中药覆盆子中指标成分含量的测定方法

摘要

本发明实施例公开了一种中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液；(2)制备混合对照品溶液；(3)超高效液相色谱检测；(4)建立N种指标成分各自的标准曲线；(5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量。本发明构建的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，准确高效，可用于对中药覆盆子的质量控制，并且该方法可同时检测中药覆盆子中多种指标成分，相对于针对不同指标成分分别检测的方法，缩短检测总时间，节省试剂成本。并且检测结果准确，精密度高，重复性好，稳定性高，专属性强。(56)对比文件杜龙飞等.覆盆子的化学成分研究《.天然产物研究与开发》.2014,第26卷第1957-1960页.JULES BEEKWILDER等.Antioxidants inRaspberry: On-Line Analysis LinksAntioxidant Activity to a Diversity ofIndividual Metabolites《.J. Agric. FoodChem.》.2005,第53卷第3313−3320页.

权利要求

1.中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：(1)制备供试品溶液

将质量为M的中药覆盆子与V体积0～100％甲醇混合，得到二者混合液，在确定混合液的重量M1后，对其进行提取操作，然后用0～100％甲醇将所述混合液的重量补足至M1，取上清液，即得供试品溶液；

(2)制备混合对照品溶液

分别称取中药覆盆子中N种指标成分的对照品，分别用0～100％甲醇溶解，定容，得到具有已知浓度的各指标成分的对照品溶液；其中，所述指标成分为腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷，N＝

8；

再分别量取各指标成分的对照品溶液，混合，用0～100％甲醇定容，得到混合对照品储备液，所述混合对照品储备液中各指标成分具有已知浓度；

将对照品混合储备液用0～100％甲醇逐级稀释成一系列分别具有不同已知浓度的混合对照品溶液；

(3)超高效液相色谱检测

色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：乙腈:0.1％甲酸比为0～2min，3:97～5:95；2～8min，5:95～11.5:88.5；8～13.5min，11.5:88.5～15.5:

84.5；13.5～15min，15.5:84.5～18:82；15～18min，18:82～20:80；18～23min，20:80～38:

62；23～25min，38:62～70:30；流速为0.2～1.0mL/min，柱温为30℃，PDA检测器，检测波长为256nm、265nm、271nm和344nm；

在所述色谱条件下，将V1体积的供试品溶液及各浓度的混合对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，获得供试品溶液的超高效液相色谱图及各浓度混合对照品溶液的超高效液相色谱图；

(4)建立N种指标成分各自的标准曲线

以各混合对照品溶液的超高效液相色谱图中各指标成分的色谱峰峰面积为纵坐标或横坐标，以混合对照品溶液中各指标成分的浓度为横坐标或纵坐标，分别建立各指标成分的标准曲线；

(5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量

根据供试品溶液超高效液相色谱图中N种指标成分各自的色谱峰峰面积，及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出N种指标成分各自的浓度C浓，并按照下列公式分别计算出供试品中N种指标成分各自的含量：含量＝C浓*V/M。

2.如权利要求1所述的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，其特征在于，所述提取为超声提取。

3.如权利要求1所述的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，其特征在于，在将所述混合液的重量补足至M1后，离心，再取上清液。

4.如权利要求1所述的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，其特征在于，所述0～

100％甲醇为70～85％甲醇。

5.如权利要求1所述的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，其特征在于，所述流速为0.4mL/min。

说明书

中药覆盆子中指标成分含量的测定方法

技术领域

[0001] 本发明涉及中药质量控制领域，特别涉及中药覆盆子中指标成分含量的测定方法。

背景技术

[0002] 中药覆盆子为蔷薇科悬钩子属植物华东覆盆子(Rubus chingii Hu)的干燥果实。夏初果实由绿变绿黄时采收，除去梗、叶，置沸水中略烫或略蒸，取出，干燥，即得中药覆盆子。中药覆盆子具有益肾固精缩尿、养肝明目之功效，临床用于治疗遗精滑精、遗尿尿频、阳痿早泄、目暗昏花等。现代药理研究表明覆盆子具有抗氧化、抗炎、抗血栓、抗癌等活性，其化学成分主要有黄酮类、萜类、甾体类、酚酸类等。

[0003] 《中国药典》2010年版一部收录了中药覆盆子性状和粉末鉴别，未收录薄层鉴别和含量测定项。但是，只通过性状和粉末的鉴别难以科学评价和控制中药覆盆子的品质质量。只有进一步的测定中药覆盆子中指标成分的含量，才能从根本上保证中药覆盆子的药效。

发明内容

[0004] 为了更好地评价和控制中药覆盆子的品质，本发明实施例公开了中药覆盆子中指标成分含量的测定方法。技术方案如下：

[0005] 中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，包括以下步骤：

[0006] (1)制备供试品溶液

[0007] 将质量为M的中药覆盆子与V体积0～100％甲醇混合，得到二者混合液，在确定混合液的重量M1后，对其进行提取操作，然后用0～100％甲醇将所述混合液的重量补足至M1，取上清液，即得供试品溶液；

