：氯化钠8g/L，氯化钾0.2g/L，磷酸氢二钠1.44g/L，磷酸氢二钾0.24g/L，溶剂为水，用盐酸调pH值至6.5，加入质量分数为6％的吐温80。

[0017] 步骤(1)中，茶树精油、薄荷醇和艾叶精油的混合物以0.2～2g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液，优选为1g/100mL。

[0018] 步骤(2)中，大豆卵磷脂和胆固醇的质量比为4:1。

[0019] 步骤(2)中，所述的薄膜水化法为：将大豆卵磷脂和胆固醇溶于氯仿后倒入圆底烧瓶中，在室温下旋蒸至瓶壁形成一层均一的薄膜；在55℃超声水浴中将20ml加入天然抗菌剂的磷酸缓冲溶液预热至55℃，再加入覆有薄膜的圆底烧瓶中，超声振荡10分钟，超声频率为400MHz，振荡频率为200转/分。

[0020] 步骤(3)中，所述的壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液，是将壳聚糖、海藻酸钠和明胶的混合物以4g/100mL的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得；其中，壳聚糖、海藻酸钠和明胶的质量比为2～4:1:1(优选为3:1:1)，壳聚糖平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％。

[0021] 步骤(3)中，脂质体悬液与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液的体积比为1:1～3(优选为1:2)。

[0022] 步骤(3)中，蔗糖的加入量以脂质体悬液和壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液的混合物体积计为2g/100mL。

[0023] 步骤(3)中，低温充分搅拌获得均一液体，低温温度为4～8℃(优选为4℃)；搅拌转速为100～200转/分(优选为150转/分)。

[0024] 本发明得到的芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料。这种伤口敷料具有持久、广谱、高效的抗菌效果，具备良好的缓释抗菌、止血性、吸水性和透气性能，生物相容性好，并带有一定的薄荷香味，对大型伤口和烧伤有明显疗效。

[0025] 有益效果：本发明制备方法与现有技术相比，具有以下优点：

[0026] 1、综合了壳聚糖和植物精油脂质体两者的优势，结合壳聚糖的止血作用和植物精油的芳香抑菌作用。制得的伤口敷料止血作用明显，抗菌活性强，广谱抑菌作用显著；制备的壳聚糖敷料具有一定的薄荷香味，能够一定程度优化环境，净化空气，还能加速消除人的神经紧张，缓解压力，愉悦心情，满足人们精神上的享受。

[0027] 2、与其他伤口敷料相比，其制备工艺相对简单，生物相容性好，符合绿色、环保的理念；用脂质体技术代替精油直接掺入制得的壳聚糖基材料，保持显著抗菌效果，持久释放芳香味的同时，更降低了精油对人体皮肤造成的刺激。

[0028] 3、采用冻干方式制得的壳聚糖基伤口敷料，孔道较多，比表面积较大，精油脂质体被结合在聚合物介质中，不会在孔道中进行排列影响其自身的吸水性和透气性，这样也可以使香气释放时间更持久。

[0029] 4、材料通过程序冻干方式比急冻能获得更加均匀丰富的孔道结构，这些孔道通过裸露在表面的壳聚糖氨基正电荷吸附捕获表面带负电荷的细菌，然后再利用精油脂质体进行融合，从而杀灭细菌，即捕获融合杀菌机理。这样克服了发明专利ZL201310574818.X溶出的精油被伤口渗出液稀释的缺陷，能长期的保持杀菌效力。ZL201310574818.X制备的伤口敷料中没有丰富的孔道。

附图说明

[0030] 图1是实施例1所制得的壳聚糖基伤口敷料A截面扫描电镜图。

[0031] 图2是是本发明所述壳聚糖基伤口敷料的比表面积，图中，A为实施例1的比表面积，B为实施例2的比表面积，C为实施例3的比表面积，D为对比例1的比表面积，E为对比例2的比表面积，F为对比例3的比表面积，G、H为市售两种敷料的比表面积。

[0032] 图3是本发明所述壳聚糖基伤口敷料和市售两种敷料的凝血效果测定结果，图中，A为实施例1的凝血效果，B为实施例2的凝血效果，C为实施例3的凝血效果，D为对比例1的凝血效果，E为对比例2的凝血效果，F为对比例3的凝血效果，G、H为市售两种敷料的凝血效果。

[0033] 图4是本发明所述壳聚糖基伤口敷料的精油释放曲线，图中，A为实施例1的精油释放曲线，B为实施例2的精油释放曲线，C为实施例3的精油释放曲线，D为对比例1的精油释放曲线，E为对比例2的精油释放曲线，F为对比例3的精油释放曲线。

