本发明提供一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，该方法是在现有白肋烟品种鉴定的基础上，确定白肋烟品种的测试性状，选择标准品种，制定性状分级标准，筛选近似品种，设计田间试验，将测试品种与标准品种和近似品种一起栽植，若测试品种至少在1个质量性状或者数量性状上与近似品种具有明显且一致的差异时，或者至少有两个数量性状与近似品种处于不同的级别时则具有特异性，若测试品种在测试中整个群体的变异度小于5%则具有一致性，连续2?3次测试的变异度无显著变化则具有稳定性。本发明能准确判别白肋烟品种的特异性、一致性和稳定性，为白肋烟品种授权提供依据，能更大程度保护育种者的合法权益。
1.一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，其特征在于，该方法具体步骤如下：（1）确定测试性状：对现有白肋烟品种资源的植物学性状、农艺性状、抗病性状、经济性状、品质性状进行重复鉴定，每份品种资源至少进行3个生长周期的鉴定，筛选出45个性状作为测试性状，包括27个必测性状和18个补充性状；
所述必测性状即为每个需要鉴定判别的测试品种必须进行观测、描述的基本性状，包括15个质量性状和12个数量性状，所述质量性状具体包括：株型、叶形、叶色、叶柄、叶耳、叶面、叶缘、叶尖、叶肉组织、叶片厚度、主脉粗细、茸毛、成熟特征、花色、花序特征，所述数量性状具体包括：自然株高、打顶株高、着生总叶数、有效叶数、节距、茎围、腰叶长、腰叶宽、顶叶长、顶叶宽、茎叶角度、大田生育期；
所述补充性状即在上述必测性状不能区别测试品种和近似品种时，仍需进一步测试而选用的性状，包括10个质量性状和8个数量性状，所述质量性状具体包括：苗色、苗期生长势、大田生长势、腋芽生长势、原烟颜色、原烟身份、原烟叶片结构、原烟叶面状态、原烟光泽、原烟颜色强度，所述数量性状具体包括：中心花开放期、黑胫病抗性、青枯病抗性、赤星病抗性、TMV抗性、PVY抗性、亩产量、中部叶烟碱含量；
（2）制定性状分级标准：将步骤（1）中确定的测试性状的每个性状根据其在步骤（1）的重复鉴定中的表达范围划分为2-6种状态，每一种状态对应一个相应的数字代码，称为一个级别；
（3）确定标准品种：从所述步骤（1）重复鉴定的品种资源中，依据各品种资源在重复鉴定中的性状表现的典型性，筛选出36个具备广泛代表性的已知品种作为标准品种，以用于性状分级的参照标准、辅助判断试验的可靠性，具体包括： Banket A-1、Burley 21、Burley
27、Burley 29、Burley 34、Burley Wloski、Gold.no.Burley、Greeneville 17A、K14(BY14)、K21(BY21)、Kentucky 12、Kentucky 14、Kentucky 24、Kentucky 56、Kentucky
8959、KBM 20、KY17（少叶）、L-8、S·K、Tennessee 90、Virginia 509、Virginia 1013、Virginia 1048、Virginia 1053、White Burley 5、白肋162、鄂白99-2-4、鄂烟101、鄂烟1号、鄂烟211、鄂烟4号、鄂烟5号、鹤峰黄烟、牡晒82-38-5、日本白肋、省白肋窄叶；选择与所述步骤（2）中划分的级别相对应的标准品种，得到各性状、级别代码和标准品种的对应关系；
（4）筛选近似品种：根据选育单位提供的待鉴定判别测试品种的性状描述资料，从现有白肋烟品种资源中选取1～5个品种，作为与测试品种进行比较的品种即近似品种；所述近似品种的选取标准为：待鉴定判别测试品种的所用亲本，或用其亲本之一培育出的其他品种；
（5）设计田间试验：进行连续2～3个相同季节的生长周期测试，每个生长周期测试都将待鉴定判别的测试品种、所述步骤（4）中筛选的近似品种和所述步骤（3）中确定的标准品种一起等行距种植，采用随机区组设计，设置3次重复或4次重复，每个小区的种植株数不少于
60株；测试地点的条件需要满足测试品种、近似品种和标准品种植株的正常生长及其性状的正常表达；
（6）观测和分析测试性状：按照植物的生长进程，对所述步骤（1）中确定的测试性状进行观测，用步骤（2）中确定的性状级别对应的标准品种的性状状态分别对待鉴定判别的测试品种和步骤（4）中筛选的近似品种的各性状的表现状态进行描述；
（7）判别测试品种的一致性：首先采用2%的群体标准和95%的可接受概率对测试品种的一致性进行初步判别：若步骤（5）中每个小区种植株数为60株，而测试品种每个小区非典型株超过3株，则直接判定测试品种不具备一致性；否则进一步通过必测性状的以所述步骤（2）和（3）中代码为分析单元计算的变异度来判别：每个小区观察测定15株，若测试品种某性状的变异度不超过5%，或者测试品种某性状的变异度不超过标准品种在该性状上的变异度，则判定测试品种在该性状上表现一致，否则判定为不一致；
（8）判别测试品种的稳定性：在连续2～3个生长周期的测试结果中，如果测试品种同一性状的表现处于步骤（2）和（3）中所述代码的同一代码内，或者第二次或第三次测试的变异度与第一次测试的变异度无显著差异，则表示该测试品种在此性状上是稳定的，否则为不稳定，以连续2～3个生长周期的测试结果评价测试品种的稳定性采用95%的接受概率；
（9）若所述步骤（7）和（8）的测试结果显示测试品种没有一致性和稳定性，则直接地判定该测试品种不具有特异性，否则按照如下方法判别测试品种的特异性：通过比较测试品种与步骤（4）中筛选的近似品种的所有必测性状上的差异进行评价，具体判定方法是：当测试品种至少在1个质量性状或者数量性状上与近似品种具有明显且一致的差异时，或者至少有两个数量性状的性状表达与近似品种处于不同的步骤（2）和（3）中所述的代码时，即判定测试品种具有特异性；对于质量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达处于不同的代码，则认为两个品种在该性状上具有明显差异；对于数量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达相差2个及2个以上代码，即判定两个品种在该性状上具有明显差异；如果测试品种和近似品种的某个数量性状表达处于同一个代码或者处于相邻的不同代码，而两个品种的该数量性状的算术平均值在95 %水平上存在显著差异，也判定两个品种在该性状上具有明显差异；若采用必测性状不能区别测试品种和近似品种时，则进一步采用补充性状按上述方法判别测试品种的特异性；所述一致的差异是指在2～3个独立的生长周期中，观测到的性状差异具有重现性。