[0008] (2)制备混合对照品溶液

[0009] 分别称取中药覆盆子中N种指标成分的对照品，分别用0～100％甲醇溶解，定容，得到具有已知浓度的各指标成分的对照品溶液；

[0010] 再分别量取各指标成分的对照品溶液，混合，用0～100％甲醇定容，得到混合对照品储备液，所述混合对照品储备液中各指标成分具有已知浓度；

[0011] 将对照品混合储备液用0～100％甲醇逐级稀释成一系列分别具有不同已知浓度的混合对照品溶液；

[0012] (3)超高效液相色谱检测

[0013] 色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为(3～70):(97～30)；流速为0.2～1.0mL/min，柱温为30～50℃，PDA检测器，检测波长为253～344nm；

[0014] 在所述色谱条件下，将V1体积的供试品溶液及各浓度的混合对照品溶液分别注入超高效液相色谱仪中，获得供试品溶液的超高效液相色谱图及各浓度混合对照品溶液的超高效液相色谱图；

[0015] (4)建立N种指标成分各自的标准曲线

[0016] 以各混合对照品溶液的超高效液相色谱图中各指标成分的色谱峰峰面积为纵坐标或横坐标，以混合对照品溶液中各指标成分的浓度为横坐标或纵坐标，分别建立各指标成分的标准曲线；

[0017] (5)确定N种指标成分在供试品中各自的含量

[0018] 根据供试品溶液超高效液相色谱图中N种指标成分各自的色谱峰峰面积，及已建立的各指标成分的标准曲线，分别计算出N种指标成分各自的浓度C浓，并按照下列公式分别计算出供试品中N种指标成分各自的含量：

[0019] 含量＝C浓*V/M。

[0020] 在本发明的一种优选实施方式中，所述提取为超声提取。

[0021] 在本发明的一种优选实施方式中，在将所述混合液的重量补足至M1后，离心，再取上清液。

[0022] 在本发明的一种优选实施方式中，所述0～100％甲醇为70～85％甲醇。

[0023] 在本发明的一种优选实施方式中，所述流速为0.4mL/min。

[0024] 在本发明的一种优选实施方式中，所述流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为18:82。

[0025] 在本发明的一种更优选实施方式中，所述的指标成分为鞣花酸，即N＝1时，所述色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为18:82；流速0.4mL/min；柱温40℃；PDA检测器；检测波长为253nm。

[0026] 在本发明的一种更优选实施方式中，所述指标成分为鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷，即N＝2时，所述色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，A相:B相为18:82；流速0.4mL/min；柱温40℃；PDA检测器；检测波长为253nm和265nm。

[0027] 在本发明的一种更优选实施方式中，所述指标成分为腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷，即N＝8时，所述色谱条件包括：固定相：采用十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱；流动相：乙腈:0.1％甲酸比为0～2min，3:97～5:95；2～8min，5:95～11.5:88.5；8～13.5min，11.5:88.5～15.5:84.5；13.5～15min，15.5:84.5～18:82；15～18min，18:82～20:80；18～23min，20:80～38:62；23～25min，38:62～70:30；柱温为30℃；PDA检测器；检测波长为256nm、265nm、
271nm和344nm。

[0028] 本发明构建的中药覆盆子中指标成分含量的测定方法，准确高效，可用于对中药覆盆子的质量控制，并且该方法可同时检测中药覆盆子中多种指标成分，相对于针对不同指标成分分别检测的方法，缩短检测总时间，节省试剂成本。并且检测结果准确，精密度高，重复性好，稳定性高，专属性强。

[0029] 当然，实施本发明的任一产品或方法并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

附图说明

[0030] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

[0031] 图1A为253nm波长下鞣花酸对照品溶液超高效液相色谱图；

[0032] 图1B为253nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；

[0033] 图2A为253nm波长下鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷混合对照品溶液色谱图；

[0034] 图2B为265nm波长下鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷混合对照品溶液色谱图；

[0035] 图2C为253nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液色谱图；

[0036] 图2D为265nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液色谱图；

[0037] 图3A为256nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；

[0038] 图3B为265nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；

[0039] 图3C为271nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；

[0040] 图3D为344nm波长下8种混合对照品溶液色谱图；

[0041] 图3E为256nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；

[0042] 图3F为265nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；

[0043] 图3G为271nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图；

[0044] 图3H为344nm波长下中药覆盆子(浙江)供试品溶液的色谱图。

具体实施方式

[0045] 《中国药典》2010年版一部收录了中药覆盆子性状和粉末鉴别，未收录薄层鉴别和含量测定项。目前已知中药覆盆子成分中腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的含量对评定中药覆盆子药性很重要。

[0046] 本发明建立了一种中药覆盆子中指标成分含量的测定方法。该方法可以根据本领域技术人员的需要，将中药覆盆子成分中的1种或多种作为指标成分，进行含量测定，在此发明人对指标成分的种类不做具体限定。

