防治肥胖症的三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用

摘要

本发明公开了一种防治肥胖症的三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用，结构如式I所示，*表示消旋、R构型或S构型。本发明的三萜皂苷类化合物，由药食同源植物‑绞股蓝地上部分通过溶剂提取后浓缩成浸膏，再将浸膏溶于水制成分散液，然后进行萃取得到正丁醇部位浸膏，最后采用色谱柱分离并通过制备型反相高效液相色谱分离纯化后获得。本发明的三萜皂苷类化合物，可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可以接受的载体组成药物组合物或作为食品辅料及食品添加剂，用于制备预防和/或治疗肥胖症的药物或保健品。本发明的制备方法简单易行，所得化合物纯度高，具有良好经济效益和应用前景。

权利要求

1.一种式I所示的三萜皂苷类化合物或其药学上可接受的盐的用途，其特征在于，用于制备药物组合物，所述药物组合物用于抑制脂肪细胞分化式中，*表示消旋、R构型或S构型。

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述三萜皂苷类化合物为式Ia或式Ib所示的化合物：

3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述三萜皂苷类化合物为式Ia所示的化合物，并且所述药物组合物用于抑制PPARγ及C/EBPα：

4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述药物组合物包括：(a)用于口服给药的固体剂型，所述固体剂型选自下组：胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂；或(b)用于口服给药的液体剂型，所述液体剂型选自下组：药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。

说明书

防治肥胖症的三萜皂苷类化合物、制备方法及其应用

技术领域

[0001] 本发明属于三萜皂苷类化合物及其制备和应用技术领域，具体涉及从绞股蓝中提取分离得到的三萜皂苷类化合物及其制备方法和用途。

背景技术

[0002] 绞股蓝(Gynostemma pentahyllum(Thunb.)Makino)是葫芦科(Cucurbitaceae)绞股蓝属多年生草质藤本植物。

[0003] 现代研究表明，绞股蓝具有降血糖、降血脂、改善心脑血管系统、增强机体免疫力以及抗肿瘤等广泛的生物活性，且其主要生物活性成分为三萜皂苷类化合物。

[0004] 鉴于三萜皂苷类化合物具有较高的药用价值，本领域尚需对其进行深入研究。

发明内容

[0005] 本发明的目的在于提供一种结构新颖的三萜皂苷类化合物及其制备方法和应用。

[0006] 本发明的第一方面，提供一种式I所示的三萜皂苷类化合物或其药学上可接受的盐，

[0007]

[0008] 式中，*表示消旋、R构型或S构型。

[0009] 在另一优选例中，所述三萜皂苷类化合物为式Ia或式Ib所示的化合物：

[0010]

[0011] 本发明的第二方面，提供第一方面所述的三萜皂苷类化合物的制备方法，包括以下步骤：

[0012] (a)采用溶剂提取绞股蓝地上部分得到提取液；

[0013] (b)将所述提取液进行浓缩得到浸膏；

[0014] (c)将所述浸膏溶于水后得到分散液；

[0015] (d)将分散液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取后取正丁醇萃取液，减压回收溶剂，得正丁醇部位浸膏；

[0016] (e)采用硅胶柱色谱层析所述正丁醇部位浸膏，以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，减压回收溶剂后再次进行硅胶柱色谱层析，用乙酸乙酯-甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂后进行ODS填料中压柱色谱，以甲醇-水溶液进行梯度洗脱，得到含所述三萜皂苷类化合物的流份；

