新颖的抗真菌组合物

摘要

本发明涉及新颖的抗真菌组合物及其在处理农产品中的用途。

权利要求

1.组合物，其包含那他霉素和咯菌腈，其中那他霉素的量在20-1000ppm的范围内，咯菌腈的量在50-1000ppm的范围内，所述组合物还包含至少一种选自以下的额外的化合物：着色剂、除草剂、肥料、增稠剂、触变剂、其他抗微生物化合物、去污剂、喷洒油、流动添加剂、矿物质、分散剂、乳化剂、消泡剂、缓冲剂和UV吸收剂。

2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述乳化剂为表面活性剂。

3.组合物，其包含那他霉素和拌种咯，其中那他霉素的量在20-1000ppm的范围内，拌种咯的量在20-1000ppm的范围内。

4.根据权利要求3所述的组合物，其中所述组合物还包含至少一种选自以下的额外的化合物：载体、着色剂、保护性胶体、粘合剂、除草剂、肥料、增稠剂、螯合剂、触变剂、其他抗微生物化合物、去污剂、填充剂、喷洒油、流动添加剂、矿物质、分散剂、乳化剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV吸收剂和抗氧化剂。

5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述乳化剂为表面活性剂。

6.根据权利要求4所述的组合物，其中所述载体为溶剂。

7.试剂盒，其包含权利要求1-6中任一项所述的组合物。

8.通过用权利要求1-6中任一项所述的组合物处理产品来保护所述产品抵抗真菌的方法。

9.通过用根据权利要求7所述的试剂盒处理产品来保护所述产品抵抗真菌的方法。

10.根据权利要求8或9所述的方法，其中所述产品选自：食品、饲料产品、药物产品、化妆品和农产品。

11.根据权利要求10所述的方法，其中所述产品为农产品。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述产品在收获后被处理。

13.产品，其包含权利要求1-6中任一项所述的组合物。

14.根据权利要求13所述的产品，其中所述产品选自：食品、饲料产品、药物产品和化妆品。

15.权利要求1-6中任一项所述的组合物在保护产品抵抗真菌中的用途。

说明书

新颖的抗真菌组合物

技术领域

[0001] 本发明公开了用于控制植物疾病和预防农作物微生物腐败的新的抗微生物组合物。

背景技术

[0002] 据估计世界农作物产量的约25％由于微生物腐败而损失，其中真菌导致的腐败是迄今为止最重要的原因。从经济学观点以及人道主义观点来看，预防食品腐败均非常重要。毕竟，世界上许多地区的人在遭受饥饿。

[0003] 在对抗植物和农作物疾病以及减轻它们对产量和品质造成的损害方面的成功在很大程度上取决于抗真菌剂的及时应用。由于抗性现象的产生，许多抗真菌剂(例如苯并咪唑)的长期和频繁的使用促成了它们有效性的降低。

[0004] 在过去40年期间，已开发出新型抗真菌剂并已在市场上销售。这些类型中的一种是苯基吡咯类型。

[0005] 苯基吡咯抗真菌剂在开发和维持方面并非不面临挑战。一个大的关注点是抗性的产生。现在已在若干种疾病中观察到对苯基吡咯抗真菌剂的抗性(参见Iacomi-Vasilescuet等人,2004；Kanetiset等人,2006；Kinayet等人,2007)。

[0006] 几十年来，多烯大环内酯杀真菌剂(antimycotic)那他霉素(natamycin)已被用于预防食品如乳酪和香肠上的真菌生长。通过使用纳塔尔链霉菌(Streptomyces natalensis)发酵生成的此天然防腐剂在全世界被广泛用作食物防腐剂并且在食品工业中具有安全使用的悠久历史。其对所有已知的食物腐败真菌均非常有效。尽管那他霉素在例如乳酪业中被应用多年，但迄今为止从未观察到抗性真菌物种的产生。

[0007] 因此可得出结论：急需用于处理植物和农作物中和植物和作物上的真菌生长的更有效的抗微生物组合物，例如抗真菌组合物。

[0008] 发明描述

[0009] 本发明通过提供包含多烯抗真菌化合物和至少一种来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的新的协同抗微生物(例如抗真菌)组合物，解决了上述问题。在本文中使用时，术语“协同的”表示组合使用时抗真菌化合物的组合效果大于他们各自使用时的效果之和。

[0010] 通常，两种活性成分的协同活性可以例如使用处理交互作用层(treatment interaction stratum，见Slinker，1998)在方差分析模型中测试。相对有效性可以通过下式计算：((未经处理的对照的进化状态值–组合物的进化状态值)/(未经处理的对照的进化状态值))×100。然后可以通过下式计算交互作用系数：((化合物A+化合物B的组合的相对有效性)/(化合物A的相对有效性+化合物B的相对有效性))×100。大于100的交互作用系数表示化合物之间的协同作用。

[0011] 或者可以如下计算协同作用：可以通过计算与用对照组合物处理的产品上的霉菌生长相比，用活性成分处理的产品上观察到的霉菌生长的减少，来测定个体活性成分的抗真菌活性(以％计)。可以根据Colby方程(Colby，1967)计算包含两种活性成分的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性(E，以％计)：

[0012] E＝X+Y–[(X·Y)/100]，其中X和Y分别是个体活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性(以％计)。如果组合的观察到的抗真菌活性(O，以％计)超出组合的预期抗真菌活性(E，以％计)并且因而协同因子O/E>1.0，那么活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效应。

[0013] 在本发明的一个实施方案中，来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物选自咯菌腈(fludioxonil)和拌种咯(fenpiclonil)。

[0014] 在一个实施方案中，所述组合物还可含有来自苯基吡咯抗真菌剂家族的两种或更多种不同抗真菌化合物。应当理解，来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的衍生物(包括但不限于来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的盐或溶剂化物)或来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物的经修饰形式也可应用于本发明的组合物中。含有苯基吡咯抗真菌剂例如咯菌腈的商业产品的实例为具有商标名 和的产品。包含苯基吡咯抗真菌剂例如拌种咯的商业产品的实例为具有商标名
和 的产品。所述商业产品可并入本发明中。