[0047] 在本发明的技术方案中，制备供试品溶液的步骤中将中药覆盆子与0～100％甲醇混合后，称重，提取完毕后，再称重，用相同体积分数的甲醇补足失重，再取上清，上述步骤可达到两个目的：充分提取和定容。此定容方法相对于取尽上清再用提取溶剂定容的方法，可以消除实验操作过程中的人为不能将上清悉数取尽所产生的误差，获得的结果更接近理论真实值。此定容方法是对传统的定容方法的改良。用此方法定容后，取部分上清液，能够满足后续实验的需求即可，简化了定容的实验步骤。本领域技术人员能够想到0～100％甲醇都可以实现将中药覆盆子中的指标成分提取的目的，但为了提高提取效率，优选70～85％甲醇作为提取溶剂，更优选体积分数为70％甲醇进行提取；为了确保在取上清时，不会取到药渣，影响后续的检测结果，优选离心后取上清。

[0048] 本发明的技术方案，在制备对照品溶液过程中，先将指标成分对照品分别溶解定容，制成具有已知浓度的对照品储备液；再分别精密吸取适量的对照品储备液，混合，用0～100％甲醇定容，得到具有已知浓度的各指标成分的混合对照品溶液；最后，逐级稀释成一系列分别具有不同已知浓度的混合对照品溶液。这样可以实现同时检测几种对照品溶液的目的，省去对于每个对照品分别进样的繁琐步骤，节省时间。在本领域中，通常稀释5-8个浓度梯度，这样处理在建立标准曲线时，线性关系好，可以正确评定供试品溶液中指标成分的浓度。

[0049] 本发明技术方案的色谱条件：固定相：十八烷基硅烷键合硅胶(C18)色谱柱的规格为3.0mm×100mm，1.7μm；流动相：A相为乙腈，B相为0.1％甲酸，当分析一两种指标成分时，可设定等度洗脱，即A相与B相比例不变，当分析更多种指标成分时，为了将各种指标成分充分分离，确保每个色谱峰的成分单一，可设定为梯度洗脱，即A相与B相比例随着设定洗脱时间而变化。如本发明的优选方案中，当检测的中药覆盆子的指标成分为鞣花酸或鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷时，流动相：乙腈:0.1％甲酸为18:82；当检测中药覆盆子8种指标成分(腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷，所述的对照品为腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷)时，流动相：乙腈:0.1％甲酸比为0～2min，3:97～5:95；2～8min，5:95～11.5:88.5；8～13.5min，11.5:88.5～15.5:
84.5；13.5～15min，15.5:84.5～18:82；15～18min，18:82～20:80；18～23min，20:80～38:
62；23～25min，38:62～70:30。流速可以为0.2～1.0mL/min，优选0.4mL/min，柱温30～50℃。本发明针对中药覆盆子中指标成分设定的色谱检测条件，获得的色谱图显示指标成分的色谱峰峰形尖锐，不拖尾，可将供试品中的成分彻底分离，检测数据真实准确。本发明选用的PDA检测器，即光电二极管阵列检测器，可同时在多个波长下对物质进行检测，检测结果稳定可靠。

[0050] 本发明中所述0～100％甲醇指的是体积分数为0～100％的甲醇水溶液，如70％甲醇是指体积分数为70％的甲醇水溶液，85％甲醇是指体积分数为85％的甲醇水溶液；同样地，所述0.1％甲酸为体积分数为0.1的甲酸水溶液。

[0051] 下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

[0052] 仪器与试药

[0053] 超高效液相色谱仪(Waters ACQUITY UPLCTM system，包括柱温箱、在线真空脱气机、高压二元梯度泵、自动进样器、PDA检测器，美国Waters公司)；十万分之一天平(METTLER TOLEDO XP6，瑞士METTLER公司)；万分之一天平(METTLER TOLEDO AL204；瑞士METTLER公司)；超声波清洗器(HS6150D，天津恒奥科技发展有限公司)；纯水机(美国Millipore公司)。

[0054] 甲醇为色谱纯(天津市康科德科技有限公司)；乙腈为色谱纯(美国Sigma-Aldrich公司)；水为自制超纯水。

[0055] 腺苷、没食子酸的对照品购自中国食品药品检定研究院；短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷、椴树苷的对照品为自制。自制对照品制备过程：中药覆盆子用95％乙醇和60％乙醇分别加热回流提取2次，每次2h，合并提取液，减压回收得到总浸膏。加入适量蒸馏水将总浸膏混悬，依次用石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯和正丁醇萃取。乙酸乙酯萃取物经反复硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、制备液相色谱分离得到椴树苷、鞣花酸和没食子酸乙酯。正丁醇萃取物经D101大孔树脂柱分离，分别以水、30％、50％、70％、95％的乙醇进行梯度洗脱，正丁醇30％乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱分离得到短叶苏木酚酸；正丁醇50％乙醇洗脱部分经硅胶柱色谱、制备液相色谱分离得到山柰酚-3-O-芸香糖苷和山柰酚-3-O-葡萄糖苷。以上制备得到的对照品经高效液相色谱检验纯度，并通过核磁共振波谱和质谱检测确证其结构。

[0056] 中药覆盆子(产地浙江)、中药覆盆子(产地山东)、中药覆盆子(产地河南)、中药覆盆子(产地安徽)、中药覆盆子(产地北京)、中药覆盆子(产地湖北)、中药覆盆子(产地河北)。