[0017] (f)以半制备型反相高效液相色谱分离纯化所述流份，得到所述三萜皂苷类化合物。

[0018] 在另一优选例中，所述绞股蓝地上部分包含叶、茎。

[0019] 在另一优选例中，所述绞股蓝为二倍体绞股蓝或四倍体绞股蓝，较佳为四倍体绞股蓝。

[0020] 在另一优选例中，所述步骤(a)具有一个或多个以下特征：

[0021] (1)所述溶剂选自：甲醇、乙醇、丙酮、水中的一种或两种以上的混合物；

[0022] (2)所述提取的次数为2-5次；

[0023] (3)所述提取的时间为1-15小时；

[0024] (4)所述绞股蓝地上部分与所述溶剂的料液比为1：2-10(kg/L)，较佳为1：3-8，更佳为1:5；

[0025] (5)所述提取在回流下进行。

[0026] 在另一优选例中，所述步骤(a)中用溶剂提取2～5次，每次1～3小时。

[0027] 在另一优选例中，所述提取的时间为2-10小时，较佳为3-8小时。

[0028] 在另一优选例中，所述浸膏与水的料液比为1:2～1:15(kg/L)，较佳为1:2-1:12，更佳为1:5-1:10。

[0029] 在另一优选例中，所述步骤(d)具有一个或多个以下特征：

[0030] (1)所述石油醚与分散液的体积比为1:2～5:1，较佳为1:1～2:1；

[0031] (2)所述乙酸乙酯与分散液的体积比为1:2～5:1，较佳为1:1～2:1；

[0032] (3)所述正丁醇与所述分散液的体积比为1:2～5:1，较佳为1:1～2:1。

[0033] 在另一优选例中，所述步骤(e)具有一个或多个以下特征：

[0034] (1)二氯甲烷-甲醇溶液中二氯甲烷与甲醇的体积比为100:1～0.5:1；

[0035] (2)乙酸乙酯-甲醇溶液中乙酸乙酯与甲醇的体积比为10:1～0.5:1；

[0036] (3)甲醇-水溶液中包含5vol％-100vol％甲醇，余量为水。

[0037] (4)二氯甲烷-甲醇溶液以体积比100:1、20:1、10:1、5:1、1:1、0.5:1进行梯度洗脱；

[0038] (5)乙酸乙酯-甲醇系统以体积比10:1、5:1、2:1、1:1、0.5:1进行梯度洗脱；

[0039] (6)甲醇-水溶液以5vol％甲醇-水、20vol％甲醇-水、40vol％甲醇-水、60vol％甲醇-水、80vol％甲醇-水、100vol％甲醇溶剂进行梯度洗脱。

[0040] 在另一优选例中，步骤(f)中采用乙腈-甲醇-水的溶剂系统进行分离纯化，得到所述三萜皂苷类化合物，其中，乙腈，甲醇与水的体积比为20-40:10-20:50-60，较佳为25-35：12-18：52-58。

[0041] 本发明的第三方面，提供一种药物组合物，包含：

[0042] (a)第一方面所述的三萜皂苷类化合物；和

[0043] (b)药学上可接受的载体。

[0044] 在另一优选例中，所述药学上可接受的载体为崩解剂、粘合剂、增溶剂和赋形剂中的一种或两种以上。

[0045] 本发明的第四方面，提供一种食品，包含第一方面所述的三萜皂苷类化合物。

[0046] 在另一优选例中，所述食品为减肥食品。

[0047] 本发明的第五方面，提供第一方面所述的三萜皂苷类化合物的用途，[0048] (1)用于制备预防和/或治疗肥胖症的药物；

[0049] (2)用作食品辅料或食品添加剂。

[0050] 本发明的第六方面，提供第三方面所述的药物组合物的用途，用于制备预防和/或治疗肥胖症的药物。

[0051] 本发明从绞股蓝中提取分离得到的三萜皂苷类化合物，及它们的光学异构体、药用盐、溶剂合物可以抑制脂肪细胞分化，它们可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可以接受的载体组成药物组合物或食品辅料及食品添加剂而应用；且制备方法简单易行，所得化合物纯度高，具有良好经济效益和应用前景。

[0052] 应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

[0053] 图1为加药分化7天后油红染色效果图。

[0054] 图2为对油红进行置换后定量图。

[0055] 图3为与脂肪分化相关基因图。

[0056] 图4为免疫荧光分析C/EBPβ与染色体DNA结合实验结果图。

[0057] 图5为C/EBPβ及磷酸化C/EBPβ蛋白表达情况图。

[0058] 图6为CH0P-10蛋白表达情况图。

[0059] 图7为对Wnt/β-catenin信号通路上下游蛋白表达情况图。

[0060] 图8为SiRNA干扰β-catenin基因后脂肪分化关键蛋白表达及油红染色图。

具体实施方式

[0061] 本申请的发明人经过对绞股蓝的化学成分及其生物活性进行广泛而深入地研究，从绞股蓝中成功分离得到多个新的三萜皂苷类化合物，并首次发现一种新的三萜皂苷类化合物及其同分异构体具有防治肥胖的功能。在此基础上，完成了本发明。