2.根据权利要求1所述的一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，其特征在于，所述步骤（1）中的质量性状是指以不连续状态表达的性状，或者性状表达范围至少部分是连续的，但其变异范围是多维的性状；所述数量性状是指性状表达包括了从一个极端到另一个极端之间的整个变异范围的性状。
3.根据权利要求1所述的一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，其特征在于，所述步骤（3）中得到的各性状、级别代码和标准品种的对应关系为：性状 状态划分 代码 标准品种
宽椭圆形 4 Kentucky 56 卵圆形 5 白肋162
绿 7 White Burley 5叶柄 无 1 鄂烟1号
大 7 Burley Wloski叶面 平 1 KY17（少叶）
较皱 5 Kentucky 56 皱折 7 省白肋窄叶
叶尖 钝尖 1 Kentucky 56 渐尖 2 鄂烟1号
粗糙 7 Burley Wloski叶片厚度 薄 3 White Burley 5 中 5 鄂烟1号
厚 7 Burley Wloski主脉粗细 细 3 Virginia 1048 中 5 Kentucky 8959 粗 7 Kentucky 56茸毛 少 3 鄂烟1号
花色 白 1 Virginia 1053 淡红 3 鄂烟1号
自然株高 矮：120.00 cm以下 1 L-8 较矮：120.01-145.00 cm 3 Kentucky 24 中：145.01-170.00 cm 5 White Burley 5 较高：170.01-195.00 cm 7 Burley 27 高：195.01 cm以上 9 KBM 20打顶株高 矮：90.00 cm以下 1 L-8 较矮：90.01-115.00 cm 3 鄂烟1号 中：115.01-140.00 cm 5 Virginia 1013 较高：140.01-165.00 cm 7 Virginia 509 高：165.01 cm以上 9 KBM 20着生总叶数 少：20.0片以下 1 L-8 较少：20.1-25.0片 3 Greeneville 17A 中：25.1-30.0片 5 鄂烟211 较多：30.1-35.0片 7 鄂烟101 多：35.1片以上 9 KBM 20有效叶数 少：15.0片以下 1 L-8 较少：15.1-20.0片 3 鄂烟1号 中：20.1-25.0片 5 Tennessee 90 较多：25.1-30.0片 7 鄂烟101 多：30.1片以上 9 KBM 20节距 短：3.50 cm以下 1 省白肋窄叶 较短：3.51-4.50 cm 3 Virginia 1048 中：4.51-5.50 cm 5 Greeneville 17A 较长：5.51-6.50 cm 7 Kentucky 56 长：6.51 cm以上 9 白肋162茎围 细：9.00 cm以下 1 鹤峰黄烟 较细：9.01-10.00 cm 3 K21(BY21) 中：10.01-11.00 cm 5 Virginia 1013 较粗：11.01-12.00 cm 7 鄂白99-2-4 粗：12.01 cm以上 9 KBM20腰叶长 短：50.00 cm以下 1 L-8 较短：50.01-60.00 cm 3 Virginia 1053 中：60.01-70.00 cm 5 Virginia 1048 较长：70.01-80.00 cm 7 Kentucky 8959 长：80.01 cm以上 9 鄂烟1号腰叶宽 窄：25.00 cm以下 1 省白肋窄叶 较窄：25.01-30.00 cm 3 Burley 34 中：30.01-35.00 cm 5 Tennessee 90 较宽：35.01-40.00 cm 7 鄂烟101 宽：40.01 cm以上 9 Kentucky 56顶叶长 短：30.00 cm以下 1 L-8 较短：30.01-40.00 cm 3 Virginia 1053 中：40.01-50.00 cm 5 Burley27 较长：50.01-60.00 cm 7 Burley 21 长：60.01 cm以上 9 鄂烟1号顶叶宽 窄：15.00 cm以下 1 省白肋窄叶 较窄：15.01-20.00 cm 3 Virginia 1013 中：20.01-25.00 cm 5 Virginia 1048 较宽：25.01-30.00 cm 7 Burley 21 宽：30.01 cm以上 9 Kentucky 56茎叶角度 小：30º以内 3 Kentucky 12 中：30º1´-60º 5 Kentucky 8959 大：60º1´-90º 7 K14(BY14)大田生育期 短：85天以下 1 White Burley 5 较短：86-95天 3 Virginia 1053 中：96-105天 5 K14(BY14) 较长：106-115天 7 Kentucky 8959 长：116天以上 9 KBM 20苗色 黄绿 3 Burley 21 浅绿 5 鄂烟1号
绿 7 Kentucky 14苗期生长势 弱 3 省白肋窄叶
大田生长势 弱 3 Gold.no.Burley 中 5 Virginia 1013 强 7 鄂烟1号
腋芽生长势 弱 3 Kentucky 8959 中 5 鄂烟1号
原烟颜色 浅红黄 1 Virginia 1053 浅红棕 3 鄂烟5号
原烟身份 薄 1 Virginia 509 稍薄 3 鄂烟1号
厚 9 Tennessee 90原烟叶片结构 紧密 1 Burley 29 稍密 3 鹤峰黄烟
原烟叶面状态 舒展 3 Burley 29 稍皱 5 鄂烟1号
明亮 9 Kentucky 8959原烟颜色强度 差 1 Burley 29 淡 3 Virginia 1013 中 5 鄂烟101