[0057] 本发明中所提及的术语“精密称定”：精密称定系指称取重量应准确至所取重量的千分之一。“精密吸取”：系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该计量器具的精确度要求。

[0058] 在本领域中，含量测定的实验数据的相对标准偏差(RSD)在5％以内，说明实验结果可靠，可真实地反应某物质的含量。

[0059] 在本领域中，加样回收率在95～105％范围内，说明实验环节未出现异常现象，所建立的方法符合含量测定要求，所获得的实验结果可靠。

[0060] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

[0061] 实施例1

[0062] (1)供试品溶液的制备

[0063] 分别对7个产地的中药覆盆子做以下处理：

[0064] 将中药覆盆子粉碎，过40目筛，精密称定0.5g，置锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，密塞，称重44.1g，室温超声处理30min，再称重，用70％甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，离心14000转10min，取上清液1mL。

[0065] 每个处理重复3次。

[0066] (2)对照品溶液的制备

[0067] 精密称定鞣花酸对照品7.75mg，加100％甲醇溶解并定容至25mL，配制成0.31mg·mL-1对照品储备液。

[0068] 精密吸取鞣花酸对照品储备液1.5mL，并用100％甲醇定容至5mL，配制成93.00μg·mL-1的对照品溶液，用1mL体积分数为100％甲醇溶液逐渐稀释，稀释的浓度分别为46.50μg·mL-1、23.25μg·mL-1、11.63μg·mL-1、5.81μg·mL-1、2.91μg·mL-1、1.45μg·mL-1。

[0069] (3)超高效液相色谱检测

[0070] 色谱条件：固相：ACQUITY BEH C18(3.0mm×100mm，1.7μm)色谱柱；流动相：A相：乙腈与B相：0.1％甲酸的比值为18:82；流速：0.4mL·min-1；柱温40℃；PDA检测器，检测波长为253nm。

[0071] 分别精密吸取供试品溶液和不同浓度的鞣花酸对照品溶液3μL，注入超高效液相色谱仪(UPLC)中进行检测。鞣花酸对照品溶液的色谱图如图1A所示。供试品溶液的色谱图以浙江产地的中药覆盆子供试品溶液的色谱图(图1B)为例。

[0072] 从图1A可以看出在253nm检测波长下，2.70min出现的色谱峰为鞣花酸的色谱峰，即鞣花酸的保留时间为2.70min。相应地，在图1B中，2.70min出现的色谱峰即是浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中鞣花酸的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。

[0073] (4)建立鞣花酸的标准曲线

[0074] 以对照品溶液中鞣花酸的浓度为横坐标，以对照品溶液的超高效液相色谱图中鞣花酸的色谱峰峰面积为纵坐标，建立鞣花酸的标准曲线，以信噪比(S/N)10为定量限，结果见表1。从表1中可知，鞣花酸在1.45～93μg·mL-1浓度范围内，标准曲线线性关系良好。

[0075] 表1鞣花酸的线性回归方程、相关系数、线性范围、定量限

[0076]

[0077] (5)确定鞣花酸在供试品中的含量

[0078] 根据供试品溶液超高效液相色谱图中鞣花酸的色谱峰峰面积，及已建立的鞣花酸的标准曲线，计算鞣花酸的浓度，并按照下列公式计算出供试品中鞣花酸的含量：

[0079] 含量＝C浓*V/M。

[0080] 根据此公式得到7个产地的中药覆盆子中指标成分鞣花酸的含量，结果见表2。

[0081] 表2中药覆盆子中指标成分鞣花酸含量测定结果(Mean±SD,n＝3)

[0082]

[0083] 下面以产地为浙江的中药覆盆子为例进行精密度、稳定性、重复性和加样回收率试验。

[0084] (6)精密度试验

[0085] 按实施例1的步骤(1)制备供试品溶液，按实施例1步骤(3)色谱条件，连续进样6次，每次3μL，检测供试品溶液中鞣花酸的含量，来评定鞣花酸的日内精密度，结果见表3。按实施例1步骤(1)制备供试品溶液，按实施例1步骤(3)色谱条件，连续三天进样，6次/天，3μL/次，测定，来评定鞣花酸的日间精密度，结果见表4。从表3和表4中可知，日内和日间精密度试验获得的鞣花酸含量的RSD分别为0.33％、2.31％。结果表明鞣花酸精密度良好，符合含量测定的要求。

[0086] 表3鞣花酸的日内精密度试验结果(mg/g,n＝6)

[0087]

[0088] 表4鞣花酸的日间精密度试验结果(mg/g,n＝3)

[0089]

[0090] (7)稳定性试验

[0091] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，按实施例1步骤(1)的方法制备供试品溶液，按实施例1步骤(3)的色谱条件，分别于0、2、4、8、10和12h进样3μL，测定，考察供试品溶液中鞣花酸12h的稳定性，结果见表5。从表5可知，鞣花酸含量的相对标准偏差(RSD)为2.24％。结果表明供试品溶液中的鞣花酸在室温条件下12h内基本稳定。

[0092] 表5鞣花酸稳定性试验结果(mg/g,n＝6)

[0093]

