含巴西蜡的沃尼妙林注射液

摘要

本发明是一种外观为乳胶状的含巴西蜡的沃尼妙林注射液，在每升注射液中包含盐酸沃尼妙林150‑180g、巴西蜡2.5‑11g、体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2‑丙二醇/乙醇加至1升。在每升注射液中还包含单油酸甘油酯100‑150ml。在制备以上所述的每升注射液时，还可加入2水柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)13.0‑31.2g，或加入10水碳酸钠(Na2CO3·10H2O)19.0‑31.9g。加入的柠檬酸钠或碳酸钠会与盐酸沃尼妙林发生反应，由此所制备的每升注射液中包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐(盐酸盐或柠檬酸盐)150‑180g，巴西蜡2.5‑11g，单油酸甘油酯100‑150ml，体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2‑丙二醇/乙醇加至1升。

权利要求

1.一种含沃尼妙林的注射液，其特征在于在每升注射液中包含以下各组分：a.盐酸沃尼妙林 150-180g

b.巴西蜡       2-11g

c.体积比为4.5∶3∶3.3∶1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升；

在所述的每升注射液中包含60-150ml单油酸甘油酯；

还可加入2水柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)13.0-31.2g，或加入10水碳酸钠(Na2CO3·

10H2O)19.0-31.9g，加入的柠檬酸钠或碳酸钠会与盐酸沃尼妙林反应，使沃尼妙林的盐酸盐转化为沃尼妙林碱或转化为柠檬酸盐；

在所述的每升注射液中包含0.1-0.3g抗氧剂，抗氧剂包括叔丁基-4-羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯或叔丁基对苯二酚中的一种或一种以上任何比例的混合物。

2.按权利要求1所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含以下各组分：a.盐酸沃尼妙林   180g

b.巴西蜡     6.6-7.26gc.叔丁基对苯二酚 0.2g

d.体积比为4.5∶3∶3.3∶1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。

3.按权利要求1所述的注射液，其特征在于在所述的每升注射液中包含以下各组分：a.盐酸沃尼妙林   180g

b.巴西蜡     6.6-7.26gc.单油酸甘油酯   100ml

d.叔丁基对苯二酚 0.2g

e.体积比为4.5∶3∶3.3∶1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。

4.按权利要求1所述的注射液，其特征在于在制备所述的每升注射液过程中加入2水柠檬酸钠21.9-31.2g，由此所制备的每升注射液中包含沃尼妙林柠檬酸盐和沃尼妙林碱

180g、巴西蜡6.6-7.26g、单油酸甘油酯100ml、叔丁基对苯二酚0.2g、体积比为4.5∶3∶3.3∶1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。

5.按权利要求1所述的注射液，其特征在于在制备所述的每升注射液过程中加入10水碳酸钠22.8-31.9g，由此所制备的每升注射液中包含盐酸沃尼妙林和沃尼妙林碱180g、巴西蜡6.6-7.26g、单油酸甘油酯100ml、叔丁基对苯二酚0.2g、体积比为4.5∶3∶3.3∶1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。

说明书

含巴西蜡的沃尼妙林注射液

技术领域

[0001] 本发明属于兽药制剂制备技术，涉及用巴西蜡(又称巴西棕榈蜡)或巴西蜡和单油酸甘油酯为缓释介质，制备含盐酸沃尼妙林或含沃尼妙林酸式盐和沃尼妙林碱的兽用长效注射液。

背景技术

[0002] 盐酸沃尼妙林是沃尼妙林碱的盐酸盐，是动物专用的半合成抗菌药物，具有抗菌谱广、活性高、毒副作用低、不易产生耐药性、残留低等特点，主要用于防治猪、牛、羊及家禽的支原体病和革兰氏阳性菌的感染。现阶段已市售的含盐酸沃尼妙林的制剂仅有经过包被(埋)的口服固体制剂，还没有盐酸沃尼妙林注射剂和沃尼妙林碱及其制剂上市。