[0062] 绞股蓝

[0063] 绞股蓝为葫芦科植物绞股蓝(Gynostemma pentaphyllum(Thunb.)Makino)的干燥全草，为多年生攀缘草本。绞股蓝具有悠久的食用历史，始载于明代的《救荒本草》作野菜食用。日本民间则称其为“甘茶蔓”，作甜茶代用品或糖尿病人的甜味剂。绞股蓝也是五加科外具有人参皂苷资源的植物之一，具有滋补保健、抗癌防衰、降血脂和降血糖等多种功能，被誉为“南方人参”。绞股蓝作为卫生部公布的可用于保健品的植物之一，因其保健功效显著，且安全性很高，适于长期服用，在民间常被当做降脂保健茶饮用。

[0064] 三萜皂苷类化合物

[0065] 本发明的三萜皂苷类化合物，结构如式I所示。

[0066] 在另一优选例中，三萜皂苷类化合物具体结构如下：

[0067]

[0068] 制备方法

[0069] 在另一优选例中，本发明的三萜皂苷类化合物的制备方法，包括以下步骤：

[0070] (1)将四倍体绞股蓝地上部分用溶剂提取，浓缩提取液得浸膏；

[0071] (2)将浸膏加水溶解得分散液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，萃取后得到正丁醇萃取液，减压回收溶剂，得正丁醇部位浸膏；

[0072] (3)将正丁醇部位浸膏与硅胶拌样，上样于硅胶柱上，先以二氯甲烷-甲醇溶液为洗脱剂进行梯度洗脱，减压回收溶剂后再次进行硅胶柱色谱层析，用乙酸乙酯-甲醇溶液进行梯度洗脱，收集洗脱液，减压回收溶剂后进行ODS填料中压柱色谱，以甲醇-水溶液系统进行梯度洗脱，收集含所述化合物的流份，将流份直接以半制备型反相高效液相色谱进行分离纯化，得到所述化合物；

[0073] 在另一优选例中，所述步骤(1)中为将四倍体绞股蓝的地上部分用溶剂提取2～5次，每次1～3小时，浓缩提取液得浸膏；

[0074] 在另一优选例中，所述步骤(1)中的溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮或水中的一种或多种的混合物；

[0075] 在另一优选例中，所述步骤(2)中的浸膏与水的质量比为1:2～1:15。

[0076] 在另一优选例中，所述步骤(2)中石油醚的加入量与分散液的体积比为1:2～5:1；

[0077] 在另一优选例中，所述步骤(2)中乙酸乙酯的加入量与分散液的体积比为1:2～5:1；

[0078] 在另一优选例中，所述步骤(2)中正丁醇的加入量与分散液的体积比为1:2～5:1。

[0079] 在另一优选例中，所述步骤(3)中，二氯甲烷-甲醇溶液以体积比100:1～1:2进行梯度洗脱；乙酸乙酯-甲醇系统以体积比10:1～1:2进行梯度洗脱；再通过ODS填料中压柱色谱进行分离，以5vol％甲醇-水～100vol％甲醇溶剂依次洗脱，收集含所述化合物的流份；一个流份通过半制备型反相高效液相色谱以30％乙腈-15％甲醇-55％水(vol)的溶剂系统进行分离纯化，得到化合物JS和化合物LS。

[0080] 在另一优选例中，所述步骤(3)中，二氯甲烷-甲醇溶液以体积比100:1、20:1、10:1、5:1、1:1、1:2进行梯度洗脱；乙酸乙酯-甲醇系统以体积比10:1、5:1、2:1、1:1、1:2进行梯度洗脱；再通过ODS填料中压柱色谱进行分离，以5vol％甲醇-水、20vol％甲醇-水、40vol％甲醇-水、60vol％甲醇-水、80vol％甲醇-水、100vol％甲醇溶剂系统依次洗脱，收集含所述化合物的流份。

[0081] 用途

[0082] 通过考察不同三萜皂苷类化合物对3T3-L1前脂肪细胞分化的抑制作用并对其作用机制研究，研究发现本发明化合物及它们的光学异构体、药用盐、溶剂合物均能显著抑制50-70％脂肪细胞分化，且多呈剂量依赖关系，表明本发明所述化合物具有明显的抑制脂肪生成作用，可用于防治肥胖症药物的制备。