[0094] (8)重复性试验

[0095] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，按实施例1步骤(1)的方法平行处理6份供试品溶液，按实施例1步骤(3)的色谱条件分别进样3μL，测定，结果见表6。从表6可知，鞣花酸含量的RSD为0.49％。结果表明本发明的检测方法重复性良好。

[0096] 表6鞣花酸重复性试验结果(mg/g,n＝6)

[0097]

[0098] (9)加样回收率试验

[0099] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.25g，分别准确加入与供试品中鞣花酸量相当的鞣花酸对照品储备液(鞣花酸对照品储备液浓度0.31mg·mL-1，加标体积1mL)，按实施例1步骤(1)的方法平行处理6份供试品，按实施例1步骤(3)的色谱条件分别进样3μL，测定，计算加样回收率，结果见表7。

[0100] 表7中药覆盆子中指标成分鞣花酸的加样回收率试验结果(n＝6)

[0101]

[0102] 实施例2

[0103] (1)供试品溶液的制备

[0104] 同实施例1步骤(1)。

[0105] (2)对照品溶液的制备

[0106] 分别精密称定鞣花酸对照品和山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品7.75mg、8.18mg，分别加100％甲醇溶解并分别定容至25mL、10mL，分别配制成0.31mg·mL-1鞣花酸对照品储备液和0.82mg·mL-1山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品储备液。

[0107] 分别精密吸取鞣花酸对照品储备液和山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品储备液1.5mL、0.2mL混合，并用100％甲醇定容至5mL，配制成93.00μg·mL-1鞣花酸、32.72μg·mL-1山柰酚-3-O-芸香糖苷混合对照品溶液，分别用1mL体积分数为100％甲醇溶液逐级稀释，鞣花酸浓度分别为46.50、23.25、11.63、5.81、2.91、1.45μg·mL-1，山柰酚-3-O-芸香糖苷浓度分别-1
为16.36、8.18、4.09、2.05、1.02、0.51μg·mL 。

[0108] (3)超高效液相色谱检测

[0109] 色谱条件：固定相：ACQUITY BEH C18(3.0mm×100mm，1.7μm)色谱柱；流动相：A相：乙腈与B相：0.1％甲酸的比值为18:82；流速：0.4mL·min-1；柱温40℃；PDA检测器，检测波长为253nm和265nm。

[0110] 分别精密吸取供试品溶液和不同浓度的鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷混合对照品溶液3μL，注入超高效液相色谱仪(UPLC)中进行检测。鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品溶液的色谱图分别如图2A和图2B所示。供试品溶液的色谱图以浙江产地的中药覆盆子供试品溶液的色谱图(图2C和图2D)为例。

[0111] 从图2A中可以看出，在253nm波长下，鞣花酸的保留时间为2.70min。相应地，图2C中，在2.70min处的色谱峰就是浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中鞣花酸的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。从图2B中可以看出，在265nm波长下，山柰酚-3-O-芸香糖苷的保留时间为3.85min。相应地，图2D中，在3.85min处的色谱峰就是浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。

[0112] (4)分别建立鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖的标准曲线

[0113] 以混合对照品溶液中鞣花酸对照品的浓度为横坐标，以混合对照品溶液的超高效液相色谱图中鞣花酸的色谱峰峰面积为纵坐标，建立鞣花酸的标准曲线。

[0114] 以混合对照品溶液中山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品的浓度为横坐标，以混合对照品溶液的超高效液相色谱图中山柰酚-3-O-芸香糖苷的色谱峰峰面积为纵坐标，建立山柰酚-3-O-芸香糖苷的标准曲线。

[0115] 二者皆以信噪比(S/N)10为定量限，结果见表8。从表8中可知，两个指标成分在各自的浓度范围内线性关系良好。

[0116] 表8鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的线性回归方程、相关系数、线性范围、定量限[0117]

[0118] (5)确定鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷在供试品中各自的含量

[0119] 分别根据供试品溶液超高效液相色谱图中鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的色谱峰峰面积，及已建立的鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的标准曲线，分别计算鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的浓度，并按照下列公式计算出供试品中鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量：

[0120] 含量＝C浓*V/M。

[0121] 根据此公式得到7个产地的中药覆盆子中指标成分鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量，结果见表9。

[0122] 表9中药覆盆子中指标成分鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷含量测定结果(Mean±SD,n＝3)

[0123]

[0124] 下面以产地为浙江的中药覆盆子为例进行精密度、稳定性、重复性和加样回收率试验。

[0125] (6)精密度试验

[0126] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，按实施例1步骤(1)的方法制备供试品溶液，按实施例2步骤(3)色谱条件，连续进样6次，每次3μL，检测供试品溶液中鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷的含量，来评定鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷的日内精密度，结果见表10。按实施例1步骤(1)制备供试品溶液，按实施例1步骤(3)色谱条件，连续三天进样，6次/天，3μL/次，测定，来评定鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷的日间精密度，结果见表11。从表10和11可知，日内精密度试验获得的鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的RSD分别为0.33％和1.08％，日间精密度试验获得的鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的RSD分别为2.31％和0.89％。结果表明鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷精密度良好，符合含量测定的要求。

[0127] 表10鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的日内精密度试验结果(mg/g,n＝6)[0128]