[0003] 有关含沃尼妙林碱或含盐酸沃尼妙林的注射剂，专利公开的有溶液型油质注射液(CN 102119919B、CN 1409631A)，有乳剂和纳米乳剂(CN 101756899A、CN 101947203A)，有脂质体新剂型(CN  101744799B)，有以泊洛沙姆407为载体制备的油悬剂(201410005517.X)，还有以聚乙二醇为载体制备的油悬剂，以及以乙酸异丁酸蔗糖酯为介质制备的油悬剂。

[0004] 本发明制剂的制备技术不同与已公开的技术。本发明是以巴西蜡或巴西蜡和单油酸甘油酯作为缓解材料，来制备含沃尼妙林的长效注射剂。

发明内容

[0005] 本发明制剂外观为乳胶状，在每升制剂中包含以下组分：

[0006] a.盐酸沃尼妙林150-180g，b.巴西蜡2.5-11g，c.体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。在所述的每升注射液中还包含单油酸甘油酯100-150ml。

[0007] 在制备以上所述的每升制剂时，还可加入2水柠檬酸钠(C6H5Na3O7·2H2O)13.0-31.2g，或加入10水碳酸钠(Na2CO3·10H2O)19.0-31.9g。加入的柠檬酸钠或碳酸钠会与盐酸沃尼妙林反应，使沃尼妙林的盐酸盐转化为沃尼妙林碱或转化为柠檬酸盐，由此所制备的制剂，其活性成份为盐酸沃尼妙林和沃尼妙林碱或沃尼妙林柠檬酸盐与沃尼妙林碱的组合物，所制备的每升制剂包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐(盐酸盐或柠檬酸盐)150-180g，巴西蜡2.5-11g，单油酸甘油酯100-150ml，体积比为4.5比3比3.3比1的三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇加至1升。

[0008] 在以上所述的每升制剂中还包含0.1-0.3g抗氧剂，选择的抗氧剂包括叔丁基-4-羟基茴香醚(BHA)、二丁基羟基甲苯(BHT)、没食子酸丙酯(PG)或叔丁基对苯二酚(TBHQ)中的一种或一种以上任何比例的混合物。

[0009] 本发明制剂的制备可采用多种不同的操作过程来完成，选择的制备过程如下：

[0010] 制备方法a：

[0011] 取巴西蜡粉与三乙酸甘油酯和苯甲醇苄酯混合，在90-95℃溶解后，在搅拌下降至室温；取盐酸沃尼妙林用1，2-丙二醇和乙醇溶解；将含巴西蜡的液体与含盐酸沃尼妙林的液体混合，加或不加入单油酸甘油酯，加或不加入抗氧剂，过高剪切均质机，即得本制剂。

[0012] 制备方法b：

[0013] 取巴西蜡粉与三乙酸甘油酯和苯甲醇苄酯混合，于90-95℃溶解后，在搅拌条件下降至室温，得含巴西蜡的液体；取盐酸沃尼妙林，用1，2-丙二醇和乙醇溶解，之后加入2水柠檬酸钠细粉或10水碳酸钠细粉，研磨60-90分钟后，加入含巴西蜡的液体和单油酸甘油酯，加入或不加入抗氧剂，用高速剪切式均质机处理10-20分钟，即得含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐(盐酸盐或柠檬酸盐)的注射剂。

[0014] 制备方法b的制备特点：通过改变碳酸钠或柠檬酸钠的加入量可以调整制剂中沃尼妙林碱与盐酸沃尼妙林，或沃尼妙林碱与沃尼妙林柠檬酸盐的含量比例。在制备过程中，10水碳酸钠的加入量应以使1/2-2/3量的盐酸沃尼妙林转化为沃尼妙林碱为适宜；2水柠檬酸钠的加入量应以使1/3量的盐酸沃尼妙林转化为柠檬酸盐，2/3量的盐酸沃尼妙林转化为沃尼妙林碱为适宜。

[0015] 制剂中沃尼妙林碱与沃尼妙林酸式盐(盐酸盐或柠檬酸盐)的含量比例和临床使用时的给药剂量对药效的持续时间长短和速释效果有明显的影响。提高制剂中沃尼妙林碱与沃尼妙林酸式盐的含量比值和提高给药剂量，可延长有效血药浓度的维持时间，这与沃尼妙林碱水溶性差油溶性好，因此，从注射部位扩展速度缓慢有密切关系。对于以治疗作用为主的抗菌药物而言，为了有利于重症感染动物的治疗，在考虑制剂的长效作用同时，更不可忽视制剂的速释作用，因此，在确定沃尼妙林碱与沃尼妙林酸式盐在制剂中的含量比例时，应以保证制剂速效作用为前提。本发明优选的制剂其活性成份包含沃尼妙林碱和沃尼妙林酸式盐两组分，从而使制剂既有速释效果还有长效作用。