[0015] 在一个实施方案中，多烯抗真菌化合物选自那他霉素、制霉菌素(nystatin)、两性霉素B、三烯菌素(trienin)、意北霉素(etruscomycin)、菲律宾菌素(filipin)、钦氏菌素(chainin)、制皮菌素(dermostatin)、lymphosarcin、杀念珠菌素(candicidin)、金色制霉素(aureofungin)A、金色制霉素B、哈霉素(hamycin)A、哈霉素B和鲁斯霉素(lucensomycin)。在一个优选的实施方案中，多烯抗真菌化合物为那他霉素。在一个实施方案中，所述组合物还可包含两种或更多种不同的多烯抗真菌化合物。应当理解，多烯抗真菌化合物的衍生物(包括但不限于多烯抗真菌化合物的盐或溶剂化物)或多烯抗真菌化合物的经修饰形式也可应用于本发明的组合物中。包含那他霉素的商业产品的实例为具有商标名 的产品。此类产品由DSM Food Specialties(荷兰)生产，并且可为包含例如
50％(w/w)那他霉素的固体或是包含例如2-50％(w/v)那他霉素的液体。所述商业产品可并入本发明的组合物中。

[0016] 本发明的组合物通常包含约0.005g/l至约100g/l和优选地约0.01g/l至约50g/l的多烯抗真菌化合物。优选地，所述量为0.01g/l至3g/l。

[0017] 本发明的组合物通常包含约0.0001g/l至约2000g/l和优选地约0.0005g/l至约1500g/l的来自苯基吡咯抗真菌剂家族的抗真菌化合物。更优选地，所述量为0.001g/l至
1000g/l。

[0018] 在一个实施方案中，本发明的组合物还包含至少一种选自以下的额外的化合物：粘着剂(sticking agent)、载体、着色剂、保护性胶体、粘合剂(adhesive)、除草剂、肥料、增稠剂、螯合剂、触变剂、表面活性剂、其他抗微生物化合物、去污剂、防腐剂、铺展剂、填充剂、喷洒油、流动添加剂、矿物质、溶剂、分散剂、乳化剂、润湿剂、稳定剂、消泡剂、缓冲剂、UV吸收剂和抗氧化剂。其他抗微生物抗真菌化合物可为抗真菌化合物(例如抑霉唑(imazalil)、噻苯哒唑(thiabendazole))或对抗昆虫、线虫、螨虫和/或细菌的化合物。当然，根据本发明的组合物还可包含两种或更多种任何上述额外的化合物。在分开应用抗真菌化合物的情况下，任何上述额外的化合物还可与多烯抗真菌化合物和/或来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物组合。在一个实施方案中，额外的化合物对于特定用途(例如食物、饲料、药物、化妆品或农业)可接受的添加剂。适合用于食物、饲料、药物、化妆品或农业的额外的化合物是本领域技术人员所已知的。

[0019] 在一个具体实施方案中，其他抗微生物化合物为属于亚磷酸类的天然农作物保护化合物，例如KH2PO3或K2HPO3或两种亚磷酸盐的混合物。如本文所用，含亚磷酸类化合物(phosphite containing compound)是指包含亚磷酸基团即PO3(呈例如H2PO3-,HPO32-或PO33-的形式)的化合物，或允许释放亚磷酸离子的任何化合物，包括化合物例如亚磷酸和膦酸及其衍生物例如其酯和/或碱金属盐或碱土金属盐。在本发明的组合物包含多烯抗真菌化合物(例如那他霉素)和至少一种含亚磷酸类化合物的情况下，对于每克多烯抗真菌化合物，它们优选地包含0.1g或更少的木质素磺酸盐，更优选0.1g或更少的多酚。优选地，对于每克多烯抗真菌化合物，它们包含0.01g或更少的木质素磺酸盐，更优选0.01g或更少的多酚。特别地，它们不含木质素磺酸盐以及优选地不含多酚。含亚磷酸类化合物的合适实例是亚磷酸及其(碱金属或碱土金属)盐，例如亚磷酸钾例如KH2PO3和K2HPO3、亚磷酸钠和亚磷酸铵，和亚磷酸的(C1-C4)烷基酯及其盐，例如乙基亚磷酸铝(三乙膦酸铝(fosetyl-Al))、乙基亚磷酸钙、异丙基亚磷酸镁、异丁基亚磷酸镁、仲丁基亚磷酸镁和正丁基亚磷酸铝。当然，含亚磷酸类化合物的混合物也包括在内。例如KH2PO3和K2HPO3的混合物可以通过例如向KH2PO3溶液中添加KOH或K2CO3至5.0-6.0的最终pH来容易地获得。如上所述，农作物或植物中被代谢成亚磷酸类化合物的前体-型化合物也可包含在本发明的组合物中。实例为膦酸盐/酯，例如三乙膦酸铝络合物。在例如农作物或植物中，该分子的膦酸乙酯部分被代谢成亚磷酸类。此类化合物的一个实例是被称为 (Bayer,德国)的商业膦酸氢乙酯(ethyl hydrogen phosphonate)产品。组合物中亚磷酸类与那他霉素的比率(以重量计)通常为2:1至500:1(w/w)之间,优选地3:1至300:1(w/w)之间，更优选地5:1至200:1(w/w)之间。

[0020] 根据本发明的组合物的pH可为1至10、优选2至9、更优选3至8、最优选4至7。它们可为固体例如粉末组合物或可为液体。本发明的组合物可为水性或非水性即用型组合物，但是也可为水性或非水性浓缩组合物/悬浮液，或在使用前必须用合适的稀释剂例如水或缓冲体系稀释的储备组合物、悬浮液和/或溶液。或者，本发明的组合物还可用于制备涂料乳剂。本发明的组合物还可具有浓缩干产品(例如粉末、颗粒和片剂)的形式。它们可用于制备用于对诸如农产品(包括植物、农作物、蔬菜和/或水果)的产品进行浸没或喷洒的组合物。当然，当多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物作为分开的组合物应用时，以上也适用。

[0021] 在另一个方面，本发明涉及试剂盒，其包含多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物。多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物可存在于两个独立的包装例如容器中。所述试剂盒的组分在包装中可为干燥形式或液体形式。如果需要，所述试剂盒可包含用于溶解所述化合物的说明书。此外，所述试剂盒可包含用于应用所述化合物的说明书。