中心花开放期 早：栽后45天以内 1 鄂烟4号 较早：栽后46-55天 3 Burley 27 中：栽后56-65天 5 Virginia 509 较晚：栽后：66-75天 7 K21(BY21) 晚：栽后76天以上 9 KBM 20黑胫病抗性 高抗：病情指数为0 1 Burley 27 抗：病情指数为0.1－20 2 鄂烟101 中抗：病情指数为20.1－40 3 鄂烟1号 中感：病情指数为40.1－60 4 Banket A-1 感：病情指数为60.1－80 5 Kentucky 56 高感：病情指数为80.1－100 6 Gold.no.Burley青枯病抗性 高抗：病情指数为0 1 Banket A-1 抗：病情指数为0.1－20 2 Kentucky 14 中抗：病情指数为20.1－40 3 Kentucky 56 中感：病情指数为40.1－60 4 White Burley 5 感：病情指数为60.1－80 5 Greeneville 17A 高感：病情指数为80.1－100 6 Kentucky 8959赤星病抗性 高抗：病情指数为0 1 抗：病情指数为0.1－20 2 Banket A-1 中抗：病情指数为20.1－40 3 K21(BY21) 中感：病情指数为40.1－60 4 Kentucky 14 感：病情指数为60.1－80 5 鄂烟101 高感：病情指数为80.1－100 6 鄂烟4号TMV抗性 免疫：病情指数为0 1 Kentucky 12 抗：病情指数为0.1－20 2 鄂烟101 中抗：病情指数为20.1－40 3 Burley 21 中感：病情指数为40.1－60 4 牡晒82-38-5 感：病情指数为60.1－80 5 Kentucky 8959 高感：病情指数为80.1－100 6 L-8PVY抗性 免疫：病情指数为0 1 抗：病情指数为0.1－20 2 Kentucky 8959 中抗：病情指数为20.1－40 3 Virginia 509 中感：病情指数为40.1－60 4 牡晒82-38-5 感：病情指数为60.1－80 5 KY17（少叶） 高感：病情指数为80.1－100 6 亩产量 低：110.00 Kg以下 1 L-8 较低：110.01-130.00 Kg 3 Virginia 1013 中：130.01-150.00 Kg 5 Virginia 1048 较高：150.01-170.00 Kg 7 Banket A-1 高：170.01 Kg以上 9 鄂烟101中部叶烟碱含量 低：1.50%以下 1 Virginia 1048 较低：1.51-2.50% 3 L-8 中：2.51-3.50% 5 Burley 29 较高：3.51-4.50% 7 鄂烟5号 高：4.51%以上 9 鄂烟1号 。
4.根据权利要求1所述的一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，其特征在于，所述步骤（6）中进行性状观测时，当观测抗病性状时，必须在控制感染的条件下，每个小区不少于对20株进行成株期人工接种鉴定。
5.根据权利要求1所述的一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，其特征在于，所述步骤（7）中非典型株是指必测性状中至少有1个质量性状与该品种的其他植株在该性状的表达处于不同的代码，或者至少有两个数量性状的性状表达与该品种的其他植株在该两个性状的表达相差2个及2个以上的代码的植株。
一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法
技术领域
[0001] 本发明涉及烟草品种鉴定判别方法，具体涉及一种鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法。
背景技术
[0002] 白肋烟是生产混合型卷烟不可缺少的原料，而品种又是决定烟叶品质的内在因素，我国已培育出一些适宜不同区域种植的优良品种，并在生产上逐步推广。白肋烟属于自花授粉的经济作物，目前存在品种被引种并繁殖的现象，既侵犯了品种所有者的利益，也导致了白肋烟品种出现混杂，对白肋烟育种工作产生了较大破坏，直接影响白肋烟的持续发展。
[0003] 新品种的特异性、一致性和稳定性测试是新品种保护的技术基础和授权的科学依据。经检索，涉及烟草品种鉴定判别的中国专利申请件仅201110408448.3号《一种鉴别烟草品种的SCAR标记引物及其方法》，是针对烤烟的生物分子技术方法。至今未见对白肋烟品种鉴别的系统技术方案。
[0004] 关于作物新品种的特异性、一致性和稳定性的判别方法，一般都包括确定测试性状、制定性状分级标准、确定标准品种、筛选近似品种、设计田间试验、观测和分析测试性状、判别一致性、稳定性和特异性这些步骤，但不同的作物，其确定的测试性状、制定的性状分级标准、确定的标准品种、田间试验方法等是不同的，因而新品种一致性、稳定性和特异性的判别方法也有所差异。在烟草上，目前已经有关于烤烟新品种的特异性、一致性和稳定性的测试指南，但至今还没有白肋烟新品种的特异性、一致性和稳定性的测试方法。
发明内容
[0005] 技术问题：本发明提供一种能够准确鉴定白肋烟品种，为白肋烟品种授权提供准确依据，减少了田间工作量，增加试验准确性的鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法。
[0006] 技术方案：本发明的鉴定判别白肋烟品种特异性、一致性和稳定性的方法，具体步骤如下：
[0007] (1)确定测试性状：对现有白肋烟品种资源的植物学性状、农艺性状、抗病性状、经济性状、品质性状进行重复鉴定，每份品种资源至少进行3个生长周期的鉴定，筛选出45个性状作为测试性状，包括27个必测性状和18个补充性状；
[0008] 所述必测性状即为每个需要鉴定判别的测试品种必须进行观测、描述的基本性状，包括15个质量性状和12个数量性状，所述质量性状具体包括：株型、叶形、叶色、叶柄、叶耳、叶面、叶缘、叶尖、叶肉组织、叶片厚度、主脉粗细、茸毛、成熟特征、花色、花序特征，所述数量性状具体包括：自然株高、打顶株高、着生总叶数、有效叶数、节距、茎围、腰叶长、腰叶宽、顶叶长、顶叶宽、茎叶角度、大田生育期；
[0009] 所述补充性状即在上述必测性状不能区别测试品种和近似品种时，仍需进一步测试而选用的性状，包括10个质量性状和8个数量性状，所述质量性状具体包括：苗色、苗期生长势、大田生长势、腋芽生长势、原烟颜色、原烟身份、原烟叶片结构、原烟叶面状态、原烟光泽、原烟颜色强度，所述数量性状具体包括：中心花开放期、黑胫病抗性、青枯病抗性、赤星病抗性、TMV抗性、PVY抗性、亩产量、中部叶烟碱含量；