[0016] 制剂中乙醇或1，2-丙二醇的含量越多，药物从注射部位扩展速度越快；在制剂中加入巴西蜡，即有稳定性作用，还具有减缓沃尼妙林(包括其盐的形式或碱的形式)扩展速度的作用；当巴西蜡与单油酸甘油酯组合使用时，制剂的缓释作用明显加强(见实施例5)。因此，通过调整制剂中沃尼妙林碱与沃尼妙林酸式盐的含量比例，或调整制剂中乙醇和1，
2-丙二醇的含量，或调整巴西蜡的含量，或调整巴西蜡和单油酸甘油酯的含量，都可有效的改变制剂的速释效果和长效作用。以上这些都是本发明制剂在制备技术方面的特点。

具体实施方式

[0017] 实施例1、制备含巴西蜡的盐酸沃尼妙林注射液

[0018] 取盐酸沃尼妙林15g，用1，2-丙二醇20ml和乙醇6ml，在室温条件下搅拌溶解，得粘稠的盐酸沃尼妙林溶液；取巴西蜡粉0.66g与三乙酸甘油酯27ml和苯甲酸苄酯18ml混合，在90-95℃溶解，在搅拌下使料温降至室温，得含巴西蜡的液体；将含巴西蜡的液体与盐酸沃尼妙林溶液混合，并加入0.02g TBHQ，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含巴西蜡的盐酸沃尼妙林注射液。

[0019] 实施例2、制备含巴西蜡和单油酸甘油酯的盐酸沃尼妙林注射液

[0020] 取15g盐酸沃尼妙林，用1，2-丙二醇20ml和乙醇6ml，在室温条件下搅拌溶解，得粘稠的盐酸沃尼妙林溶液；取0.66g巴西蜡粉与27ml三乙酸甘油酯和18ml苯甲酸苄酯混合，在90-95℃溶解，在搅拌下使料温降至室温，得含巴西蜡的液体；将含巴西蜡的液体与盐酸沃尼妙林溶液混合，并加入0.02g TBHQ和10ml单油酸甘油酯，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含巴西蜡和单油酸甘油酯的盐酸沃尼妙林注射液。

[0021] 实施例3、制备含沃尼妙林柠檬酸盐和沃尼妙林碱的注射液

[0022] 取15g盐酸沃尼妙林，用1，2-丙二醇20ml和乙醇6ml，在室温条件下搅拌溶解，得粘稠的盐酸沃尼妙林溶液；取0.66g巴西蜡粉与27ml三乙酸甘油酯和18ml苯甲酸苄酯混合，在90-95℃溶解，在搅拌下使料温降至室温，得含巴西蜡的液体；将粘稠的盐酸沃尼妙林溶液与2水柠檬酸钠2.56g混合，研磨70-90分钟后，加入含巴西蜡的液体和10ml单油酸甘油酯、
0.02g TBHQ，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含沃尼妙林柠檬酸盐和沃尼妙林碱的注射液。分析结果显示，加入的柠檬酸钠与盐酸沃尼妙林反应，形成氯化钠、沃尼妙林的柠檬酸盐和沃尼妙林碱。由于沃尼妙林碱与柠檬酸是以等摩尔量成盐，因此，反应生成的沃尼妙林碱约1/3量转化为柠檬酸盐，2/3量仍以游离碱形式存在。

