一种用于白芨组培的生根培养基及白芨的组培方法

摘要

本发明提供了一种用于白芨组培的生根培养基及白芨的组培方法。一种用于白芨组培的生根培养基，包括营养物质和锯末，并且每升所述生根培养基含160‑180g锯末。白芨的组培方法包括下列步骤：使白芨种子经过萌发和分化，再转移至上述生根培养基中进行生根培养。本发明的生根培养基培育出的白芨苗容易移栽，具有移栽成活率高、成本低、无需清洗育苗等优点。

权利要求

1.白芨的组培方法，其特征在于，包括下列步骤：

配制种子萌发培养基：改良型MS培养基、NAA0.5mg/L、40g/L土豆汁、40g/L蔗糖和4.3g/L琼脂粉；

配制分化培养基：改良型MS培养基、6-BA2.0mg/L、NAA0.2mg/L、40g/L土豆汁、40g/L蔗糖和4.3g/L琼脂粉；

配制生根培养基：改良型MS培养基、0.1mg/L6-BA、1.0mg/L萘乙酸、70g/L香蕉汁、40g/L土豆汁、40g/L蔗糖和160g/L冬瓜树锯末；

先将种子在所述种子萌发培养基中萌发30天，然后再转移至所述分化培养基，培养30天，最后移至所述生根培养基培养60天，以上三个过程培养条件相同：温度25℃，光照强度

1500lx，光照时间10h/d；

所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1900mg/L，硝酸铵1650mg/L，二水氯化钙440mg/L，七水硫酸镁370mg/L，磷酸二氢钾170mg/L，碘化钾0.83mg/L，硼酸6.2mg/L，四水硫酸锰

22.3mg/L，七水硫酸锌8.6mg/L，钼酸钠0.25mg/L，五水硫酸铜0.025mg/L，氯化钴0.025mg/L，硫酸亚铁27.8mg/L，乙二胺四乙酸24.3mg/L，肌醇100mg/L，烟酸0.8mg/L，盐酸吡哆醇

0.8mg/L，盐酸硫胺素0.8mg/L，和甘氨酸3mg/L；pH为5.8；

所述锯末经过以下方法清洗：

将锯末放入稀释5倍的10％次氯酸钠溶液中浸泡1小时后，挤压滤去次氯酸钠溶液，再放入清水中浸洗1次，挤压滤去水溶液，备用。

说明书

一种用于白芨组培的生根培养基及白芨的组培方法

技术领域

[0001] 本发明涉及组培领域，具体而言，涉及一种用于白芨组培的生根培养基及白芨的组培方法。

背景技术

[0002] 白芨是多年生草本球根植物，植株高18-60厘米，主要分布在中国、日本以及缅甸北部，主要花期在春季，但因各地气候而不同，晚冬至夏初都可能开花。白芨有广泛的药用价值及园林价值。白芨主要用于收敛止血，消肿生肌，可盆栽室内观赏，亦可点缀于较为荫蔽的花台、花境或庭院一角。

[0003] 白芨的蒴果中含有数以万计的细微种子，消毒灭菌后，选择合适的培养基，进行白芨种子的无菌萌发，以便种植，生产上多采用固体培养法育苗，即“种子萌发—分化—诱导生根成苗”的方式进行大规模生产，经过最后的生根培养过程后，白芨组培苗可以出瓶移栽，然而传统的生根培养基为琼脂培养基，其易附着在白芨苗根部，不易从玻璃瓶中取出，也不方便清洗，容易伤到苗根，严重影响移栽成活率。

[0004] 有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

[0005] 本发明的第一目的在于提供一种用于白芨组培的生根培养基，所述的生根培养基容易移栽白芨苗，具有移栽成活率高、成本低、无需清洗育苗等优点。

[0006] 本发明的第二目的在于提供一种白芨的组培方法，所述的组培方法培养出的白芨苗具有移栽成活率高、成本低等优点。

[0007] 为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：

[0008] 一种用于白芨组培的生根培养基，包括营养物质和锯末，并且每升所述生根培养基含160-180g锯末。

[0009] 上述生根培养基采用锯末代替了传统的凝固剂—琼脂粉，因而避免了移栽时白芨苗根被琼脂粘附需要清洗的问题，不会因清洗伤及苗根，从而提高了白芨苗的移栽成活率。同时与琼脂粉相比，锯末可以回收利用而来，成本较低。另外，160-180g/L浓度的锯末适宜白芨苗的生根。