[0010] (2)制定性状分级标准：将步骤(1)中确定的测试性状的每个性状根据其在步骤(1)的重复鉴定中的表达范围划分为2-6种状态，每一种状态对应一个相应的数字代码，称为一个级别；
[0011] (3)确定标准品种：从所述步骤(1)重复鉴定的品种资源中，依据各品种资源在重复鉴定中的性状表现的典型性，筛选出36个具备广泛代表性的已知品种作为标准品种，以用于性状分级的参照标准、辅助判断试验的可靠性，具体包括：Banket A-1、Burley 21、Burley 27、Burley 29、Burley 34、Burley Wloski、Gold.no.Burley、Greeneville 17A、K14(BY14)、K21(BY21)、Kentucky 12、Kentucky 14、Kentucky 24、Kentucky 56、Kentucky 8959、KBM 20、KY17(少叶)、L-8、S·K、Tennessee 90、Virginia 509、Virginia 1013、Virginia 1048、Virginia 1053、White Burley 5、白肋162、鄂白99-2-4、鄂烟101、鄂烟1号、鄂烟211、鄂烟4号、鄂烟5号、鹤峰黄烟、牡晒82-38-5、日本白肋、省白肋窄叶；选择与所述步骤(2)中划分的级别相对应的标准品种，得到各性状、级别代码和标准品种的对应关系；
[0012] (4)筛选近似品种：根据选育单位提供的待鉴定判别测试品种的性状描述资料，从现有白肋烟品种资源中选取1～5个品种，作为与测试品种进行比较的品种即近似品种；所述近似品种的选取标准为：待鉴定判别测试品种的所用亲本，或用其亲本之一培育出的其他品种；
[0013] (5)设计田间试验：进行连续2～3个相同季节的生长周期测试，每个生长周期测试都将待鉴定判别的测试品种、所述步骤(4)中筛选的近似品种和所述步骤(3)中确定的标准品种一起等行距种植，采用随机区组设计，设置3次重复或4次重复，每个小区的种植株数不少于60株；测试地点的条件需要满足测试品种、近似品种和标准品种植株的正常生长及其性状的正常表达；
[0014] (6)观测和分析测试性状：按照植物的生长进程，对所述步骤(1)中确定的测试性状进行观测，用步骤(2)中确定的性状级别对应的标准品种的性状状态分别对待鉴定判别的测试品种和步骤(4)中筛选的近似品种的各性状的表现状态进行描述；
[0015] (7)判别测试品种的一致性：首先采用2％的群体标准和95％的可接受概率对测试品种的一致性进行初步判别：若步骤(5)中每个小区种植株数为60株，而测试品种每个小区非典型株超过3株，则直接判定测试品种不具备一致性；否则进一步通过必测性状的以所述步骤(2)和(3)中代码为分析单元计算的变异度来判别：每个小区观察测定15株，若测试品种某性状的变异度不超过5％，或者测试品种某性状的变异度不超过标准品种在该性状上的变异度，则判定测试品种在该性状上表现一致，否则判定为不一致；
[0016] (8)判别测试品种的稳定性：在连续2～3个生长周期的测试结果中，如果测试品种同一性状的表现处于步骤(2)和(3)中所述代码的同一代码内，或者第二次或第三次测试的变异度与第一次测试的变异度无显著差异，则表示该测试品种在此性状上是稳定的，否则为不稳定，以连续2～3个生长周期的测试结果评价测试品种的稳定性采用95％的接受概率；
[0017] (9)若所述步骤(7)和(8)的测试结果显示测试品种没有一致性和稳定性，则直接地判定该测试品种不具有特异性，否则按照如下方法判别测试品种的特异性：通过比较测试品种与步骤(4)中筛选的近似品种的所有必测性状上的差异进行评价，具体判定方法是：当测试品种至少在1个质量性状或者数量性状上与近似品种具有明显且一致的差异时，或者至少有两个数量性状的性状表达与近似品种处于不同的步骤(2)和(3)中所述的代码时，即判定测试品种具有特异性；对于质量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达处于不同的代码，则认为两个品种在该性状上具有明显差异；对于数量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达相差2个及2个以上代码，即判定两个品种在该性状上具有明显差异；如果测试品种和近似品种的某个数量性状表达处于同一个代码或者处于相邻的不同代码，而两个品种的该数量性状的算术平均值在95％水平上存在显著差异，也判定两个品种在该性状上具有明显差异；若采用必测性状不能区别测试品种和近似品种时，则进一步采用补充性状按上述方法判别测试品种的特异性；所述一致的差异是指在2～3个独立的生长周期中，观测到的性状差异具有重现性。
[0018] 本发明方法的优选方案中，步骤(1)中的质量性状是指以不连续状态表达的性状，或者性状表达范围至少部分是连续的，但其变异范围是多维的性状；所述数量性状是指性状表达包括了从一个极端到另一个极端之间的整个变异范围的性状。
[0019] 本发明方法的优选方案中，步骤(3)中得到的各性状、级别代码和标准品种的对应关系为：
[0020]
[0021]
[0022]
[0023]
[0024]
[0025] 本发明方法的优选方案中，步骤(5)中参试种子未做影响植株正常生长和性状表达的处理，需为同一批次。
[0026] 本发明方法的优选方案中，步骤(6)中的性状观测包括群体测量、个体测量、群体目测和个体目测，在必测性状中，除大田生育期外，均为个体目测或测量的性状，在补充性状中，每个性状均为群体目测或测量的性状；每个需要个体目测或测量的性状在每个小区的观察分析株数为15个单株；根据每个测试性状的特点不同而采用不同的描述方法，对于质量性状描述，若测试品种与哪一个标准品种在该性状上表现为同一状态，就用这个标准品种的该状态的代码来描述测试品种，近似品种也用同样的方法描述；对于数量性状的描述，先分别随机度量测试品种、近似品种和不同性状表现状态对应标准品种的每个种植小区的各15株的该性状的表现，计算各个品种该性状表现的平均数，然后用各个性状表现状态对应标准品种的平均数分别与测试品种和近似品种的平均数相比较，与哪一个标准品种的平均数接近，就用哪个标准品种的代码分别对测试品种和近似品种进行描述；
