一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法

摘要

本发明公开了一种从红豆杉枝叶中分离提纯10?去乙酰基巴卡亭III的方法。它包含以下工艺过程1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，用80％乙醇回流提取5小时，连续提取3次，滤液减压浓缩后得10?DABIII提取物。2)将10?DABIII提取物溶解后干法上样，收集含10?DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10?DABIII半成品。3)将10?DABIII半成品溶解后，按1：1.5?4的摩尔比加入咪唑类化合物，搅拌30min后静置，0℃冷却，过滤，干燥，得10?DABIII与咪唑的结晶配合物。4)将10?DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，萃取，干燥，去除溶剂后得10?DABⅢ纯品含量在99％以上。

权利要求

1.一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得到10-DABIII提取物，其中10-DABIII的质量含量为8-20％；

(2)将10-DABIII提取物用溶剂溶解后干法上样，用洗脱液洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品；

(3)将上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩尔比为10-DABIII半成品：咪唑类化合物＝1：1.5-4.0的比例加入咪唑类化合物，室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物；

(4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品。

2.如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于：步骤(2)中溶解10-DABIII提取物的溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇中的一种或几种。

3.如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于：步骤(2)中的洗脱液选自下述混合溶剂中的一种：乙酸乙酯-石油醚、甲醇-四氢呋喃-正己烷、乙酸乙酯-环己烷。

4.如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于：步骤(3)中的咪唑类化合物为咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一种或几种。

5.如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于：经过一次柱层析和一次添加咪唑类化合物进行结晶纯化获得高纯度10-DABIII。

6.如权利要求1所述的一种从红豆杉枝叶中高效分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，其特征在于：所得10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水分离，有机溶剂萃取得纯品。

说明书

一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法

技术领域

[0001] 本发明涉及一种从红豆杉枝叶中分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III(10-DAB III)的方法，特别是利用10-DAB III粗品与咪唑类化合物结晶纯化获得高纯度10-DAB III的分离方法。

背景技术

[0002] 多西紫杉醇被认为是迄今疗效最显著的抗癌药物之一，1996年经FDA确认开始用于肺癌、乳腺癌、结肠癌等方面的临床药物。多西紫杉醇和紫杉醇(Taxol)一样具有广谱的抗白血病和抗实体肿瘤活性，结构复杂，多官能团和多手性中心等，全合成成本高、难度较大。当发现欧洲红豆杉的针叶中提取到浓度较高的紫杉烷类似物10-去乙酰基巴卡亭(10-deacetyl baccatin III,简称10-DAB III)中间体后，多西紫杉醇的合成及规模化生产才成为可能。10-DAB III的结构式如下：

[0003]

[0004] 10-DAB Ⅲ主要分布在红豆杉的枝叶中，其含量可高达0.1％以上，而在多年生的树皮含量最少。其分布与紫杉醇的分布刚好相反,紫杉醇主要分布在多年生的红豆杉树皮中，含量多在0.03％以下，而在叶中含量极低，大多不及树皮中含量的十分之一。枝叶是可再生资源，因此生产10-DAB Ⅲ不象生产紫杉醇以牺牲有限的红豆杉资源为代价，因此,研究10-DABⅢ的提取和纯化工艺具有十分重要的意义。

[0005] 目前，关于10-DABⅢ的提取分离已有大量文献和专利报道，基本上都是采取提取、分离、结晶三个步骤，其中分离和结晶是影响得率和纯度的关键步骤。常规采用甲醇或酒精进行浸泡提取，萃取浓缩，然后多次硅胶柱层析分离，重结晶得到一定纯度的10-DABIII。多次柱层析分离和重结晶过程不仅费时费力，增加溶剂成本，还会降低得率。因而如何简化分离纯化工艺，尽可能少的利用有机溶剂方便的获得高质量的10-DABIII成为该领域研究的重点。

[0006] 中国专利公开号CN1473821A公开了一种提取10-DABIII的方法，采用常规硅胶柱层析分离提取处理出的半成品10-DABIII，该方法较耗费时间，溶剂消耗量也大，容易造成得率的损失。中国专利公开号CN1398859A公开了一种从种植红豆杉枝叶用后残渣中提取10-DABIII的方法，该方法涉及制备液相色谱分离过程，但所用溶剂体系和梯度洗脱手段在规模化生产中显得工艺复杂，溶剂消耗量大。中国专利公开号CN101045719A公开了一种利用制备液相色谱分离纯化10-DABIII的半成品，用分析纯四氢呋喃、正己烷和甲醇混合溶剂为洗脱流动相，制备工艺较为复杂，更适合于实验室小批量生产。