[0010] 在上述生根培养基中，锯末可以采用任意植物的锯末，例如：冬瓜树锯末、松树锯末、杉树锯末和桉树锯末等，所有锯末都具有透气保水的效果，其中冬瓜树和杉树锯末含纤维和碳氮化合物较高，适合植物生长所需，松树和桉树含萜类物质较高，有抑制植物生长的作用，需要堆沤发酵后才可以使用。

[0011] 优选地，所述营养物质包括：原始浓度的MS培养基，0.1-2.0mg/L细胞分裂素和0.1-1.0mg/L萘乙酸。

[0012] 采用此营养物质培育出的白芨苗茎秆粗壮。为进一步提高培育出的白芨苗的质量，还可以采用以下营养物质

[0013] 原始浓度的改良型MS培养基，0.1-2.0mg/L细胞分裂素和0.1-1.0mg/L萘乙酸；所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1890-1900mg/L，硝酸铵1650-1660mg/L，二水氯化钙440-445mg/L，七水硫酸镁370-375mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.75-0.83mg/L，硼酸5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-24mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.025-0.03mg/L，硫酸亚铁27.8-30mg/L，乙二胺四乙酸24.3-26mg/L，肌醇95-100mg/L，烟酸0.8-1mg/L，盐酸吡哆醇0.8-1mg/L，烟酸硫胺素0.8-
1mg/L，甘氨酸3-4mg/L，pH为5.8-6.0。

[0014] 在上述营养物质的基础上，可以添加以下物质：60-70g/L香蕉汁，30-40g/L土豆汁，30-40g/L蔗糖，以缩短培养周期，改善白芨苗的健壮度。具体地，土豆汁起到提供营养物质和促生长的作用。香蕉汁，利于白芨苗生根壮根，提高白芨在室外炼苗的成活率。蔗糖，提供碳源，使白芨苗生长健壮，并在一定程度上减少微生物的污染。

[0015] 更优选地，细胞分裂素的浓度为0.1-0.2mg/L，萘乙酸的浓度优选为0.8-1.0mg/L，细胞分裂素优选选用6-BA。

[0016] 优选地，所述改良型MS培养基的配方为：硝酸钾1895-1900mg/L，硝酸铵1650-1655mg/L，二水氯化钙440-442mg/L，七水硫酸镁370-373mg/L，磷酸二氢钾165-170mg/L，碘化钾0.8-0.83mg/L，硼酸5.5-6.2mg/L，四水硫酸锰22.3-23.6mg/L，七水硫酸锌8.6-10mg/L，钼酸钠0.2-0.25mg/L，五水硫酸铜0.025-0.03mg/L，氯化钴0.028-0.03mg/L，硫酸亚铁
27.8-29mg/L，乙二胺四乙酸24.3-25mg/L，肌醇98-100mg/L，烟酸0.8-0.9mg/L，盐酸吡哆醇
0.8-0.9mg/L，烟酸硫胺素0.8-0.9mg/L，甘氨酸3-3.5mg/L，pH为5.8-6.0。

[0017] 白芨的组培方法，包括下列步骤：

[0018] 使白芨种子经过萌发和分化，再转移至上文所述的生根培养基中进行生根培养。

[0019] 上述组培中所用的生根培养基采用锯末代替了传统的凝固剂—琼脂粉，因而避免了移栽时白芨苗根被琼脂粘附需要清洗的问题，因此该组培方法得到的白芨苗不会因清洗伤及苗根，从而提高了移栽成活率。

[0020] 优选地，所述萌发过程所用的培养基为：原始浓度的所述改良型MS培养基，0.5-0.6mg/L萘乙酸和4.3-4.5g/L琼脂粉；优选地，还包括30-40g/L土豆汁，30-40g/L蔗糖。

