一种离体肝脏灌注保存液

摘要

本发明涉及器官移植技术领域，具体公开了一种离体肝脏的灌注保存液，包括按照比例混合而成的供体全血、白蛋白、抗生素、胰岛素，肝素，复方氨基酸，葡萄糖、地塞米松、氯化钠、碳酸氢钠、生理盐水、ATP‑MgCl2、S‑腺苷蛋氨；离体肝脏在该灌注保存液中保存50小时，其肝细胞损害少，没有并发症，可以满足器官移植的需求，延长移植物的存活时间，提高移植物在宿主内的存活率，本发明所述灌注保存液生产成本低，具有实际的应用价值。

权利要求

1.一种离体肝脏灌注保存液，其特征在于，每820mL保存液中含有以下各组分：供体全血            500～520mL；

抗生素              0.8～1.5g；

20%白蛋白           25～35mL；

胰岛素              400～420u；

肝素                25000～28000u；

10%复方氨基酸       25～30mL；

葡萄糖              10～18g；

地塞米松            4～10mg；

10%氯化钠           2～5mL；

5%碳酸氢钠          25～30mL；

生理盐水            80～100mL；

ATP-MgCl2                 60～65g；

S-腺苷蛋氨          1～3g；

前列地尔            10～16ug；

10%葡萄糖酸钙       6～10mL余量为去离子水。

2.根据权利要求1所述的肝脏灌注保存液，其特征在于，所述的抗生素选自甲硝唑、头孢唑林中的一种或两种。

3.权利要求1至2任一项所述肝脏灌注保存液在制备器官移植保存制剂中的应用。

说明书

一种离体肝脏灌注保存液

技术领域

[0001] 本发明涉及器官移植技术领域，更具体地，涉及一种离体器官灌注保存液。

背景技术

[0002] 器官移植是一些疾病的最终治疗手段，通过器官移植，一些患者的生命得以延续。器官移植中一个非常关键的步骤是离体器官的保存，这在很大程度上决定了器官移植的成败，一般从其他供体上切取的器官不可能马上就移植到患者体内，必然有一个储存转运的过程，而在常温下，离体器官的细胞仍进行缺氧代谢，引起细胞内酸中毒、线粒体产能障碍、细胞内钙超载、细胞肿胀、大量自由基生成，最终导致离体器官发生不可逆转的病变或死亡，因此，需要对获得的离体器官进行适当的灌注保存。

[0003] 临床上公认的离体器官的保存液有UW液，其主要缺点是其抗氧化作用弱，因UW液中含有含羟乙基淀粉，从而粘滞性过高、对离体器官和肺保存效果不好；申请号为200610124269.3的中国专利公开了一种新型多器官储存保护液，该保护液应用了褪黑素、维生素C和水溶性维生素E组成的抗氧化系统，旨在降低器官储存过程中自由基导致的氧化损伤；申请号为200810036928.X的中国专利公开了一种离体肝脏灌注保存液，其更有效的应用于离体肝脏的0～4℃保存，可防止低温导致的缺血性损伤、细胞水肿及继发性损伤。

[0004] 另外，在肝脏移植中还有很多移植机会由于保存时间限制而失去，即使移植手术很成功，却因为保存过程对肝组织的损伤导致肝脏质量下降和免疫排斥造成移植失败，为了提高肝脏移植手术的成功率，有必要研制一种针对于离体肝脏的灌注保存液。

发明内容

[0005] 本发明所要解决的问题是克服现有技术所存在的缺陷，提供一种离体器官灌注保存液。

[0006] 本发明所述目的是通过以下技术方案予以实现的：

[0007] 一种离体肝脏灌注保存液，每820mL保存液中含有以下各组分：

[0008] 供体全血            500～600mL；

[0009] 抗生素              0.8～2g；

[0010] 20%白蛋白           20～50mL；

[0011] 胰岛素              300～500u；

[0012] 肝素                20000～30000u；

[0013] 10%复方氨基酸       20～40mL；

[0014] 葡萄糖              10～20g；

[0015] 地塞米松            2～10mg；

[0016] 10%氯化钠           2～5mL；

[0017] 5%碳酸氢钠          20～30mL；

[0018] 生理盐水            80～120mL；

[0019] ATP-MgCl2                 50～65g；

[0020] S-腺苷蛋氨          1～3g；

[0021] 前列地尔            10～20ug；

[0022] 余量为去离子水，所述的复方氨基酸为复方氨基酸注射液18aa。

[0023] 在进行器官移植时，需要对从供体切下的器官进行暂时的灌注和保存，现有技术中也有器官灌注保存液，但其所公开的灌注保存液仅能从一个方面解决问题，例如，申请号为200610124269.3的中国专利公开了一种新型多器官储存保护液，该保护液应用了褪黑素、维生素C和水溶性维生素E组成的抗氧化系统，旨在降低器官储存过程中自由基导致的氧化损伤；申请号为200810036928.X的中国专利公开了一种离体肝脏灌注保存液，其更有效的应用于离体肝脏的0～4℃保存，可防止低温导致的缺血性损伤、细胞水肿及继发性损伤；本发明所述灌注保存液针对肝脏移植手术，探索出了新的全面保护离体肝脏，同时能够持续为离体肝脏提供能量和代谢底物的灌注保存液。