[0022] 在另一方面，本发明涉及一种通过用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物处理产品来保护所述产品抵抗真菌的方法。此外，可在用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物处理产品之前、同时或之后，用其他抗真菌和/或抗微生物化合物处理产品。可通过顺次应用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物来处理产品，或反之亦然。或者，可通过同时应用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物的来处理产品。在同时应用的情况下，所述化合物可存在于同时应用的不同的组合物中，或所述化合物可存在于单一组合物中。在另一实施方案中，可通过以分开(separate)模式或交替(alternate)模式应用所述抗真菌化合物来处理产品。在一个实施方案中，本发明涉及通过对产品应用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物来处理产品的方法。通过应用化合物，可预防产品上或产品中的真菌生长。换句话讲，所述化合物保护产品免于真菌生长和/或真菌感染和/或真菌腐败。所述化合物还可用于处理已经感染真菌的产品。通过应用所述化合物，可减缓、停止由于这些产品上或产品中的真菌所导致的疾病发展，或产品甚至可从所述疾病中痊愈。在本发明的一个实施方案中，用根据本发明的组合物或试剂盒来处理产品。在一个实施方案中，所述产品为食物、饲料、药物、化妆品或农产品。在一个优选的实施方案中，所述产品为农产品。

[0023] 多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物、根据本发明的组合物和根据本发明的试剂盒可通过喷洒而应用至产品。适用于将液体形式的这些化合物、组合物和试剂盒应用至产品的其他方法也是本发明的一部分。这些方法包括但不限于浸蘸、浇水、浸透、引入倾倒池(dump  tank)、蒸发、雾化(atomizing)、成雾(fogging)、熏蒸、涂抹、刷涂、粉化(dusting)、起泡、铺展、包装和涂覆(例如使用蜡或静电)。此外，还可将抗真菌化合物注射到土壤中。已知使用自动系统的喷洒应用降低人力成本并且节约成本。为此目的，可使用本领域技术人员公知的方法和设备。当感染风险高时，根据本发明的组合物可定期喷洒。当感染风险较低时，喷洒间隔可更长。根据应用类型，所应用的多烯抗真菌化合物的量可从5ppm至10,000ppm、优选地从10ppm至5,000ppm，最优选地从20ppm至1,000ppm变化。根据应用类型，所应用的来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物的量可从10ppm至5,000ppm、优选地从20ppm至3,000ppm，最优选地从50ppm至1,000ppm变化。

[0024] 在一个具体实施方案中，可在收获后处理农产品。通过使用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物，在长时间段内实现对收获后和/或储存疾病的控制，从而允许经长距离和在温度与湿度方面具有不同受控气氛体系的多种储存条件下运输所收获的农产品。收获后储存病症为例如皮孔斑点、枯萎、衰老性分解、苦陷症、灼枯(scald)、水心病(water core)、褐化、维管分解、CO2损伤、CO2或O2不足和软化。真菌疾病可例如由以下真菌引起：Blumeria spp.，例如Blumeria graminis；Uncinula spp.，例如Uncinula necator；Leveillula spp.，例如Leveillula taurica；Podosphaera spp.，例如Podosphaera leucotricha，Podosphaera fusca，Podosphaera aphanis；Microsphaera spp.，例如Microsphaera syringae；Sawadaea spp.，例如Sawadaea  tulasnei；Mycosphaerella spp.，Mycosphaerella musae，Mycosphaerella fragariae，Mycosphaerella citri；Mucor spp.，例如Mucor piriformis；Monilinia spp.，例如Monilinia fructigena，Monilinia laxa；Phomopsis spp.，Phomopsis natalensis；
Colletotrichum spp.，例如Colletotrichum musae，Colletotrichum gloeosporioides，Colletotrichum coccodes；Verticillium spp.，例如Verticillium theobromae；
Nigrospora spp.；Botrytis spp.，例如Botrytis cinerea；Diplodia spp.，例如Diplodia citri；Pezicula spp.；Alternaria spp.，例如Alternaria citri,Alternaria alternata；Septoria spp.，例如Septoria depressa；Venturia spp.，例如Venturia inaequalis，Venturia pyrina；Rhizopus spp.，例如Rhizopus stolonifer，Rhizopus oryzae；Glomerella spp.，例如Glomerella cingulata；Sclerotinia spp.，例如Sclerotinia fruiticola；Ceratocystis spp.，例如Ceratocystis paradoxa；Fusarium spp.，例如Fusarium semitectum，Fusarium moniliforme，Fusarium solani，Fusarium oxysporum；Cladosporium spp.，例如Cladosporium  fulvum，Cladosporium cladosporioides，Cladosporium cucumerinum，Cladosporium musae；Penicillium spp.，例如Penicillium funiculosum，Penicillium expansum，Penicillium digitatum，Penicillium italicum；Phytophthora spp.，例如Phytophthora citrophthora，Phytophthora fragariae，Phytophthora cactorum，Phytophthora parasitica；
Phacydiopycnis spp.，例如Phacydiopycnis malirum；Gloeosporium spp.，例如Gloeosporium album，Gloeosporium perennans，Gloeosporium fructigenum，Gloeosporium singulata；Geotrichum spp.，例如Geotrichum candidum；Phlyctaena spp.，例如Phlyctaena vagabunda；Cylindrocarpon spp.，例如Cylindrocarpon mali；
Stemphyllium spp.，例如Stemphyllium vesicarium；Thielaviopsis spp.，例如Thielaviopsis paradoxy；Aspergillus spp.，例如Aspergillus niger，Aspergillus carbonarius；Nectria spp.，例如Nectria galligena；Cercospora spp.，例如Cercospora angreci，Cercospora apii，Cercospora atrofiliformis，Cercospora musae，Cercospora zeae-maydis。

[0025] 本发明的另一方面涉及多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物保护产品抵抗真菌的用途。如上文所述，所述化合物可顺次或同时使用(例如应用)。在一个实施方案中，本发明涉及一种用途，其中将根据本发明的组合物或试剂盒应用至产品。在一个实施方案中，产品为食物、饲料、药物、化妆品或农产品。在一个优选的实施方案中，产品为农产品。