[0023] 实施例4、制备含盐酸沃尼妙林和沃尼妙林碱的注射液

[0024] 取15g盐酸沃尼妙林，用1，2-丙二醇20ml和乙醇6ml，在室温条件下搅拌溶解，得粘稠的盐酸沃尼妙林溶液；取0.66g巴西蜡粉与27ml三乙酸甘油酯和18ml苯甲酸苄酯混合，在90-95℃溶解，在搅拌下使料温降至室温，得含巴西蜡的液体；将粘稠的盐酸沃尼妙林溶液与10水碳酸钠2.67g混合，研磨70-90分钟后，加入含巴西蜡的液体和10ml单油酸甘油酯、
0.02g TBHQ，用高剪切均质机处理10-20分钟，得含盐酸沃尼妙林和沃尼妙林碱的注射液(制剂中盐酸沃尼妙林与沃尼妙林碱的重量比约为1∶2)。

[0025] 实施例5、对比制剂与实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂和实施例4制剂在绵羊体内的血药浓度测定

[0026] 1、对比制剂

[0027] 对比制剂a：

[0028] 取纯度99.0％盐酸沃尼妙林，用三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇(4.5∶3∶3.3∶1，体积比)，在搅拌条件下溶解，制备成含17％盐酸沃尼妙林(重量/体积比)的注射液。用时现配制。

[0029] 对比制剂b：

[0030] 取纯度99.0％的盐酸沃尼妙林，用三乙酸甘油酯/苯甲酸苄酯/1，2-丙二醇/乙醇(4.5∶3∶3.3∶1，体积比)，在搅拌条件下溶解，之后加入单油酸甘油酯，混匀，制备成含10％单油酸甘油酯和17％盐酸沃尼妙林的注射液。用时现配制。

[0031] 2、实验动物、给药和采血

[0032] 以绵羊为实验动物，选8只体重在24-30公斤的健康圈养绵羊，试验分6次，每次试验8只绵羊均注射同一种试验药剂，不同药剂的给药时间间隔为10天(每次试验的间隔时间)，给药剂量均为17mg/kg b.w.，采用臀部肌内注射给药。每次给药前均采空白血样，本试验目的是比较6种不同制剂的速释与缓释效果，不做系统的药代动力学参数分析，因此，仅在给药后0.5、1.5、3、12、24、48、72、96小时采血，每次从每只羊的颈静脉准确取血7ml，将同一时间采集的8只羊的血样置于同一支含有肝素钠的100ml离心管中，混匀，3500r/min离心10分钟，分离血浆，-18℃冰箱保存，待检测。

[0033] 3、血浆样品处理及检测

[0034] (1)样品处理：

[0035] 准确吸取血浆样品30ml，加45ml甲醇，振荡5分钟，12000r/min离心15min，弃沉淀，将上清液转移到250ml茄形蒸馏瓶中，55℃、-0.1mPa条件下旋蒸，去净甲醇，加入正己烷-乙酸乙酯(1∶1)30ml和0.5％碳酸钠溶液10ml，充分振荡15min，4500-5000r/min离心5min，转移有机相(上层)至鸡心瓶中，55℃、-0.1mPa条件下旋蒸，除净有机溶剂。往鸡心瓶中加0.1％酒石酸溶液3ml，充分溶解后，过已平衡好的SPE小柱(Dikma公司产品，bond Elute 
300mg/6ml)，用甲醇洗脱，洗脱液在45℃下用氮气吹干，残留物用0.5ml流动相复溶，过0.45μm滤膜，进行HPLC分析。

[0036] (2)检测方法与检测结果

[0037] 用岛津高效液相色谱仪检测血浆中沃尼妙林浓度(ng/ml)。色谱柱为C18，5μm 4.6x 250mm；流动相：A相为乙腈，B相为pH 2.5的磷酸盐缓冲液，A相/B相＝1∶1(v/v)，柱温25℃；流速：1ml/min；检测波长：210nm；进样体积：100μl。血浆中沃尼妙林浓度(ng/ml)的检测结果见表1。

[0038] 表1、绵羊注射实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂、实施例4制剂和对比制剂的血药浓度(ng/ml)测定结果

[0039]

[0040] 实施例6、实施例3制剂在绵羊体内的血药浓度测定

[0041] 1、实验动物、给药和采血

[0042] 选15只体重在24-29公斤的圈养健康绵羊，分成3组，每组5只。经臀部肌内注射实施例4制剂，给药剂量分别为10mg/kg b.w.；20mg/kg b.w.；30mg/kg b.w.。在给药后0.5、1.5、3、12、24、48、72、96小时采血，每次从羊颈静脉准确取血10ml，将同一组同一时间采集的血样置于同一支含有肝素钠的100ml离心管中，混匀，3500r/min离心10分钟，分离血浆，-
18℃存放。