[0129] 表11鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的日间精密度试验结果(mg/g,n＝3)[0130]

[0131] (7)稳定性试验

[0132] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，按实施例1步骤(1)的方法制备供试品溶液，按实施例2步骤(3)的色谱条件，分别于0、2、4、8、10和12h进样3μL，测定，考察供试品溶液中鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷12h的稳定性，结果见表12。从表12可知，鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的RSD分别为2.24％、1.90％。结果表明供试品溶液中的鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷在室温条件下12h内基本稳定。

[0133] 表12鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷稳定性试验结果(mg/g,n＝6)

[0134]

[0135]

[0136] (8)重复性试验

[0137] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，按实施例1步骤(1)的方法平行处理6份供试品溶液，按实施例2步骤(3)的色谱条件分别进样3μL，测定，结果见表13。从表13可知，鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷含量的RSD分别为0.49％、0.42％。结果表明本发明的检测方法重复性良好。

[0138] 表13鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷重复性试验结果(mg/g,n＝6)

[0139]

[0140] (9)加样回收率试验

[0141] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.25g，分别准确加入与供试品中鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷量相当的鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品储备液(鞣花酸对照品储-1备液浓度0.31mg·mL ，加标体积1mL；山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品储备液浓度0.82mg·mL-1，加标体积120μL)，按实施例1步骤(1)的方法平行处理6份供试品，按实施例2步骤(3)的色谱条件分别进样3μL，测定，计算加样回收率，结果见表14。

[0142] 表14中药覆盆子中指标成分鞣花酸和山柰酚-3-O-芸香糖苷的加样回收率试验结果(n＝6)

[0143]

[0144]

[0145] 实施例3

[0146] (1)供试品溶液的制备

[0147] 分别对7个产地的中药覆盆子做以下处理：

[0148] 将中药覆盆子粉碎，过40目筛，精密称定1.0g，置锥形瓶中，精密加入70％甲醇50mL，密塞，称重44.6g，室温超声处理30min，称重，用70％甲醇水溶液补足损失的重量，摇匀，离心14000转10min，取上清液1mL。

[0149] 每个处理重复3次。

[0150] (2)对照品溶液的制备

[0151] 分别精密称定腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷对照品5.80mg、6.90mg、7.43mg、6.89mg、6.33mg、7.65mg和5.89mg，分别加100％甲醇(含少量DMSO)溶解并分别定容至5mL，精密称定鞣花酸对照品2.91mg,加100％甲醇溶解并定容至10mL，分别配制成1.16mg·mL-1腺苷、1.38mg·mL-1没食子酸、1.49mg·mL-1短叶苏木酚酸、1.38mg·mL-1没食子酸乙酯、0.29mg·mL-1鞣花酸、
1.27mg·mL-1山柰酚-3-O-芸香糖苷、1.53mg·mL-1山柰酚-3-O-葡萄糖苷、1.18mg·mL-1椴树苷的对照品储备液。

[0152] 分别精密吸取腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷对照品储备液200μL、150μL、200μL、400μL、4000μL、500μL、150μL和300μL混合，并用85％甲醇定容至10mL，配制成23.20μg·mL-1腺苷、
20.70μg·mL-1没食子酸、29.72μg·mL-1短叶苏木酚酸、55.12μg·mL-1没食子酸乙酯、
116.40μg·mL-1鞣花酸、63.30μg·mL-1山柰酚-3-O-芸香糖苷、22.95μg·mL-1山柰酚-3-O--1
葡萄糖苷、35.34μg·mL 椴树苷混合对照品溶液，并用1mL体积分数为100％甲醇溶液逐级稀释，腺苷浓度分别为11.60、5.80、2.90、1.45、0.73、0.36μg·mL-1，没食子酸浓度分别为
10.35、5.18、2.59、1.29、0.65、0.32μg·mL-1，短叶苏木酚酸浓度分别为14.86、7.43、3.72、
1.86、0.93、0.46μg·mL-1，没食子酸乙酯分别为27.56、13.78、6.89、3.45、1.72、0.86μg·-1 -1
mL ，鞣花酸浓度分别为58.20、29.10、14.55、7.28、3.64、1.82μg·mL ，山柰酚-3-O-芸香糖苷浓度分别为31.65、15.83、7.91、3.96、1.98、0.99μg·mL-1，山柰酚-3-O-葡萄糖苷浓度分别为11.48、5.74、2.87、1.43、0.72、0.36μg·mL-1，椴树苷浓度分别为17.67、8.84、4.42、
2.21、1.10、0.55μg·mL-1。

[0153] (3)超高效液相色谱检测

[0154] 色谱条件：固定相：ACQUITY BEH C18(3.0mm×100mm，1.7μm)色谱柱；流动相：A相：乙腈与B相：0.1％甲酸的比值为乙腈:0.1％甲酸比为0～2min，3:97～5:95；2～8min，5:95～11.5:88.5；8～13.5min，11.5:88.5～15.5:84.5；13.5～15min，15.5:84.5～18:82；15～
18min，18:82～20:80；18～23min，20:80～38:62；23～25min，38:62～70:30；流速：0.4mL·min-1；柱温30℃；PDA检测器，检测波长为256nm、265nm、271nm、344nm。