[0083] 此外，本发明的化合物还可用作食品辅料或食品添加剂，添加到食品中，用于预防和/或治疗肥胖症。

[0084] 药物组合物

[0085] 本发明还提供了一种药物组合物，它包含安全有效量范围内的活性成分，以及药学上可接受的载体。

[0086] 本发明所述的“活性成分”是指本发明所述的式I化合物。

[0087] 本发明所述的“活性成分”和药物组合物可用于抑制脂肪细胞分化。在另一优选例中，用于制备预防和/或治疗肥胖症的药物。

[0088] “安全有效量”指的是：活性成分的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg活性成分/剂，更佳地，含有10-200mg活性成分/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个药片。

[0089] “药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明的活性成分以及它们之间相互掺和，而不明显降低活性成分的药效。

[0090] 通常的，载体包括稀释剂、填充剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、调味剂或其它常规添加剂中的一种或多种。

[0091] 药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如 )、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。

[0092] 本发明的活性成分或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、直肠、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)等。

[0093] 用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。

[0094] 在这些固体剂型中，活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。

[0095] 所述的固体剂型还可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。

[0096] 用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性成分外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料。

[0097] 除了活性成分外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。

[0098] 用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

[0099] 本发明化合物可以单独给药，或者与其他治疗药物联合给药。

[0100] 使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。

[0101] 本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以被任何提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

[0102] 本发明的有益之处在于：

[0103] (1)本发明通过从四倍体绞股蓝中提取分离得到结构新颖的三萜皂苷类化合物，该化合物及它们的光学异构体、药用盐、溶剂合物具有制备防治肥胖症药物的用途，它们可以以其自身的形式施用，也可以和药学上可以接受的载体组成药物组合物而应用；

[0104] (2)本发明提供制备方法简单易行，可在通用设备中完成；

[0105] (3)制备所得化合物纯度高，具有良好经济效益和应用前景。

[0106] 下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件如Sambrook等人，分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

[0107] 除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

[0108] 实施例1

[0109] (1)制备四倍体绞股蓝提取物

[0110] 所用原料为葫芦科(Cucurbitaceae)绞股蓝属植物绞股蓝[G.pentahyllum(Thunb.)Makino]的四倍体，产于陕西省平利县。

[0111] 采集地上部分，干燥后粉碎，取3.8kg，每次用20L甲醇于65-70℃加热回流提取，提取3次，每次2小时，合并提取液，减压回收甲醇，得提取物浸膏800g；

[0112] (2)提取三萜皂苷类化合物

[0113] 将上述800g浸膏加水4800ml分散，依次用等体积的石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取部位。取正丁醇萃取液，减压回收溶剂，得正丁醇部位浸膏390g；

[0114] (3)分离纯化

[0115] 将正丁醇部位浸膏与硅胶(100-200目)拌样，上样于常规硅胶(100-200目)色谱柱上，用二氯甲烷-甲醇系统以体积比100:1、20:1、10:1、5:1、1:1、1:2进行梯度洗脱，每份2000ml，共收集洗脱液27份，将7-16份合并(223g)，减压回收溶剂后再上硅胶(200-300目)色谱柱，用乙酸乙酯-甲醇系统以体积比10:1、5:1、2:1、1:1、1:2进行梯度洗脱，每份
1000ml，共收集洗脱液72份，将33-69份合并(12g)，减压回收溶剂后通过ODS填料(50μm)中压柱色谱进行分离，以5vol％甲醇-水、20vol％甲醇-水、40vol％甲醇-水、60vol％甲醇-水、80vol％甲醇-水、100vol％甲醇溶剂系统依次洗脱，每份60ml，共收集1600份，合并871-
960份(910mg)，减压回收溶剂，得到浓缩样品。

[0116] 其中871-960份通过半制备型反相高效液相色谱以30％乙腈-15％甲醇-55％水(vol)的溶剂系统进行分离纯化，得到化合物JS(264mg)和LS(44mg)。

[0117] 半制备反相高效液相色谱使用Waters SunFire OBD-C18柱(250mm×19mm i.d.,5μm)，流动相流速为4ml/min，检测波长为205nm。