[0043] 2、血浆样品处理及检测

[0044] 血浆样品处理和检测方法同实施例5，检测结果见表2。

[0045] 表2、绵羊注射实施例3制剂的血药浓度(ng/ml)

[0046]采血时间(h) 10mg/kg b.w. 20mg/kg b.w. 30mg/kg b.w.
0.5 597 753 1261
1.5 936 1296 1431
3 1235 1368 1626
12 431 835 763
24 346 679 601
48 135 464 417
72 64 255 334
96 未检测到 112 189

[0047] 从表1数据中可见：(1)巴西蜡具有减缓盐酸沃尼妙林释放速度的作用(见实施例1制剂和对比制剂的测定数据)。专利CN 86105087C曾公开了用巴西蜡和植物油为缓释材料制备含牛生长激素的注射给药制剂，在该制剂中巴西蜡需达到5％以上浓度时，才具有较好的缓释作用，这时的制剂已呈半固体状态。(2)单油酸甘油酯与巴西蜡组合使用，缓释作用更好(见实施例2制剂的测定数据)。专利CN 201510118056.1中描述了以巴西蜡和单油酸甘油酯为缓释载体制备含抗寄生虫药物的长效注射剂。近些年的研究显示，单油酸甘油酯具有在体内吸收水份(体液)达到35％的平衡含量后发生相变的特征(由层流状转化为高粘度的立方相)，因此，人们利用它的这一特性，以它作为缓释材料来开发原位胶凝长效注射剂，有关这方面的研究，公开的专利很多，并且以单油酸甘油酯为载体的原位胶凝注射剂已有商品上市。众多的研究结果表明，制剂中单油酸甘油酯的浓度要达到30％以上时才对药物的释放具有较好的减缓作用。本发明试验结果显示，当单油酸甘油酯与巴西蜡组合使用时，其在制剂中的浓度大于6％时，就有明显的限制药物扩展速度的作用。(3)按一定比例将沃尼妙林的酸式盐和沃尼妙林碱组合使用，与仅含有盐酸沃尼妙林的制剂比较，其后期血药浓度明显偏高(见实施例3和实施例4制剂的测定数据)，并且该制剂在给药后很快达到较高水平的血药浓度。本制剂的这一特点与专利CN 1409631A公开的制剂不同，试验显示，当制剂中仅含有沃尼妙林碱时，给药后初期的血药浓度偏低(以苯甲酸苄酯和十四烷酸异丙酯为介质时，0.5-3小时的血药浓度为378-812ng/ml)。给药后初期有一个适当高的血药浓度，有利于重症感染动物的治疗。从表2所示的测定数据可见：(1)给药剂量越大，有效血药浓度维持时间越长，本剂的这一特点提示我们，可在注射时通过调整给药剂量来改变药效的维持时间。(2)在给药12小时后释药速度明显平稳，我们认为在12小时以后的血药浓度维持可能主要是依赖于沃尼妙林碱的缓慢释放作用。

[0048] 实施例7、实施例1制剂至实施例4制剂的稳定性试验

[0049] 本试验重点考察了实施例1制剂、实施例2制剂、实施例3制剂、实施例4制剂在25-28℃存放6个月，其制剂沃尼妙林含量变化。采用HPLC法测定制剂中沃尼妙林的含量。测定结果示于表3。

[0050] 表3、制剂稳定性试验

[0051]测定时间(天) 实施例1制剂 实施例2制剂 实施例3制剂 实施例4制剂
30 0.21 0.09 0.35 0.17
90 0.64 0.12 0.33 0.39
180 0.92 0.84 0.56 0.61

[0052] 表中数值为制剂中沃尼妙林减少量(按碱的形式计算)占制剂初始量(0天含量)的百分比。表中数值显示，实施例1制剂至实施例4制剂在25-28℃存放6个月，制剂中沃尼妙林(碱)的减少量仅占制剂初始量(0天含量)的0.56-0.92％，说明本发明制剂稳定。