[0021] 萌发的效果对白芨苗的质量有至关重要的影响，采用上述培养基可以促进原球茎诱导丛生芽增殖，使生长的根更粗壮，叶片更宽大。另外，土豆汁中含有淀粉和其他未知生长因子，有助于白芨种子的萌发和原球茎的增殖。白芨种子萌发阶段不能进行光合作用，缺乏自养能力，需要外源碳源提供能量，蔗糖分子可以进出植物细胞，可提供碳源，使种子萌发和原球茎增值。琼脂粉，高温溶解，常温凝固为固体胶，与其他营养物质混合凝固便于白芨种子或原球茎更好的吸收养分。

[0022] 优选地，所述分化过程所用的培养基为：原始浓度的所述改良型MS培养基，2.0-3.0mg/L细胞分裂素，0.2-0.3mg/L萘乙酸和4.3-4.5g/L琼脂粉。

[0023] 采用此培养基可以提高芽的分化速度以及分化效果。

[0024] 优选地，在上述萌发和分化阶段还包括30-40g/L土豆汁，30-40g/L蔗糖。为萌发和分化阶段提供充足的营养，提高组培速度，改善白芨苗的健壮度。

[0025] 优选地，所述锯末为经过次氯酸钠溶液清洗的锯末。

[0026] 氯酸钠溶液既可以杀菌，又可以除去锯末中的污染物，为组培提供无菌环境。具体清洗的方法可以参考：将锯末放入稀释5倍的10％次氯酸钠溶液中浸泡1小时后，挤压滤去次氯酸钠溶液，再放入清水中浸洗1次，挤压滤去水溶液，备用。

[0027] 与现有技术相比，本发明的有益效果为：

[0028] (1)改进白芨组培所用的生根培养基，以提高移栽成活率，并减低培养基成本。

[0029] (2)改进MS培养基，以缩短培养周期，减小污染率，降低成本，提高了成活率。

[0030] (3)改进白芨组培所用的萌发培养基和分化培养基，以改善白芨苗的健壮情况。

[0031] (4)添加土豆汁和香蕉汁等营养物质，以改善白芨苗的根部发育情况。

附图说明

[0032] 为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，以下将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。

[0033] 图1为实施例10在生根培养一个月后的白芨苗；

[0034] 图2为对照组在生根培养一个月后的白芨苗；

[0035] 图3为实施例10在生根培养两个月后的白芨苗；

[0036] 图4为对照组在生根培养两个月后的白芨苗。

具体实施方式

[0037] 下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

[0038] 下文所有实施例所用的锯末都经过以下方法清洗：

[0039] 将锯末放入稀释5倍的10％次氯酸钠溶液中浸泡1小时后，挤压滤去次氯酸钠溶液，再放入清水中浸洗1次，挤压滤去水溶液，备用。

[0040] 实施例1

[0041] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0042] MS培养基，0.1mg/L6-BA，1.0mg/L萘乙酸和160g/L冬瓜锯末。

[0043] 实施例2

[0044] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0045] MS培养基，2.0mg/L6-BA，0.1mg/L萘乙酸和180g/L冬瓜锯末。

[0046] 实施例3

[0047] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0048] MS培养基，0.2mg/L6-BA，0.8mg/L萘乙酸和180g/L冬瓜锯末。

[0049] 实施例4

[0050] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0051] MS培养基，0.1mg/L6-BA，1.0mg/L萘乙酸，60g/L香蕉汁，30g/L土豆汁，30g/L蔗糖和160g/L冬瓜锯末。

[0052] 实施例5

[0053] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0054] MS培养基，0.1mg/L6-BA，1.0mg/L萘乙酸，70g/L香蕉汁，40g/L土豆汁，40g/L蔗糖和160g/L杉树锯末。

[0055] 实施例6

[0056] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0057] 改良型MS培养基，0.1mg/L6-BA，1.0mg/L萘乙酸，70g/L香蕉汁，40g/L土豆汁，40g/L蔗糖和160g/L冬瓜锯末；

[0058] 改良型MS培养基：配方如表1所示。

[0059] 表1实施例1的改良型MS培养基

[0060]

[0061]

[0062] 实施例7

[0063] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0064] 改良型MS培养基，0.1mg/L6-BA，1.0mg/L萘乙酸，70g/L香蕉汁，40g/L土豆汁，40g/L蔗糖和160g/L松树锯末；改良型MS培养基：配方如表1所示。

