一种金叶复叶槭的组培快繁方法

摘要

本发明公开了一种金叶复叶槭的组培快繁方法，包括如下步骤：于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于附加0.5‑1.0mg/L的6‑苄基氨基嘌呤的MS培养基中，诱导腋芽萌发；将获得的嫩茎，剪成2‑3cm长的节段，接种于MS培养基中，进行增殖培养；将生长健壮、长3‑4cm的单芽接种于1/2MS培养基中，进行生根培养；当根长至3‑6cm时，将瓶盖打开，炼苗3天后，移栽。本发明通过培养基组分的调整和培养条件的控制，能够较快启动金叶复叶槭离体材料腋芽萌发，诱导试管苗茎段不经愈伤组织直接产生数目较多的不定芽，须根数量多，移栽成活率达85％，为金叶复叶槭工厂化育苗提供了一条有效途径。

权利要求

1.一种金叶复叶槭的组培快繁方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1、于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于添加了0.5-

1.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤的MS培养基中，于20±2℃-25±2℃，14小时光照，光照强度

2000lx条件下培养，诱导腋芽萌发至6-8cm长的嫩茎；

S2、取步骤S1获得的嫩茎，剪成2-3cm带2个叶柄的节段，接种于添加了0.5mg/L 6-苄基氨基嘌呤、0.01-0.05mg/L噻苯隆、0.05mg/L萘乙酸的MS培养基中，于20±2℃-25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下，进行增殖培养；

S3、选取步骤S2所得的生长健壮、长3-4cm的单芽接种于添加了0.01-0.05mg/L吲哚丁酸的1/2MS培养基中，于20±2℃-25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下，进行生根培养。

S4、当根长至3-6cm时，将瓶盖打开，炼苗3天后，用镊子轻轻夹出幼苗，在流水中轻轻冲洗根部培养基，移栽至装有基质的一次性塑料杯中，将塑料杯每10个置于塑料自封袋中，室温炼苗30天后，将生根苗上盆栽于含有珍珠岩、蛭石和田园土的基质中生长。

2.根据权利要求1所述的金叶复叶槭组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S1中的培养基中还添加有6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖。

3.根据权利要求1所述的金叶复叶槭组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S2中增殖培养基还添加有6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L 2-吗啉乙磺酸、0.2g/L左旋谷酰胺。

4.根据权利要求1所述的金叶复叶槭组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S3中生根培养基还添加有7g/L琼脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/L 2-吗啉乙磺酸。

5.根据权利要求1所述的金叶复叶槭组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S4中一次性塑料杯的基质由珍珠岩和泥炭土按1∶1的比例混合而成。

6.根据权利要求1所述的金叶复叶槭组培快繁方法，其特征在于，所述步骤S4中珍珠岩、蛭石、田园土的比例为3∶2∶5。

说明书

一种金叶复叶槭的组培快繁方法

技术领域

[0001] 本发明涉及植物组织培养方法，具体涉及一种金叶复叶槭的组培快繁方法。

背景技术

[0002] 金叶复叶槭(Acer negundo‘Aurea’)属槭树科(Aceraceae)槭属(Acer)树种，是复叶槭的栽培变种，落叶乔木，是我国近几年从欧洲引进的优良观赏树种。金叶复叶槭生长势旺盛，小枝光滑，金黄色；奇数羽状复叶对生，叶较大，叶色柔和，春季金黄色，渐变为黄绿色，具有极高的观赏价值。金叶复叶槭适生范围广，抗性强，耐干旱、耐寒冷(可耐-40-45℃低温)、耐轻度盐碱地、耐烟尘，根萌蘖性强。因其较强的适生性和较高的观赏价值，我国华北、东北、西北及华东地区均有作园林绿化树种栽培，目前市场供不应求。

[0003] 生产中金叶复叶槭的主要繁殖方式为嫁接繁殖。嫁接繁殖成活率较高，但砧木选择不当会影响后期树势生长，且繁殖系数较低、投入成本较大。组织培养技术是良种快繁的主要途径之一，繁殖系数高，变异小。关于金叶复叶槭组织培养的报道很少，只是对其组培性能的初探，同其他槭树科树种的组织培养一样，存在新芽启动慢、增殖系数低、生根性能较差、成活率低的缺陷。