[0026] 在一个具体实施方案中，多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物可用于药物以例如治疗和/或预防真菌疾病。多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物可例如以药物组合物的形式使用。所述组合物可还包含药学上可接受的赋形剂。所述抗真菌化合物可经口施用或肠胃外施用。所述组合物的类型取决于施用途径。

[0027] 本发明的另一方面涉及用多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物处理的产品。在一个实施方案中，用根据本发明的组合物或试剂盒来处理产品。本发明因此涉及包含多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物的产品。经处理的产品的表面上和/或产品内可包含多烯抗真菌化合物和来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物。或者，经处理的产品可包含含有这些化合物的涂层。在一个实施方案中，经处理的产品表面上包含0.000001至200mg/dm2，优2 2
选0.00001至100mg/dm ，更优选0.00005至10mg/dm的多烯抗真菌化合物。在另一个实施方案中，它们的表面上包含0.000001至200mg/dm2，优选0.00001至100mg/dm2，更优选0.00005至10mg/dm2的来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物。在一个实施方案中，产品为食物、饲料、药物、化妆品或农产品。在一个优选的实施方案中，产品为农产品。

[0028] 如本文所用，术语“食品”应当非常广义地理解，包括但不限于乳酪、奶油乳酪、碎乳酪、软干酪、经加工的乳酪、酸奶油、干燥的经发酵的肉制品，包括萨拉米香肠和其他香肠、酒、啤酒、酸乳、果汁和其他饮料、沙拉酱、软干酪酱、蘸料、烘焙制品和烘焙填料、表面釉和糖霜、涂抹酱、披萨饼馅料、糕饼和糕饼填料、橄榄、橄榄卤水(olive brine)、橄榄油、果汁、番茄泥和番茄糊、佐料(condiment)、水果浆以及类似食品。

[0029] 如本文所用，术语“饲料产品”也应当非常广义地理解，包括但不限于宠物食物、肉鸡饲料等。

[0030] 如本文所用，术语“药物产品”也应当非常广义地理解，包括包含活性分子例如药物、药剂或药物化合物和任选地药学上可接受的赋形剂的产品，所述赋形剂即与活性分子组合用于制备合适或便利的剂型的任何惰性物质。

[0031] 如本文所用，术语“化妆品”也应当非常广义地理解，包括下述产品，所述产品用于通过防止水分的蒸腾来保护或治疗角质组织如皮肤和唇、头发和指甲的干燥，而且护理组织以及赋予这些组织以良好的外观。术语“化妆产品”涵盖的产品包括但不限于保湿剂、个人清洁产品、闭合的药物递送贴片、指甲油、粉、擦拭物、护发剂、皮肤护理乳、剃须膏等。

[0032] 如本文所用，术语“农产品”也应当非常广义地理解，包括但不限于谷物，例如小麦、大麦、裸麦、燕麦、水稻、高粱等等；甜菜，例如糖用甜菜(sugar beet)和饲料甜菜(fodder beet)；梨果和核果和浆果，例如苹果、梨、李子、杏、桃、杏仁、樱桃、草莓、覆盆子和黑莓；豆科植物，例如豆子、扁豆、豌豆、大豆；油料植物，例如油菜、芥末、罂粟、橄榄、向日葵、椰子、蓖麻植物、可可、花生；葫芦科，例如南瓜、小黄瓜(gherkins)、甜瓜、黄瓜、倭瓜、茄子；纤维植物，例如棉花、亚麻、大麻、黄麻；柑橘水果，例如橙、柠檬、葡萄柚、蜜桔、枸橼；热带水果，例如木瓜、百香果、芒果、杨桃、菠萝、香蕉、奇异果；蔬菜，例如菠菜、莴苣、芦笋、十字花科如卷心菜和芜菁、胡萝卜、洋葱、番茄、马铃薯、马铃薯种子(seed-potatoes)、尖辣椒(hot pepper)和甜椒；月桂样植物，例如酪梨、肉桂、樟脑树；或产品如玉米、烟草、坚果、咖啡、甘蔗、茶、葡萄藤、酒花、橡胶植物、以及观赏植物例如切花、玫瑰、郁金香、百合、水仙花、藏红花、风信子、大丽花、大丁草、康乃馨、倒挂金钟(fuchsias)、菊花和球根花卉(flower bulbs)、灌木、落叶树和常绿树例如松柏植物、温室植物和树木。其包括但不限于植物及其部分、果实、种子、插条(cuttings)、栽培种、移植物、鳞茎、块茎、根-块茎、根茎、切花和蔬菜。

[0033] 用于制备本文所述的组合物的方法是本发明的另一个方面。所述方法包括向来自苯基吡咯抗真菌剂家族的至少一种抗真菌化合物添加多烯抗真菌化合物。所述化合物可例如被单独地添加至水性组合物并混合，随后如需要则调节pH值、粘度等。如果单独添加，则单独化合物中的一些或全部可为粉末形式，但或者，一些或全部也可为液体形式。所述化合物也可例如以粉末形式添加至彼此并混合以获得粉末状组合物。所述粉末状组合物可随后添加至水性组合物。实施例

[0034] 实施例1

[0035] 香蕉的处理

[0036] 每次处理使用四个有机的、未成熟的(绿色)香蕉。根据de Lapeyre de Bellaire和Dubois(1987)所述方法,使用木塞钻孔器对每个香蕉的皮造成三次创伤。随后，用15μl包含1×105个孢子/毫升的Fusarium proliferatum悬浮液对每个创口进行接种。在20℃下孵育4小时后，用100μl新鲜制备的包含那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物处理每个香蕉创口。此外，测试单独的或与那他霉素组合的苯基吡咯抗真菌剂拌种咯。所述抗真菌组合物包含1.00％(w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、0.40％(w/w)黄原胶、0.20％(w/w)消泡剂、0.30％(w/w)柠檬酸、0.39％(w/w)乳酸和0.11％(w/w)山梨酸钾。所述组合物的pH为4.0。将不含那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合物用作对照。将经处理的、未成熟的香蕉在密闭箱中于黑暗中、20℃下和95％的相对空气湿度中孵育，所述条件在饱和Na2HPO4水溶液的存在下获得。在前20天的孵育期间，密闭箱中包含成熟的(黄色)香蕉以提高乙烯气体水平，从而诱导经处理的、未成熟的香蕉成熟。