[0027] 本发明方法的优选方案中，步骤(6)中进行性状观测时，当观测抗病性状时，必须在控制感染的条件下，每个小区不少于对20株进行成株期人工接种鉴定。
[0028] 本发明方法的优选方案中，步骤(7)中非典型株是指必测性状中至少有1个质量性状与该品种的其他植株在该性状的表达处于不同的代码，或者至少有两个数量性状的性状表达与该品种的其他植株在该两个性状的表达相差2个及2个以上的代码的植株。
[0029] 本发明方法所述现有白肋烟品种资源包括国内白肋烟审定品种、国内白肋烟种质资源、引自国外白肋烟种质资源，共145份种质资源材料，具体包括：8301、8701、Banket A-1、Burley 1、Burley 2、Burley 5、Burley 10、Burley 11、Burley 11A、Burley 18-100、Burley 21、Burley 26、Burley 27、Burley 29、Burley 34、Burley 37、Burley 49、Burley
64、Burley 67、Burley 68、Burley 69、Burley 93、Burley 100、Burley 151、Burley Wloski、Burley Skroniowski、BYS、EB 9002号、Ergo、Gold.no.Burley、Greeneville 17A、Har Win、J.P.W Burley、K10(BY10)、K14(BY14)、K21(BY21)、K26(BY26)、KBM 20、KBM 33、Kentucky 9、Kentucky 10、Kentucky 12、Kentucky 14、Kentucky 15、Kentucky 16、Kentucky 17、Kentucky 24、Kentucky 34、Kentucky 41A、Kentucky 56、Kentucky 57、Kentucky 907、Kentucky 908、Kentucky 8959、KY 17(少叶)、L-8、LA Burley 21、PB 9、PMR Burley 21、S 174、S·K、S.N(69)、Stamn D23-Nikotinarn、Tennessee 86、Tennessee 90、Tennessee 97、TI 1406、TI 1463、Virginia 52、Virginia 509、Virginia 528、Virginia
1012、Virginia 1013、Virginia 1019、Virginia 1041、Virginia 1048、Virginia 1050、Virginia 1052、Virginia 1053、Virginia 1061、Virginia 1088、Virginia 1411、W.B、W.B
68、White Burley 1、White Burley 2、White Burley 5、Wohlsdorfer Burley、阿波(Awa)、巴引1号、巴引2号、白茎烟、白肋162、白元洲1号、本格力号、达白1号、达白2号、鄂白001、鄂白002、鄂白003、鄂白004、鄂白005、鄂白006、鄂白007、鄂白008、鄂白009、鄂白010、鄂白
011、鄂白20号、鄂白21号、鄂白99-2-4、鄂白单株9号、鄂烟101、鄂烟1号、鄂烟209、鄂烟211、鄂烟2号、鄂烟3号、鄂烟4号、鄂烟5号、鄂烟6号、鹤峰大五号、鹤峰黄烟、鹤峰自来黄、黄金蔸、建白90、建始白肋10号、建选1号、建选2号、建选3号、建选304号、金水白肋1号、金水白肋
2号、津引2号、临育1号、牡晒82-38-5、黔白1号、日本白肋、省白肋窄叶、五峰白肋烟、选择18号多叶、引巴1号、引巴2号、云白1号、云白2号。
[0030] 本发明中所述测试品种包括白肋烟新常规种、新杂交种、新雄性不育系、新种质材料和来源于组培的新品种。
[0031] 有益效果：本发明与现有技术相比，具有以下优点：(1)本发明方法通过对现有白肋烟品种资源的植物学性状、农艺性状、抗病性状、经济性状、品质性状进行重复鉴定，筛选出相对稳定的、易于操作的、能够清晰描述并能充分显示出品种间差异的45个性状作为测试性状，并据其表达范围划分为2-6种级别，同时给每一种级别对应一个相应的数字代码和一个标准品种，这样就能够通过田间小区鉴定试验来度量每个测试性状的变异度，并依据标准品种来确定每个性状表达所处的级别，进而可以根据不同测试周期测试品种的测试性状的变异度和所处级别的变化来判别测试品种的一致性和稳定性；选择测试品种的近似品种作为测试品种的比较对象，不仅减少了田间工作量，增加试验准确性，而且能够通过比较测试品种与近似品种在测试性状表达级别上的异同，来判别测试品种的特异性。因此，本发明方法解决了白肋烟品种特异性、一致性和稳定性判别的技术问题。(2)本发明方法采用的测试性状、性状分级标准和标准品种，都是在对现有品种资源的植物学性状、农艺性状、抗病性状、经济性状、品质性状进行重复鉴定的基础上制定的，因而适合对白肋烟新常规种、新杂交种、新雄性不育系、新种质材料和来源于组培的新品种的一致性、稳定性和特异性的判别，为白肋烟新品种的授权提供依据，不但可以对我国拥有自主知识产权的白肋烟新品种和特优资源进行保护，还可对国外白肋烟品种的引进和利用进行规范管理，促进白肋烟种质资源的交流，对发展白肋烟遗传育种具有重要意义。
具体实施方式
[0032] 下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但本发明的实施方式不限于此。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0033] 实施例一：测试性状、性状分级标准和标准品种的确定
[0034] 多年来，湖北省烟草科学研究院育种中心广泛搜集、引进和创新白肋烟种质资源145份，包括国内白肋烟审定品种、国内白肋烟种质资源、引自国外白肋烟种质资源，具体为：8301、8701、Banket A-1、Burley 1、Burley 2、Burley 5、Burley 10、Burley 11、Burley
11A、Burley 18-100、Burley 21、Burley 26、Burley 27、Burley 29、Burley 34、Burley