发明内容

[0004] 本发明提供了一种金叶复叶槭的组培快繁方法，克服了金叶复叶槭的组培培养中启动慢、增殖系数低、生根性能差、成活率低的不足。

[0005] 为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：

[0006] 一种金叶复叶槭的组培快繁方法，包括如下步骤：

[0007] S1、于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于附加0.5-1.0mg/L的6-苄基氨基嘌呤(6-BA)的MS培养基中，于20±2℃-25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养，诱导腋芽萌发至6-8cm长的嫩茎；

[0008] S2、取步骤S1获得的嫩茎，剪成2-3cm带2个叶柄的节段，接种于附加0.5mg/L 6-苄基氨基嘌呤(6-BA)、0.01-0.05mg/L噻苯隆(TDZ)、0.05mg/L萘乙酸(NAA)的MS培养基中，于20±2℃-25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下，进行增殖培养；

[0009] S3、选取步骤S2所得的生长健壮、长3-4cm的单芽接种于含0.01-0.05mg/L吲哚丁酸(IBA)的1/2MS培养基中，于20±2℃-25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下，进行生根培养。

[0010] S4、当根长至3-6cm时，将瓶盖打开，炼苗3天后，用镊子轻轻夹出幼苗，在流水中轻轻冲洗根部培养基，移栽至装有基质的一次性塑料杯中，将塑料杯每10个置于塑料自封袋中，室温炼苗30天后，将生根苗上盆栽于含有珍珠岩、蛭石和田园土的基质中生长。

[0011] 其中，所述步骤S1中的培养基中还包含6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖。

[0012] 其中，所述步骤S2中增殖培养基还包含6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L 2-吗啉乙磺酸(MES)、0.2g/L左旋谷酰胺。

[0013] 其中，所述步骤S3中生根培养基还包含7g/L琼脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/L 2-吗啉乙磺酸(MES)。

[0014] 其中，所述步骤S4中一次性塑料杯的基质由珍珠岩和泥炭土按1∶1的比例混合而成。

[0015] 其中，所述步骤S4中珍珠岩、蛭石、田园土的比例为3∶2∶5。

[0016] 本发明具有以下有益效果：

[0017] 解决了槭树科树种组培过程中新芽启动慢、增殖系数低、生根性差、移栽成活率低的问题。通过培养基组分的调整和培养条件的控制，能够较快启动金叶复叶槭离体材料腋芽萌发，诱导试管苗茎段不经愈伤组织直接产生数目较多的不定芽，平均每个外植体增殖芽子数可达5.8个，不定芽生根率达100％，主根发达，须根数量多，移栽成活率达85％，为金叶复叶槭工厂化育苗提供了一条有效途径。

具体实施方式

[0018] 为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

[0019] 实施例1

[0020] 于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于含不同浓度梯度的6-BA(0、0.5、1.0mg/L)、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养，诱导腋芽萌发。统计腋芽萌发时间及萌发茎段状态。结果表明，含0mg/L、0.5mg/L、1.0mg/L 6-BA的培养基中外植体的腋芽萌发时间分别为25天、15天、12天，添加6-BA可提前腋芽启动时间，含0.5-1.0mg/L 6-BA培养基中萌发的嫩茎状态正常，叶片平展，萌发嫩茎伸长速度较快。

[0021] 实施例2

[0022] 于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于含0.5mg/L 6-BA、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养，诱导腋芽萌发。将腋芽萌发获得的嫩茎，剪成2-3cm带2个叶柄的节段，接种在含0.5mg/L 6BA、0.05mg/L NAA、不同浓度梯度的TDZ(0、0.01、0.05、0.1mg/L)、6g/L琼脂粉、
30g/L蔗糖、0.25g/L MES、0.2g/L左旋谷酰胺的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养进行增殖培养。培养50天后统计增殖倍数。结果表明，含0mg/L、
0.01mg/L、0.05mg/L、0.1mg/L TDZ的培养基中平均每个茎段增殖的芽子数分别为2个、4.8个、5.8个、2.6个。前三种浓度下增殖的芽子生长正常，后一种浓度下增殖的芽子粗短、扭曲，外植体切口处愈伤组织化严重。