[0037] 在孵育期间，香蕉上的霉菌生长程度以下列两重方式进行评价：(i)计数每总共12个创口中长有霉菌的创口数；和(ii)通过计算与用对照组合物处理的香蕉创口上的霉菌生长相比，用所述抗真菌组合物处理的香蕉创口上观察到的霉菌生长的减少来测定各个活性成分的抗真菌活性(以％计)。根据Colby公式(Colby,1967)来计算包含两种活性成分的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性(E，以％计)：

[0038] E＝X+Y–[(X·Y)/100]

[0039] 其中X和Y分别是各个活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性(以％计)。如果对组合的观察到的抗真菌活性(O，以％计)超出组合的预期抗真菌活性(E，以％计)并从而使协同作用因子O/E>1.0，则活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效果。

[0040] 结果清楚地证实，与单独的那他霉素或苯基吡咯抗真菌剂相比，包含那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂两者的抗真菌组合物保护香蕉更好地对抗霉菌生长。

[0041] 因此，那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合在香蕉上具有协同抗真菌活性。

[0042] 实施例2

[0043] 草莓的处理

[0044] 每次处理使用十二个新鲜的、有机草莓。用0.5mm长的切口对每个草莓造成创伤，用10μl包含1×105个孢子/毫升的Botrytis cinerea悬浮液对每个创口进行接种。在20℃下孵育2小时后，在新鲜制备的包含那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物中将每个草莓各自浸渍1分钟。此外，测试单独的或与那他霉素组合的苯基吡咯抗真菌剂拌种咯。所述抗真菌组合物也包含1.00％(w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、0.40％(w/w)黄原胶、0.20％(w/w)消泡剂、0.30％(w/w)柠檬酸、0.39％(w/w)乳酸和0.11％(w/w)山梨酸钾。所述组合物的pH为4.0。将不含那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合物用作对照。将经处理的草莓在密闭箱中于黑暗中和20℃下孵育。

[0045] 在孵育后，草莓上的霉菌生长以下列两重方式进行评价：(i)计数每总计12个草莓中长有霉菌的草莓数；和(ii)根据实施例1中描述的Colby方法(Colby,1967)计算与用对照组合物处理的草莓上的霉菌生长相比，用所述抗真菌组合物处理的草莓上观察到的霉菌生长的减少来测定单独的和组合的活性成分的抗真菌活性(以％计)。

[0046] 结果证实，与单独的那他霉素或苯基吡咯抗真菌剂相比，包含那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的抗真菌组合物在草莓上具有更强的抗真菌活性。

[0047] 因此，那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合应用协同地减少草莓上的霉菌生长。

[0048] 实施例3

[0049] 蜜桔(mandarins)的处理

[0050] 每次处理使用十个新鲜的、有机蜜桔。根据de Lapeyre de Bellaire和Dubois(1987)所述方法，使用木塞钻孔器对每个蜜桔的皮造成一次创伤。随后，用10μl包含1×104个孢子/毫升的Penicillium italicum悬浮液对每个创口进行接种。在20℃下孵育2小时后，在新鲜制备的包含那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物中将蜜桔各自浸渍1分钟。此外，测试单独的或与那他霉素组合的苯基吡咯抗真菌剂拌种咯。此外，所述抗真菌组合物包含3.1％(w/w)蜂蜡、0.76％(w/w)甘油、0.66％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(Tween 60)、0.03％(w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、0.02％(w/w)黄原胶、0.02％(w/w)消泡剂、0.15％(w/w)柠檬酸和0.01％(w/w)山梨酸钾。所述组合物的pH为4.0。将不含那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合物用作对照。

[0051] 将经处理的蜜桔在封闭箱中于黑暗中、20℃下孵育，并在孵育25、28、31和34天后评价霉菌生长。根据实施例1和2中所述的Colby方法(Colby，1967)，通过计算与用对照组合物处理的蜜桔上的霉菌生长相比，用所述抗真菌组合物处理的蜜桔上观察到的霉菌生长的减少来测定单独的和组合的活性成分的抗真菌活性(以％计)。

[0052] 结果证明，在预防蜜桔上的霉菌生长方面，包含那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的抗真菌组合物优于包含单独的那他霉素或苯基吡咯抗真菌剂的组合物。

[0053] 因此，那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合应用协同地减少蜜桔上的霉菌生长。

[0054] 实施例4

[0055] 体外抗真菌活性

[0056] 为了证实那他霉素与苯基吡咯抗真菌剂的组合对抗Botrytis cinerea的协同抗真菌活性，使用96孔微量滴定板进行体外测定。测试以下组合物：

[0057] -对照(无活性成分)；

[0058] -那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)；

[0059] -苯基吡咯抗真菌剂；

[0060] -那他霉素+苯基吡咯抗真菌剂。

[0061] 用92μl PCB培养基填充微量滴定板的每个孔后，从PCB培养基或甲醇中制备的单独储备溶液中添加活性成分，这导致每孔100μl的中间体积。随后，使用PCB培养基中制备的100μl Botrytis cinerea悬浮液以2.5×103个孢子/毫升接种每个孔。因此，每个孔包含
200μl的最终体积和<1％的甲醇，这不影响Botrytis cinerea的生长(数据未示出)。

[0062] 将微量滴定板在25℃下孵育后，通过计算与不存在活性成分时观察到的霉菌生长相比，存在活性成分时观察到的霉菌生长的减少来评价各个活性成分的体外抗真菌活性(以％计)。根据Colby公式(Colby,1967)来计算活性成分组合的预期抗真菌活性(E，以％计)：

[0063] E＝X+Y–[(X·Y)/100]

[0064] 其中X和Y分别是各个活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性(以％计)。如果对组合观察到的抗真菌活性(O，以％计)超出组合的预期抗真菌活性(E，以％计)并从而使所得协同作用因子O/E>1.0，则活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效果。

[0065] 结果证实，与单独的那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂相比，那他霉素+苯基吡咯抗真菌剂组合具有更强的对抗Botrytis cinerea的抗真菌活性。