发明内容

[0007] 针对10-DABIII的提取纯化需要使用多次柱层析及重结晶，或者使用复杂的制备色谱技术来实现的现状，本发明提出将10-DABIII粗品经一次柱层析和一次添加咪唑类化合物进行结晶纯化获得高纯度精品的简化分离方法。考虑到10-DABⅢ的结构中含有多羟基，如果加入含氮有机化合物，则两者之间可能通过氢键形成结晶化合物，我们研究发现，10-DABⅢ易与咪唑形成结晶配合物，而不受其它杂质影响，更为重要的是，形成的结晶配合物加水后可以方便的用有机溶剂提取出来，这样的结晶分离过程为获得高纯度的10-DABⅢ提供了方便。

[0008] 本发明的目的在于提供一种简易高效分离纯化10-DABIII粗品，获得高纯度10-DABIII的方法。

[0009] 本发明的目的通过以下技术方案实现：

[0010] (1)将红豆杉枝叶粉碎烘干后，按固液比1:10的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得到10-DABIII提取物，其中10-DABIII的质量含量为8-20％；

[0011] (2)将10-DABIII提取物用溶剂溶解后干法上样，用洗脱液洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品；

[0012] (3)将上述10-DABIII半成品用二氯甲烷溶解后，按摩尔比为10-DABIII半成品：咪唑类化合物＝1：1.5-4.0的比例加入咪唑类化合物，室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物；

[0013] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，再用无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品。

[0014] 步骤(2)所述溶解10-DABIII提取物的溶剂为四氢呋喃、二氯甲烷、甲醇中的一种或几种；

[0015] 步骤(2)所述的洗脱液选自下述混合溶剂中的任意一种：乙酸乙酯-石油醚、甲醇-四氢呋喃-正己烷、乙酸乙酯-环己烷；

[0016] 步骤(3)所述的咪唑类化合物为咪唑、1-甲基咪唑、2-甲基咪唑中的一种或几种。

[0017] 本发明具有以下优点：

[0018] (1)利用10-DABⅢ易与咪唑类化合物形成结晶配合物的特点，方便的实现了10-DABⅢ与其它紫杉烷类化合物进行分离的目的；

[0019] (2)10-DABⅢ与咪唑类化合物形成结晶配合物后，可以方便的用有机溶剂提取分离，从而获得高纯度产品；

[0020] (3)分离过程仅需一次柱层析和一次结晶分离过程，避免了连续多次的柱层析及重结晶操作，大大减少了人力、物力耗费；

[0021] (4)与10-DABⅢ形成结晶配合物的咪唑类化合物可以回收，循环使用，成本更低也更环保。

具体实施方式

[0022] 实施例1：

[0023] (1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取1kg细粉按固液比1:10的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得10-DABIII提取物120g。

[0024] (2)将10-DABIII提取物用300mL四氢呋喃溶解后干法上样，用乙酸乙酯-石油醚(体积比乙酸乙酯：石油醚＝2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品1.85g。

[0025] (3)将上述10-DABIII半成品用20mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑0.20g，室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物1.08g。

[0026] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品0.896g，纯度99.2％。

[0027] 实施例2：

[0028] (1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取10kg粉末按固液比1:10的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得10-DABIII提取物1350g。

[0029] (2)将10-DABIII提取物用3000mL四氢呋喃溶解后多次干法上样，用乙酸乙酯-环己烷(体积比乙酸乙酯：环己烷＝2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品22.8g。

[0030] (3)将上述10-DABIII半成品用200mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑3.0g，室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物11.9g。

[0031] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，去除溶剂后得10-DABⅢ纯品9.35g，纯度99.4％。

[0032] 实施例3：

[0033] (1)将红豆杉枝叶烘干后粉碎成100目的细粉，取5kg粉末按固液比1:10的比例用体积分数为80％的乙醇水溶液回流提取5小时，连续提取3次，合并滤液，减压浓缩后得10-DABIII提取物680g。

[0034] (2)将10-DABIII提取物用1200mL二氯甲烷溶解后多次干法上样，用乙酸乙酯-石油醚(体积比乙酸乙酯：石油醚＝2:1)洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，蒸除溶剂得10-DABIII半成品10.9g。

[0035] (3)将上述10-DABIII半成品用100mL二氯甲烷溶解后，加入咪唑2.0g，室温搅拌30min后，静置，0℃冷却，将所得晶状固体过滤，真空干燥，得10-DABIII与咪唑的结晶配合物5.8g。

[0036] (4)将上述10-DABIII与咪唑的结晶配合物加水溶解，用二氯甲烷萃取三次，合并