37、Burley 49、Burley 64、Burley 67、Burley 68、Burley 69、Burley 93、Burley 100、Burley 151、Burley Wloski、Burley Skroniowski、BYS、EB 9002号、Ergo、Gold.no.Burley、Greeneville 17A、Har Win、J.P.W Burley、K10(BY10)、K14(BY14)、K21(BY21)、K26(BY26)、KBM 20、KBM 33、Kentucky 9、Kentucky 10、Kentucky 12、Kentucky
14、Kentucky 15、Kentucky 16、Kentucky 17、Kentucky 24、Kentucky 34、Kentucky 41A、Kentucky 56、Kentucky 57、Kentucky 907、Kentucky 908、Kentucky 8959、KY 17(少叶)、L-8、LA Burley 21、PB 9、PMR Burley 21、S 174、S·K、S.N(69)、Stamn D23-Nikotinarn、Tennessee 86、Tennessee 90、Tennessee 97、TI 1406、TI 1463、Virginia 52、Virginia
509、Virginia 528、Virginia 1012、Virginia 1013、Virginia 1019、Virginia 1041、Virginia 1048、Virginia 1050、Virginia 1052、Virginia 1053、Virginia 1061、Virginia 1088、Virginia 1411、W.B、W.B 68、White Burley 1、White Burley 2、White Burley 5、Wohlsdorfer Burley、阿波(Awa)、巴引1号、巴引2号、白茎烟、白肋162、白元洲1号、本格力号、达白1号、达白2号、鄂白001、鄂白002、鄂白003、鄂白004、鄂白005、鄂白006、鄂白007、鄂白008、鄂白009、鄂白010、鄂白011、鄂白20号、鄂白21号、鄂白99-2-4、鄂白单株
9号、鄂烟101、鄂烟1号、鄂烟209、鄂烟211、鄂烟2号、鄂烟3号、鄂烟4号、鄂烟5号、鄂烟6号、鹤峰大五号、鹤峰黄烟、鹤峰自来黄、黄金蔸、建白90、建始白肋10号、建选1号、建选2号、建选3号、建选304号、金水白肋1号、金水白肋2号、津引2号、临育1号、牡晒82-38-5、黔白1号、日本白肋、省白肋窄叶、五峰白肋烟、选择18号多叶、引巴1号、引巴2号、云白1号、云白2号。
[0035] 将上述145份品种资源分批次地重复进行植物学性状、农艺性状、综合经济性状、抗病性状以及烟叶外观品质、常规化学成分含量、吸食品质鉴定，每份品种资源至少进行了3个生长周期的鉴定，通过连续8年的鉴定，以性状相对稳定、易于观测操作、能够清晰描述并能充分显示出品种间差异为原则，筛选出45个性状，按性状在品种特异性、一致性和稳定性测试中的重要程度分为27个必测性状和18个补充性状；所述必测性状为每个需要鉴定判别的测试品种必须进行观测、描述的基本性状，包括15个质量性状和12个数量性状，质量性状具体包括：株型、叶形、叶色、叶柄、叶耳、叶面、叶缘、叶尖、叶肉组织、叶片厚度、主脉粗细、茸毛、成熟特征、花色、花序特征，数量性状具体包括：自然株高、打顶株高、着生总叶数、有效叶数、节距、茎围、腰叶长、腰叶宽、顶叶长、顶叶宽、茎叶角度、大田生育期；所述补充性状是在上述必测性状不能区别测试品种和近似品种时，仍需进一步测试而选用的性状，包括10个质量性状和8个数量性状，质量性状具体包括：苗色、苗期生长势、大田生长势、腋芽生长势、原烟颜色、原烟身份、原烟叶片结构、原烟叶面状态、原烟光泽、原烟颜色强度，数量性状具体包括：中心花开放期、黑胫病抗性、青枯病抗性、赤星病抗性、TMV抗性、PVY抗性、亩产量、中部叶烟碱含量；所述质量性状是指以不连续状态表达的性状，或者性状表达范围至少部分是连续的，但其变异范围是多维的性状；所述数量性状是指性状表达包括了从一个极端到另一个极端之间的整个变异范围的性状。测试性状的观测包括群体测量、个体测量、群体目测和个体目测，在必测性状中，除大田生育期外，均为个体目测或测量的性状，在补充性状中，每个性状均为群体目测或测量的性状。
[0036] 为了测试新品种以及进行品种描述，将上述测试性状的每个性状的表达范围根据其表现划分为2-6种状态，每一种状态对应一个相应的数字代码，称为一个级别。同时为了确定同一性状的不同表达状态、消除年份误差和提高测试可靠性，以尽量公知公用、能代表更多性状为原则，根据上述145份现有白肋烟品种资源连续8年的鉴定结果而从中筛选出用于性状分级的参照标准、辅助判断试验可靠性的具备广泛代表性的36个标准品种，包括：Banket A-1、Burley 21、Burley 27、Burley 29、Burley 34、Burley Wloski、Gold.no.Burley、Greeneville 17A、K14(BY14)、K21(BY21)、Kentucky 12、Kentucky 14、Kentucky 24、Kentucky 56、Kentucky 8959、KBM 20、KY17(少叶)、L-8、S·K、Tennessee
90、Virginia 509、Virginia 1013、Virginia 1048、Virginia 1053、White Burley 5、白肋
162、鄂白99-2-4、鄂烟101、鄂烟1号、鄂烟211、鄂烟4号、鄂烟5号、鹤峰黄烟、牡晒82-38-5、日本白肋、省白肋窄叶。每个测试性状的绝大多数状态或者级别都对应有标准品种，每个性状的状态划分对应的代码和标准品种为：
[0037]
[0038]
[0039]
[0040]
[0041]
[0042] 实施例2：白肋烟新品种特异性、一致性和稳定性的测试
[0043] 以白肋烟新品种22083为测试品种，根据品种22083的资料描述，该品种是以Burley 21的不育系为母本、Virginia 509为父本配制而成的杂交种，其在形态特征上可能与亲本Burley 21和Virginia 509相近，也可能与以Burley 21不育系为母本育成的品种鄂烟1号和鄂烟211以及以Virginia509不育系为母本育成的品种达白2号相近，因此选择Burley 21、Virginia 509、鄂烟1号、鄂烟211和达白2号作为近似品种，其中Burley 21、Virginia 509、鄂烟1号和鄂烟211同时为标准品种。