[0066] 因此，那他霉素和苯基吡咯抗真菌剂的组合应用协同地抑制Botrytis cinerea的生长。

[0067] 实施例5

[0068] 草莓的处理

[0069] 每次处理使用十二个新鲜的、有机草莓。用0.5mm长的切口对每个草莓造成创伤，5
用10μl包含1×10个孢子/毫升的Botrytis cinerea悬浮液对每个创口进行接种。在20℃下孵育3小时后，在新鲜制备的包含500ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、500ppm咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物中将每个草莓各自浸渍1分钟。每种抗真菌组合物还包含3.2％(w/w)蜂蜡、0.8％(w/w)甘油、0.7％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(Tween 60)、0.1％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween 80)、0.05％(w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、0.03％(w/w)消泡剂、0.02％(w/w)黄原胶、0.02％(w/w)柠檬酸、
0.01％(w/w)乳酸和0.01％山梨酸钾。将不含那他霉素和咯菌腈的组合物用作对照。每种组合物的pH为4。将经处理的草莓在密闭箱中于黑暗中在20℃下孵育19天。

[0070] 在孵育期间，草莓上的霉菌生长以下列两重方式进行评价：(i)计数每总计12个草莓中长有霉菌的草莓数；和(ii)通过计算与用对照组合物处理的草莓上的霉菌生长相比，用所述抗真菌组合物处理的草莓上观察到的霉菌生长的减少来测定单独的和组合的活性成分的抗真菌活性(以％计)。根据Colby公式(Colby,1967)来计算包含两种活性成分的组合抗真菌组合物的预期抗真菌活性(E，以％计)：

[0071] E＝X+Y–[(X·Y)/100]

[0072] 其中X和Y分别是各个活性成分X和Y的观察到的抗真菌活性(以％计)。如果对组合观察到的抗真菌活性(O，以％计)超出组合的预期抗真菌活性(E，以％计)并从而使协同作用因子O/E>1.0，则活性成分的组合应用导致协同的抗真菌效果。

[0073] 表1(每总共12个草莓中长有霉菌的草莓数)和表2(抗真菌活性)中的结果清楚证实，与包含单独的那他霉素或咯菌腈的组合物相比，包含500ppm那他霉素和500ppm咯菌腈的组合抗真菌组合物更有效地保护草莓对抗霉菌生长。

[0074] 在孵育7天、8天、9天、10天、和11天后，用对照组合物或单独那他霉素处理的所有12个草莓均长有霉菌，用单独咯菌腈处理的12个草莓中的3个、5个、8个、9个和9个分别同样如此。然而，用那他霉素和咯菌腈的活性成分组合处理的12个草莓中没有一个在该11天的孵育阶段长有霉菌(参见表1)。

[0075] 在第12天和第13天，用对照组合物或单独那他霉素处理的所有12个草莓均长有霉菌，用单独咯菌腈处理的12个草莓中的9个和11个分别同样如此。然而，在用那他霉素和咯菌腈二者处理的12个草莓中，在第12天仅有1个显示出霉菌生长，在第13天仅有2个显示出霉菌生长(参见表1)。

[0076] 在孵育14-17天后，用对照组合物、单独那他霉素或单独咯菌腈处理的所有12个草莓均长有霉菌。然而，在用那他霉素和咯菌腈二者处理的12个草莓中，多达8个、6个、3个、和3个分别在第14、15、16和17天仍无霉菌生长(参见表1)。

[0077] 此外，在7至19天的孵育期间所观察到的抗真菌活性超出预期抗真菌活性大约9至＞60％。因此，协同作用因子总是＞1.0并从第7天的1.1增加至第18和19天的甚至12(参见表2)。

[0078] 因此，500ppm那他霉素和500ppm咯菌腈的组合应用导致草莓上的霉菌生长出乎意料强地协同减少。

[0079] 实施例6

[0080] 草莓的处理

[0081] 如实施例5中所述进行实验，不同之处在于以下事实：在新鲜制备的包含250ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、250ppm咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物中将每个有创口并且经接种的草莓各自浸渍1分钟。在孵育期间，根据实施例5中所述的两种方法来评价经处理草莓的霉菌生长。

[0082] 表3(每总计12个草莓中长有霉菌的草莓数)和表4(抗真菌活性)中的结果清楚证实：与单独的那他霉素或咯菌腈相比，包含250ppm那他霉素和250ppm咯菌腈的抗真菌组合物在草莓上具有强得多的抗真菌效果。

[0083] 在孵育6-9天后，用对照组合物处理的所有12个草莓均长有霉菌，用单独那他霉素处理的12个草莓中的11个同样如此。此外，用单独咯菌腈处理的12个草莓中，5个在第6-8天显示出霉菌生长，8个在第9天显示出霉菌生长。然而，用那他霉素和咯菌腈的活性成分组合处理的12个草莓中没有一个在该9天的孵育阶段中长有霉菌(参见表3)。

[0084] 在第10天和第11天，用对照组合物或单独那他霉素处理的所有12个草莓均长有霉菌，用单独咯菌腈处理的12个草莓中的9个和10个分别同样如此。然而，在用那他霉素和咯菌腈二者处理的12个草莓中，没有1个在第10天展示出霉菌生长，仅有1个在第11天展示出霉菌生长(参见表3)。

[0085] 在孵育12-15天后，用对照组合物、单独那他霉素或单独咯菌腈处理的所有12个草莓均长有霉菌。然而，在用那他霉素和咯菌腈二者处理的12个草莓中，多达8个、5个、4个、和2个分别在第12、13、14和15天仍然没有霉菌(参见表3)。

[0086] 此外，在6至19天的孵育期间所观察到的抗真菌活性高于预期抗真菌活性大约8至60％。因此，协同作用因子总是超过1.0并从第6天的1.1增加至第18和19天的甚至＞20(参见表4)。