[0023] 实施例3

[0024] 于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于含0.5mg/L 6-BA、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养，诱导腋芽萌发。将腋芽萌发获得的嫩茎，剪成2-3cm带2个叶柄的节段，接种在含0.5mg/L 6BA、0.05mg/L NAA、0.05mg/L TDZ、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L MES、0.2g/L左旋谷酰胺的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养进行增殖培养。将增殖获得的生长健壮、长3-4cm的单芽分别接种在1/2MS附件不同浓度梯度的IBA(0.01、0.05、0.1mg/L)培养基中，以及1/2MS附件不同浓度梯度的NAA(0.01、0.05、0.1mg/L)培养基中进行生根培养，各种培养基中还包含7g/L琼脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/L MES。培养条件25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx。统计生根时间、50天后的生根率、观察记录生根情况。结果表明，在含NAA的生根培养基中培养的不定芽生根慢、根短、细弱，主根不明显，最早生根时间为21天，最大生根率62％，平均根长1.54cm。在含0.01、0.05、0.1mg/L IBA生根培养基中培养的不定芽最早生根时间分别为15、11、11天，生根率均达100％，平均根长分别为4.2cm、4.8cm、5.1cm；含0.01-0.05mg/L IBA的培养基中培养的不定芽根系生长快、根粗壮，主根明显、须根多，含0.1mg/L IBA培养基中培养的不定芽下端根与茎连接处出现愈伤组织块。

[0025] 实施例4

[0026] 于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于含0.5mg/L 6-BA、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养，诱导腋芽萌发。将腋芽萌发获得的嫩茎，剪成2-3cm带2个叶柄的节段，接种在含0.5mg/L 6BA、0.05mg/L NAA、0.05mg/L TDZ、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L MES、0.2g/L左旋谷酰胺的MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000l x条件下培养进行增殖培养。将增殖获得的生长健壮、长3-4cm的单芽接种在含0.05mg/L IBA、7g/L琼脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/L MES的1/2MS培养基中，于25±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下生根培养。当根长至3-6cm时，将瓶盖打开，炼苗3天。先用镊子轻轻夹出幼苗，在流水中轻轻冲洗根部培养基，移栽至装有基质(珍珠岩∶泥炭土＝1∶1)的一次性塑料杯中，将塑料杯每10个置于塑料自封袋中，室温炼苗30天后，调查成活率，将生根苗上盆栽于珍珠岩+蛭石+田园土(比例3∶2∶5)的基质中生长。结果表明，按此程序进行金叶复叶槭的组培快繁，田间采集的外植体接种后，腋芽启动可在培养15天后开始；启动获得的无菌材料增殖倍数平均为5.8，最高可达6.2；不定芽生根率达100％，根系粗壮发达，移栽成活率达78％。

[0027] 实施例5

[0028] 于春季休眠芽抽条后采集5cm左右的新生嫩枝，表面消毒后接种于含0.5mg/L 6-BA、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖的MS培养基中，于20±2℃，14小时光照，光照强度2000l x条件下培养，诱导腋芽萌发。将腋芽萌发获得的嫩茎，剪成2-3cm带2个叶柄的节段，接种在含0.5mg/L 6BA、0.05mg/L NAA、0.05mg/L TDZ、6g/L琼脂粉、30g/L蔗糖、0.25g/L MES、0.2g/L左旋谷酰胺的MS培养基中，于20±2℃，14小时光照，光照强度2000lx条件下培养进行增殖培养。将增殖获得的生长健壮、长3-4cm的单芽接种在含0.05mg/L IBA、7g/L琼脂粉、15g/L蔗糖、0.25g/L MES的1/2MS培养基中，于20±2℃，14小时光照，光照强度2000l x条件下生根培养。当根长至3-6cm时，将瓶盖打开，炼苗3天。先用镊子轻轻夹出幼苗，在流水中轻轻冲洗根部培养基，移栽至装有基质(珍珠岩∶泥炭土＝1∶1)的一次性塑料杯中，将塑料杯每10个置于塑料自封袋中，室温炼苗30天后，调查成活率，将生根苗上盆栽于珍珠岩+蛭石+田园土(比例3∶2∶5)的基质中生长。本实施例和实施例4唯一的区别是培养温度不同。结果表明，
25±2℃条件下培养的试管苗，在培养后期如不及时更换培养基，下部片叶片会出现轻微失绿白化现象，影响移栽成活率；培养温度降至20±2℃后，可有效阻止试管苗下部叶片失绿白化现象，提高移栽成活率，该温度下的移栽成活率为85％。两种温度在芽启动时间、增殖倍数、生根性能方面影响不显著。

[0029] 综上所述，通过调节培养基中激素的比例，控制培养条件，能够显著提前金叶复叶槭组织培养的芽启动时间、提高试管苗增殖系数、增加生根性能，促进移栽成活率，本发明的栽培方法平均每个外植体增殖芽子数可达5.8个，不定芽生根率达100％，主根发达，须根数量多，移栽成活率达85％，为金叶复叶槭工厂化育苗提供了一条有效途径。

[0030] 以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。