[0118] 经核磁共振波谱测试确定化合物JS,LS的化学结构，它们的理化性质和波谱数据分别为：

[0119] 化合物JS：白色无定型粉末， HRESIMS:m/z911.4998[M-H]-(calculated for C47H75O17,911.5004)；1H和13C-NMR数据见表1；

[0120] 化合物LS：白色无定型粉末， HRESIMS:m/z911.4999[M-H]-(calculated for C47H75O17,911.5004)；1H和13C-NMR数据见表1；

[0121] 表1.化合物JS和LS的1H(500MHz)和13C-NMR(125MHz)数据(Pyridine-d5)[0122]

[0123]

[0124]

[0125] 实施例2

[0126] 抑制脂肪细胞分化活性试验

[0127] 将单体化合物JS及LS分别作用3T3-L1前脂肪细胞系分化模型，加入诱导剂后，经过6天的分化，通过油红染色，证明其对脂肪细胞分化的影响，在此基础上对其作用进行分子生物学机制研究，证明其抑制了C/EBPβ的磷酸化及提高了CHOP-10蛋白的表达，延迟其同染色体DNA的结合，这种作用导致了脂肪细胞不能正常分化。

[0128] 1.药物溶液的配制

[0129] (1)将单体化合物JS及其同分异构体LS分别用DMSO配制成100mM溶液，置于-4℃保存；

[0130] (2)胰岛素，地塞米松及糖皮质激素购自sigma，DMEM培养基及澳洲小牛血清及胎牛血清购自Gibco.

[0131] 2.细胞株：3T3-L1前脂肪细胞系购自美国ATCC.

[0132] 3.试验方法：

[0133] 按常规复苏细胞并且传代培养，使用DMEM+10％PCS+1％双抗(青霉素、链霉素)的完全培养基，接种细胞到6孔细胞培养板，每孔细胞悬液2ml，细胞数为1.5×105个；接触抑制48h后，加入0.5mmol/L 1-甲基-3异丁基-黄噪呤,1μM地塞米松和1ug/mL胰岛素及100μM化合物，每两天换一次液，6天后进行油红染色，观察抑制效果。在此基础上，选择效果最好的化合物并根据不同浓度化合物，采用基因蛋白及免疫荧光技术对其作用机制进行研究，结果如图1-8所示。

[0134] 图1通过油红染色，表明JS及同分异构体LS均具有抑制脂肪细胞分化的作用，其中JS效果更好一些。

[0135] 图2为对油红染色进行异丙醇置换定量后比较，也证明JS及同分异构体LS均具有抑制脂肪细胞分化的作用。

[0136] 图3为选取100uM JS对与脂肪细胞分化相关基因PPARγ、C/EBPα、aP2及adiponectin进行mRNA基因水平PCR定量分析，表明JS对起主要作用的PPARγ及C/EBPα具有明显的抑制作用。

[0137] 图4-6通过免疫荧光技术及蛋白印迹技术证明，JS是通过减少关键蛋白C/EBPβ磷酸化及提高抑制其与DNA的结合活性蛋白CHOP-10含量，抑制C/EBPβ活性，从而减少了它对PPARγ及C/EBPα的转录作用。

[0138] 图7结果表明，JS对WNT/β-catenin信号途径的影响中可以发现，JS是通过激活WNT/β-catenin信号通路抑制GSK3beta活性，从而达到了抑制C/EBPβ磷酸化并结合提高β-catenin高表达，共同作用抑制脂肪分化关键蛋白PPARγ及C/EBPα的表达，图8表明这种影响当β-catenin基因敲除后，PPARγ及C/EBPα的表达得到加强，油红染色证明药物作用减弱。

[0139] 实施例3

[0140] 食品

[0141] 按以下配方配制减肥食品

[0142] 燕麦片2-5重量份、山药1-5重量份、膳食纤维10-15重量份、薏米1-4重量份、肌醇2-5重量份、麦芽糖10-15重量份、化合物JS0.1％-0.5％重量份

[0143] 一日3餐，连续7-15天。

[0144] 实施例4

[0145] 药物组合物

[0146]

[0147] 将上述组分混合均匀，直接压片，即得片剂组合物，每次口服1片，一日2-3次。

[0148] 实施例5

[0149] 药物组合物

[0150]

[0151] 将上述组分混合物均匀填充成1000个胶囊，每次口服1粒，一日2-3次。

[0152] 在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。