[0034] 图5是本发明所述壳聚糖基伤口敷料和市售两种敷料的瞬时菌体清除率测定结果，图中，A为实施例1的瞬时菌体清除率，B为实施例2的瞬时菌体清除率，C为实施例3的瞬时菌体清除率，D为对比例1的瞬时菌体清除率，E为对比例2的瞬时菌体清除率，F为对比例3的瞬时菌体清除率，G、H为市售两种敷料的瞬时菌体清除率。

具体实施方式

[0035] 根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

[0036] 香气释放时间的测定：将样品放入25℃，气压为1标准大气压，湿度50％的环境中每过一周取出测定，5人进行主观评价，大于等于3人评价为有香味的，则认定为香气仍在释放阶段。

[0037] 比表面积测定：采用比表面积测定仪测定敷料的比表面积。

[0038] 凝血效果的测定：将等量的壳聚糖基伤口敷料放入聚丙烯管中，预孵育至37℃。利用柠檬酸处理的全血0.2ml加入到管中，再加入20μl 0.2mol/l氯化钙溶液。然后把管子放入37℃下孵育，30转/分振荡，10分钟后没有被捕获的红细胞用25ml水洗下来，在540nm测定吸光度。

[0039] 精油释放曲线的测定：利用紫外分光光度法对壳聚糖基伤口敷料的释放性能进行测定。准确称取0.1g的壳聚糖基伤口敷料置于50ml 0.01mol/l pH7.4磷酸盐缓冲液(PBS)中振荡。使用紫外分光光度计在265nm处测定在PBS缓冲液中不同时间的壳聚糖膜萃取溶液吸光度。以吸光度为纵坐标，时间为横坐标，作壳聚糖基伤口敷料的释放曲线。

[0040] 瞬时菌体吸附实验：在24孔板中，每孔加入1.5ml浓度在108-109cfu/ml白色念珠菌菌悬液，放入剪成直径1cm的圆片形敷料，振荡5min，将敷料取出。用血球计数板计算剩余液体的菌体浓度。

[0041] 抑菌性测试：测试菌种为大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌。首先将壳聚糖基伤口敷料分别剪成直径约5mm的圆片，并经紫外灯灭菌，然后吸取0.1mL浓度在104-105cfu/ml菌悬液涂布于固体培养基平皿上，接着用无菌镊子夹取壳聚糖基冻干膜片贴在各种含菌平皿上，将其置于37℃的培养箱中培养18-24h后，测量抑菌圈直径。

[0042] 实施例1：

[0043] 一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法：

[0044] (1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油以质量比为1:1:1在4℃下以60转/分搅拌。将8g氯化钠，0.2氯化钾g/L，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸氢二钾，加入到800ml水中，搅拌使充分溶解，用盐酸调pH值至6.5，补充水至1000ml，加入60g吐温80，得到磷酸缓冲溶液。将精油混合物以1g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液即得天然芳香抑菌剂；

[0045] (2)将100mg大豆卵磷脂和25mg胆固醇溶于氯仿后倒入圆底烧瓶中，在室温下旋蒸至瓶壁形成一层均一的薄膜；在55℃超声水浴中将10ml天然芳香抑菌剂预热至55℃，再加入覆有薄膜的圆底烧瓶中，超声振荡10分钟，超声频率为400MHz，振荡频率为200转/分，制得脂质体悬液；

[0046] (3)将平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％的壳聚糖、海藻酸钠和明胶以质量比3:1:1混合，以4％w/v的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液。以1:2体积比将脂质体悬液与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液混合，加入总体积2g/100mL的蔗糖，在4℃，150转/分下搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开。

[0047] (4)将涂有液体的聚四氟乙烯板放入真空冷冻干燥箱，-5℃预冻6h，然后以5℃/h的速率降温至-80℃，再抽真空维持在0.012mBar以下，冷冻干燥90h，最终得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料A。

[0048] 实施例2：

[0049] 一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法：

[0050] (1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油以质量比为1:1:1在4℃下以60转/分搅拌。将8g氯化钠，0.2氯化钾g/L，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸氢二钾，加入到800ml水中，搅拌使充分溶解，用盐酸调pH值至6.5，补充水至1000ml，加入60g吐温80，得到磷酸缓冲溶液。将精油混合物以0.2g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液即得天然芳香抑菌剂；

[0051] (2)将100mg大豆卵磷脂和25mg胆固醇溶于氯仿后倒入圆底烧瓶中，在室温下旋蒸至瓶壁形成一层均一的薄膜；在55℃超声水浴中将10ml天然芳香抑菌剂预热至55℃，再加入覆有薄膜的圆底烧瓶中，超声振荡10分钟，超声频率为400MHz，振荡频率为200转/分，制得脂质体悬液；

