一种L‑鸟氨酸琥珀酸中性盐的制备方法及应用

摘要

本发明属于医药化工领域，公开了一种L‑鸟氨酸琥珀酸中性盐的制备方法及应用。该方法首先制备游离的L‑鸟氨酸水溶液，将琥珀酸粉末、晶体或者溶液加入到该溶液中，搅拌反应，得到L‑鸟氨酸琥珀酸中性盐溶液，再将L‑鸟氨酸琥珀酸中性盐以晶体形式析出。该方法简单可行、生产成本低、产品的收率高纯度高，可进行工业化推广，L‑鸟氨酸琥珀酸中性盐可用来制备治疗糖尿病的药物和各类解毒药。

权利要求

1.L-鸟氨酸琥珀酸中性盐在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

2.L-鸟氨酸琥珀酸中性盐在制备解毒药中的应用，所述的解毒药为对硫酸镉解毒的药物。

说明书

一种L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的制备方法及应用

技术领域

[0001] 本发明属于医药化工领域，涉及一种L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的制备方法及应用。技术背景

[0002] 如今相关L-鸟氨酸的很多产品被开发应用。L-鸟氨酸在医药领域用于止血抢救、神经修复、保肝护肝、心脑血管等方面；在保健品、食品添加剂中，主要用于饮料、营养品、美容食品、解酒等。L-鸟氨酸相关的盐有很多，L-鸟氨酸门冬氨酸治疗肝性脑病、肝炎以及保护肝脏，L-鸟氨酸苯乙酸用于因尿素循环障碍引起的肝性脑病，L-鸟氨酸阿司匹林主要用于心血管病、降血压等。

[0003] 琥珀酸是人体三羧酸循环的中间代谢产物，具有抗焦虑、改善睡眠、治疗癫痫、催眠等作用。琥珀酸和中枢神经系统具有很大的关联，它的结构和γ-氨基丁酸、牛磺酸具有相似的结构，所以琥珀酸对焦虑具有很好的治疗效果。琥珀酸以盐的形式作为营养补充食品，并得到了美国食品药物管理局的批准。

[0004] 目前，国内外还没有关于L-鸟氨酸琥珀酸中性盐制备及新用途的报道。

发明内容

[0005] 本发明的目的是针对上述技术问题，提供一种L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的制备方法。

[0006] 本发明还有一个目的是提供L-鸟氨酸琥珀酸中性盐在制药中的应用。

[0007] 本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

[0008] 一种L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的制备方法，该方法首先制备游离的L-鸟氨酸水溶液，将琥珀酸粉末、晶体或者溶液加入到该溶液中，搅拌反应，得到L-鸟氨酸琥珀酸中性盐溶液，再将L-鸟氨酸琥珀酸中性盐以晶体形式析出。

[0009] 按上述制备方法得到的L-鸟氨酸琥珀酸中性盐，其晶体中L-鸟氨酸与琥珀酸的摩尔比列为2:1，并含2个分子结晶水。

[0010] 所述的制备方法，其中L-鸟氨酸水溶液获得方法如下。

[0011] 方法一、通过微生物发酵获得L-鸟氨酸发酵液，再分离纯化获得L鸟氨酸的水溶液，然后将其浓缩为150-350g/L；

[0012] 方法二、称取一定量的L-鸟氨酸盐溶于水，调节pH至1.0-3.0，上用氨水处理过的强酸型阳离子交换柱，然后用去离子水除去杂质后，用0.05-1.0mol/L的氨水将L-鸟氨酸洗脱下来，浓缩到150-350g/L。

[0013] 方法二中L-鸟氨酸盐为L-鸟氨酸的盐酸盐、硝酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、谷氨酸盐、苯乙酸盐、苹果酸盐、阿司匹林盐、α-酮戊二酸盐、磷酸盐中的一种或者多种。

[0014] 所述的制备方法，其中L-鸟氨酸和琥珀酸的开始反应摩尔比例为2.3-1.8:1，反应温度为10-50℃。

[0015] 所述的制备方法，其中结晶过程中pH为6-8，结晶时的温度控制在15-55℃，搅拌转速控制在160-270rpm，结晶过程中添加的晶种量为结晶产物理论值的0.6-7wt％，结晶可以采取降温、升温、蒸发溶剂、加入反溶剂中的一种或多种方式，L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的结晶初始浓度为100-600g/L。

[0016] 所述的制备方法，其中所述的反溶剂为亲水有机溶剂，优选以下物质中的一种或者是多种的组合：乙醇、甲醇、乙腈、丙醇、异丙醇、2-丁醇、乙二醇、丙酮，所述的反溶剂的水溶液浓度在70-100％；反溶剂的添加速率为0.1-0.8mL/min，反溶剂的添加量为结晶液起始液体积的0.5-12倍。