[0155] 分别精密吸取供试品溶液和不同浓度的混合对照品溶液3μL，注入超高效液相色谱仪(UPLC)中进行检测。腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷，8种对照品溶液的色谱图分别如图3A～3D所示。供试品溶液的色谱图以浙江产地的中药覆盆子供试品溶液的色谱图(图3E～3H)为例。

[0156] 从图3A中可以看出，在256nm波长下，腺苷的保留时间为2.16min，鞣花酸的保留时间为14.39min。相应地，图3E中，在2.16min和14.39min处的色谱峰分别为浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中腺苷和鞣花酸的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。从图3B中可以看出，在265nm波长下，椴树苷的保留时间为22.12min。相应地，图3F中，在22.12min处的色谱峰就是浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中椴树苷的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。从图3C中可以看出，在271nm波长下，没食子酸的保留时间为2.67min，没食子酸乙酯的保留时间为12.44min。相应地，图3G中，在2.67min和12.44min处的色谱峰分别为浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中没食子酸和没食子酸乙酯的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。从图3D中可以看出，在344nm波长下，短叶苏木酚酸的保留时间为8.54min，山柰酚-3-O-芸香糖苷的保留时间为17.16min，山柰酚-3-O-葡萄糖苷的保留时间为17.77min。相应地，图3H中，在8.54min、17.16min和17.77min处的色谱峰分别为浙江产地的中药覆盆子供试品溶液中短叶苏木酚酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷和山柰酚-3-O-葡萄糖苷的色谱峰，且与其他成分实现良好分离。

[0157] (4)分别建立腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的标准曲线。

[0158] 分别以混合对照品中腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的浓度为横坐标，分别以混合对照品溶液的超高效液相色谱图中腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的色谱峰峰面积为纵坐标，建立腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷各自的标准曲线。皆以信噪比(S/N)10为定量限，结果见表15。从表15中可知，腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷在各自的浓度范围内线性关系良好。

[0159] 表15中药覆盆子中8种对照品的线性回归方程、相关系数、线性范围、定量限[0160]

[0161] (5)确定腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷在供试品中各自的含量

[0162] 分别根据供试品溶液超高效液相色谱图中腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的色谱峰峰面积，及与之对应的标准曲线，分别计算腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的浓度，并按照下列公式计算出供试品中8种指标成分的含量：

[0163] 含量＝C浓*V/M。

[0164] 根据此公式得到7个产地的中药覆盆子中8种指标成分的含量，结果见表16。

[0165] 表16中药覆盆子中8种指标成分含量测定结果(Mean±SD,n＝3)

[0166]

[0167] 下面以产地为浙江的中药覆盆子为例进行精密度、稳定性、重复性和加样回收率试验。

[0168] (6)精密度试验

[0169] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子1.0g，按实施例1步骤(1)的方法制备供试品溶液，按实施例3步骤(3)色谱条件，连续进样6次，每次3μL，检测供试品溶液中8种指标成分的含量，来分别评定8种指标成分的日内精密度，结果见表17。按实施例3步骤(1)制备供试品溶液，按实施例3步骤(3)色谱条件，连续三天进样，6次/天，3μL/次，测定，来评定8种指标成分的日间精密度，结果见表18。从表17和18可知，日内精密度试验获得的腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷含量的RSD分别为0.68％、1.74％、1.53％、2.45％、1.43％、0.58％、0.58％、0.90％，日间精密度试验获得的腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷含量的RSD分别为0.97％、1.49％、1.98％、2.78％、1.61％、0.68％、1.46％、0.94％。表明腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷的精密度良好，符合含量测定的要求。

[0170] 表17 8种指标成分的日内精密度试验结果(mg/g,n＝6)

[0171]

[0172] 表18 8种指标成分的日间精密度试验结果(mg/g,n＝3)

[0173]

[0174] (7)稳定性试验

[0175] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子1.0g，按实施例1步骤(1)的方法制备供试品溶液，按实施例3步骤(3)的色谱条件，分别于0、2、4、8、10和12h进样3μL，测定，考察供试品溶液中8种指标成分的稳定性，结果见表19。从表19可知，腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷含量的RSD分别为1.00％、0.96％、1.01％、3.00％、0.58％、0.89％、1.65％、0.68％。结果表明供试品溶液中腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷在室温条件下12h内基本稳定。

[0176] 表19 8种指标成分的稳定性试验结果(mg/g,n＝6)

[0177]

[0178] (8)重复性试验

[0179] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，按实施例1步骤(1)的方法平行处理6份供试品溶液，按实施例3步骤(3)的色谱条件分别进样3μL，测定，结果见表20，腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷含量的RSD分别为1.75％、1.69％、1.04％、2.60％、1.68％、0.96％、1.67％、3.65％。结果表明本发明的检测方法重复性良好。

[0180] 表20 8种指标成分的重复性测试结果(mg/g,n＝6)

[0181]