[0044] 在湖北省烟草科学研究院恩施晾晒烟试验基地，于2月中旬将包括测试品种22083、上述近似品种及实施例一中确定的标准品种在内的共计38个品种的未做影响植株正常生长和性状表达处理的同一批次的种子进行播种育苗，观察各参试品种苗色和苗期生长势。5月上旬，选择地势平坦、土质均匀、肥力中等、排灌方便、无根茎类发病历史且周围无病毒传染源的地块，将测试品种、近似品种和标准品种一起等行距栽植，行距120cm，株距
50cm。每个测试品种、近似品种及标准品种每个小区的种植株数为60株，设置3个重复，随机排列。测试田四周设置保护行。试验田整地、施肥、起垄及田间管理措施同当地大田生产，对测试品种、近似品种和标准品种的田间管理严格一致。通过1个生长周期的鉴定观察，确认筛选的近似品种比较准确，于是不改变近似品种，在翌年相同生长季节重复进行上述田间试验。
[0045] 在每年的田间试验中，按照植物的生长进程，对测试性状进行观察记载，用标准品种分别对测试品种和近似品种各性状的表现状态进行描述。每个需要个体目测或测量的性状在每个小区的观察测定数为15个单株或者是取自该15个单株的样本分析，性状的观察测定和取样分析的数据分别来自3个重复。根据每个测试性状的特点不同而采用不同的方法；对于质量性状描述，通过观察记载，若测试品种与哪一个标准品种在该性状上表现为同一状态，就用这个标准品种的该状态的代码来描述测试品种，近似品种也用同样的方法描述；
对于数量性状的描述，先分别随机度量测试品种、近似品种和不同性状表现状态对应标准品种的每个种植小区的各15株的该性状的表现，计算各个品种该性状表现的平均数，然后用各个性状表现状态对应标准品种的平均数分别与测试品种和近似品种的平均数相比较，与哪一个标准品种的平均数接近，就用哪个标准品种的代码分别对测试品种和近似品种进行描述。表1为测试品种22083及其近似品种第1生长周期27个必测性状的观测结果，表2为测试品种22083及其近似品种第2生长周期27个必测性状的观测结果。
[0046] 表1 测试品种22083及其近似品种第1测试周期27个必测性状的观测结果[0047]
[0048]
[0049] 表2 测试品种22083及其近似品种第2测试周期27个必测性状的观测结果[0050]
[0051]
[0052] 首先，采用2％的群体标准和95％的可接受概率对测试品种22083的一致性进行初步判别。每个小区种植株数为60株，若测试品种22083每个小区非典型株超过3株，则可直接判定测试品种22083不具备一致性，所述非典型株是植株的表现或植株部分的性状表达与该品种的绝大多数植株有明显区别的植株。实际鉴定观察结果表明，2年田间试验中，测试品种22083每个小区都没有观察到非典型株。于是，进一步通过每个小区观察测定或取样分析15株，以本发明中所述代码为分析单元，计算必测性状的变异度来判别，若测试品种某性状的变异度不超过5％，或者测试品种的变异度不超过标准品种在该性状上的变异度，可判定测试品种在该性状表现一致，如果所观测的性状有差异，以表现最多的性状值为准，不能进行个体测试的大田生育期性状，不进行一致性判别。根据实际观测结果，27个必测性状中的15个质量性状包括株型、叶形、叶色、叶柄、叶耳、叶面、叶缘、叶尖、叶肉组织、叶片厚度、主脉粗细、茸毛、成熟特征、花色和花序特征的变异度为0,11个数量性状包括自然株高、打顶株高、着生总叶数、有效叶数、节距、茎围、腰叶长、腰叶宽、顶叶长、顶叶宽和茎叶角度的变异度介于1％-4％范围内，两年观测结果基本一致。因此，判定测试品种22083具备一致性。
[0053] 然后，根据连续2个相同生长季节的测试结果，判定测试品种22083的稳定性。若在连续2个相同生长季节的测试结果中，测试品种22083同一性状的表现在同一代码内，或者第二次测试的变异度与第一次测试的变异度无显著变化，则表示该测试品种在此性状上是稳定的，否则为不稳定，以连续2个生长周期的测试结果评价测试品种的稳定性采用95％的接受概率。从表1和表2列出的测试结果可知，在连续2个相同生长季节的测试结果中，测试品种22083同一性状的表现均在同一代码内，因此，可以直接判定测试品种22083具备稳定性。
[0054] 由于测试品种22083具备一致性和稳定性，因此，需要继续根据测试品种22083与其近似品种Burley 21、Virginia 509、鄂烟1号、鄂烟211和达白2号测试的性状分布的级差，判定测试品种22083与其近似品种是否存在显著差异，即是否具有特异性。具体判定方法是：当测试品种至少在1个质量性状或者数量性状上与近似品种具有明显且一致的差异时，或者至少有两个数量性状的性状表达与近似品种处于不同的代码时，即可判定测试品种具有特异性；对于质量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达处于不同代码，则认为两个品种在该性状上具有明显差异；对于数量性状，如果测试品种和近似品种的性状表达相差2个及2个以上代码，即可判定两个品种在该性状上具有明显差异，如果测试品种和近似品种的性状表达处于同一个代码或者处于相邻的不同代码，而两个品种的该数量性状的算术平均值在95％水平上显著，也可判定两个品种在该性状上具有明显差异；所述一致的差异是指在2-3个独立的生长周期中，观测到的性状差异应该具有重现性。从表1和表2列出的测试结果可知，测试品种22083至少在3个质量性状和3个数量性状的表达上与近似品种Burley 21处于不同代码，且连续2个相同生长季节的测试结果基本一致，可以认为测试品种22083与近似品种Burley 21不同；测试品种22083至少在1个质量性状和3个数量性状的表达上与近似品种Virginia 509处于不同代码，且连续2个相同生长季节的测试结果基本一致，可以认为测试品种22083与近似品种Virginia 509不同；测试品种22083至少在2个质量性状和6个数量性状的表达上与近似品种鄂烟1号处于不同代码，且连续2个相同生长季节的测试结果基本一致，可以认为测试品种22083与近似品种鄂烟1号不同；测试品种22083至少在1个质量性状和3个数量性状的表达上与近似品种鄂烟211处于不同代码，且连续2个相同生长季节的测试结果基本一致，可以认为测试品种22083与近似品种鄂烟211不同；测试品种22083至少在1个质量性状和2个数量性状的表达上与近似品种达白2号处于不同代码，且连续2个相同生长季节的测试结果基本一致，可以认为测试品种22083与近似品种达白2号不同。综上分析，测试品种22083至少在1个质量性状上与筛选的所有近似品种都具有明显且一致的差异，至少有两个数量性状的性状表达与筛选的所有近似品种处于不同的代码且在2个独立的生长周期中具有重现性，因此，可判定测试品种22083具有特异性。