[0017] L-鸟氨酸琥珀酸中性盐在制备治疗糖尿病的药物中的应用。

[0018] L-鸟氨酸琥珀酸中性盐在制备解毒药中的应用，所述的解毒药可以解除蛇毒、酸中毒、氨中毒、或化学中毒等。

[0019] L-鸟氨酸琥珀酸中性盐在制备戒烟戒毒、保肝护肝的药物中的应用

[0020] 本发明在制备方法中，用高效液相色谱法检测L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的含量。

[0021] 本发明的有益效果:

[0022] 本发明的制备方法简单可行、生产成本低、产品的收率高纯度高，可进行工业化推广，可以用来治疗糖尿病和各类解毒。

[0023] L-鸟氨酸琥珀酸中性盐是一种酸碱度适合人体的复合盐，它具有很强的水溶性(20℃时，100ml水中溶解606g)。L-鸟氨酸琥珀酸中性盐具有较好的解毒效果，比如蛇毒(中华眼镜蛇毒素)。中华眼镜蛇毒素主要是通过抑制细胞线粒体的呼吸作用，导致呼吸麻痹，缺氧。L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的很强的水溶性，可以迅速大量进入肝脏细胞的线粒体，琥珀酸和ADP的偶联作用就可以解除细胞毒素对呼吸作用的抑制，从而达到了解毒的功能。同时L-鸟氨酸通过尿素循环和氨基酸盐溶剂对CO2捕集作用，迅速清除细胞内的CO2，维持细胞内的pH稳定，从而有利于解毒。L-鸟氨酸琥珀酸中性盐还可以用于氨中毒、重金属中毒、化合物中毒等。该盐通过尿素循环可以很快地降低人体内氨的水平，达到正常的水平，从而达到解毒的功能。它还可以和有毒的化学物质形成螯合物等从而降低有毒物质的毒性，如重金属离子等。

[0024] L-鸟氨酸琥珀酸中性盐还可用于养生护理。抽烟吸毒使人体积累了大量的生物碱，而且抽烟吸毒还有其他很多有毒有害物质，这些都是靠人体的肝脏来降解，造成了脏脏处于负荷状态，长期以往导致就会导致肝脏功能的障碍。而L-鸟氨酸琥珀酸中性盐可以中和体内有害的生物碱，调节中枢神经，抑制了烟瘾毒瘾的再次发作，最终达到戒烟戒毒的目的。同时，L-鸟氨酸琥珀酸中性盐有保肝护肝的作用，可以修复抽烟吸毒对肝脏的伤害。

[0025] L-鸟氨酸琥珀酸中性盐对糖尿病也具有很好的缓解效果。糖尿病患者由于血糖浓度过高，导致了多饮多尿多食，并且对眼、肾、心血管等具有严重的损害作用。糖尿病患者体内的脂肪、蛋白质一般会被大量地被消耗。脂肪和蛋白质被消耗时，体内必定产生大量的二氧化碳和氨，二氧化碳过多不利于人体的酸碱平衡，氨对人体的神经系统有着巨大的毒害作用，二者必须迅速地排除体外，保证机体的正常运行。L-鸟氨酸琥珀酸中性盐可以直接参加人体的三羧酸循环，代替葡萄糖为人体提供能量，从而可以通过服用L-鸟氨酸琥珀酸中性盐来缓解血糖浓度太高对人体的器官造成了损害。L-鸟氨酸琥珀酸中性盐可以通过加速尿素循环清除体内的二氧化碳和氨，再通过肾脏排出体外。

附图说明

[0026] 图1是L-鸟氨酸琥珀酸中性盐红外光谱图。

[0027] 图2是L-鸟氨酸琥珀酸中性盐的热重图。

[0028] 图3是L-鸟氨酸琥珀酸中性盐图(640倍)。

[0029] 图4是L-鸟氨酸琥珀酸中性盐图(160倍)。

[0030] 图5是L-鸟氨酸琥珀酸中性盐氢谱图。

[0031] 图6是L-鸟氨酸盐酸盐液相色谱图。

[0032] 图7是琥珀酸液相色谱图。

具体实施方式

[0033] 以下通过实施例对本发明作进一步的阐述。

[0034] 实施例1

[0035] 将L-鸟氨酸发酵液按照文献CN101955901A的实施例1、2处理得到L-鸟氨酸的水溶液，将水溶液浓缩为320g/L，取50mL L-鸟氨酸溶液加入7.2g琥珀酸晶体，搅拌反应至溶液透明溶液，pH达到7.1，然后在常温加入无水乙醇25mL使溶液快速接近饱和状态，在25℃下以0.2-0.5ml/min加入200mL 80％的乙醇溶液且不断搅拌，速率为200rpm，在此过程中加入晶种0.7g，然后缓慢降温至15℃保持4h，过滤，洗涤，干燥晶体，得到晶体18.5g，产率70.9％。通过高效液相测得纯度为98.3％，热重测得含有二个分子结晶水。