[0052] (3)将平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％的壳聚糖、海藻酸钠和明胶以质量比2:1:1混合，以4％w/v的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液。以1:1体积比将脂质体悬液与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液混合，加入总体积2g/100mL的蔗糖，在4℃，150转/分下搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开。

[0053] (4)将涂有液体的聚四氟乙烯板放入真空冷冻干燥箱，-5℃预冻6h，然后以1℃/h的速率降温至-55℃，再抽真空维持在0.012mBar以下，冷冻干燥72h，最终得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料B。

[0054] 实施例3：

[0055] 一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法：

[0056] (1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油以质量比为1:1:1在4℃下以60转/分搅拌。将8g氯化钠，0.2氯化钾g/L，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸氢二钾，加入到800ml水中，搅拌使充分溶解，用盐酸调pH值至6.5，补充水至1000ml，加入60g吐温80，得到磷酸缓冲溶液。将精油混合物以2g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液即得天然芳香抑菌剂；

[0057] (2)将100mg大豆卵磷脂和25mg胆固醇溶于氯仿后倒入圆底烧瓶中，在室温下旋蒸至瓶壁形成一层均一的薄膜；在55℃超声水浴中将10ml天然芳香抑菌剂预热至55℃，再加入覆有薄膜的圆底烧瓶中，超声振荡10分钟，超声频率为400MHz，振荡频率为200转/分，制得脂质体悬液；

[0058] (3)将平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％的壳聚糖、海藻酸钠和明胶以质量比4:1:1混合，以4％w/v的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液。以1:3体积比将脂质体悬液与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液混合，加入总体积2g/100mL的蔗糖，在4℃，150转/分下搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开。

[0059] (4)将涂有液体的聚四氟乙烯板放入真空冷冻干燥箱，-5℃预冻6h，然后以10℃/h的速率降温至-80℃，再抽真空维持在0.012mBar以下，冷冻干燥100h，最终得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料C。

[0060] 对比例1：

[0061] 一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法：

[0062] (1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油以质量比为1:1:1在4℃下以60转/分搅拌。将8g氯化钠，0.2氯化钾g/L，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸氢二钾，加入到800ml水中，搅拌使充分溶解，用盐酸调pH值至6.5，补充水至1000ml，加入60g吐温80，得到磷酸缓冲溶液。将精油混合物以1g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液即得天然芳香抑菌剂；

[0063] (2)将平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％的壳聚糖、海藻酸钠和明胶以质量比3:1:1混合，以4％w/v的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液。以1:2体积比将天然芳香抑菌剂与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液混合，加入总体积2g/100mL的蔗糖，在4℃，150转/分下搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开。

[0064] (3)将涂有液体的聚四氟乙烯板放入真空冷冻干燥箱，-5℃预冻6h，然后以5℃/h的速率降温至-80℃，再抽真空维持在0.012mBar以下，冷冻干燥90h，最终得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料D。

[0065] 对比例2：

[0066] 一种芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料的制备方法：

[0067] (1)将茶树精油、薄荷醇和艾叶精油以质量比为1:1:1在4℃下以60转/分搅拌。将8g氯化钠，0.2氯化钾g/L，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸氢二钾，加入到800ml水中，搅拌使充分溶解，用盐酸调pH值至6.5，补充水至1000ml，加入60g吐温80，得到磷酸缓冲溶液。将精油混合物以1g/100mL的浓度加入磷酸缓冲溶液即得天然芳香抑菌剂；

[0068] (2)将100mg大豆卵磷脂和25mg胆固醇溶于氯仿后倒入圆底烧瓶中，在室温下旋蒸至瓶壁形成一层均一的薄膜；在55℃超声水浴中将10ml天然芳香抑菌剂预热至55℃，再加入覆有薄膜的圆底烧瓶中，超声振荡10分钟，超声频率为400MHz，振荡频率为200转/分，制得脂质体悬液；

[0069] (3)将平均分子量为500kDa，脱乙酰度为85％的壳聚糖、海藻酸钠和明胶以质量比3:1:1混合，以4％w/v的浓度溶于1％v/v乙酸水溶液中，4℃下充分搅拌均匀，调pH值至6.5即得壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液。以1:2体积比将脂质体悬液与壳聚糖-海藻酸钠-明胶溶液混合，加入总体积2g/100mL的蔗糖，在4℃，150转/分下搅拌获得均一液体；将液体涂于聚四氟乙烯板表面，放置2h使其完全展开。

[0070] (4)将涂有液体的聚四氟乙烯板室温下晾干，最终得到芳香抑菌的壳聚糖基伤口敷料E。

[0071] 对比例3：ZL201310574818.X

[0072] 一种壳聚糖基静电纺丝复合伤口敷料的制备方法，包括如下步骤：

[0073] (1)将0.5ml茶树精油和0.1g卵磷脂在0.5ml水中混合搅拌均匀，超声分散脱气，制得精油乳液；

[0074] (2)将0.75g壳聚糖(粘均分子量为5.0×105，脱乙酰度为80～85％)溶于50ml 90wt％的乙酸溶液中，加入1ml甘油作为增塑剂，加入1ml精油乳液，室温搅拌至完全溶解，制得纺丝液；