[0055] 假若采用上述必测性状不能区别测试品种和近似品种，则需使用补充性状进一步判别。若采用补充性状如苗色、苗期生长势、大田生长势、腋芽生长势、原烟颜色、原烟身份、原烟叶片结构、原烟叶面状态、原烟光泽、原烟颜色强度、中心花开放期、亩产量、中部叶烟碱含量等仍无法判别，则需补测黑胫病抗性、青枯病抗性、赤星病抗性、TMV抗性和PVY抗性进行判别，但必须在控制感染的条件下，每个小区不少于对20株进行成株期人工接种鉴定。
[0056] 白肋烟品种表达的性状很多，分为植物学性状、农艺性状、抗病性状、经济性状和品质性状，但这些性状中，有些性状因地域、年份不同而变化很大，有些性状不易观测，操作麻烦、困难，有些性状不易清晰描述，有些性状不能充分显示品种间的差异。因此，要判别白肋烟新品种的特异性、一致性和稳定性，必须选择相对稳定的、易于操作的、能够清晰描述并能充分显示出品种间差异的性状作为测试性状，而哪些性状能够作为测试性状必须通过对现有白肋烟品种资源的反复鉴定才能确定。为了减少工作量，又将测试性状分为必测性状和补充性状，所谓必测性状就是测试性状中能够在田间试验中通过观察和测量直接得到的性状，所谓补充性状相对于必测性状，观察和测量要麻烦一些，是在必测性状不能区别测试品种和近似品种时，才进一步测试而选用的性状。
[0057] 在白肋烟品种的测试性状中，有些性状表达包括了从一个极端到另一个极端之间的整个变异范围，是可以用测量工具测量的，称作数量性状，如株高、叶数、叶长、叶宽等，有些性状不易测量、只能是定性描述的，但其中有些性状是不呈连续状态表达的，如株型、叶柄有无等，有些性状至少部分是连续表达的，如叶形、叶色、叶耳大小等，这些性状称作质量性状。不同的白肋烟品种在同一个性状上的表达状态有可能是不同的，对于质量性状可以通过定性描述，而对于数量性状必须进行测量，但由于数量性状受试验地小环境的影响，不同品种的不同的测量数据并不能说明品种间有差异，因此，为了准确描述每个测试品种，必须把测试性状的表达范围划分成不同的状态，并给每种状态赋予一个参照品种，即本发明方法所述的标准品种(标准品种是所有作物新品种测试指南的通用说法)。各个测试性状表达状态的划分也是必须建立在对现有白肋烟品种资源反复鉴定的基础上才能确定的。至于株高、叶形等质量性状不同表达状态的描述，为了便于理解，必须采用通用的描述语言，如株型描述分为塔形、筒形、橄榄形等，叶色描述分为浓绿、深绿、绿、浅绿、黄绿等。至于数量性状则根据现有品种在多年鉴定试验中的表达范围，按等差划分为不同状态，如株高分为矮、较矮、中、较高、高五个状态等。考虑到试验地小环境的影响，同一个品种不同植株间是有差异的，为了计算平均数和变异度，还必须给各个测试性状每个表达状态，赋予一个数字代码。对于质量性状来说，如果呈不连续状态表达，则看作类别，若没有极端状态就给予数字代码“1、2、3…”，若呈极端状态就给予数字代码“1、9”；如果至少部分是连续表达的，若没有极端状态就给予数字代码“3、5、7…”，若有极端状态就给予数字代码“1、3、5、7…”。对于数量性状来说，由于性状表达包括了从一个极端到另一个极端之间的整个变异范围，就给予数字代码“1、3、5、7、9”。由于地域、年份和试验地块小环境影响，有些性状表达状态不太容易划分，因此必须给各个测试性状的每种表达状态赋予一个参照品种即标准品种，而标准品种的确定也是必须建立在对现有白肋烟品种资源反复鉴定的基础上的，必须选择那些在品种资源重复鉴定试验中性状表现具有典型性、广泛代表性的品种才能作为标准品种，本发明方法中提到的标准品种就是我们根据反复鉴定试验确定的，并不是已有的。标准品种有两个作用，一是用于性状分级的参照标准，二是用来辅助判断试验的可靠性，消除环境误差。对于质量性状来说，若测试品种及其近似品种与哪一个标准品种在该性状上表现状态接近，就用哪个标准品种的该状态来描述测试品种及其近似品种。对于数量性状来说，若测试品种及其近似品种与哪一个标准品种在该性状表现的平均数接近，就用哪个标准品种的该状态来描述测试品种及其近似品种。
[0058] 关于近似品种：由于现有白肋烟品种资源众多，没有条件也不可能将所有品种都进行与测试品种比较，只能从现有品种资源中选择与测试品种在形态特征上最为相近的品种与测试品种进行比较，所选的与测试品种在形态特征上最为相近的品种就称作近似品种。近似品种的选择必须根据需要鉴定判别的测试品种的选育单位提供的该测试品种的性状描述资料，从现有白肋烟品种资源中进行选取。近似品种有两个作用：一是减少鉴定工作量，二是用来判别测试品种的特异性，若测试品种与近似品种一致，也就不具备特异性。
[0059] 关于田间试验的设计，如行株距、小区种植株数、重复数、测试周期等，都是依据白肋烟生长特点及充分观察品种的性状表达为原则，硬性规定的。一般的白肋烟品种田间试验的行株距、小区种植株数、重复数、试验周期等，可能与此相同，也可能不同，主要根据试验单位的条件和试验目的来确定。田间试验设计是本发明方法的必要步骤。
[0060] 关于田间试验的重复，为田间试验和生物统计专业术语，指区组，一个重复就是一个区组，每个区组都包含所有参试品种，每个参试品种在一个区组内种植成一个小区。3次重复可以理解为每个品种种植3个小区，但分布在3个区组中；4次重复可以理解为每个品种种植4个小区，但分布在4个区组中。
[0061] 关于性状的观察测定株数，一般的品种试验为5-10株，但用来判别品种的特异性、一致性和稳定性来说，株数偏少，不能代表一个小区的品种表现，因此，本发明方法硬性规定观察测定株数为15株。
[0062] 关于判别测试品种一致性的方法，不同作物有所不同，一般作物要么采用非典型株来判别，要么采用性状变异度来判别，本方法根据白肋烟作物特点将两种判别方法结合