[0087] 因此，250ppm那他霉素和250ppm咯菌腈的组合应用在草莓上有极强的协同抗真菌效果。

[0088] 实施例7

[0089] 橙的处理

[0090] 每次处理使用八个新鲜的、有机橙。将每个橙在180ppm次氯酸盐溶液中浸泡10分钟，然后用新鲜的自来水充分冲洗并干燥。根据de Lapeyre de Bellaire和Dubois(1987)所述方法，使用木塞钻孔器对每个经消毒的橙的皮造成一次创伤。随后，用10μl包含5×105个孢子/毫升的Penicillium italicum悬浮液对每个创口进行接种。在20℃下孵育3小时后，用总共150μl新鲜制备的包含500ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、300ppm咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物处理每个创口和创口周围1cm的橙皮区域。每种抗真菌组合物还包含3.2％(w/w)蜂蜡、0.8％(w/w)甘油、0.7％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(Tween 60)、0.1％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween 80)、0.05％(w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、0.03％(w/w)消泡剂、0.02％(w/w)黄原胶、0.02％(w/w)柠檬酸、0.01％(w/w)乳酸和0.01％山梨酸钾。将不含那他霉素和咯菌腈的组合物用作对照。每种组合物的pH为4。

[0091] 将经处理的橙在封闭箱中于黑暗中、20℃下孵育，并在27天的孵育期间评价霉菌生长。根据实施例5中所述的两种方法来测定单独的和组合的活性成分的抗真菌活性(以％计)。

[0092] 表5(每总计8个橙中长有霉菌的橙数)和表6(抗真菌活性)中的结果清楚显示：与单独的那他霉素或咯菌腈相比，500ppm那他霉素和300ppm咯菌腈的活性成分组合更成功地限制橙上的霉菌生长。

[0093] 在孵育18至27天之后，用对照组合物处理的所有8个橙均长有霉菌，用单独那他霉素处理的8个橙中的6个以及用单独咯菌腈处理的8个橙中的7个同样如此。然而，用那他霉素和咯菌腈的活性成分组合处理的8个橙中仅4个在第18至27天之间长有霉菌(参见表5)。

[0094] 此外，在第18至27天之间，包含那他霉素和咯菌腈的组合物的观察到的抗真菌活性比预期抗真菌活性高7大约20％。因此，相应的协同作用因子均超过＞1.0并从第18天的1.2甚至增加至第21-27天的1.7(参见表6)。

[0095] 总之，该实施例的结果证实：当组合应用于橙上时，500ppm那他霉素和300ppm咯菌腈有强协同抗真菌效果。

[0096] 实施例8

[0097] 橙的处理

[0098] 如实施例7中所述进行实验，不同之处在于以下事实：用150μl新鲜制备的包含250ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、100ppm咯菌腈或两者的水性抗真菌组合物来处理每个有创口并且经接种的橙。在孵育期间，根据实施例5中所述的两种方法来评价经处理的橙的霉菌生长。

[0099] 表7(每总计8个橙中长有霉菌的橙数)和表8(抗真菌活性)中的结果显示，与单独的那他霉素或咯菌腈相比，250ppm那他霉素和100ppm咯菌腈的活性成分组合在橙上具有较高的抗真菌活性。

[0100] 在孵育14至27天之后，用对照组合物或咯菌腈处理的所有8个橙均显示出霉菌生长，用单独的那他霉素处理的8个橙中的6个或7个同样如此。然而，用那他霉素和咯菌腈的活性成分组合处理的8个橙中仅有4个或5个在第14-27天之间长有霉菌(参见表7)。

[0101] 此外，在孵育19至27天之后，那他霉素和咯菌腈的活性成分组合的观察到的抗真菌活性比预期抗真菌活性高8至约30％。因此，协同作用因子在第19天的1.2至第26和27天的2.8之间(参见表8)。

[0102] 因此，250ppm那他霉素和100ppm咯菌腈的组合应用导致橙上的霉菌生长强烈协同减少。

[0103] 实施例9

[0104] 橙的处理

[0105] 如实施例7中所述进行实验，不同之处在于以下事实：用150μl新鲜制备的包含500ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、400ppm拌种咯或两者的水性抗真菌组合物来处理每个有创口并且经接种的橙。在23天的孵育期间，根据实施例5中所述的两种方法来评价经处理的橙的霉菌生长。

[0106] 表9(每总计8个橙中长有霉菌的橙数)和表7(抗真菌活性)中的结果清楚显示：与单独的那他霉素或拌种咯相比，500ppm那他霉素和400ppm拌种咯的活性成分组合更成功地限制橙上的霉菌生长。

[0107] 在孵育14天和15天后，用对照组合物处理的所有8个橙、用单独的那他霉素处理的8个橙中的5个以及用单独的拌种咯处理的8个橙中的6个显示出霉菌生长。然而，用那他霉素和拌种咯的活性成分组合处理的8个橙中仅有2个在第14天和15天长有霉菌(参见表9)。

[0108] 在第16、18和19-23天，用对照组合物或单独的拌种咯处理的所有8个橙均长有霉菌，此外，用单独的那他霉素处理的8个橙中的5或6个长有霉菌。然而，在用那他霉素和拌种咯的活性成分组分处理的8个橙中，在第16、18和19-23天分别仅2、3和4个橙展示出霉菌生长(参见表9)。

[0109] 此外，在12至23天的孵育期间，包含那他霉素和拌种咯的组合物的观察到的抗真菌活性比预期抗真菌活性高8-40％。因此，相应的协同作用因子均＞1.0并从第12天的1.1增加至第22和23天的3.6(参见表10)。

[0110] 总之，该实施例的结果清楚证实了500ppm那他霉素和400ppm拌种咯在组合应用于橙上时的协同抗真菌效果。

[0111] 实施例10

[0112] 甜椒的处理

[0113] 每次处理使用十个新鲜的、有机的甜椒。根据de Lapeyre de Bellaire和Dubois(1987)所述方法，使用木塞钻孔器对每个甜椒的皮造成一次创伤。随后，用10μl包含1×105个孢子/毫升的Botrytis cinerea悬浮液对每个创口进行接种。在20℃下孵育3小时后，用总共75μl新鲜制备的包含400ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)、600ppm拌种咯或两者的水性抗真菌组合物处理每个创口和创口周围0.5cm的表皮区域。每种抗真菌组合物还包含3.2％(w/w)蜂蜡、0.8％(w/w)甘油、0.7％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单硬脂酸酯(Tween 60)、0.2％(w/w)聚氧乙烯脱水山梨醇单油酸酯(Tween 80)、0.05％(w/w)甲基羟乙基纤维素(MHEC)、0.03％(w/w)消泡剂、0.02％(w/w)黄原胶、0.02％(w/w)柠檬酸、0.01％(w/w)乳酸和0.01％山梨酸钾。将不含那他霉素和拌种咯的组合物用作对照。每种组合物的pH为4。