[0036] 实施例2、

[0037] 量取90mL 25％的氨水稀释至1.5L，将810g JK006阳离子交换柱转化为氨型，接着用去离子水冲去柱子间的杂质至pH为8-9。称取45.0g L-鸟氨酸盐酸盐溶解在1500mL的水中，盐酸调节溶液的pH到2。将L-鸟氨酸盐酸盐溶液上柱，用去离子水洗去杂质，直到电导100uS/cm以下，接着用0.8mol/L的氨水将L-鸟氨酸洗脱下来。将得到的L-鸟氨酸溶液蒸馏除氨到150mL，测得浓度250g/L。常温下取40mL L-鸟氨酸溶液加入4.5g琥珀酸晶体，搅拌反应至溶液透明，pH为7.0。在25℃下0.2-0.5ml/min加入500mL 80％的乙醇溶液并在此过程中加入0.4g晶种，搅拌速率为200rpm，然后缓慢降温至15℃保持4h，过滤，洗涤，干燥晶体，得到晶体12.3g。产率75.2％。通过高效液相测得纯度98.7％，热重测得含有二个结晶水。

[0038] 实施例3、

[0039] 量取90mL 25％的氨水稀释至1.5L，将1000g JK006阳离子交换柱转化为氨型，接着用去离子水冲去柱子间的杂质至pH为8-9。称取60.0gL-鸟氨酸盐酸盐溶解在2000mL的水中，盐酸调节溶液的pH到2。将L-鸟氨酸盐酸盐溶液上柱，用去离子水洗去杂质，直到电导100uS/cm以下，接着用0.8mol/L氨水将L-鸟氨酸洗脱下来。L-鸟氨酸溶液蒸馏除氨到
150mL，测得浓度320g/L。取50mLL-鸟氨酸溶液加入7.2g左右琥珀酸晶体，搅拌反应至溶液透明，pH为7.0，然后在15℃加入无水甲醇25mL快速达到饱和，在25℃下0.2-0.5ml/min加入
300mL 95％的甲醇溶液且搅拌速率为210rpm加入晶种0.7g，然后缓慢降温至15℃保持4h，过滤，洗涤，干燥晶体，得到晶体19g，产率73.0％。通过高效液相测得纯度为98.1％，热重测得含有二个结晶水。

[0040] 实施例4、

[0041] 实验使用成年健康的Wistar雄性大鼠若干只，体重295—305g，随机选取10只作为空白对照给予大鼠正常的食料，剩下的大鼠每天用60mg/kg的四氧嘧啶连续饲养一周后，禁食12小时但不禁水，空腹，从大鼠毛细管眼眶静脉丛取血测定大鼠血糖浓度，挑选血糖浓度大于12mmol/L的大鼠，将所有大鼠分为6组，空白对照组、模型对照组、实验组(低剂量、中剂量、高剂量)、阳性药物(黄连素)对照组，连续每天给药42天，从尾部取血测定血糖浓度。空白和模型对照组给予生理盐水，实验组每天给予剂量L-鸟氨酸琥珀酸中性盐(按本发明实施例2制备)。

[0042]

[0043] 根据上表可知，当L-鸟氨酸琥珀酸中性盐高剂量相对于模型组具有显著的效果(P<0.05)。

[0044] 实施例5、

[0045] 试验使用昆明鼠48只雄鼠，体重30±3g，小鼠给予空腹注射8mg/kg的硫酸镉，然后给小鼠喂食L-鸟氨酸琥珀酸中性盐，分为高剂量组(1000mg/kg)、低剂量组(500mg/kg)、及其各自的对照组(生理盐水)，每组12只小鼠，24小时后观察各组死亡率。

[0046]剂量 喂食组死亡数(只) 对照组死亡数(只) P
500mg/kg 6 11 <0.05

[0047]1000mg/kg 2 10 <0.01

[0048] 以上结果表明，小鼠喂食L-鸟氨酸琥珀酸中性盐对硫酸镉中毒具有明显的解毒效果。