[0075] (3)将1g壳聚糖溶于50ml 2wt％的乙酸溶液中，加入1ml甘油作为增塑剂，室温搅拌至完全溶解，制得成膜液，利用流延成膜法制得壳聚糖膜，揭下备用；

[0076] (4)将壳聚糖膜包覆在静电纺丝接收板上，用10ml注射器(7#平头针)抽取纺丝液，固定在静电纺丝装置上，固定静电压20KV，接收距离为7cm，进样速率为0.3ml/h，在温度25℃下进行电纺，得到精油壳聚糖纤维颗粒层(图2为精油壳聚糖纤维颗粒层的扫描电镜照片)。

[0077] (5)静电纺丝完成后，再将一层壳聚糖膜覆盖在精油壳聚糖纤维颗粒层上，先用50℃压制10s，再用120℃压制10s，得到壳聚糖基静电纺丝复合伤口敷料F。

[0078] 敷料香气释放时间的测定结果如表1。

[0079] 表1 敷料香气释放时间的测定结果

[0080]样品 香气释放时间/(周)
A 26
B 27
C 32
D 12
E 10
F 27

[0081] 实施例1、2、3的样品具有更持久的香气释放时间，其作为敷料作用于伤口上时能更好的释放香气，遮盖掉伤口微生物作用可能产生的异味，使患者心情更愉悦。

[0082] 由上述实施例所制得的五种含植物精油的壳聚糖基伤口敷料以及市售的两种伤口敷料，其吸水性按照YY/T0471.1-2004标准进行测定，水蒸气透过率按照YY/T0471.2-2004标准进行测定，结果如表2。

[0083] 表2 伤口敷料的吸水性和水蒸气透过率测定结果

[0084]样品 吸水量/(g·g-1) 水蒸气透过率/(g·m-2·d-1)
A 26.72 3886
B 25.98 4100
C 27.17 4220
D 24.50 2073
E 3.03 2004
F 20.00 1886
G 3.49 2034
H 4.93 1987

[0085] 注：G为术宁愈肤贴壳聚糖创面敷料，品牌爱贝乐，生产厂家南昌华康医疗科技有限公司；H为壳聚糖医用膜，品牌泰宝，生产厂家广东泰宝科技医疗用品有限公司。

[0086] 本发明所制得的芳香抑菌壳聚糖基伤口敷料的吸水率达到26.72～27.17g·g-1，水蒸气透过率达到3886～4220g·m-2·d-1，吸水和透气性能都优于市售敷料。由于对比例1、2中没有采用脂质体技术或采用晾干成膜，而本发明采用脂质体及冻干成膜导致敷料内部结构为多孔结构(图1)，冻干技术制得的敷料比表面积更大(图2)，其吸水性、水蒸气透过率大大增加(表2)，可以使得伤口保持适度的干燥，有利于伤口结痂。

[0087] 敷料的凝血效果由A540nm表征，A540nm越小说明洗脱的血细胞越少，即敷料的凝血效果越好。图3显示，本发明实施例1、2、3制得的A、B、C的A540nm均小于0.05，而对比例的D、E在0.10-0.15之间，而市售的壳聚糖敷料均大于0.2。因此，本发明所制得的敷料具有更好的凝血效果。

[0088] 采用本发明技术获得的伤口敷料具有较佳的精油成分缓释效果(图4)，在35周中逐步缓慢释放。但是对比例中的D、E，释放时间较短，在15周之前敷料中的大部分精油成分已经释放进入环境，其精油缓释效果不及A、B、C。这意味着A、B、C敷料在医用环境中能更持久的产生抑菌效果。

[0089] 采用本发明技术获得的伤口敷料具有较佳的瞬时菌体清除率(图5)。A、B、C的瞬时菌体清除率在90％-95％。而其他敷料的瞬时菌体清除率均低于85％。尤其是F，尽管比表面积最大，但是过大的孔隙率会导致菌体的渗漏，对菌体截留作用下降。这意味着A、B、C敷料在医用环境中能在更短的时间内截留更多的菌体。

[0090] 敷料的抑菌测试结果如表3。

[0091] 表3 敷料的抑菌测试结果

[0092]

[0093] 含有精油的壳聚糖基伤口敷料均具有一定的抑菌活性。但是采用本发明技术的壳聚糖敷料其抑菌作用更加突出，而市售的壳聚糖基伤口敷料作用微弱，基本不能抑制微生物的生长。