[0114] 将经处理的甜椒在封闭箱中于黑暗中、20℃下孵育，并在孵育期间评价霉菌生长。根据实施例5中所述的Colby方法(Colby，1967)，通过计算与用对照组合物处理的甜椒上的霉菌生长相比，用所述抗真菌组合物处理的甜椒上观察到的霉菌生长的减少来测定单独的和组合的活性成分的抗真菌活性(以％计)。

[0115] 表11中的结果显示：与包含那他霉素或拌种咯的组合物相比，包含400ppm那他霉素和600ppm拌种咯的组合抗真菌组合物更有效地保护甜椒对抗霉菌生长。

[0116] 在孵育47-50天之后，那他霉素和拌种咯的活性成分组合的观察到的抗真菌活性超出预期抗真菌活性大约30-45％，这导致协同作用因子在4.0和14.0之间(参见表11)。

[0117] 因此，该实施例证明了在甜椒上组合应用400ppm那他霉素和600ppm拌种咯的协同抗真菌效果。

[0118] 实施例11

[0119] 凤梨的处理

[0120] 在该实验中，从位于Costa Rica的包装厂选择凤梨。基于颜色和大小的均匀性选择这些凤梨。此外，它们没有可见的霉菌生长或由瘟疫或疾病引起的任何其它可见伤害。

[0121] 首先通过将凤梨浸在包含150ppm次氯酸钠的溶液中持续1分钟来使其表面消毒。接着，干燥水果，之后使用改良喷壶将抗微生物组合物应用在水果上。为了模拟凤梨包装厂中使用的蜡瀑布(wax cascade)，这种喷洒用蜡薄膜覆盖水果外皮。凤梨的冠部未被处理。
将如下抗微生物组合物应用在水果上：

[0122] 组合物A：包含20％体积/体积蜡(STA FRESH 2952)的水性组合物；

[0123] 组合物B：包含200ppm那他霉素(DSM Food Specialties,Delft,荷兰)和20％体积/体积蜡(STA FRESH 2952)的水性组合物；

[0124] 组合物C：包含250ppm咯菌腈和20％体积/体积蜡(STA FRESH 2952)的水性组合物；

[0125] 组合物D：包含200ppm那他霉素、250ppm咯菌腈20％体积/体积蜡(STA FRESH 2952)的水性组合物；

[0126] 40倍地进行实验(每种组合物5个盒子，每个盒子包含8个凤梨)。所有组合物的pH均为7.2。此外，以每个水果1ml的比率将各组合物喷涂在每个经处理水果的花梗(伤口)上。应用组合物之后，干燥凤梨。

[0127] 为了模拟凤梨在船运集装箱中的运输，将其贮存在温度为7.5℃的冷却室中21天。21天之后，将温度升高至18-20℃以模拟在超市中的保质期。将凤梨在18-20℃下贮存另外7天。因此，总贮存时间为28天。

[0128] 28天之后，使用如下方法评价凤梨外皮上的霉菌发生。对于所有组合物，计算每总计40个凤梨中外皮上具有可见霉菌发生的凤梨数。随后，通过计算与组合物A相比，在凤梨外皮上观察到的霉菌发生的减少来测定单独和组合活性成分(组合物B、C和D)的抗真菌活性(以％计)。根据实施例5中所述的Colby方法(Colby,1967)将组合物D的观察到的抗真菌活性与组合物D的预期抗真菌活性相比。

[0129] 结果(参见表12)证明：与单独的那他霉素或咯菌腈相比，包含200ppm那他霉素和250ppm咯菌腈的抗真菌组合物在凤梨上有更强的抗真菌活性。

[0130] 因此，那他霉素和咯菌腈的组合应用协同地减少凤梨上的霉菌生长。

[0131] 表1.在用包含500ppm那他霉素、500ppm咯菌腈或两者的组合物处理后，在20℃下孵育的长有霉菌的草莓的数量。

[0132]

[0133]

[0134] 表2.在20℃下孵育后，包含500ppm那他霉素、500ppm咯菌腈或两者的组合物在草莓上的抗真菌活性(％)。

[0135]

[0136]

[0137]

[0138]

[0139] 表3.在用包含250ppm那他霉素、250ppm咯菌腈或两者的组合物处理后，在20℃下孵育的长有霉菌的草莓的数量。

[0140]

[0141]

[0142] 表4.在20℃下孵育后，包含250ppm那他霉素、250ppm咯菌腈或两者的组合物在草莓上的抗真菌活性(％)。

[0143]

[0144]

[0145]

[0146] 表5.在用包含500ppm那他霉素、300ppm咯菌腈或两者的组合物处理后，在20℃下孵育的长有霉菌的橙的数量。

[0147]

[0148] 表6.在20℃下孵育后，包含500ppm那他霉素、300ppm咯菌腈或两者的组合物在橙上的抗真菌活性(％)。

[0149]

[0150]

[0151] 表7.在用包含250ppm那他霉素、100ppm咯菌腈或两者的组合物处理后，在20℃下孵育的长有霉菌的橙的数量。

[0152]

[0153] 表8.在20℃下孵育后，包含250ppm那他霉素、100ppm咯菌腈或两者的组合物在橙上的抗真菌活性(％)。

[0154]

[0155]

[0156] 表9.在用包含500ppm那他霉素、400ppm拌种咯或两者的组合物处理后，在20℃下孵育的长有霉菌的橙的数量。

[0157]

[0158] 表10.在20℃下孵育后，包含500ppm那他霉素、400ppm拌种咯或两者的组合物在橙上的抗真菌活性(％)。

[0159]

[0160]

[0161]

[0162] 表11.在20℃下孵育后，包含400ppm那他霉素、600ppm拌种咯或两者的组合物在甜椒上的抗真菌活性(％)。

[0163]

[0164]

[0165] 表12.在贮存28天(在7.5℃下的21天和随后在18-20℃下的7天)后，包含200ppm那他霉素、250ppm咯菌腈或两者的组合物在凤梨上的抗真菌活性(％)。

[0166]

[0167] 参考文献

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