[0024] 本发明所述离体肝脏的灌注保存液包括按照比例混合而成的供体全血、白蛋白、抗生素、胰岛素，肝素，复方氨基酸，葡萄糖、地塞米松 、氯化钠、碳酸氢钠、生理盐水、ATP-MgCl2、 S-腺苷蛋氨。

[0025] 其中，供体全血可提供体外灌注时离体器官所需红细胞，作为载氧剂；同时全血中的血浆可维持灌注液中的胶体渗透压；抗生素可抑制在器官获取及灌注过程中进入灌注液及器官内的革兰氏阴性杆菌、阳性球菌以及厌氧菌。

[0026] 20%白蛋白可维持灌注液中胶体渗透压，使细胞内外胶体渗透压保持平衡。

[0027] 胰岛素促进葡萄糖向细胞内转移，并促进蛋白质合成；10%复方氨基酸为离体器官的蛋白质合成提供代谢底物；5%葡萄糖为离体器官的能量代谢提供底物，是主要能量来源；而50%葡萄糖除了作为能量来源外，同时可促进肝细胞再生。

[0028] 地塞米松：稳定细胞膜和细胞器膜，减轻器官炎症反应。

[0029] 肝素防止灌注液中的全血成分出现凝固血块，同时溶解灌注器官的微小血管中形成的血栓；10%氯化钠维持灌注液中的晶体渗透压，提供灌注液中的钠离子；5%碳酸氢钠可中和器官在获取过程中及灌注前由于无氧代谢所产生的大量酸性物质，稳定灌注液中的PH值。

[0030] 生理盐水：增加灌注液容量，做为灌注液的主要溶剂，同时可提供稳定的晶体渗透压，使灌注液处于等渗状态；ATP-MgCl2：向细胞直接提供能量，恢复器官细胞一定的能量贮备，使热缺血的器官组织ATP含量增加；稳定细胞膜和细胞器膜，降低细胞膜通透性，减轻细胞水肿；改善复流后的微循环和区域灌注量，从而缓解肝组织的低氧和低能状态；S-腺苷蛋氨：可提高肝细胞DNA甲基化水平，促进DNA的合成，诱导肝细胞早期有丝分裂，促其再生，同时有利于细胞内ATP的产生；前列地尔可扩张器官内血管，改善灌注血流；维持晶体渗透压和胶体渗透压。

[0031] 优选地，上述灌注保存液还包括5～10mL 10%葡萄糖酸钙；葡萄糖酸钙可以维护细胞膜和毛细血管的正常通透性，从而使肝脏细胞更好的浸泡在灌注保存液中。

[0032] 申请人在复配上述灌注保存液的过程中，发现前列地尔与葡萄糖酸钙的配比对灌注液的保存效果影响显著，优选地，只有前列地尔与10%葡萄糖酸钙的用量比为10～16ug：6～10mL时，离体肝脏在所述灌注保存液中的保存时间长，且对肝脏的不良影响最小。

[0033] 优选地，上述保存液中，每820mL保存液中含有以下各组分：

[0034] 供体全血            500～520mL；

[0035] 抗生素              0.8～1.5g；

[0036] 20%白蛋白           25～35mL；

[0037] 胰岛素              400～420u；

[0038] 肝素                25000～28000u；

[0039] 10%复方氨基酸       25～30mL；

[0040] 葡萄糖              10～18g；

[0041] 地塞米松            4～10mg；

[0042] 10%氯化钠           2～5mL；

[0043] 5%碳酸氢钠          25～30mL；

[0044] 生理盐水            80～100mL；

[0045] ATP-MgCl2                 60～65g；

[0046] S-腺苷蛋氨          1～3g；

[0047] 前列地尔            10～16ug；

[0048] 10%葡萄糖酸钙       6～10mL

[0049] 余量为去离子水。

[0050] 优选地，所述的抗生素选自甲硝唑、头孢唑林中的一种或两种。

[0051] 提供上述任意一种肝脏灌注保存液在制备器官移植保存制剂中的应用。

[0052] 与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

[0053] 本发明提供了一种离体肝脏的灌注保存液，包括按照比例混合而成的供体全血、白蛋白、抗生素、胰岛素，肝素，复方氨基酸，葡萄糖、地塞米松、氯化钠、碳酸氢钠、生理盐水、ATP-MgCl2、 S-腺苷蛋氨；离体肝脏在该灌注保存液中保存50h，肝细胞仅有轻微肿胀，其余正常，没有并发症，可以满足器官移植的需求，延长移植物的存活时间，提高移植物在宿主内的存活率，本发明所述灌注保存液生产成本低，具有实际的应用价值。