[0182] (9)加样回收率试验

[0183] 精密称定粉碎过40目的中药覆盆子0.5g，分别准确加入与供试品中腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷量相当的各对照品储备液或对照品溶液(腺苷对照品溶液浓度116μg·mL-1，加标体积500μL；没食子酸对照品溶液浓度138μg·mL-1，加标体积320μL；短叶苏木酚酸对照品储备液浓度1486μg·mL-1，加标体积60μL；没食子酸乙酯对照品储备液浓度1378μg·mL-1，加标体积120μL；鞣花酸对照品溶液浓度327μg·mL-1，加标体积2000μL；山柰酚-3-O-芸香糖苷对照品储备液浓度1266μg·mL-1，加标体积150μL；山柰酚-3-O-葡萄糖苷对照品溶液浓度153μg·mL-1，加标体积420μL；椴树苷对照品储备液浓度1178μg·mL-1，加标体积80μL)，按实施例1步骤(1)的方法平行处理6份供试品，按实施例3步骤(3)的色谱条件分别进样3μL，测定，计算加样回收率，结果见表21。

[0184] 表21中药覆盆子中8种指标成分的加样回收率试验结果(n＝6)

[0185]

[0186]

[0187] 需要说明的是，从实施例1、2和3中可以看出，在制备供试品溶液步骤中，区别仅在于精密称定的中药覆盆子粉末的质量不同，实施例1和2为0.5g，实施例3为1.0g。无论是0.5g还是1.0g中药覆盆子粉末，用50mL 70％甲醇处理，70％甲醇的加入量都是过量的，都可以达到充分提取的目的。也就是说实施例1、2和3对于供试品溶液的制备方法是一样的。
基于此，各实施例的精密度试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收率试验中关于供试品溶液的制备方法也是一样的。

[0188] 需要说明的是，在制备对照品溶液时，实施例1和2使用70％甲醇制备对照品溶液，实施例3使用85％甲醇制备对照品溶液。由于本发明中，进行超高效液相色谱检测时，进样量仅为3μL，对整个检测体系——超高效液相色谱仪-PDA检测器和色谱条件不产生波动，即对各种指标成分的检测结果不产生影响。

[0189] 需要说明的是，图3中，按中药覆盆子中8种指标成分的保留时间，1代表腺苷、2代表没食子酸、3代表短叶苏木酚酸、4代表没食子酸乙酯、5代表鞣花酸、6代表山柰酚-3-O-芸香糖苷、7代表山柰酚-3-O-葡萄糖苷、8代表椴树苷，其中如图3A所示：腺苷(1)和鞣花酸(5)对照品检测波长为256nm；如图3B所示：椴树苷(8)对照品检测波长为265nm；如图3C所示：没食子酸(2)和没食子酸乙酯(4)对照品检测波长为271；如图3D所示：短叶苏木酚酸(3)、山柰酚-3-O-芸香糖苷(6)、山柰酚-3-O-葡萄糖苷(7)对照品检测波长为344nm。图3E与图3A对应，检测供试品溶液中腺苷和鞣花酸的色谱峰，图3F与图3B对应，检测供试品溶液中椴树苷的色谱峰；图3G与图3C对应，检测供试品溶液中没食子酸和没食子酸乙酯的色谱峰；图3H与图3D对应，检测供试品溶液中短叶苏木酚酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷的色谱峰。

[0190] 需要说明的是，鞣花酸的最大吸收波长范围在253～256nm，在实施例1和实施例2设定鞣花酸的检测波长为253nm。在实施例3中，腺苷的最大吸收波长为256nm，二者的最大吸收波长差别不大，为了减少设定的波长数量，将鞣花酸的检测波长调整为256nm，对鞣花酸的检测结果几乎没有影响。这是本领域的技术人员可以根据实际情况和经验来调整的，并不影响检测结果的可靠性。

[0191] 需要说明的是，在实施例3中，制备对照品混合溶液时，加入少量的二甲基亚砜(DMSO)是为了使8种指标成分的对照品完全地彻底地溶解在85％甲醇中，对各种指标成分含量检测结果不产生影响。

[0192] 需要说明的是，本发明虽是同时检测多种指标成分，但所使用的超高效液相色谱仪是根据设定的检测波长分别出图的。以实施例2为例，设定了2个检测波长，分别为253nm、265nm，则得到253nm波长下，对照品和供试品各一张图，265nm波长下，对照品和供试品各一张图，共计4张图。

[0193] 根据实施例3的技术方案，本领域技术人员无需创造性劳动，依据此技术方案可以同时检测腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷中的一种或多种，也就是说，依据本发明检测中药覆盆子中指标成分的技术方案，对任一种或多种中药覆盆子中的指标成分进行检测皆属于本发明的保护范围。

[0194] 从上述结果可以看出，本发明利用超高效液相色谱仪测定所构建中药覆盆子中指标成分的定量分析方法，最多可同时检测腺苷、没食子酸、短叶苏木酚酸、没食子酸乙酯、鞣花酸、山柰酚-3-O-芸香糖苷、山柰酚-3-O-葡萄糖苷和椴树苷，8种指标成分。该方法相对于针对不同指标成分分别检测的方法，缩短检测总时间，节省实际成本。并且检测结果准确，精密度高，重复性好，稳定性高，专属性强。

[0195] 以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均包含在本发明的保护范围内。