[0065] 表2实施例2的改良型MS培养基

[0066]

[0067]

[0068] 实施例8

[0069] 一种用于白芨组培的生根培养基：

[0070] 改良型MS培养基，0.1mg/L6-BA，1.0mg/L萘乙酸，70g/L香蕉汁，40g/L土豆汁，40g/L蔗糖和160g/L桉树锯末；改良型MS培养基：配方如表1所示。

[0071] 表3实施例3的改良型MS培养基

[0072]

[0073]

[0074] 实施例9

[0075] 白芨的组培方法：

[0076] 配制种子萌发培养基：MS培养基+NAA0.5mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0077] 配制分化培养基：MS培养基+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0078] 生根培养基如实施例1。

[0079] 先将种子萌发30天，然后再转移至分化培养基，培养30天，最后移至生根培养基培养60天，以上三个过程培养条件相同：温度25℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d。

[0080] 实施例10

[0081] 白芨的组培方法：

[0082] 配制种子萌发培养基：MS培养基+NAA0.5mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0083] 配制分化培养基：MS培养基+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0084] 生根培养基如实施例6。

[0085] 先将种子萌发30天，然后再转移至分化培养基，培养30天，最后移至生根培养基培养60天，以上三个过程培养条件相同：温度25℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d。

[0086] 实施例11

[0087] 白芨的组培方法：

[0088] 配制种子萌发培养基：改良型MS培养基+NAA0.5mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0089] 配制分化培养基：改良型MS培养基+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0090] 改良型MS培养基如实施例6。

[0091] 生根培养基如实施例6。

[0092] 先将种子萌发30天，然后再转移至分化培养基，培养30天，最后移至生根培养基培养60天，以上三个过程培养条件相同：温度25℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d。

[0093] 实施例12

[0094] 白芨的组培方法：

[0095] 配制种子萌发培养基：改良型MS培养基+NAA0.6mg/L+30g/L土豆汁+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂粉。

[0096] 配制分化培养基：改良型MS培养基+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L+30g/L土豆汁+30g/L蔗糖+4.5g/L琼脂粉。

[0097] 改良型MS培养基如实施例6。

[0098] 生根培养基如实施例6。

[0099] 先将种子萌发30天，然后再转移至分化培养基，培养30天，最后移至生根培养基培养60天，以上三个过程培养条件相同：温度25℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d。

[0100] 实施例13

[0101] 白芨的组培方法：

[0102] 配制种子萌发培养基：MS培养基+NAA0.5mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0103] 配制分化培养基：MS培养基+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+40g/L土豆汁+40g/L蔗糖+4.3g/L琼脂粉。

[0104] 生根培养基如实施例4。

[0105] 先将种子萌发30天，然后再转移至分化培养基，培养30天，最后移至生根培养基培养60天，以上三个过程培养条件相同：温度25℃，光照强度1500lx，光照时间10h/d。

[0106] 实验：

[0107] 评价实施例9-13的组培结果，并将现有技术作为对照组。

[0108] 对照组的组培方法：种子萌发培养基：MS+NAA0.5mg/L+土豆汁40g/L+蔗糖40g/L+琼脂粉，培养30天，转接到分化培养基中培养。分化培养基：MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L+土豆汁40g/L+蔗糖40g/L+琼脂粉，培养30天，转接到生根培养基中培养。生根培养基：MS+6-BA0.1mg/L+NAA1.0mg/L+土豆汁40g/L+香蕉汁70g/L+蔗糖40g/L+琼脂。所有培养基中琼脂粉用量为4.4g/L。培养80-90天出瓶移栽。

[0109] 结果如表4和图1-4所示。其中，图1为实施例10在生根培养一个月后的白芨苗，图2为对照组在生根培养一个月后的白芨苗，图3为实施例10在生根培养两个月后的白芨苗，图4为对照组在生根培养两个月后的白芨苗。

[0110] 表4白芨苗的生长情况

[0111]

[0112] 尽管已用具体实施例来说明和描述了本发明，然而应意识到，在不背离本发明的精神和范围的情况下可以作出许多其它的更改和修改。因此，这意味着在所附权利要求中包括属于本发明范围内的所有这些变化和修改。