附图说明

[0054] 图1为各组HE染色结果.；A为UW液灌注组肝组织；B为UW液灌注组胆管组织；C为灌注液灌注组肝组织；D为灌注液灌注组胆管组织。

具体实施方式

[0055] 下面通过说明书附图和具体实施例对本发明进一步具体描述。下述所使用的实验方法若无特殊说明，均为本技术领域现有常规的方法，所使用的配料或材料，如无特殊说明，均为通过商业途径可得到的配料或材料；本发明不应限制于实施例范围。

[0056] 实施例1

[0057] 本实施例灌注液的配制方法：无菌条件下，取部分去离子水，将除供体全血和白蛋白之外的其余物质首先加入去离子水中，混匀后加入白蛋白和供体全血，再最终定容至820 mL。

[0058] 每820mL灌注液包括表1中各组分：

[0059]

[0060] 实施例2

[0061] 本实施例灌注液的配制方法：无菌条件下，取部分去离子水，将除供体全血和白蛋白之外的其余物质首先加入去离子水中，混匀后加入白蛋白和供体全血，再最终定容至820 mL。

[0062] 每820mL灌注液包括表2中各组分：

[0063]

[0064] 实施例3

[0065] 本实施例灌注液的配制方法：无菌条件下，取部分去离子水，将除供体全血和白蛋白之外的其余物质首先加入去离子水中，混匀后加入白蛋白和供体全血，再最终定容至820mL。

[0066] 每820mL灌注液包括表3中各组分：

[0067]

[0068] 对比例1

[0069] 实验方法同实施例1，唯一不同的是本对比例所述灌注液中不含S-腺苷蛋氨和葡萄糖酸钙，灌注液的总体积为820mL。

[0070] 对比例2

[0071] 实验方法同实施例1，唯一不同的是本对比例所述灌注液中不含S-腺苷蛋氨，灌注液的总体积为820mL。

[0072] 对比例3

[0073] 实验方法同实施例1，唯一不同的是本对比例所述灌注液中不含葡萄糖酸钙，灌注液的总体积为820mL。

[0074] 对比例4

[0075] 实验方法同实施例1～3，唯一不同的是本对比例所述灌注液中前列地尔与10%葡萄糖酸钙的用量比为20ug：10mL。

[0076] 对比例5

[0077] 实验方法同实施例1～3，唯一不同的是本对比例所述灌注液中前列地尔与10%葡萄糖酸钙的用量比为10ug：20mL。

[0078] 对比例6

[0079] 实验方法同实施例1，唯一不同的是，本对比例所用的复方氨基酸是专利号为200810036928.X的中国专利所述离体肝脏灌注保存液中用到的氨基酸。

[0080] 对比例7

[0081] 实验方法同实施例1，唯一不同的是，本对比例用人工血液代替供体全血。

[0082] 对比例8

[0083] 实验方法同实施例1，唯一不同的是，本对比例用红细胞代替供体全血。

[0084] 实施例4

[0085] 将实施例1～3和对比例1～8所述灌注液用于肝脏的灌注保存，观察肝脏的保存状态，其结果如表4。

[0086]

[0087] 实施例5

[0088] 1、实验动物

[0089] 雄性西藏小型猪10只，普通级，体重20～25kg，月龄4～6月，购于南方医科大学实验动物中心。饲养室室温全天控制于20～25℃，标准饲料喂养，自由饮水。动物均根据国家规定进行人性化饲养，保证实验动物的相关福利，饲养3至7天后用于实验。

[0090] 2、实验分组及模型建立:

[0091] 将所有动物于实验前随机分为以下2组：保存液（选择实施例1所述保存液）灌注组、UW液灌注组，每组5只。具体模型建立方法如下：

[0092] 实验动物麻醉后静脉快速推注10%氯化钾注射液40ml。待心电活动消失并静息5分钟后，我们将其判定为心脏死亡。并在死亡时间满90分钟后再进行肝脏获取。随后行常温机械灌注4小时并全血灌注复流1小时。随后留取病理标本并采集复流后全血行肝功能检测，结果如表5。

[0093]

[0094] HE染色结果如图1，灌注液组胆管组织光镜下表现与正常胆管组织类似，胆管上皮细胞较完整（图1D）。UW组经1小时的全血复流后，胆道出现结构破坏，病理表现为：胆总管胆道上皮完整性出现破坏，胆道上皮细胞大部分剥落消失，胆道上皮下结缔组织水肿明显，完全裸露（图1B）。灌注液组在光镜下的病理表现为：肝细胞出现广泛性水肿，肝窦间隙增宽，充血，肝细胞存在散在坏死区域（图1A）。UW液组与灌注组病理改变类型相同，但表现更为严重（图1C）。